Сифак болезнь: Что такое сифилис, симптомы и лечение

Сифилис

Сифилис — болезнь инфекционного характера, запускающаяся попаданием в организм бледной трепонемы (Treponema pallidum). Попадает бледная трепонема в большинстве случаев при половых контактах и поражает кожные покровы, слизистые оболочки, нервную систему, внутренние органы и опорно-двигательный аппарат. Вне организма бледная трепонема быстро погибает под внешним воздействием: иссыхание, нагревание свыше 55 °C более четверти часа, нанесение 70° раствора этилового спирта. Снижение температуры только помогает жить бледной трепонеме. Активный рост происходит после деления поперек на два или несколько сегментов, каждый из которых далее превращается в особь взрослого типа. Также различаются виды жизни: цисты и L-форма. Циста обладает высокой антигенной активностью или ответом иммунитета на чужеродный агент в организме, а L-форма — слабой.

Способы заражения:

1. Через половые контакты — внедрение возбудителя при наличии повреждения кожи или слизистых оболочек;
2. Через плаценту — при передаче возбудителя ребенку, приводящая к врожденному заболеванию;
3. Через молоко — возможно;
4. Через биологические жидкости (слюна, сперма, вагинальный секрет) — при поражении возбудителем данных локализаций с наличием клинических признаков;
5. Через кровь — при донорстве;
6. В быту — редкость, однако бывает у детей при тесном контакте с больными родителями, которые соприкасаются поверхностями с сифилитическим поражением;
7. При выполнении профессиональных обязанностей — медицинские и лабораторные работники.

После внедрения возбудителя до появления первичных признаков заболевания проходит от 2 недель до 2 месяцев, что называется инкубационным периодом. Однако данный период может быть короче (около недели) при наличии нескольких мест внедрения или повторном заражении, так как иммунитет ответит быстрее на возбудителя. Либо данный период может быть длиннее (около полугода) при приеме небольшого количества антибиотиков по поводу лечения других сопутствующих болезней.

Также стоит отметить скрытый сифилис, который не имеет никаких клинических проявлений. Данные больные более опасные, так как в любой момент может произойти заразное проявление.

Будьте здоровы!

Записаться на прием к дерматовенерологу

Врач дерматовенеролог — Храповицкая Жанна Геннадьевна

Записаться можно по телефону (391) 205−00−48 или через личный кабинет

Сифилис наступает. Где в России легче всего подхватить «французскую болезнь»?

Если бы сифилис был человеком и имел способность мыслить, то он наверняка бы в голос смеялся над попытками врачей стереть его с лица земли. Казалось бы, в XXI веке пора уже забыть о страшных венерических болезнях, которые в Средние века убивали миллионы людей. Но вот, например, сифилис так не считает.

В восьми регионах нашей страны заболеваемость этим страшным (даже от одного названия становится не по себе) недугом превышает среднероссийские показатели более чем в два раза. Об этом сказано в свежем докладе Росстата о социально-экономическом положении в России.

При том что в целом по России ситуация с сифилисом стабильная, в ряде субъектов с начала 2018 года количество заболевших заметно выросло.

Самые печальные данные приходят из Республики Алтай — там уровень заболеваемости на 100 тысяч человек превысил среднероссийский показатель почти в три раза.

Высокие показатели заболеваемости сифилисом наблюдались также в Амурской, Калужской, Иркутской, Саратовской областях, республиках Тыва, Бурятия, Саха (Якутия) — там зафиксировано превышение средних показателей более чем в два раза.

К таким данным Росстата стоит добавить ещё один регион России — Камчатку. О том, что там растёт количество заболевших, в мае сообщали местные СМИ. Как рассказала заведующая поликлиническим отделением краевого кожно-венерологического диспансера Валентина Каплиева, за 2016 год больных было 14, в 2017-м — уже 29, а с начала 2018-го — уже семь человек заразились этим венерическим заболеванием.

Всего с начала года почти 6 тысяч россиян заболели сифилисом.

Фото: © Shutterstock

Лайф отправил запрос в Минздрав Республики Алтай с просьбой пояснить, почему ситуация с сифилисом в регионе гораздо хуже, чем везде. Там не смогли оперативно предоставить ответ. Что касается остальных регионов, то там, как ранее сообщали СМИ, проблемы наблюдаются уже давно, но справиться с ними, очевидно, не получается. Например, в Минздраве Саратовской области сообщили, что там проблемы с сифилисом наблюдаются аж с 2006 года.

Почти во всех перечисленных регионах отмечали, что основной процент заболевших приходится не на коренное население, а на приезжих. Эксперты подтверждают: мигранты действительно часто приезжают в Россию, будучи уже заражёнными.

— У нас складывается такая картина: если взять только российское население, то в 2017 году заболеваемость сифилисом составила 15,5 случая на 100 тыс. населения. Это общероссийский показатель. А если считать вместе с мигрантами, то получается 19,5 случая на 100 тысяч населения, — рассказала Анна Кубанова, главный внештатный специалист Минздрава России по дерматовенерологии и косметологии.

Однако, по словам специалиста, показатели заболеваемости сифилисом в нашей стране приближаются к общеевропейским (то есть, у нас всё ещё не так плохо).

Но, по мнению некоторых экспертов, статистика по этому направлению всё же недостаточно достоверна. И на самом деле ситуация с сифилисом в нашей стране не такая радужная.

Фото: © Shutterstock

— В настоящее время разрешено лечение заболеваний, передающихся половым путём, в частных клиниках, а там далеко не всегда предоставляют данные о своих пациентах. Зачастую вообще лечат анонимно. Скорее всего, слишком много заболевших просто не попадают в официальную статистику, — рассказал Вадим Покровский, руководитель Федерального научно-методического центра по борьбе и профилактике ВИЧ-инфекции.

По словам эксперта, вполне вероятно, что конкретно в восьми перечисленных регионах просто лучше считают всех пациентов с сифилисом. Но всё равно данных для объективной оценки ситуации недостаточно.

Кроме того, дело ещё и в том, что наши граждане о своём здоровье не особо беспокоятся.

— Ещё одна проблема заключается в том, что у нас и пациенты, и врачи порой несерьёзно относятся к диспансеризации и профилактическим осмотрам. По-хорошему нужно хотя бы раз в год проходить полный осмотр, сдавать кровь, но далеко не все это делают. Это мешает выявлять сифилис на ранних стадиях, — считает Анна Шаропина, врач-дерматовенеролог H-Clinic.

«Французская болезнь»

Фото: © Shutterstock

Когда сифилис впервые обнаружили на российской территории (примерно в начале XVI века), его называли «французская болезнь». Позднее врачи стали официально называть сифилис lues.

Это очень опасное венерическое инфекционное заболевание, которое может годами «жить» в организме, убивая его. Основной путь передачи — половой. Но есть и другие — заразиться можно при поцелуе (если во рту есть ранки). Заразны также молоко кормящей больной матери и, конечно, кровь (можно заразиться при прямом переливании, во время операции, при использовании общего шприца или бритвы).

Редко, но всё же реально «подхватить» сифилис в быту — при использовании общей зубной щётки, полотенца, белья. По словам специалистов, сифилис — это самое заразное венерическое заболевание. Возбудитель этого недуга — микроорганизм с поэтичным названием «бледная трепонема».

Сифилис может начаться со скрытой формы (когда почти никаких признаков болезни не обнаруживается), а потом наступают следующие этапы. Первичный сифилис — это, по сути, первые признаки болезни. Среди симптомов — образование твёрдого шанкра (такие круглые твёрдые образования на коже, чаще всего — на половых органах), воспаление лимфоузлов. Этот этап может продолжаться около двух месяцев.

Вторичный сифилис способен продолжаться годами. Эта стадия протекает волнообразно — симптомы (в том числе и внешние) то появляются, то исчезают бесследно. В этом и кроется основная проблема — зачастую больные и не обращаются к врачу, потому что не видят причин для беспокойства. Но при этом сифилис активно разрушает внутренности: поражается нервная система, начинаются регулярные лихорадки и высыпания на коже, плохо работают органы пищеварения, слабеют кости. Важно отметить, что вторичный сифилис наступает, если вовремя не началось лечение первичного или оно было прервано.

Фото: © Public Domain Pictures

А вот самая большая беда — это третичный сифилис. Он наступает, если человек годами вообще никак не лечился. Начинаются необратимые поражения внутренних органов, на коже появляются гуммы (мягкие опухоли, внешне выглядят, как большие глубокие язвы), которые обезображивают больного.

Если наступил третичный сифилис, то пациента уже, скорее всего, спасти не получится — почти весь организм уничтожила зловещая трепонема. Именно эта стадия заболевания может включать в себя самую известную «страшилку» на тему сифилиса — может отвалиться нос (точнее, разрушатся его кости). К счастью, в наши дни такие запущенные случаи встречаются крайне редко.

На ранних стадиях сифилис лечится, в современных условиях достаточно просто и быстро. Нужно будет обязательно лечь в больницу, где врач назначит курс специальных антибиотиков и других вспомогательных препаратов. Но важно понимать, что, даже если симптомы исчезнут, наблюдаться у врачей стоит до тех пор, пока лабораторные анализы точно не подтвердят, что бледная трепонема окончательно покинула организм. В противном случае — здравствуй, вторичный, а потом, может быть, и третичный сифилис — а это уже прямая дорога на кладбище.

Стоит также отдельно упомянуть врождённый сифилис — это когда ребёнок заражается сифилисом от матери, если она, случайно или намеренно, не лечилась. Если заражение произошло, то, к сожалению, малыш обречён на инвалидность или даже смерть. Например, совсем недавно в Ростовской области от сифилиса умер полуторамесячный малыш.

Важно: больной сифилисом заразен в любые периоды болезни. Даже если внешне никаких признаков заболевания нет.

Щит от дурной болезни

Стопроцентной защиты от старого, но совсем недоброго сифилиса, к сожалению, не существует. Но есть простые методы профилактики, которые помогут избежать неприятных последствий.

— Главное — половой контакт всегда должен быть с презервативом. Кроме того, во время посещения врача нужно следить, меняет ли доктор перчатки, стерильны ли инструменты, которыми он пользуется, — советует Анна Шаропина. — Если же у человека обнаружили сифилис, то обязательно должны пройти проверку его половые партнёры — даже если кровь покажет отрицательный результат, врач назначит терапию, чтобы избежать скрытого сифилиса. А то так часто бывает — у партнёра в крови сифилис не нашли, все расслабились, а через пару месяцев болезнь всё равно появляется.

Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр

Тест выявляет антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Эти антитела присутствуют в крови у больных сифилисом.

Синонимы русские

Неспецифический антифосфолипидный (реагиновый) тест, современный аналог реакции Вассермана (RW).

Синонимы английские

Nontreponemal test, rapid plasma reagin test, syphilis screening test, STS.

Метод исследования

Флокуляционный тест.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Возбудителем сифилиса является Treponema pallidum (бледная трепонема), бактерия из семейства спирохет.

Сифилис – венерическое заболевание: наиболее часто он передается половым путем. Кроме того, возможно заражение через кровь (например, при совместном использовании шприцев, бритв и пр.), плода от матери или бытовым путем (очень редко).

В международной классификации болезней выделяют врождённый, ранний и поздний сифилис, а также неуточненные формы. В медицинской литературе используются понятия первичный, вторичный и третичный сифилис.

Инкубационный период начинается с момента заражения и длится до первых симптомов (твердого шанкра) в среднем 21 день (от 10 до 90 дней).

Первичный сифилис – стадия с возникновения твердого шанкра до появления сыпи. Твердый шанкр – это язвочка, которая может появляться в том месте, где возбудитель проник в организм (обычно на половых органах). Он не болит и исчезает (без лечения) через 2-6 недель. Также на этой же стадии иногда увеличиваются лимфоузлы. В первое время заболевший человек остается серонегативным (т. е. в его крови еще нет антител против сифилиса).

Вторичный сифилис. Примерно через 4-8 недель после появления шанкра проявляются новые симптомы: сыпь и общее недомогание, температура, головная боль и др. Возможны и более тяжелые проявления.

Затем признаки сифилиса исчезают и заболевание переходит в латентную фазу. При этом возбудитель все же не покидает организм, поэтому при ослаблении иммунитета могут возникать рецидивы болезни. Их симптомы совпадают с проявлениями вторичного сифилиса.

Бывает, что сифилис так и остается в латентной форме. Но в ряде случаев, если человек не лечится, с годами развивается третичный сифилис. При этом поражаются различные органы и ткани: нервная и сердечно-сосудистая система, кости, суставы и др.

Для диагностики сифилиса часто используют серологические тесты (основанные на выявлении антител). Все виды анализов можно разделить на две группы: трепонемные и нетрепонемные тесты. Анализ на сифилис RPR относится к нетрепонемным.

Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против самих бактерий T. Pallidum, например сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации) или сифилис РИФ (реакция иммунофлуоресценции).

Посредством нетрепонемных тестов выявляют антитела против кардиолипина (липида, который входит в состав мембраны митохондрий и бактерий). Они появляются в организме человека со стадии первичного сифилиса (примерно через неделю после возникновения твердого шанкра). При нетрепонемных методах анализа на сифилис не различают тип антител (IgG, IgM или др.), а определяют суммарный ответ. К таким исследованиям относят микрореакции преципитации: RPR, VDRL и др.

При первичном и вторичном сифилисе чувствительность нетрепонемных тестов высокая (в случае RPR: 86  % при первичном, 100  % при вторичном), а чем выше чувствительность метода, тем больше вероятность, что тест выявит болезнь. Соответственно, если человек болен сифилисом, то результат теста со 100-процентной чувствительностью точно будет положительным.

Однако при использовании нетрепонемных тестов возможен и ложноположительный результат (выявление антител, несмотря на то что человек не болен сифилисом). Дело в том, что антитела против кардиолипина возникают не только при сифилисе, но и при некоторых других заболеваниях.

Поэтому при диагностике сифилиса нетрепонемный тест должен быть подтвержден с помощью более специфичного трепонемного.

У нетрепонемных тестов есть еще одна особенность. Антитела против кардиолипина появляются в острой фазе болезни. Поэтому, когда человек выздоравливает, их уровень снижается, так что по нему можно судить об успешности лечения.

 Для чего используется исследование?

• Для первичной диагностики сифилиса.
• Чтобы оценить успешность лечения.

Когда назначается исследование?

• При скрининговом обследовании на сифилис. Обследоваться должны беременные женщины, доноры крови (и органов), представители некоторых профессий (врачи, работники сферы питания, люди, контактирующие с детьми, пациенты перед госпитализацией или хирургической операцией.
• При подозрении на сифилис (если у пациента есть симптомы сифилиса, генитальные язвы или другие половые инфекции, а также если его половой партнер болен сифилисом). В частности, когда ребенок родился от матери, больной сифилисом.
• После прохождения курса лечения от сифилиса.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Отрицательный результат

• Сифилиса нет. Однако нельзя полностью исключить и другие варианты.

• • Сифилис на ранней стадии. Если с момента заражения прошло меньше 3-5 недель, то антитела против кардиолипина еще не детектируются. Тест следует повторить через 10-14 дней.
  • Сифилис на поздней стадии. После стадии вторичного сифилиса количество кардиолипиновых антител снижается. Например, чувствительность метода VDLR при третичном сифилисе составляет 70  % (т. е. у 30  % больных результат будет отрицательным).
  • Ложноотрицательный результат (в редких случаях). Существует «эффект прозоны»: если антител очень много (слишком высокий титр), то результат может оказаться отрицательным.

Окончательное решение о постановке диагноза зависит от результата других тестов (трепонемных).

Положительный результат

• Сифилис.
• Ложноположительный результат. В этом случае титр антител обычно очень низкий.

Положительный результат должен быть подтвержден с помощью специфических трепонемных тестов.

Что означают результаты теста, который сдают повторно (после курса лечения)?

• Если результат стал отрицательным или титр снизился в 4 раза и более – лечение прошло успешно.

• Если титр не снизился – нужна консультация с врачом и дальнейшие исследования.

Что может влиять на результат?

Ложноположительные результаты могут быть:

• при аутоиммунных расстройствах (например, при системной красной волчанке, тиреоидите),
• при лепре, ВИЧ-инфекции, атипичной пневмонии, малярии и др.,
• у людей, употребляющих наркотики внутривенно,
• у пожилых.

проваливается ли нос, откуда берутся язвы на веках и почему Саратовская область в лидерах по заболеваемости?

Саратовская область снова лидер по заболеваемости сифилисом. О том, что это за болезнь, как ей можно заразиться, чем лечить и почему мы в лидерах, мы поговорили с дерматовенерологом клиники «Альфа-Центр Здоровья» Марией Маркиной.

Второй месяц подряд Саратовская область уверенно держит первое место среди российских регионов по заболеваемости сифилисом. Впрочем, в почетную первую пятерку она входит почти всегда. В региональном минздраве считают, что подобное лидерство – это даже хорошо. Оно показывает, что метод выявления заболевших у нас более качественный, чем везде. Даже в столицах.

 

Возбудитель 

Возбудитель сифилиса – бледная трепонема, микроорганизм, который живет только и исключительно в организме человека. Во внешней среде неустойчив, хотя и может долгое время сохраняться при низких температурах. Например, при температуре -18 градусов цисты и споры бледной трепонемы могут жить до года. Можно поэкспериментировать, но,  конечно, никто не заставит вас хранить телесные жидкости в собственной морозилке.

Бледная трепонема боится бытовой химии и прекрасно смывается с тарелок и ложек в водосток, где и погибает. Для нее губительны антисептики, кислоты, щелочи и т.д.

 

Пути заражения 

Бледная трепонема попадает в организм человека вместе с жидкостями – слюной, спермой или кровью. Поэтому и путей заражения несколько. 

• Самый частый путь, конечно, половой. Партнер, с которым вы практикуете незащищенный секс, причем не только генитальный, но и оральный, вполне может подарить вам бледную трепонему.
• Заразиться сифилисом можно и контактно-бытовым способом.
   – Есть вдвоем из одной тарелки, пользоваться одной ложкой или вилкой не гигиенично, — объясняет Мария Маркина. – Не стоит облизывать детскую соску-пустышку, а потом совать ее ребенку в рот. Так дети могут заразиться от родителей. Или привычка была у наших бабушек – пожевать еду, а потом дать ее ребенку. Так тоже делать не надо.
  
  При этом, бытовой сифилис встречается сейчас крайне редко, поскольку и уровень грамотности стал повыше, и уровень жизни с советских времен подрос.
• Трансплацентарный путь – когда ребенок от больной матери получает бледную трепонему внутриутробно.
• Сифилис можно заполучить при переливании крови от больного человека здоровому. Такой путь заражения называется трансфузионным. Конечно, в Центре переливания крови на наличие возбудителей сифилиса проверяется вся донорская кровь. Но в редких случаях бледная трепонема может «проскочить» фильтр. В инкубационном периоде болезни тест на сифилис дает отрицательный результат.   
• Профессиональный путь заражения: он грозит в основном медицинским работникам: врачам-хирургам, медсёстрам, которые забирают кровь или делают инъекции. Так же риску заражения подвержены врачи-косметологи. 

Мария Маркина. Фото Матвей Фляжников 

Сифилис. Инкубационный период 

В среднем, от момента заражения до появления первых признаков болезни проходит 30-35 дней. Анализ крови в эти дни положительным не будет.

— Если у человека есть хронические сопутствующие заболевания, ВИЧ-инфекция, пожилой возраст, то инкубационный период может сокращаться до 8-15 дней, — объясняет Маркина. – Если человек здоров и активен, инкубационный период может увеличиваться.

 

Твердый шанкр. Первичный сифилис 

Инкубационный период заканчивается, болезнь проявляется.  И вот тут-то человек готов заподозрить, что с ним что-то не так: скорее всего, в этот момент на половых органах появятся эрозивные дефекты. Тот самый пресловутый твердый шанкр – образование в месте проникновения бактерии в тело. Обычно, шанкр сопровождает регионарный лимфоденит – увеличение лимфатического узла рядом с местом кожного поражения. 

— Нет, это не всегда лимфоузлы в паховой области, — объясняет Маркина. – Твердый шанкр может быть на слизистой губ, щек, на коже вокруг рта, на лице. Иногда их выявляют даже на слизистой век. Все зависит от того, каким был половой акт. Соответственно, воспаляются ближайшие к эрозивным дефектам лимфоузлы. 

Третий признак – лимфангит, то есть, воспаление и увеличение лимфатического сосуда. 

Совершенно необязательно, что все три симптома проявят себя одновременно. Но чаще всего сочетаются твердый шанкр и воспаление лимфоузлов.

Обычно первичный сифилис длится от 6 до 8 недель, если проигнорировать симптомы и не начать лечить.  

— Далеко не всегда язвы на слизистой означают сифилис, — говорит дерматовенеролог. – Есть мягкий шанкр, появление которого вызывает другой микроорганизм, язвы могут  быть проявлением генитального герпеса, похожие проявления могут вызывать стрептококковые инфекции. Иногда язвы и микротравмы на половых органах появляются из-за неправильного использования секс-игрушек. А также потому, что партнеры случайно или нарочно травмируют друг друга. 

В общем, если вы обнаружили язвы на половых органах, необязательно сразу кидаться на партнера с кулаками и обвинять в измене. Но это точно стопроцентный повод обратиться к врачу и сдать кровь на сифилис. 

При положительном результате придется «сдать» врачу и всех половых партнеров за ближайшие полтора-два месяца, которым теперь тоже, скорее всего, потребуется лечение.

 

Сыпь на ладошках. Вторичный сифилис 

Симтоматика вторичного сифилиса отличается от первой стадии заболевания. Длится, если не лечить, 3-4 года, проявляется высыпаниями на коже и слизистых. И имеет волнообразное течение: симптомы то проявляются, то разрешаются полностью.  Все зависит от количества бледных трепонем в организме – насколько с бактерией справляется иммунитет. 

Сыпь бывает разная по размеру, характеру и местам высыпания. Но в отличие от прочих кожных поражений, при сифилисе сыпь появляется на ладонях и ступнях. Если перед вами человек с высыпаниями на ступнях и ладонях, лучше не рисковать, а, к примеру, попросить перед контактом справку от венеролога. 

Фото Матвей Фляжников 

Поражение внутренних органов. Третичный сифилис 

На этом этапе кожные поражения сохраняются.  Поражаются внутренние органы. 

— Чаще всего это поражение головного мозга и нервной системы, — говорит Мария Маркина. – Нейросифилис. Иногда он протекает бессимптомно, либо проявляется симптоматикой других неврологических заболеваний. Сифилис может вызывать менингит, инсульт, менингомиелит, спинную сухотку, прогрессивный паралич. Слабеют мышечные рефлексы, начинаются парестезии, боли.

 

Провалившийся нос… 

-…это не миф, но за то время, что я училась и работаю, я таких пациентов не встречала, — говорит Маркина. 

Западение носа вообще довольно редкое явление и проявляется только в третичном сифилисе. Но так как за свою жизнь средний человек довольно часто принимает самые разные антибиотики, то эти препараты могут сдерживать развитие бледной трепонемы в организме.

Об антибиотиках в качестве отступления 

-Антибактериальная эра человечество ни к чему хорошему не приведет, — комментирует ситуацию с бесконтрольным приемом антибактериальных препаратов Мария Маркина. – Наши люди привыкли по каждому чиху глотать антибиотики, забывая или не зная о том, что у бактерий развивается устойчивость к препаратам. Для лечения привычных инфекций приходится использовать антибиотики из резервного списка.

Что такое резервный антибактериальный препарат? Это когда перепробованы в лечении практически все группы антибактериальных препаратов, а эффекта нет. Тогда используют резервный антибиотик. Список резервных антибактериальных препаратов с каждым годом становится все короче. И однажды мы просто не справимся с суперинфекцией, потому что кому-то важно лечить антибиотиками пустячный насморк.

 

Как лечить сифилис? 

Сифилис прекрасно лечится антибиотиками. Выбор лечения зависит стадии болезни, клинических проявлений и характера течения. Препарат для лечения, его дозу препарата, длительность его применения выбирает врач. Лечить себя гуглом не надо.

Кому-то требуется стационарное лечение, а кто-то лечится амбулаторно. Надо помнить, что сифилис – это хроническое инфекционное заболевание. А человек, однажды подхвативший бледную трепонему, еще очень долго остается на диспансерном учете у дерматовенеролога. 

— Даже при пролеченном сифилисе кровь, бывает, «крестит», — объясняет Маркина. — Это на медицинском сленге означает – дает положительный результат на сифилис. Степень заражения определяется количеством крестиков в результате анализа. При этом пациент уже не заразен. Поэтому каждому переболевшему выдается специальная справка, которую человек предъявляет в другой больнице, где при поступлении берут кровь на сифилис. 

Ежегодно переболевших сифилисом госпитализируют и проводят профилактическое лечение. 

Донорами крови такие люди быть уже не могут. 

Фото Матвей Фляжников 

Опасный возраст 

Наибольшее число заражений сифилисом приходится на людей в возрасте от 16 до 39 лет – время активной половой жизни. Но сейчас по медстандартам врачи обязаны обследовать на сифилис всех молодых людей (и девушек) от 13 лет. 

Что интересно, мужчины болеют сифилисом в 2-4 раза чаще, чем женщины.

 

Целоваться через платок. Личные методы профилактики 

Первое и главное – понимать, с кем вы вступаете в половую связь. Знаете ли вы этого человека, можете ли ему доверять? Лучше, конечно, сразу просить справку о том, что у человека нет инфекций, передающихся половым путем. Что он здоров и безопасен. 

— Спрашивать о том, когда ты в последний раз был у врача, а документ покажи? – это серьезный психологический барьер, — говорит врач. – У вас конфетно-букетный период, бабочки в животе, а тут ты со своим – справку давай! Сразу как будто вся романтика обнуляется. Однако лучше уж один раз испытать неловкость, чем потом столкнуться с последствиями заболевания. Но и барьерный путь контрацепции тоже никто не отменял. Хотя даже при поцелуях все равно сохраняется риск заражения. 

В проникающем сексе с малознакомым (это тот, у кого свежей справки нет) партнером надо обязательно использовать презерватив. Незащищенный оральный секс при отсутствии кондома не выход! (помним про поцелуи). 

Не следует пользоваться столовыми приборами, которыми пользовался кто-то до вас, на унитаз в общественном месте лучше стелить одноразовое гигиеническое сиденье. Про пустышки, детей и жеваный мякиш мы говорили выше.

 

И просветительская работа! Государственные меры профилактики 

Ежегодная диспансеризация. По медицинским стандартам каждый человек в России должен раз в год пройти медосмотр – сдать кровь на ВИЧ и сифилис, сделать флюорографию, женщины должны посетить гинеколога, мужчины – хирурга. Следить за этим должны учреждения образования и руководители предприятий, раз в год отправляя учеников, студентов и сотрудников на профосмотр. 

Повышение уровня жизни. Давно замечено, что, чем ниже уровень жизни, тем выше заболеваемость. Человек из глухой деревни, у которого домик с удобствами на улице и баня раз в месяц, может легко пропустить первые признаки того же сифилиса. Или просто не сможет обратиться за медицинской помощью. 

Просветительская работа. Раньше врачи с лекциями об инфекциях и заболеваниях, передающихся половым путем, приходили в школы, вузы, колледжи, на производства. Рассказывали о способах заражения и методах контрацепции. Сейчас просветительская работа так широко не ведется – в школы никто не приходит, потому что там дети, которых надо охранять от нежелательной информации. Те же дети сейчас рано взрослеют, прекрасно пользуются интернетом, откуда черпают свои знания. Не всегда их критически осмысливая. И лечат они себя так же – через интернет. Раз Пете с Васей лекарство при таких симптомах помогло, значит и мне поможет. А одинаковые симптомы могут быть у самых разных заболеваний. 

Кстати, министерство здравоохранения Саратовской области подчеркивает, что просветительскую работу проводит: информация о профилактике ИППП размещена на сайтах медучреждений дерматовенерологического профиля. Областной кожвендиспансер раз в две недели у себя проводит круглые столы на тему профилактики половых инфекций и особенности бессимптомного течения сифилиса. На постоянно основе специалисты диспансера ходят с лекциями в колледжи города. Но пока в городе коронавирус, все-таки не ходят – самоизоляция и ограничительные меры им этого делать не дают.

 

Почему Саратов в лидерах? 

Чем ниже уровень жизни, тем выше уровень заболеваемости – об этом пишут во всех методичках по профилактике. На здоровье населения влияет изменение социально-экономической ситуации, разного рода потрясения: фоны, конфликты, миграция. Скорее всего, последствия самоизоляции, ограничительных мер и прочих «плюшек» пандемии covid-19 нам еще аукнутся. 

— Что касается Саратова, то тут вот еще какой момент: наш город – город с высоким притоком населения из других регионов, — объясняет Мария Маркина. – У нас много вузов, к нам едут студенты из других регионов с собственным багажом. И этим багажом пополняют нашу региональную статистику.

 

Цифры снижаются 

Надо отметить, что цифры заболеваемости «французской болезнью» в мире неуклонно снижаются. Снижаются они и в статистике Саратовской области. Сейчас в регионе состоит на учете 1182 пациента. 487 из них перенесли болезнь в прошлом.

Если в 2017 году сифилитическая инфекция была выявлена у 832 человек в регионе, в 2018 уже у 714 человек, то в 2019 заразившихся оказалось всего 695.

За шесть месяцев 2020 года было выявлено 299 заболевших.  

Сдать кровь на сифилис можно бесплатно в той поликлинике, к которой вы прикреплены. Вас обязательно проверят на наличие инфекции, если вас госпитализируют в стационар. Или вы можете сдать кровь в кожно-венерологическом диспансере в Энгельсе на ул. Колотилова д. 50, в Саратове на ул. Мясницкая д.143. 

Методы исследования крови на сифилис разнообразны РМП – реакция микропреципитации, ИФА — иммуноферментный анализ и РПГА — реакция пассивной гемагглютинации. 

Будьте здоровы и берегите себя!

Сифилис — симптомы, признаки — лечение сифилиса

Сифилис — это классическое венерическое заболевание, при котором просиходит поражение слизистых оболочек, покровов кожи, внутренних органов (а именно сердечно-сосудистой системы, желудка, печени), костно-суставной и нервной систем.

Вызывается сифилис бледной трепонемой, которая является микробом спиралевидной формы с большой подвижностью. При размножении, каждая бледная трепонема делится на несколько частей. Период ее размножения — 33 часа (учет этого времени важен при лечении сифилиса).

Заниматься самолечением сифилиса ни в коем случае нельзя! Пациент должно находиться под контролем врача и регулярно подтверждаться лабораторными методами.

 

Как передается сифилис

Заразиться сифилисом можно половым путем, однако очень редко бывают случаи заражения бытовым путем, при контакте с больным сифилисом. Также сифилис передается от матери плоду и во время переливания крови.

Симптомы сифилиса

Сифилис проявляет себя не сразу, а только через 3-5 недель после заражения. Этот период называется инкубационным. В это время бактерии распространяются по всему организму с током лимфы и крови, происходит их размножение. Когда бактерий становится очень  много и появляются первые признаки болезни, тогда наступает стадия первичного сифилиса. В этот момент на теле, в месте, где произошло заражение появляются язвочки — твердый шанкр. Это кожное образование выглядит, как плотное, красное, безболезненное пятно с эрозией (поверхностной язвочкой) на верхушке. Вокруг твердого шанкра воспалительных изменений обычно не бывает.

Через 6-7 недель после того, как появились первые признаки сифилиса, возникает сыпь, которая начинает распространяться по всему телу. С этого момента сифилис переходит во вторичную стадию. В этот период различные сыпи появляются и через некоторое время исчезают сами собой. Третичный период сифилиса наступает через 5-10 лет. Тогда на коже появляются узлы и бугорки.

В середине твердого шанкра также может образовываться плотный налет серовато-желтого цвета. Как правило, диаметр шанкра составляет от 10 до 20 мм. Чаще всего, появляется шанкр на половых органах: на головке полового члена, в венечной борозде, внутреннем и наружном листках крайней плоти; реже — на больших или малых половых губах и на коже мошонки и лобка. Кроме того, шанкр также может возникнуть вне половых органов — чаще всего на сосках молочных железы, красной кайме губ и даже на миндалинах в горле.

Чем опасен сифилис?

В первичном периоде, когда только произошло заражение сифилисом, твердый шанкр у мужчин может осложниться парафимозом, воспалительным фимозом, баланопоститом, баланитом, гангренизацией и фагеденизмом.

Во вторичном периоде осложнением может быть сифилитическое облысение (на 3-5 месяце заболевания), также могут быть поражены суставы, кости и надкостницы.

Во время третичного периода уже наблюдается необратимое деструктивное поражение внутренних органов (воспаление кости, надкостницы, поражение мягкого и твердого неба, языка, дужек, глотки с образованием отверстий, остеомиелиты, поражение нервной системы, гидрартрозы и остеоартрозы, аорты, сердца и других органов).

Диагностика сифилиса

Диагностировать сифилис можно сдав анализ крови на сифилис. Существуют нетрепонемные (RPR, RW с кардиолипиновым антигеном) и трепонемные (РИФ, РИБТ, RW c трепонемным антигеном). При массовом обследовании в поликлинике или больнице чаще всего используют нетрепонемные анализы крови.

Для того, чтобы оценить эффективность лечения сифилиса, обычно применяют нетрепонемные анализы крови в количественном исполнении (например, RW с кардиолипиновым антигеном). При этом, трепонемные анализы крови у человека, перенесшего сифилис, всю жизнь будут оставаться положительными. В связи с этим, чтобы оценить эффективность лечения трепонемные анализы крови (РИБТ, РИФ, РПГА) не применяют.

Лечение сифилиса

Лечение сифилиса начинается после того, как точно установлен точный диагноз и подтвержден лабораторными анализами. При этом, лечение сифилиса должно быть комплексным и индивидуальным. В основе лечения сифилиса — прием антибиотиков. В некоторых случаях назначают лечение, которое дополняет прием антибиотиков — физиотерапию, общеукрепляющие препараты, иммунотерапию и т. д.

Если Вы действительно ищете своего доктора…

Врачи дерматовенерологи

Анализ на сифилис

Сифилис — это довольно частое венерическое заболевание, вызываемое бактериями treponema pallidum. Сифилис поражает организм зараженного, включая центральную нервную систему, кожные покровы, а также некоторые внутренние органы. В основном инфекция передается половым путем, но не редки случаи заражения при простом контакте с больным, через бытовые предметы (одежда, белье, посуда), а также от матери к плоду. Опасность заключается и в том, что характерные для болезни симптомы не проявляются на ранней стадии. Поэтому при малейшем подозрении на возможность заражения следует сдать анализ на сифилис. 

Стадии развития сифилиса:

• Первая стадия. Наступает в периоде от 14 до 20 дней после заражения. Характерным признаком является появление язв на теле, половых органах. Ранки не доставляют каких-либо болевых ощущений.
• Вторая стадия. На данном этапе на ладонях и ступнях появляется болезненная сыпь, общее состояние организма ухудшается, возможны боли в горле, отечность лимфатических узлов. Вторичный сифилис определяется через 15-40 дней.

Сифилис — сложное инфекционное заболевание, но его можно вылечить, особенно на ранних стадиях. Сложнее всего дело обстоит со скрытой, бессимптомной формой. В этом случае больной в течение нескольких лет может являться опасным носителем инфекции и не знать об этом.

Важно понимать, что при любом подозрении на заболевании следует пройти обследование не только самостоятельно, но и предупредить о своих опасениях полового партнера, людей, тесно контактирующих с вами. Необходимо знать, что помимо последствий, вызываемых самой болезнью, увеличивается риск заболевания ВИЧ и другими инфекциями.

Расшифровка анализа на сифилис:

Нормой для здорового человека является отрицательный результат. Тем не менее, в редких случаях это может свидетельствовать и о ранней стадии болезни.
Положительный результат анализа говорит о текущем заболевании и/или о скрытой форме сифилиса. В некоторых случаях положительный тест может быть обнаружен у человека, который ранее являлся зараженным, но уже прошел курс лечения.

Подготовка к анализу на сифилис:

• Следует ограничить употребление табака за час до анализа, полностью прекратить курение за тридцать минут до забора крови
• За сутки до исследования запрещено употреблять алкоголь.

Быстро и анонимно сдать анализ на сифилис вы можете в филиалах сети «Медкомиссия №1». Наши лаборатории расположены в 7 районах Санкт-Петербурга и оснащены современным высокотехнологичным оборудованием. Результаты анализа будут готовы в кратчайшие сроки.

твердый шанкр и сыпь — клиника «Добробут»

Лечение сифилиса у женщин при беременности

Наиболее серьезным заболеванием, передающимся половым путем, считается сифилис. Особенно опасен и коварен сифилис у женщин, которые часто замечают болезнь только на поздних стадиях. Поскольку последствия врожденного сифилиса у детей могут быть весьма тяжелыми (если ребенок не погибает на последних месяцах беременности или сразу после рождения, то у него развиваются поражения внутренних органов и кожи), при постановке на учет беременные женщины обязательно сдают анализ «на сифилис».

Возбудитель заболевания – бледная трепонема. Заражение происходит через травмированные участки кожи и слизистых оболочек, чаще всего во время половых контактов. Через микротравмы возбудитель заболевания попадает в кровоток. Спустя 3-4 недели после контакта на месте внедрения появляется небольшая язва – сифилома. Сифилис у женщин опасен тем, что сифилома часто расположена во влагалище или даже на шейке матки. Она безболезненна, а потому долго остается незамеченной. Болезнь без лечения прогрессирует. О том, как передается бытовой сифилис и какой имеет инкубационный период, о симптомах заболевания и стандартной схеме лечения мы расскажем ниже.

Как проявляется первичный и вторичный сифилис

Периоды протекания сифилиса:

• инкубационный: с момента заражения до появления видимых признаков заболевания. Длится от двух недель до трех месяцев;
• первичный: со времени появления твердого шанкра на месте внедрения возбудителя. Первый признак сифилиса на ранних стадиях – шанкр. Он имеет вид эрозии или язвочки цвета красного мяса. Диагностика твердого шанкра во рту и на губах иногда бывает затруднена из-за его атипичной формы. Через неделю увеличиваются и уплотняются близлежащие лимфатические узлы. Спустя 2-3 недели увеличиваются в размере все лимфатические узлы, возникает слабость, головная боль;
• вторичный: появляется кожная сыпь, которая может исчезать без лечения, а затем вновь появляться. Виды высыпаний: узелковые, пузырьковые, гнойничковые. Через 5-6 месяцев возможно выпадение волос, поражение нервной системы. Подробнее о том, как проявляется первичный и вторичный сифилис, читайте на нашем сайте https://www. dobrobut.com/;
• третичный: при отсутствии лечения наступает через 3,5-4 года. Поражаются многие ткани и органы, вплоть до спинного и головного мозга.

Первый симптом заражения половым сифилисом у мужчин – появление твердого шанкра (единичного или множественных). Язва (эрозия) обычно локализуется в области гениталий (чаще на половом члене).

Как сдать анализ крови на скрытый сифилис

Анализ на сифилис в обязательном порядке сдают беременные, доноры, некоторые категории работников (медицинский персонал, повара), пациенты перед плановой операцией. Положительный результат теста на сифилис не всегда говорит о том, что у человека ЗППП. Анализы могут быть ложноположительными при острых и хронических заболеваниях, недавней вакцинации и некоторых других состояниях. Объясняется это тем, что в крови пациента имеются иммуноглобулины, которые схожи с антитрепонемными антителами. Отсюда и ложноположительный результат на сифилис. В таких случаях для получения достоверных результатов проводят повторный тест – определение в биоматериале не антител, а самого возбудителя (трепонемы).

Однако определить скрытый сифилис или поздние его формы прямыми методами нельзя, поэтому в клинической практике их используют исключительно для подтверждения диагноза. Как сдать анализ крови на скрытый сифилис? Для этой цели пользуются непрямыми методами, например всем известной RW (Реакция Вассермана). Однако сейчас применяют и более современные методы: реакцию микропреципитации (РМП) и РПР-тест (RPR).

Лечение сифилиса

При своевременной диагностике и начале лечения на первой стадии возможно выздоровление в течение 2-3 недель. Если болезнь запущена, то лечение может растянуться на два года, поэтому важно своевременно диагностировать сифилис. Особенно внимательными к своему здоровью должны быть женщины – сифилис у них часто протекает в скрытой форме, а характерные симптомы появляются лишь на поздних стадиях.

Основные направления медикаментозной терапии:

• антибиотики группы пенициллина;
• антигистаминные препараты;
• витамины;
• биостимуляторы.

С момента изобретения пенициллина антибиотики этой группы выступают препаратами выбора. К лекарственным средствам высокой активности относятся Бициллин-1, Ретарпен, Экстенциллин. При непереносимости этого ряда антибиотиков назначают препараты резервной группы – тетрациклины и макролиды. Витамины и биостимуляторы назначают для повышения защитных сил организма. Необходимо учитывать возможность развития вагинального кандидоза при применении высоких доз антибиотиков. Женщинам параллельно проводят противогрибковую терапию. Неспецифическое лечение (пиротерапия, аутогемотерапия) показано при злокачественном и рецидивирующем течении болезни. Лечение сифилиса у женщин при беременности проводят препаратами группы пенициллина, что относительно безопасно как для матери, так и для будущего ребенка.

Самолечение при сифилисе недопустимо, так как может привести к развитию устойчивых форм возбудителя. Своевременное обращение к дерматовенерологу и правильно подобранная терапия позволяют полностью победить болезнь.

Связанные услуги:
Консультация инфекциониста
Лабораторное исследование крови

90 000 лемуров сифаки, занесенных в список «находящихся под угрозой исчезновения» в связи с загадочной гибелью

• За последние полтора месяца по меньшей мере 31 сифака Верро (Propithecus verreauxi) умер в заповеднике Беренти недалеко от южной оконечности Мадагаскара.
• Это одна из крупнейших смертей лемуров, которую могут вспомнить ученые.
• Эксперты полагают, что виноваты паразиты или клещевые заболевания, но точная причина остается неизвестной.
• На большом собрании МСОП, состоявшемся на прошлой неделе в Антананариву, столице Мадагаскара, специалисты по приматам решили перевести все девять видов сифака из находящихся под угрозой исчезновения в находящиеся под угрозой исчезновения.

Лемуры на Мадагаскаре годами страдают от вырубки лесов, браконьерства, засухи и других проблем. Теперь в очень посещаемом заповеднике Беренты у южной оконечности острова один вид сталкивается с новой таинственной угрозой.

За последние полтора месяца в заповеднике погибло не менее 31 сифаки Верро ( Propithecus verreauxi ). Большинство из них были найдены уже мертвыми; другие были найдены тяжело больными и позже умерли от дыхательной недостаточности. Сотрудники Berenty и местные ученые связались с ветеринарами и приматологами по всему миру.Эксперты считают, что виноваты паразиты или клещевые заболевания, но точная причина остается неизвестной.

Это одна из крупнейших смертей лемуров, которую могут вспомнить ученые на Мадагаскаре. «Мы никогда раньше не видели ничего подобного», — сказала Монгабею Патрисия Райт, эксперт по лемурам и основатель Center ValBio, исследовательского центра на востоке центральной части Мадагаскара.

Сифака Верро (Propithecus verreauxi). Изображение Ретта А. Батлера.

Сифаки Верро боролись задолго до этой вспышки.Белые пушистые лемуры уже были занесены в список находящихся под угрозой исчезновения Международным союзом охраны природы (МСОП). По данным МСОП, популяция сильно фрагментирована и сокращается на протяжении десятилетий. Этот вид встречается в засушливых районах и колючих лесах на юго-западе Мадагаскара.

По стечению обстоятельств, на прошлой неделе в Антананариву, столице Мадагаскара, состоялось большое собрание группы специалистов по приматам из Красного списка МСОП, и переоценка статуса опасности для всех видов лемуров была главным пунктом повестки дня.По словам присутствовавших, группа решила повысить список всех девяти видов сифака из находящихся под угрозой исчезновения в категорию находящихся под угрозой исчезновения. Изменение статуса еще не официально, но во время встречи на странице Facebook группы специалистов проекта Lemur Conservation Network об этом упомянули: «Нам очень грустно сообщать, что все виды сифака теперь находятся под угрозой исчезновения».

Сифаки Верро путешествуют группами до 14 особей, и по крайней мере две из этих групп были уничтожены в Беренти с конца марта.Беренти — это частный заповедник, которым управляет французская семья, владеющая местным бизнесом по производству сизаля. На протяжении десятилетий он был исследовательским центром и популярным местом экотуризма. Лемуры — главная достопримечательность.

Ученые собрали воедино сведения о причине смерти, оценив больных сифаков, которые были найдены еще живыми. У некоторых из этих сифаков были парализованы задние ноги; чтобы двигаться, им приходилось волочиться руками по лесной подстилке. (Обычно сифаки Верро обладают мощными задними лапами, которые позволяют им подпрыгивать боком по земле или прыгать с дерева на дерево на расстояние до 3 метров или 10 футов.) В течение суток в большинстве случаев паралич перемещался вверх по телу и в легкие, вызывая смерть от дыхательной недостаточности.

Сифаки Верро в ожесточенной территориальной погоне. Изображение Ретта А. Батлера.

Большинство мертвых сифаков были обнаружены покрытыми клещами, которые, по мнению ученых, могли вызвать паралич, передав сифакам нейротоксин или некоторые виды инфекционных риккетсиозных бактерий. Однако в 2014 году ученые обнаружили множество других сифаков Верро, покрытых клещами, и у них не было никаких признаков болезни.

Другая возможность заключается в том, что недавние смерти были вызваны одноклеточными паразитами токсоплазмы, которые поражают нервную систему и которые, подобно риккетсиозным бактериям, могли быть занесены в этот район людьми. Паразиты могли находиться в местной почве или в кошачьем навозе. Образцы тканей и органов из тел мертвых сифаков были отправлены в Мадагаскарский институт Пастера в Антананариву, но результаты анализов еще не получены.

Почти все погибшие сифаки были самцами, и это поначалу навело ученых на мысль, что, возможно, смерть наступила из-за агрессивных территориальных споров.Поскольку внешние угрозы вынудили сифаку Верро и другие виды лемуров скапливаться на небольших участках, в этом нет ничего удивительного. «Когда мы нашли первых 9 [мертвых сифаков], мы подумали, что это может быть связано с перенаселением», — сказала Монгабею управляющая заповедником Клэр Фулон. Однако на трупах не было признаков насилия, и теперь эта версия исключена. Эксперты не уверены, почему большинство мертвых сифаков — самцы.

Сифака Верро кормит своего ребенка. Изображение Ретта А. Батлера.

Какой бы ни была причина болезни, другие виды лемуров не так уязвимы к ней, как сифаки Верро. До сих пор ни один из множества кошачьих лемуров ( Lemur catta ) в том же районе не пострадал. Однако один бурый лемур (род Eulemur ) был найден мертвым, по-видимому, от той же болезни.

С 30 апреля не было обнаружено ни одного больного или мертвого сифака, поэтому эксперты надеются, что худшее уже позади. «Поскольку большинство новостей указывало на это локальное событие в течение временной шкалы, я надеюсь, что то, что стало причиной 37 смертей (это число, которое обсуждалось на заседании МСОП), прошло своим чередом», — Эдвард Луис, директор неправительственной организации Мадагаскарское партнерство по биоразнообразию и директор по генетике сохранения в Университете США.Зоопарк и аквариум Генри Дурли в Омахе, расположенный в Южной Омахе, говорится в электронном письме Монгабею. (Луи и другие эксперты назвали число погибших около тридцати, но Фоулон, управляющий заповедником, позже сказал Монгабаю, что во время вспышки погиб только 31 сифака. )

Команда ветеринаров из Германии прибыла на место, чтобы поддержать малагасийского ветеринара, работающего над этим случаем.

Танец сифаки Верро. Изображение Ретта А. Батлера.

ОБРАТНАЯ СВЯЗЬ: Используйте эту форму, чтобы отправить сообщение редактору этого сообщения.Если вы хотите опубликовать публичный комментарий, вы можете сделать это внизу страницы.

Животные, Биоразнообразие, Кризис биоразнообразия, Сохранение, Обезлесение, Экосистемы, Вымирающие виды, Окружающая среда, Вымирание, Фрагментация леса, Леса, Среда обитания, Деградация среды обитания, Разрушение среды обитания, Охота, Лемуры, Заготовка леса, Млекопитающие, Парки, Приматы, Охраняемые территории, Тропические леса, Исследования, Тропические леса, Дикая природа, Охрана дикой природы Распечатать

(PDF) Биомедицинская оценка сифаки Верро (Propithecus Verreauxi) из национального парка Киринди Митеа на Мадагаскаре

23.Юнге Р.Э., Луи Э.Э. Биомедицинская оценка

черных лемуров (Eulemur macaco macaco) в заповеднике Локобе

, Мадагаскар. J Zoo Wildl Med. 2007;38:67–

76.

24. Каур Т., Сингх Дж., Тонг С., Хамфри С., Клевенджер

Д., Тан В., Секели Б., Ван И, Ли И, Алекс Мьюз Е,

Киёно M, Hanamura S, Inoue E, Nakamura M,

Huffman MA, Jiang B, and Nishida T. Описательная

эпидемиология смертельных респираторных вспышек и обнаружение связанного с человеком метапневмовируса у диких

шимпанзе (Pan troglodytes) в горах Махале

Национальный парк, Западная Танзания.Am J Приматол.

2008;70:755–765.

25. Ким С.И., Хан Дж.С., Сузуки Т., Хан С.С. Косвенный

показатель транспортного стресса в гематологических показателях у

вновь приобретенных яванских макак. J Мед Приматол.

2005; 34: 188–192.

26. Кок Р.А., Михок С.Р., Вамбуа Дж., Мванзия Дж.,

Сайгава К. Влияние транслокации на гематологические параметры

черных носорогов на свободном выгуле (Diceros

bicornis michaeli) в Кении. J Zoo Wildl Med.

1999;30:389–396.

27. Kowalewski MM, Salzer JS, Deutsch JC, Rano

M, Kuhlenschmidt MS, Gillespie TR. Черно-золотые

обезьяны-ревуны (Alouatta caraya) как стражи

здоровья экосистемы: закономерности заражения зоонозными простейшими

в зависимости от степени контакта человека с приматами. Am J

Приматол. 2011;73:75–83.

28. Лейтон Ф.А. Оценка риска для здоровья при транслокации

диких животных. Rev Sci Tech.

2002; 21:187–195.

29. Льюис Р.Дж., Баннар-Мартин К.Х. Воздействие циклона

Фанеле на сухой тропический лес на Мадагаскаре.

Биотропика. 2012;44:135–140.

30. Лилли А.А., Мелман П.Т., Доран Д. Кишечные

паразиты у горилл, шимпанзе и человека на исследовательском полигоне Мон-

дика, Национальный парк Дзанга-Ндоки, Центральная Африканская Республика,

. Int J Приматол. 2002; 23: 555–573.

31. Лайлз А.М., Добсон А.П. Инфекционные болезни и

интенсивное лечение — динамика популяции, угрожающие

хозяева и их паразиты. J Zoo Wildl Med.

1993; 24:315–326.

32. Мэр М.И., Соммер Дж.А., Хоук М.Л., Заонарив-

ло Дж.Р., Райт П.С., Ингрэм С., Энгель С.Р., Луис Э.Е.

Специфический статус Propithecus spp. Int J Приматол.

2004; 25:875–900.

33. МакКаллум Х., Добсон А. Обнаружение угроз болезней и паразитов

исчезающим видам и экосистемам.

Trends Ecol Evol. 1995; 10: 190–194.

34. Muehlenbein MP, Schwartz M, Richard A.

Паразитологические анализы сифаки (Propithecus ver-

reauxi) в Беза Махафали, Мадагаскар.J Zoo Wildl

Мед. 2003; 34: 274–277.

35. Низейи Д.Б., Мвебе Р., Нантеза А., Крэнфилд М.Р.,

Калема Г.Р., Грачик Т.К. Криптоспоридии зр. и

Giardia sp. инфекции у горных горилл (Gorilla

gorilla beringei) национального парка Бвинди Импенетрабл

, Уганда. J Паразитол. 1999; 85: 1084–1088.

36. Обернье Дж.А., Болдуин Р.Л. Установление

соответствующего периода акклиматизации после перевозки лабораторных животных. ILAR J. 2006;47:364–

369.

37. Rasambainarivo F, Gillespie T, Wright P, Arsen-

ault J, Villeneuve A, Lair S. Исследование Giardia и

Cryptosporidium у лемуров. Ranomafana Na-

Национальный парк, Мадагаскар. Дж. Уайлдл Дис. 2013; 49: 741–743.

38. Расамбайнариву Ф.Т., Юнге Р.Э. 12-месячное обследование

желудочно-кишечных гельминтозов лемуров

, содержащихся в двух зоопарках на Мадагаскаре. J Zoo Wildl Med.

2010;41:638–642.

39. Ричард А.Ф. Поведенческие вариации: тематическое исследование

малагасийского лемура. Льюисбург (Пенсильвания): Bucknell Univ. Нажмите;

1978. 211 стр.

40. Ричард А.Ф., Николл М.Е. Социальное доминирование самок и основной обмен веществ у малагасийских приматов,

Propithecus verreauxi. Am J Приматол. 1987; 12: 309–314.

41. Ричард А.Ф., Ракотоманга П., Шварц М.

Демография Propithecus verreauxi в Беза Махафали,

Мадагаскар: соотношение полов, выживание и рождаемость, 1984–

1988. Am J Phys Антропол. 1991; 84: 307–322.

42. Ричард А.Ф., Ракотоманга П., Шварц М.

Распространение Propithecus verreauxi в Беза Махафали,

Мадагаскар: 1984–1991 гг. Am J Приматол. 1993; 30:1–20.

43. Рулке-Паркер М.Э., Мансон Л., Пакер С., Кок

Р., Кливленд С., Карпентер М., О’Брайен С.Дж., Поспишил

А, Хофманн-Леманн Р., Лутц Х., Мваменгеле Г.Л.,

Мгаса MN, Machange GA, Summers BA, Appel MJ.

Эпидемия вируса чумы собак среди львов серенгети

(Panthera leo).Природа. 1996; 379: 441–445.

44. Salzer JS, Rwego IB, Goldberg TL, Kuhlen-

schmidt NS, Gillespie TR. лямблии сп. и Cryptospo-

ridium sp. инфекций у приматов в фрагментированных и

ненарушенных лесах в западной части Уганды. J Паразитол.

2007; 93: 439–440.

45. Sleeman JM, Meader LL, Mudakikwa AB,

Foster JW, Patton S. Желудочно-кишечные паразиты

горных горилл (Gorilla gorilla beringei) в парке

National des Volcans, Руанда. J Zoo Wildl Med.

2000;31:322–328.

46. Спенсер Дж. А., Джойнер К. С., Хилтон К. Д., Дуби Дж. П.,

Тойвио-Киннукан М., Минк Дж. К., Блэгберн Б. Л. Рассеянный токсоплазмоз

у кольцехвостого лемура

(Lemur catta) в неволе. J Паразитол. 2004; 90: 904–906.

47. Wasfy M, Oyofo B, Elgindy A, Churilla A.

Сравнение консервирующих сред для хранения образцов стула

. Дж. Клин Микробиол. 1995; 33: 2176–2178.

48. Вобезер, Г.Стратегии борьбы с болезнями

диких животных. Rev Sci Tech. 2002; 21: 159–178.

49. Ян Л., Грей В. Педиатрические эталонные интервалы для

костных маркеров. Клин Биохим. 2006; 39: 561–568.

Получено для публикации 7 марта 2013 г.

P-FAKSer732 выявляется в опухолевых клетках и не локализуется в ЖК при миграции

Проанализировано присутствие P-FAKSer732 вместе с -Tyr576, сайтом, отвечающим за максимальную активность FAK, при меланоме, раке яичников и щитовидной железы клетки. В основном, во всех клеточных линиях экспрессия FAK также была связана с присутствием P-FAKSer732 и -Tyr576, хотя и на различных уровнях (рис. 1а). FAK в основном фосфорилировался по Ser732 в Me # 21 и # 25. Высокая экспрессия FAK, P-FAKSer732 и -Tyr576 также наблюдалась в Me#20, первичной опухоли, и в Me#31, висцеральных метастазах. Все эти клеточные линии меланомы, которые также экспрессируют самые высокие уровни FAK, принадлежат к подмножеству меланом, лишенных фактора транскрипции меланоцитов MITF и антигенов дифференцировки меланомы. ¹⁴ Три из восьми карцином яичников и одна из трех линий клеток щитовидной железы экспрессировали FAK, P-FAKSer732 и -Tyr576 на высоких уровнях. В лизатах опухолевых клеток, содержащихся в свежем асците рака яичников на поздних стадиях (дополнительная таблица S1), FAK также был фосфорилирован по Ser732 (рис. 1b), что указывает на то, что это фосфорилирование не ограничивается клетками, культивируемыми in vitro .

Рисунок 1

P-FAKSer732 выявляется в опухолевых клетках и не локализуется в ЖК при миграции. ( a ) Вестерн-блоттинг лизатов тотальных клеток меланомы ( n =14), раковых клеток яичников ( n =9) и щитовидной железы ( n =3). ( b ) Вестерн-блот-анализ тотальных клеточных лизатов из клеток асцита рака яичников ( n =8). Наличие в асците опухолевых клеток оценивали с помощью маркера эпителиальной адгезии е-кадгерина (кадх). ( c ) Анализ заживления ран, выполненный на контрольных (CO) или FAK- (FAK) молчащих клетках (Me)#28.Левая панель: вестерн-блоттинг, показывающий уровень подавления FAK и способность к заживлению ран через 4, 24 и 30 часов после царапины. Звездочками отмечены статистически значимые значения ( P ≤0,01). Планка погрешности, С.Д. Правая панель: репрезентативные изображения, показывающие раны в начальной точке ( t = 0 ч), через 24 ч и закрытие ран в конце эксперимента ( t = 30 ч). Иммуноблотинг проводили с антителами против белков, представленных справа. β -актин использовали в качестве контроля загрузки геля. ( d ) IF, выполненный на истощенных клетках Me # 28, индуцированных для миграции через рану. Клетки окрашивали на P-FAKSer732, -Tyr 397, -Tyr 576, FAK (зеленый) и α -тубулин (красный). Ядра окрашивали DAPI (синий). Объединенные изображения отображаются на верхних панелях. ( e ) IP на лизатах Me # 28 с нормальной кроличьей сывороткой (CO) или анти-P-FAKSer732 (S732). Иммунопреципитированные образцы анализировали методом вестерн-блоттинга. Иммуноблотинг проводили с антителами против белков, указанных справа.

В опухолевых клетках FAK регулирует подвижность клеток, направляя миграцию клеток. Во время миграции фосфорилированные FAK по остаткам тирозина локализуются в ЖК и/или в передней и задней части клеток. ¹ Действительно, временный нокдаун FAK с помощью специфической миРНК в клетках Me#28 индуцировал статистически значимое снижение заживления ран по сравнению с клетками, трансфицированными несайленсинговой миРНК, как через 24 ч, так и через 30 ч (рис. 1с), когда последний полностью залечил рану.Иммунофлуоресценцию (ИФ) использовали для анализа локализации фосфорилированных изоформ FAK в клетках Me#28, мигрирующих в рану. P-FAKSer732 локализовался в цитоплазме и в околоядерной области, но не в ЖК (рис. 1d), тогда как P-FAKTyr397 и -Tyr576 были обнаружены в цитоплазме и в ЖК переднего края. Кроме того, вестерн-блот-анализ образцов Me#28 после иммунопреципитации (IP) с антителом против P-FAKSer732 (Ab) показал, что основная форма в иммунопреципитате состояла из FAK, фосфорилированного по Ser732 (рис. 1e), тогда как доминирующая форма в несвязанная фракция содержала в основном P-FAKTyr576.

Эти результаты показывают, что FAK существует в виде двух различных пулов: первый связан с ЖК, а второй, фосфорилированный на Ser732, локализован в цитоплазме в перинуклеарной области.

FAK фосфорилируется по Ser732 независимо от взаимодействия с интегрином

Чтобы выяснить, было ли фосфорилирование Ser732 следствием фосфорилирования по Tyr397, клетки Me#28 стабильно трансфицировали конструкцией FRNK, а экспрессирующий FRNK клон F6 отбирали с помощью вестерн-блоттинга (рис. 2а).Стимуляция фетальной телячьей сывороткой (FCS) клеток Me#28, трансфицированных конструкцией FRNK (клон F6), приводила к повышенному фосфорилированию FAK только по Ser732, тогда как ложно-трансфицированные клетки также демонстрировали повышенный уровень P-FAKTyr397 и -Tyr576 (рис. 2b).

Рисунок 2

FAK фосфорилируется по Ser732 независимо от участия интегрина. ( a ) Вестерн-блот анализ тотальных клеточных лизатов клонов, полученных из FRNK-трансфецированных (Me) #28. Клон F6, экспрессирующий самые высокие уровни белка FRNK, был выбран для эксперимента, представленного на панели b.( b ) Вестерн-блоттинг тотальных лизатов клеток Me#28, трансфицированных Mock или FRNK (клон F6). β -актин использовали в качестве контроля загрузки геля. ( c ) Левая панель: вестерн-блоттинг, выполненный на лизатах голодающих клеток Me # 28, выращенных на пластике (-) или фибронектине (Fn) (+). β -актин использовали в качестве контроля загрузки геля. Правая панель: денситометрический анализ, сообщающий об уровнях фосфорилированных изоформ FAK по отношению к общей экспрессии FAK в клетках, выращенных на Fn.Приведены средние значения пяти экспериментов.

Чтобы оценить, зависело ли фосфорилирование Ser732 от вовлечения и активации интегрина, клетки Me#28 выращивали в отсутствие FCS в течение 24 часов на пластике или фибронектине. Вестерн-блоттинг на клеточных лизатах показал, что P-FAKSer732 не увеличивался в клетках, выращенных на фибронектине (рис. 2c), в то время как P-FAKTyr397 и -Tyr576 увеличивались, как и ожидалось, в клетках, выращенных на фибронектине, что указывает на то, что P-FAKSer732 не является нижестоящим эффектором. активации интегрина.

Эти результаты показывают, что фосфорилирование по Ser732 не зависит от аутофосфорилирования FAK по Tyr397, в то время как последнее необходимо для фосфорилирования по Tyr576 при вовлечении интегрина, как уже показано. ¹⁵

P-FAKSer732 накапливается в митотических клетках и совместно локализуется с МТ митотического веретена

Затем мы спросили, могут ли пролиферативные стимулы индуцировать P-FAKSer732. Действительно, стимуляция FCS голодающих клеточных линий Me # 28, OAW42 и NIM-1 индуцировала во всех из них повышенные уровни P-FAKSer732 (рис. 3а), которые сильно накапливались, как показано IF на рис. 3b, в митотических клетках. .В клетках в интерфазе P-FAKSer732 не накапливался и располагался в цитоплазме, как это уже показано на рис. 1д.

Рисунок 3

P-FAKSer732 накапливается в митотических клетках и совместно локализуется с МТ митотического веретена. ( a ) Вестерн-блоттинг тотальных лизатов голодающих или стимулированных FCS клеток. ( b ) IF, выполненный на фиксированных клетках после стимуляции FCS антителами против P-FAKSer732 (зеленый). Ядра окрашивали DAPI (синий). ( c ) Конфокальное IF, выполненное на фиксированных клетках Me # 28 с анти-P-FAKSer732 и ac- α — (левая и средняя панели) или γ -тубулин Ab (правая панель).Показаны изображения метафаз (левая и правая панели, секция 14 и 12 соответственно) и поздней анафазы (секция 11, средняя панель). Барс, 10  мк м. ( d ) IF, выполненный на клетках Me # 28 после экстракции свободного тубулина буфером PEM (см. Материалы и методы). Белыми стрелками указаны фазы митоза: 1 — профаза; 2 анафаза; 3 — телофаза; 4, цитокинез. Иммуноокрашивание проводили с анти-P-FAKSer732 (красный) и ac- α -тубулином (зеленый). Ядра окрашивали DAPI (синий).Барс, 60  мк м. ( e ) ВБ на лизатах клеток Me#28 с анти-P-FAKSer732 (S732) и Abs промежуточной цепи -динеина. Иммунопреципитированные фракции анализировали методом вестерн-блоттинга. В качестве отрицательного контроля (СО) использовали нормальную кроличью или мышиную сыворотку. Для иммуноблотинга антитела представлены справа.

Конфокальный IF был выполнен для лучшего исследования локализации P-FAKSer732 в делящихся клетках Me#28. P-FAKSer732 совместно локализован с α -тубулином в митотическом веретене во время метафазы (рис. 3c, левая панель).Во время поздней анафазы P-FAKSer732 совместно локализовался с α -тубулином в веретене, вероятно, в местах, где МТ удлиняются и сжимаются (рис. 3c, средняя панель), и накапливался в середине веретена, что указывает на взаимодействие с корковый актин. Анти-P-FAKSer732 также диффузно окрашивал цитоплазму клеток, но не наблюдалось совместной локализации с γ -тубулином в центросоме (рис. 3с, правая панель).

Кроме того, P-FAKSer732 совместно локализовался с ac- α -тубулином веретена во всех митотических фазах при экстракции растворимого тубулина (рис. 3d).

Моторный белок МТ динеин регулирует динамику МТ и тянущие силы коры на полюсах веретена. ¹⁶ Для биохимического анализа возможной связи между FAK, наблюдаемой в основном на МТ веретена, и динеином, был проведен IP на лизатах Me#28 с анти-P-FAKSer732 и антителами промежуточной легкой цепи -динеина. Анти-P-FAKSer732 коиммунопреципитировался как с ак- α -тубулином, так и с динеином (рис. 3е, левая панель). Соответственно, антитела против динеина коиммунопреципитировали с FAK, фосфорилированным на Ser732, а также с ac- α -тубулином (рис. 3e, правая панель).

Таким образом, P-FAKSer732 связывается с полимеризованными МТ веретена деления на всех стадиях митоза и биохимически связан с динеином, что указывает на его роль во время митоза.

FAK способствует пролиферации клеток, когда он фосфорилирован по Ser732

Для оценки роли P-FAKSer732 в пролиферации клетки Me#28 обрабатывали специфичной siRNA против FAK и оценивали способность к росту. Скорость роста клеток меланомы снизилась на 25% через 48 часов и до 40% через 72 часа (рис. 4а).Кроме того, фосфорилирование Ser10 гистона h4 (названного здесь PHh4), маркера митоза, ¹⁷ , было на 30% ниже в FAK-молчащих клетках по сравнению с клетками, трансфицированными контрольной siRNA (рис. 4b), что указывает на роль FAK. в контроле митоза.

Рисунок 4

FAK способствует пролиферации клеток, когда фосфорилируется по Ser732. ( a ) Анализ пролиферации, выполненный на клетках, подавленных контрольной (siCO) или FAK- (siFAK) siRNA. Показаны репрезентативные кривые роста одного из трех независимых экспериментов; каждая точка представляет собой среднее значение трех повторов.Столбики погрешностей, С.Д. Звездочки указывают статистически значимые значения ( P <0,0001). ( b ) Митотический индекс, выполненный на контрольной (siCO) или FAK- (siFAK) молчащей (Me) # 28 клетке. Уровень митоза представлен как процент PHh4-позитивных клеток, измеренный с помощью FACS. Звездочка, P ≤0,05. ( c ) Скорость пролиферации контрольных (siCO)- или FAK- (siFAK)-молчащих клеток Me#28, трансфицированных только GFP, wt GFP- или Mut GFP-FAK векторами. Эксперимент проводился в трехкратной повторности.Звездочки указывают статистически значимые значения ( P <0,001). Столбики погрешностей, С.Д. ( d ) Вестерн-блоттинг клеточных лизатов трансфектантов, описанных выше, обработанных контрольной (siCO) или FAK (siFAK) siRNA. Эндогенный ФАК, тонкая стрелка, эктопический ФАК, толстая стрелка. Для иммуноблотинга Abs указаны справа. β -актин использовали в качестве контроля загрузки геля.

Для специфической оценки роли P-FAKSer732 в пролиферации клеток мы временно трансфицировали контрольные клетки или клетки Me#28 с замалчиванием FAK конструкцией GFP отдельно или содержащей GFP-FAK дикого типа (wt) или мутантный FAK на Ser732→Ala ¹⁰ (названный здесь Mut GFP-FAK).Контрольные молчащие клетки, трансфицированные Mut GFP-FAK, показали снижение скорости роста на 53% по сравнению с клетками, трансфицированными GFP-FAK дикого типа (рис. 4c). Уменьшение роста достигало 70%, когда Mut GFP-FAK трансфицировали в клетки, заглушенные FAK. Повторная экспрессия GFP-FAK дикого типа в FAK-молчащих клетках не была способна вернуть пролиферацию к пролиферации, наблюдаемой в клетках, обработанных контрольной миРНК, хотя наблюдалось 30% увеличение по отношению к обработанным siFAK клеткам, трансфицированным только GFP. Эти данные подтверждают гипотезу о том, что тонкий баланс между общим FAK и P-FAKSer732 необходим для поддержания правильной скорости роста.

Приведенные выше результаты были дополнительно подтверждены вестерн-блоттингом клеточных лизатов трансфектантов, описанных выше. В клетках, трансфицированных GFP-FAK как дикого типа, так и Mut, наблюдалось снижение PHh4 (рис. 4d), что указывает на роль во вступлении в митоз. Наоборот, экспрессия Mut GFP-FAK увеличивала количество полимеризованных МТ, оцениваемых с помощью антиацетилированных α -тубулина (ac- α -тубулина) Ab.

Эти данные убедительно указывают на то, что P-FAKSer732 связан с повышенным потенциалом роста, и вместе с результатами, показанными выше, также подтверждают гипотезу о его участии в регуляции динамики МТ и в сборке митотического веретена.

P-FAKSer732 способствует деполимеризации МТ

Исследовать, может ли влияние на МТ, проанализированное как ac- α -тубулин, быть связано только с клетками P-FAKSer732, NIM-1, которые экспрессируют низкие уровни FAK ( Фигура 1а), трансфицировали конструкцией, экспрессирующей wt и Mut GFP-FAK. Вестерн-блоттинг клеточных лизатов показал, что клетки, трансфицированные Mut GFP-FAK, содержали примерно в 2,5 раза больше ac- α -тубулина по сравнению с клетками, трансфицированными GFP-FAK дикого типа (фиг. 5a).Наоборот, iper-экспрессия FAK, как и в клетках, трансфицированных GFP-FAK дикого типа, была связана с 50% снижением ac- α -тубулина по сравнению с клетками, трансфицированными GFP.

Рисунок 5

P-FAKSer732 способствует деполимеризации МТ. ( a ) Верхняя панель: вестерн-блоттинг клеточных лизатов из клеток NIM-1, трансфицированных только GFP, векторами wt или Mut GFP-FAK. Эндогенный ФАК, тонкая стрелка, эктопический ФАК, толстая стрелка. Нижняя панель: денситометрический анализ, выполненный на вестерн-блоттинге, показанный на верхней панели.Показаны результаты трех проведенных экспериментов. ( b ) Анализ повторного роста МТ проводили на клетках Me#28 и OAW42, трансфицированных контрольной (siCO) или FAK- (siFAK) siRNA. Для иммуноблотинга Abs указаны справа. β -актин использовали в качестве контроля загрузки геля

Тот факт, что количество полимеризованных МТ было обратно пропорционально количеству P-FAKSer732, подтверждает гипотезу о том, что FAK может модулировать динамику МТ. Чтобы проверить эту возможность, мы провели анализ повторного роста MT на клетках Me # 28 и OAW42 после подавления FAK.Молчащие клетки обрабатывали нокодазолом в течение ночи, чтобы вызвать деполимеризацию МТ, что оценивали по отсутствию ac- α -тубулина, а затем анализировали повторный рост МТ после вымывания нокодазола. FAK-молчащие клетки показали более высокое количество ac- α -тубулина, что указывает на более высокие уровни полимеризованных МТ, и после обработки нокодазолом ac- α -тубулин был обнаружен незначительно. Следует отметить, что нокдаун FAK индуцировал лучшее восстановление повторного роста МТ после удаления нокодазола по сравнению с клетками, трансфицированными контрольной миРНК (рис. 5b).

Эти данные убедительно указывают на то, что FAK, фосфорилированный по Ser732, играет роль в деполимеризации МТ.

Отсутствие фосфорилирования Ser732 нарушает сборку веретена и митоз

Для специфической оценки роли P-FAKSer732 во время митоза клетки дикого типа и Mut GFP-FAK временно трансфицировали в клетки Me#28 и NIM-1. В интерфазе wt (рис. 6а, левая панель) и Mut GFP-FAK (рис. 6b, левая панель) были в основном локализованы в местах FA, и между двумя трансфектантами не наблюдалось различий.В митотических клетках Mut GFP-FAK, локализованный в случайно расположенном веретене, демонстрирует диффузное окрашивание вдоль всего веретена, а хромосомы выглядят значительно не выровненными (рис. 6b, правая панель). Клетки, трансфицированные GFP-FAK дикого типа, показали правильное веретено с GFP-FAK дикого типа, в основном локализованным на полярных МТ (рис. 6а, правая панель). В соответствии с этими результатами число митозов было в шесть и в три раза ниже в клетках Me#28 и NIM-1, трансфицированных Mut GFP-FAK (рис. 6c).

Рисунок 6

Отсутствие фосфорилирования Ser732 нарушает сборку веретена и митоз.Клетки Me#28 и NIM-1 временно трансфицировали векторами дикого типа ( a ) или Mut GFP-FAK ( b ). IF проводили с антителами против α -тубулина (красный) на фиксированных клетках. Ядра окрашивали DAPI (синий). Вставки внизу сообщают о зеленом/красном слиянии, показывая локализацию в веретене экзогенного дикого типа или Mut GFP-FAK. Барс, 10  мк м. ( c ) Число митозов в трансфицированных клетках. Столбики погрешностей, С.Д. Звездочками отмечены P ≤0,05

Путь MEK/ERK участвует в фосфорилировании по Ser732, связанному с полимеризованными МТ

Несколько солидных опухолей имеют гиперактивированный путь MEK/ERK, и уже предполагалось, что ERK является регулятором МТ динамика и митоз. ^{18, 19} Таким образом, было проанализировано возможное участие путей MEK/ERK и Rho/ROCK, которые генерируют P-FAKSer732 в ЭК, ¹² при обработке UO126 и Y27632, которые являются ингибиторами MEK и ROCK соответственно. В клетках Me # 28, стимулированных FCS, UO126 ингибировал P-FAKSer732 почти на 90%, а Y27632 снижал P-FAKSer732 до 30% (рис. 7a). Поскольку FAK может быть восходящим и нисходящим эффектором путей MEK/ERK и Rho/ROCK, ²⁰ было проанализировано влияние экспрессии FAK на эти пути.Временное замалчивание FAK в клетках Me#28 индуцировало 35% снижение фосфорилирования ERK (рис. 7b), подтверждая, что экспрессия и/или активация FAK могут регулировать фосфорилирование ERK. Обработка Y27632 в контрольных клетках, трансфицированных siRNA, немного снижала фосфорилирование ERK и достигала 70% снижения в FAK-молчащих клетках, подтверждая мнение, что ROCK дополнительно индуцировал снижение фосфорилирования ERK при снижении FAK. Как показано выше, UO126 полностью ингибировал P-FAKSer732. Эти результаты убедительно указывают на то, что путь MEK/ERK отвечает за P-FAKSer732.

Рисунок 7

Путь MEK/ERK участвует в фосфорилировании Ser732, связанного с полимеризованными МТ. ( a ) Клетки Me#28, обработанные ингибиторами UO126 или Y27632 в течение 24 часов. Верхняя панель: вестерн-блоттинг, выполненный на лизатах необработанных или обработанных клеток. Нижняя панель: денситометрический анализ вестерн-блоттинга, показанный на верхней панели, с указанием процентного содержания P-FAKSer732 по отношению к общему количеству FAK после обработки ингибитором. Столбики погрешностей, С.Д. ( b ) Верхняя панель: вестерн-блоттинг, выполненный на лизатах клеток Me#28, трансфицированных контрольной (CO) или FAK- (FAK) миРНК.Нижняя панель: денситометрический анализ вестерн-блоттинга, показанный на верхней панели, с указанием процента P-ERK по отношению к общему количеству ERK при обработке ингибитором. β -Актин использовали в качестве контроля загрузки геля. ( c ) Вестерн-блоттинг лизатов голодающих клеток Me # 28 и OAW42, стимулированных FCS и обработанных повышающейся концентрацией UO126 (1–20   мк М). Общий ERK использовали в качестве контроля загрузки геля. ( d ) Вестерн-блоттинг фракций растворимых (S) или полимеризованных МТ (МТ) (см. Материалы и методы) из клеток Me#28, не обработанных или обработанных UO126 (20  мк М)

Наблюдение взаимосвязи между P -FAKSer732, активация MEK/ERK и полимеризованный тубулин (рис. 4 и 5), мы оценили, способен ли ингибитор MEK/ERK модулировать количество полимеризованного тубулина.Обработка UO126 на клетках Me#28 и OAW42 увеличивала количество ac- α -тубулина и уменьшала количество P-FAKSer732 дозозависимым образом, что указывает на обратную корреляцию между FAK, фосфорилированным на Ser732 MEK/ERK и Полимеризация МТ (рис. 7в).

Биохимическую ассоциацию P-FAKSer732 с полимеризованными МТ затем исследовали с помощью вестерн-блоттинга на клеточных экстрактах после разделения растворимой и полимеризованной фракций α -тубулина. P-FAKSer732 был обнаружен как в растворимой, так и в МТ-фракции, но обработка UO126 снижала уровни P-FAKSer732 только во фракции МТ (рис. 7d), указывая на то, что часть P-FAKSer732 связана с ac- α -тубулином. и что фосфорилирование de novo по Ser732 FAK происходит на уровне МЦ.Ac- α -тубулин фракции МТ увеличивался в клетках, обработанных UO126.

EGF-зависимый путь EGFR/MEK/ERK/CDK5 индуцирует P-FAKSer732, тем самым способствуя митозу

Путь MEK/ERK является одним из нижестоящих эффекторов EGFR ²¹ и CDK5 фосфорилирует FAK на Ser732 в нервных клетках. ¹¹ Для проверки гипотезы о том, что P-FAKSer732 индуцируется активацией пути EGFR/CDK5, истощенные клетки Me#28, NIM-1 и OAW42 стимулировали EGF. Во всех трех клеточных линиях стимуляция EGF увеличивала P-ERK вместе с P-FAKSer732 и P-CDK5Tyr15, активной изоформой киназы (рис. 8а).Чтобы проверить, находится ли CDK5 ниже сигнального каскада EGFR/MEK/ERK, клетки Me#28, обработанные миРНК ERK2, стимулировали EGF. Стимуляция EGF сильно снижала P-FAKSer732 и P-CDK5Tyr15 в ERK2-молчащих клетках, но не в контрольных клетках, обработанных siRNA (фиг. 8b). Чтобы подтвердить наличие оси MEK/ERK/CDK5/P-FAKSer732, истощенные клетки Me#28, OAW42 и NIM-1 обрабатывали возрастающими концентрациями росковитина, мощного ингибитора CDK5. ²² Лечение росковитином снижало количество P-FAKSer732 дозозависимым образом во всех клеточных линиях (рис. 8c), но не влияло на уровень P-FAKTyr397 и P-ERK.Более того, лечение росковитином увеличивало количество ак- α -тубулина дозозависимым образом.

Рисунок 8

EGF-зависимый путь EGFR/MEK/ERK/CDK5 индуцирует P-FAKSer732, тем самым способствуя митозу. ( a ) Вестерн-блоттинг лизатов голодающих клеток Me#28, NIM-1 и OAW42, стимулированных EGF (20 нг/мл) в течение до 20 мин. Для иммуноблотинга Abs указаны справа. β -Актин использовали в качестве контроля загрузки геля. ( b ) Вестерн-блоттинг клеточных лизатов из клеток Me # 28, заглушенных контрольной (-) или ERK2 (+) миРНК, голодающих и затем стимулированных EGF (20 нг / мл) в течение 15 минут. Abs сообщается справа. α -Тубулин использовали в качестве контроля загрузки геля. ( c ) Вестерн-блоттинг лизатов голодающих клеток Me # 28, OAW42 и NIM-1, необработанных или обработанных росковитивом (2–20   мк М) и стимулированных FCS. Abs сообщается справа. β -Актин использовали в качестве контроля загрузки геля. ( d ) Конфокальное IF, выполненное на фиксированных клетках NIM-1, необработанных или обработанных росковитивом (10  μ M) и окрашенных анти-P-FAKSer732 (зеленый) и α -тубулином (красный).Шкала баров, 20  мкм м

IF на клетках NIM-1, обработанных росковитином, показала нарушение веретена (рис. 8d), согласно данным, представленным на рис. 6. Окрашивание P-FAKSer732 было ниже и диффузнее по сравнению с наблюдаемым на Клетки, обработанные FCS, и не наблюдалось совместной локализации с ацетилированным α -тубулином.

Эти данные убедительно показывают, что путь EGFR/MEK/ERK/CDK5 индуцирует фосфорилирование FAK по Ser732 независимо от аутофосфорилирования FAK, таким образом способствуя образованию веретена и митозу опухолевых клеток.

МКР-13-0505 1..13

%PDF-1.5 % 177 0 объект > эндообъект 176 0 объект >поток 2014-03-28T12:30:03+05:30Arbortext Advanced Print Publisher 9.1.406/W Unicode2022-02-01T16:50:05-08:002022-02-01T16:50:05-08:00Acrobat Distiller 8.0.0 (Windows)приложение/pdf

MCR-13-0505 1..13

UUID:ea828715-1dd1-11b2-0a00-a408278d5b00uuid:ea828718-1dd1-11b2-0a00-1e0000000000 конечный поток эндообъект 175 0 объект > эндообъект 170 0 объект > эндообъект 103 0 объект > эндообъект 22 0 объект > эндообъект 104 0 объект > эндообъект 100 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Текст]>>/Тип/Страница>> эндообъект 105 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Текст]>>/Тип/Страница>> эндообъект 108 0 объект >/Шрифт>/ProcSet[/PDF/Текст]>>/Тип/Страница>> эндообъект 178 0 объект >/ProcSet[/PDF/Text/ImageC]/XObject>>>/Type/Page>> эндообъект 189 0 объект [195 0 Ч 196 0 Ч 197 0 Ч 198 0 Ч 199 0 Ч 200 0 Ч] эндообъект 190 0 объект >поток д 538.6593933 0 0 80,8514099 22,6703033 653,1485901 см /Im0 Делать Вопрос БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 104,4599 554,99985 Тм (Опубликовано в Интернете 24 января 2014 г. ) Tj /T1_1 1 тс -7,44599 0 тд (Мол. Рак Рез.\240)Tj /T1_0 1 тс 0 1 ТД (\240 )Tj 0 1.00001 ТД (Майкл Л. Мегисон, Лорен А. Гиллори, Джерри Э. Стюарт и др.) Tj /T1_2 1 тс 0 1 ТД (\240 )Tj /T1_3 1 тс 18 0 0 18 30 594,99997 Тм (Агрессивные опухоли почек у детей) Tj Т* (Ингибирование FAK отменяет злокачественный фенотип в) Tj ET 30 467 524 68 рэ 0 0 м С БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120.94202 507,99997 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -7,55696 1 тд (Обновленная версия)Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 141 499,99994 Тм (\240 )Tj /T1_0 1 тс 16.84196 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг -15,22996 0 тд (10.1158/1541-7786.MCR-13-0505)Тж 0 г -1,612 0 Тд (дои:) ТиДжей 0 1.00001 ТД (Доступ к самой последней версии этой статьи на:)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120,94202 466,99994 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -3,50099 1 тд (Материал)Tj -3,44499 1,00001 тд (Дополнительное) Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 141 469,99994 Тм (\240 )Tj /T1_0 1 тс 37.01692 1 тд ( )Tj 0 0 1 рг -37.01692 0 Тд (http://mcr.aacrjournals.org/content/suppl/2014/01/24/1541-7786. MCR-13-05\ 05.DC1)Tj 0 г Т* (Доступ к самым последним дополнительным материалам на:) Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 30 446,99997 Тм (\240 )Tj 0 1 ТД (\240 )Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 30 426,99997 Тм (\240 )Tj Т* (\240 )Tj ET БТ /T1_2 1 тс 10 0 0 10 30 406,99997 Тм (\240 )Tj Т* (\240 )Tj ET 30 282 524 125 рэ 0 0 м С БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120,94202 374,99997 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -5,66901 1 тд (Уведомления по электронной почте)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 295.49963 387 тм (относится к этой статье или журналу.)Tj 0 0 1 рг -15,44996 0 тд (Зарегистрируйтесь, чтобы получать бесплатные уведомления по электронной почте)Tj ET БТ 0 г /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120,94202 341,99994 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -6,38997 1 тд (Подписки)Tj 0,556 1,00001 Тд (Перепечатки и) Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 141 344,99994 Тм (\240 )Tj 13.46496 1 тд (.)Tj 0 0 1 рг -6,85098 0 тд ([email protected]) Tj 0 г -6,61398 0 тд (Отдел в)Tj 0 1.00001 ТД (Чтобы заказать перепечатку этой статьи или подписаться на журнал, свяжитесь с\ t Публикации AACR)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 11 0 0 11 120. 94202 319,99997 Тм (\240 )Tj /T1_3 1 тс -5,66901 1 тд (Разрешения)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 10 0 0 10 141 281,99985 Тм (\240 )Tj 0 1 ТД (сайт с правой ссылкой. )Tj 0 1.00001 ТД (\(ССС\))Tj 0 1 ТД (Нажмите «Запросить разрешения», чтобы перейти к очистке авторских прав\ ранцевый центр)Tj 34,51591 1 тд (.)Tj 0 0 1 рг -34,51591 0 Тд (http://mcr.aacrjournals.org/content/early/2014/03/28/1541-7786.MCR-13-05\ 05)Тж 0 г 0 1.00001 ТД (Чтобы запросить разрешение на повторное использование всей или части этой статьи, используйте этот li\ нк)Tj ET БТ /T1_0 1 тс 9 0 0 9 269.24255 1,99997 тм (Исследование.) Tj -2,64901 1 тд (1 февраля 2022 г. \251 Американская ассоциация рака, 2014 г.)Tj 0 0 1 рг -9,39096 0 тд (mcr.aacrjournals.org) Tj 0 г -8,11398 0 Тд (Скачано с )Tj ET БТ /T1_0 1 тс 9 0 0 9 129,67427 769 Тм (Опубликовано в Интернете 24 января 2014 г.; DOI: 10.1158/1541-7786.MCR-13-05\ 05 )Тж ET конечный поток эндообъект 194 0 объект >/Фильтр/FlateDecode/Высота 231/Длина 74084/Имя/X/Подтип/Изображение/Тип/XObject/Ширина 1539>>поток HMLT̼ VR$XJ%BUls*lUwnJ?XhA InX( *BBB:H|`l33~3E BOws/+»

FAK регулирует экспрессию E-кадгерина через p-Src Y416 /p-ERK 1/2 /p- Сигнальный путь Stat3 Y705 и PPARγ/miR-125b/Stat3 в клетках меланомы B16F10

ВВЕДЕНИЕ

Метастатическая меланома является одним из самых сложных для лечения злокачественных новообразований и является причиной 60–80% смертей от рака кожи [1, 2]. ].Однако механизм, лежащий в основе миграции клеток меланомы и метастазирования, все еще плохо изучен. Киназа фокальной адгезии (FAK) представляет собой нерецепторную протеинтирозинкиназу, которая способствует адгезии, миграции и инвазии клеток [3]. Недавние исследования показали, что FAK сверхэкспрессируется при различных злокачественных опухолях, а уровень FAK положительно коррелирует со степенью злокачественности меланомы [4]. Снижение экспрессии FAK блокирует инвазию, миграцию и метастазирование клеток при нейробластоме [5].Ранее мы сообщали, что клетки B16F10 с высокой степенью метастазирования имели более высокий уровень экспрессии FAK, чем клетки B16 F1 с низкой степенью метастазирования [6].

Е-кадгерин представляет собой однопроходный трансмембранный гликопротеин, который опосредует межклеточные адгезии. Понижающая регуляция Е-кадгерина способствует миграции раковых клеток [7, 8]. Более того, потеря E-кадгерина также способствует инвазивному и метастатическому поведению во многих эпителиальных опухолях [9, 10]. Снижение FAK привело к увеличению E-кадгерина в опухоли молочной железы [11]. Недавнее исследование показало, что малая интерферирующая РНК Stat3 значительно увеличивает экспрессию E-кадгерина, указывая на то, что Stat3 отрицательно регулирует экспрессию E-кадгерина [12].

В этом исследовании мы исследовали сигнальный путь, участвующий в ингибировании E-кадгерина с помощью FAK. Также обсуждалась роль FAK как потенциальной мишени для терапии меланомы.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Нокдаун FAK подавлял миграцию клеток B16F10 и метастазирование опухоли

Мы сообщали, что уровень экспрессии FAK в высокометастатических клетках B16F10 выше, чем в малометастатических клетках B16F1. Для дальнейшего изучения роли FAK в миграции/метастазировании клеток B16F10 мы сконструировали клеточные линии SiFAK и SiNC.По сравнению с таковыми в клетках SiNC уровень мРНК FAK (рис. 1A) и уровни белка p-FAK и FAK (рис. 1B) заметно снизились в клетках SiFAK. Влияние FAK на миграцию клеток контролировали с помощью анализа трансвелл (рис. 1C) и анализа заживления ран (рис. 1D). Понижающая регуляция FAK значительно подавляла миграцию клеток B16F10. Роль FAK в метастазировании опухоли in vivo дополнительно исследовали путем внутривенной инъекции клеток SiFAK или SiNC мышам C57BL/6J.Как показано уменьшением количества опухолевых узелков на поверхности легких мышей, которым вводили клетки SiFAK, подавление FAK заметно подавляло метастазирование опухоли (рис. 2А и 2В).

Рисунок 1: Понижающая регуляция FAK подавляет миграцию клеток B16F10. ( A ) Уровень мРНК FAK в клетках SiNC и SiFAK. ( B ) Экспрессия FAK и p-FAK ^Y397 в клетках SiNC и SiFAK. Также представлены нормализованные результаты денситометрии. ( C ) Миграция клеток SiNC и SiFAK проанализирована с помощью трансвелл-анализа.( D ) Миграция клеток SiNC и SiFAK проанализирована с помощью анализа заживления ран.

Рисунок 2: FAK способствует метастазированию опухоли. ( A ) Опухолевые узелки образовались в легких мышей, которым через 17 дней после того, как мышам внутривенно вводили клетки SiNC и SiFAK. ( B ) Количественный анализ опухолевых узлов. Результат выражали как среднее значение ± стандартное отклонение.

Экспрессия генов, участвующих в миграции/метастазировании меланомы, была изменена в клетках SiFAK

Сообщалось, что ингибирование FAK снижает инвазию и метастатический потенциал рака [13].Потеря FAK была связана со снижением активности ERK _1/2 в эпителиальных клетках молочной железы. Предыдущее исследование показало, что снижение экспрессии FAK также увеличивает уровень E-кадгерина в опухолевых клетках [14]. Е-кадгерин изменяет взаимодействие клеток меланомы и ингибирует инвазию и метастазирование опухолевых клеток. Потеря экспрессии Е-кадгерина была обычным явлением при меланоме [15-17]. Чтобы выявить механизм, лежащий в основе роли FAK в миграции/метастазировании опухоли, мы исследовали влияние нокдауна FAK на уровни Src, p-Src ^Y416 , ERK _1/2 , p-ERK _1/2 . , Stat3, p-Stat3 ^Y705 и Е-кадгерин методом вестерн-блоттинга. Результаты показали, что стабильное вмешательство в экспрессию FAK в клетках SiFAK снижало уровни p-Src ^Y416 и p-ERK _1/2 , но не влияло на уровни общего Src и ERK _1/2 (рис. 3A). и 3В). По сравнению с клетками SiNC уровни Stat3 и p-Stat3 ^Y705 снизились в клетках SiFAK (рис. 3C). Однако вмешательство FAK значительно увеличивало экспрессию E-кадгерина (рис. 3D).

Рисунок 3: Влияние FAK на экспрессию Src, p-Src ^Y416 , ERK _1/2 , p-ERK _1/2 , Stat3, p-Stat3 ^Y705 и E-Cadherin.( A ) Экспрессия Src и p-Src ^Y416 , ( B ) ERK _1/2 и p-ERK _1/2 , ( C ) Stat3 и p-8Stat7 Y405 905 и p2Stat3 905 и ( D ) Экспрессию E-кадгерина в клетках SiNC и SiFAK исследовали с помощью вестерн-блоттинга. Также представлены нормализованные результаты денситометрии.

Понижающая регуляция FAK увеличивает экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь p-Src

^Y416 /p-ERK _1/2 /p-Stat3 ^Y705 в клетке меланомы B16F10

Аутофосфорилированный FAK2 778 9020 (FAK ^Y397 ) может рекрутировать и фосфорилировать Src с последующим фосфорилированием ERK _1/2 с помощью p-Src [18]. Инактивация ERK _1/2 снижала фосфорилирование Stat3 ^Y705 (p-Stat3 ^Y705 ) в клетках рака желудка человека [19]. Кроме того, выявлена ​​отрицательная корреляция между p-Stat3 ^Y705 и экспрессией Е-кадгерина при гепатоцеллюлярной карциноме [20]. Основываясь на наших предыдущих данных, мы предположили, что FAK может блокировать экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь p-Src ^Y416 / p-ERK _1/2 / p-Stat3 ^Y705 в клетках B16F10.Чтобы проверить эту гипотезу, клетки SiNC и SiFAK обрабатывали ингибитором Src (AZD0530) или ингибитором ERK _1/2 (U0126), и уровни белка p-Src ^Y416 , p-ERK _1/2 , p-Stat3 ^Y705 и Е-кадгерин исследовали вестерн-блоттингом. Когда фосфорилирование Src ^Y416 (p-Src ^Y416 ) ингибировалось AZD0530, уровни p-ERK _1/2 и p-Stat3 ^Y705 резко снижались, в то время как E-кадгерин заметно увеличивался в SiNC. клетки (рис. 4А).Когда p-ERK _1/2 ингибировался U0126, p-Stat3 ^Y705 заметно снижался, в то время как E-кадгерин увеличивался в клетках SiNC (фиг. 4B). Кроме того, короткую интерференционную РНК Src (SiSrc) или U0126 использовали для обработки клеток SiFAK, и их влияние на Src, p-ERK _1/2 , p-Stat3 ^Y705 и E-кадгерин исследовали с помощью вестерн-блоттинга. . SiSrc снижал уровни p-ERK _1/2 и p-Stat3 ^Y705 и повышал уровень E-кадгерина в клетках SiFAK.Без какого-либо влияния на экспрессию Src U0126 ингибировал p-ERK _1/2 и p-Stat3 ^Y705 и стимулировал экспрессию E-кадгерина (фиг. 4C). Эти данные предполагают, что FAK ингибирует экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь p-Src ^Y416 /p-ERK _1/2 /p-Stat3 ^Y705 в клетках B16F10.

Рисунок 4: сигнальный путь p-Src ^Y416 /p-ERK _1/2 /p-Stat3 ^Y705 участвовал в опосредованной FAK экспрессии E-кадгерина. ( A ) Экспрессия p-Src ^Y416 , p-ERK _1/2 , p-Stat3 ^Y705 и E-кадгерина в клетках SiNC, инкубированных с ингибитором Src AZD0530 (5 мкМ) или без него в течение 24 часы.( B ) Экспрессия p-ERK _1/2 , p-Stat3 ^Y705 и E-Cadherin в клетках SiNC, инкубированных с или без ингибитора ERK _1/2 U0126 (10 мкМ) в течение 24 часов. ( C ) Экспрессия Src, p-ERK _1/2 , p-Stat3 ^Y705 и E-кадгерина в клетках SiFAK, инкубированных с U0126 (10 мкМ) или трансфицированных SiSrc. Также представлены нормализованные результаты денситометрии.

FAK подавляет экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь PPARγ/miR-125b/Stat3

Как указано выше, мы обнаружили, что нокдаун FAK снижает Stat3 и p-Stat3 ^Y705 (рис. 3C), а FAK активирует p-Stat3 ^Y705 через сигнальный путь p-Src ^Y416 /p-ERK _1/2 .Но неясно, как FAK регулирует экспрессию Stat3. Накапливающиеся данные показали, что микроРНК нарушаются во время прогрессирования меланомы [21, 22]. Известно, что miRNAs связываются с 3′-нетранслируемой областью (UTR) мРНК-мишени, чтобы ингибировать трансляцию белка. Предыдущее исследование показало, что экспрессия miR-125b подавляется при меланоме [23], а Stat3 является нижележащей мишенью miR-125b [24]. На основании анализа общедоступных баз данных мы также обнаружили, что Stat3 является потенциальной мишенью miR-125b (рис. 5А).Наши результаты QRT-PCR показали, что уровень miR-125b в клетках SiFAK был значительно выше, чем в клетках SiNC, что указывает на то, что miR-125b может участвовать в регуляции Stat3 с помощью FAK (рис. 5B). Сообщается, что нокдаун Stat3 значительно увеличивает экспрессию E-кадгерина в клетках колоректального рака [25]. Следовательно, FAK может ингибировать экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь miR-125b/Stat3 в клетках B16F10. В нашем исследовании миметик miR-125b, ингибитор miR-125b и их отрицательный контроль трансфицировали в клетки SiFAK соответственно. По сравнению с отрицательным контролем, miR-125b имитирует снижение Stat3 при увеличении E-кадгерина (рис. 5C). Как и ожидалось, эффект ингибитора miR-125b на экспрессию Stat3 и E-кадгерина был противоположным действию миметика miR-125b (рис. 5D). Наши результаты показали, что FAK ингибирует экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь miR-125b/Stat3 в клетках меланомы B16F10.

Рисунок 5: miR-125b способствует экспрессии E-кадгерина. ( A ) Дуплекс между miR-125b и мышиным stat3 3′ UTR, предсказанный мирбазой (http://www.mirbase.org). ( B ) Экспрессию miR-125b в клетках SiNC и SiFAK исследовали с помощью QRT-PCR. Результаты выражали как среднее значение ± стандартное отклонение. ( C ) Экспрессия Stat3 и E-кадгерина в клетках SiFAK, трансфицированных миметиком miR-125b и NC. ( D ) Экспрессия Stat3 и E-кадгерина в клетках SiFAK, трансфицированных ингибитором miR-125b и NC. Также представлены нормализованные результаты денситометрии.

Однако еще предстоит выяснить, как FAK ингибирует экспрессию miR-125b. Известно, что PPARγ может способствовать экспрессии miR-125b путем прямого связывания с чувствительным элементом в промоторной области гена miR-125b [26]. В нашем исследовании мы изучали, участвует ли PPARγ в регуляции miR-125b. По сравнению с таковыми в клетках SiNC уровни белка PPARγ и E-кадгерина были выше в клетках SiFAK после обработки активатором PPARγ (троглитамин, Trog) (рис. 6А). Затем интерференционные РНК PPARγ (SiPPARγ-1 и SiPPARγ-2) и их отрицательный контроль трансфицировали в клетки SiFAK (фиг. 6B).В результате мы обнаружили, что miR125b подавляется после нокдауна PPARγ (рис. 6C), что свидетельствует о том, что FAK ингибирует экспрессию miR-125b путем подавления экспрессии PPARγ. Между тем вмешательство PPARγ повышало уровень белка Stat3 и снижало уровень E-кадгерина (рис. 6D). В совокупности FAK подавлял экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь PPARγ/miR-125b/Stat3.

Рисунок 6: PPARγ стимулировал экспрессию миР-125b. ( A ) Экспрессия PPARγ и E-кадгерина в клетках SiNC и SiFAK, инкубированных с Trog (20 мкМ). ( B ) Экспрессия мРНК PPARγ в клетках SiFAK, трансфицированных интерференционной РНК PPARγ SiPPARγ-1, SiPPARγ-2 и обработанных Trog (20 мкМ). ( C ) QRT-PCR исследовала экспрессию miR-125b в клетках SiFAK после трансфекции интерференционной РНК PPARγ SiPPARγ-1, SiPPARγ-2 и инкубации с Trog (20 мкМ). ( D ) Экспрессия PPARγ, Stat3 и E-кадгерина в клетках SiFAK после трансфекции интерференционной РНК PPARγ SiPPARγ-1, SiPPARγ-2 и инкубации с Trog (20 мкМ).Также представлены нормализованные результаты денситометрии.

МиР-125b подавляла миграцию клеток B16F10

Недавнее исследование показало, что миР-125b может действовать как супрессор опухоли при меланоме [27]. Чтобы проверить, может ли miR-125b ингибировать миграцию клеток B16F10, миметик miR-125b, ингибитор miR-125b и их отрицательный контроль трансфицировали в клетки B16F10. Результаты RTCA показали, что миметик miR-125b значительно уменьшил миграцию клеток B16F10 (рис. 7A и 7B), в то время как ингибитор miR-125b значительно увеличил миграцию клеток B16F10 (рис. 7C и 7D).Наши данные показали, что миР-125b подавляла миграцию клеток B16F10.

Рисунок 7: miR-125b ингибирует миграцию клеток B16F10. ( A , B ) Миграции клеток B16F10, трансфицированных миметиком miR-125b и отрицательным контролем, анализировали с помощью RTCA. ** указывает p < 0,01. ( C , D ) Миграции клеток B16F10, трансфицированных ингибитором miR-125b, и отрицательный контроль анализировали с помощью RTCA. * указывает p < 0,05.

Нарушенная экспрессия генов FAK, Src, ERK

_1/2 , PPARγ, C21orf34, Stat3 и E-кадгерин связана с метастазированием у пациентов с меланомой

, PPARγ, C21orf34 (ген-хозяин miR-125b), Stat3 и E-кадгерин по-разному экспрессировались в тканях меланомы человека, мы сначала проанализировали уровни их мРНК при раке меланомы с использованием базы данных Oncomine Cancer Microarray (www.oncomine.org). Как показал набор данных меланомы Рикера, экспрессия FAK, ERK _1/2 повышена, в то время как экспрессия PPARγ, C21orf34 и E-кадгерина снижена при метастатической меланоме по сравнению с нормальным контролем ( Рисунок 8А). Как видно из набора данных меланомы Талантова, по сравнению с нормальным контролем экспрессия FAK, Src, ERK _1/2 и Stat3 регулируется с повышением, в то время как экспрессия PPARγ снижается при метастатической меланоме (рис. 8B). ). Результаты из базы данных Oncomine согласуются с нашими выводами по клеткам B16F10, что указывает на то, что наши выводы могут быть полезны для терапии меланомы.

Фигура 8: Уровни мРНК FAK, Src, ERK _1/2 , PPARγ, C21orf34, Stat3 и E-кадгерина в меланоме человека были получены из базы данных Oncomine.( A ) Уровни мРНК FAK, ERK _1/2 , PPARγ, C21orf34 и E-кадгерина анализировали в наборе данных меланомы Riker. ( B ) Уровни мРНК FAK, Src, ERK _1/2 , PPARγ и Stat3 анализировали в наборе данных меланомы Талантова. * р < 0,05, ** р < 0,01, *** р < 0,001. ( C ) Предлагаемая модель регуляции миграции клеток с помощью FAK в клетках меланомы.

Мы также проанализировали уровень мРНК FAK, Src, ERK _1/2 , PPARγ, C21orf34, Stat3 и E-кадгерина при раке молочной железы человека с использованием базы данных Oncomine Cancer Microarray. По сравнению с нормальным контролем экспрессия FAK, Src, ERK _1/2 и Stat3 повышена, в то время как экспрессия PPARγ, C21orf34 и E-кадгерина снижена при раке молочной железы TCGA (дополнительная таблица 1) и Рак молочной железы Турашвили (дополнительная таблица 2). Результаты рака молочной железы подтвердили результаты метастатической меланомы, указывая на то, что FAK регулирует экспрессию E-кадгерина посредством передачи сигналов p-Src ^Y416 / p-ERK _1/2 /p-Stat3 ^Y705 и PPARγ/miR-125b/Stat3. путь (рис. 8C).

ОБСУЖДЕНИЕ

В этом исследовании мы продемонстрировали, что нокдаун FAK ингибирует миграцию и метастазирование клеток B16F10, и дополнительно изучили основной механизм. Наши данные показали, что подавление FAK ингибирует фосфорилирование Src и ERK _1/2 . Кроме того, нокдаун ФАК подавлял уровни Stat3 и p-Stat3 ^Y705 . Приведенные выше результаты согласуются с недавним сообщением о том, что нокдаун FAK ингибирует активацию ERK _1/2 в сосудистых ГМК крыс [28], а снижение p-ERK _1/2 ингибирует активацию Stat3 в MCF-7 и MDA- клетки MB-231 [29]. Кроме того, мы обнаружили, что FAK ингибирует экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь P-Src ^Y416 /p-ERK _1/2 /p-Stat3 ^Y705 .

Однако еще предстоит выяснить, как сигнальный путь FAK ингибирует экспрессию Stat3 и участвует ли Stat3 в регуляции E-кадгерина. Предыдущее исследование показало, что miR-125b взаимодействует с 3′-UTR мРНК Stat3, подавляя экспрессию генов. На основании общедоступной базы данных (mirbase, http://www.mirbase.org), Stat3 оказался потенциальной мишенью miR-125b. Кроме того, в недавнем исследовании также сообщается, что экспрессия miR-125b подавляется при злокачественной меланоме кожи [30], а miR-125b действует как супрессор опухоли при опухоли печени и злокачественной меланоме кожи [31, 32]. Поэтому мы дополнительно исследовали роль miR-125b в клетке B16F10. Мы обнаружили, что нокдаун FAK способствует экспрессии miR-125b. Миметик miR-125b ингибировал экспрессию Stat3, в то же время стимулируя экспрессию E-кадгерина.Основываясь на дальнейшем исследовании, мы обнаружили, что FAK подавляет экспрессию miR-125b посредством подавления PPARγ. Кроме того, мы обнаружили, что miR-125b может ингибировать миграцию клеток B16F10.

Все приведенные выше данные, полученные на линии клеток мыши B16F10, позволяют предположить, что FAK регулирует экспрессию E-кадгерина через p-Src ^Y416 /p-ERK _1/2 /p-Stat3 ^Y705 и PPARγ/miR-125b/ Сигнальный путь Stat3. Мы также повторили ключевые эксперименты на линии клеток меланомы человека A375. Интерференционную РНК FAK и его отрицательный контроль трансфицировали в клетки A375, и уровни нескольких белков исследовали вестерн-блоттингом.Когда экспрессия FAK была заблокирована, уровни белков p-Src ^Y416 , p-ERK _1/2 , Stat3 и p-Stat3 ^Y705 снижались, в то время как уровни белков PPARγ и E- кадгерин были усилены (дополнительная фигура 1A). Затем для обработки клеток A375 использовали интерференционную РНК Src (дополнительный рисунок 1B), U0126 (дополнительный рисунок 1C) и интерференционную РНК PPARγ (дополнительный рисунок 1C), а также уровни белка Src, p-ERK _1/2. , PPARγ, Stat3, p-Stat3 ^Y705 и Е-кадгерин.Результаты для клеток A375 совпадают с результатами, полученными для клеток B16F10, что указывает на то, что две клеточные линии имеют общий путь, лежащий в основе репрессии экспрессии E-кадгерина с помощью FAK.

Клеточные линии мышиной меланомы B16F10 и B16F1 были получены из их родительской клеточной линии B16F0 путем клональной селекции метастатической опухоли [6]. В соответствии со ссылкой мы обнаружили, что уровень экспрессии FAK в сильнометастатических клетках B16F10 намного выше, чем в малометастатических клетках B16F1 (дополнительная фигура 2).Используя клеточные линии B16F10 и B16F1, мы исследовали влияние FAK с повышенной экспрессией на гены, участвующие в миграции/метастазировании меланомы. По сравнению с клетками B16F10 уровни белка p-Src ^Y416 , p-ERK _1/2 , Stat3 и p-Stat3 ^Y705 снизились, тогда как уровни белка PPARγ и E-кадгерина увеличились в клетках B16F1. (Дополнительный рисунок 2). Приведенные выше результаты соответствовали результатам, полученным на клетках SiFAK и SiNC, предполагая, что FAK/p-Src ^Y416 /p-ERK _1/2 /p-Stat3 ^Y705 /E-кадгерин и FAK/PPARγ/miR Сигнальный путь -125b/Stat3/E-кадгерин также работает, когда экспрессия FAK активируется.

Как показывают данные из базы данных Oncomine, по сравнению с нормальным контролем экспрессия мРНК FAK, Src, ERK _1/2 , Stat3 увеличилась, в то время как экспрессия PPARγ, C21orf34 и E-кадгерина снизилась при раке меланомы человека и рак молочной железы. В заключение, наши данные показали, что FAK ингибирует экспрессию E-кадгерина через сигнальный путь p-Src ^Y416 /p-ERK _1/2 / p-Stat3 ^Y705 и PPARγ/miR-125b/Stat3 в обоих клетки меланомы и опухоли человека.Наше исследование предполагает, что FAK может быть потенциальной мишенью для терапии меланомы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Биопрепараты и антитела

AZD0530, U0126 и бластицидин были получены от Sigma-Aldrich, Cell Signaling и Invitrogen соответственно. Первичные антитела против FAK, фосфорилированного FAK (p-FAK ^Y397 ) и Е-кадгерина были приобретены у BD Biosciences. Первичные антитела против Src, фосфорилированные Src (p-Src ^Y416 ), Stat3, фосфорилированные Stat3 (p-Stat3 ^Y705 ), ERK _1/2 , фосфорилированные ERK _1/2 (p-ERK _{1/ 2}) и PPARγ были получены от Cell Signaling.Первичные антитела против тубулина, актина и GAPDH были получены из Санта-Крус.

Культуры клеток

Клеточная линия SiFAK (стабильная интерференция FAK в клетках B16F10) и клеточная линия SiNC (отрицательный контроль в отношении SiFAK) были сконструированы путем стабильной трансфекции плазмидой pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR, несущей малую интерферирующую РНК FAK или siFAK встраивают siRNA в клетки B16F10, соответственно [33]. Клетки культивировали при 37°С и 5 % СО ₂ в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с добавлением 10 % эмбриональной бычьей сыворотки (Life Technologies, США) и 3 мг·л ^–1 бластицидина.

Анализ миграции

Миграцию клеток контролировали с помощью анализа Transwell, анализатора клеток в реальном времени (RTCA) и анализов заживления ран. Для трансвелл-анализа 1 × 10 ⁵ клеток на вставку (размер пор 8 мкм) инкубировали в среде DMEM без сыворотки в течение 24 часов. Затем клетки внутри вставок удаляли ватным тампоном, а клетки на нижней стороне вставок фиксировали и окрашивали. Делали фотографии пяти полей и подсчитывали общее количество клеток, рассчитывали среднее количество клеток на поле.

Система анализа клеток в реальном времени (RTCA) ×CELLigence DP использовалась для мониторинга клеточной адгезии. После уравновешивания планшетов CIM-Plate-16 в течение 1 часа во влажной атмосфере при 37°C 2,0 × 10 ⁴ клеток/лунку в бессывороточной среде переносили в CIM-Plate-16 в 3 повторах. Импеданс непрерывно контролировали в течение 30 часов в соответствии с инструкциями производителя, и данные отображались в виде клеточного индекса. Для анализа заживления ран клетки высевали при исходной плотности 2×10 ⁵ клеток/лунку и культивировали в течение ночи в среде DMEM с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки.Затем клетки культивировали в среде DMEM без сыворотки в течение 24 часов. Наконечник микропипетки использовали для создания раны в монослое клеток. Закрытие ран наблюдали с помощью фазово-контрастной микроскопии, и цифровые изображения получали с интервалом времени 0 часов и 24 часа.

Метастазы в хвостовую вену

Самки мышей C57BL/6J (возраст 6–8 недель) были приобретены в Центре сравнительной медицины Университета Янчжоу (Янчжоу, Китай). Мышам C57BL/6J внутривенно вводили клетки SiFAK или SiNC (5×10 ⁵ ) через хвост.Через 17 дней мышей усыпили, а их легкие собрали и сфотографировали. Количество опухолевых узлов на поверхности легких подсчитывали под макроскопом.

Выделение тотальной РНК и количественная ПЦР в реальном времени (QRT-PCR)

Тотальную РНК выделяли из клеточных линий SiNC и SiFAK с помощью реагента TRIzol (Invitrogen, США). Количество и чистоту РНК определяли на биофотометре (Eppendorf, Германия). кДНК первой цепи синтезировали с использованием 1,5 мкг тотальной РНК с использованием набора реагентов PrimeScript RT (Takara, Япония).QRT-PCR проводили с использованием FastStart Universal SYBR Green Master [Rox] (Roche, Swiss). Ген-специфические праймеры были синтезированы компанией Nanjing Genscript (Нанкин, Китай). U6 использовали для нормализации данных экспрессии миР-125b.

U6-RT: 5′-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGC AATTCAGTTGAGAAAAATATGGAACGCT-3′ U6-F: 5′-CTGGTAGGGTGCTCGCTTCGGCAG-3′ U6-R: 5′-CAACTGGTGTCGTGGAGTCGGC-3′ miR-125b- RT: 5′-CTGATGACTGGTGTC miR-125b-F:5′-CGCGCTCCCTGAGA CCCTAAC-3′ miR-125b-R: 5′-TGGTGTCGTGGAG TCG-3′ FAK-F: 5′-AAAGCAGTAGTGAGCCAACAA-3′ FAK-R: 5′-CTGAGGCGAAATCCATAGC-3 PPARγ -F: 5′-ATCTTAACTGCCGGATCCAC-3′ PPARγ-R: 5′-GA TGGCATTGTGAGACATCC -3′ GAPDH-F: 5′-TGAAGC AGGCATCTGAGGG-3′ GAPDH-R: 5′-CGAAGGTGGA AGAGTGGGAG-3′.

Трансфекция РНК

miR-125b mimic, miR-125b mimic отрицательный контроль (NC), miR-125b ингибитор, miR-125b ингибитор NC, интерференционная РНК Src (SiSrc) и интерференционная РНК PPARγ (SiPPARγ) были синтезированы олигонуклеотиды GenePharma (Шанхай, Китай). SiPPARγ-1-F: 5′-GCGAUCUUGACAGGAAAGATT-3′ SiPPARγ-1-R: 5′-UCUUUCCUGUCAAGAUCGCTT-3′ SiPPARγ-2-F: 5′-GACAGUGACUUGGCUAUAUTT-3′ SiPPARγ-2-R: 5′-AUAUAGCCAAGUCACUGUCTT- 3′ SiSrc-F: 5′-CU GUAUCCGACUUCGACAATT -3′ SiSrc-R: 5′-UUGU CGAAGUCGGAUACAGTT-3′ миР-125b миметик-F: 5′-UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA-3′ миР-125b мимик-R: 5′- ACAAGUUAGGGUCAGGGAUU-3′ NC для SiPPARγ, SiSrc и миметика miR-125b NC-F: 5′-U UCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′ NC-R: 5′-ACGUG ACACGUUCGGAGAATT-3′ ингибитор miR-125b: 5′-UCA CAAGUUAGGGUCUCAGGGA-3 ′ Ингибитор miR-125b-NC: 5′-CAGUACUUUUGUAGUACAA-3′ Клетки трансфицировали РНК по протоколу Lipofectamine 2000 (Invitrogen, США) и культивировали в течение 48 часов до сбора.

Вестерн-блоттинг

Клетки лизировали и общие белки фракционировали с помощью SDS-PAGE и переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Мембрану блокировали 5% обезжиренным сухим молоком в 1×PBST-буфере, а затем инкубировали с соответствующими первичными антителами в течение одного часа. Конъюгированный с пероксидазой хрена антимышиный или антикроличий IgG использовали в качестве вторичного антитела, полосы белка выявляли с помощью системы детекции с улучшенной хемилюминесценцией (Tanon, Шанхай, Китай). Плотность различных белковых полос анализировали с помощью программного обеспечения Chemianalysis, и значение анализа плотности помечали под каждой белковой полосой.

Статистический анализ

Эксперименты проводились в трех повторностях. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение и проанализированы с использованием теста Стьюдента t . Статистическую значимость определяли следующим образом: * p < 0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001.

Сокращения

FAK: киназа фокальной адгезии; GAPDH: глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа; NC: нормальное управление; PBST: фосфатно-солевой буфер с твином; QRT-PCR: количественная ПЦР в реальном времени; 3′-UTR: 3′-нетранслируемые области; Трог: троглитамин; Клеточная линия SiFAK: стабильная интерференция FAK в клетках B16F10; Клеточная линия SiNC: отрицательный контроль для клеточной линии SiFAK; RTCA: анализатор клеток в реальном времени.

БЛАГОДАРНОСТИ

Авторы хотели бы поблагодарить Min Lu и Tongyang Zhu за их помощь в экспериментальном оборудовании и материалах.

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Согласие на публикацию

Неприменимо.

Одобрение этики и согласие на участие

Все протоколы использования животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Школы наук о жизни Нанкинского университета.

ФИНАНСИРОВАНИЕ

Эта работа была поддержана грантами Национального фонда естественных наук Китая (81630092, 81573338, 81421091, 30425009, 30330530, 31200572, 81121062, 31071196), Национальной ключевой исследовательской программы 1 2016YFC0

0), Научным фондом докторантуры Министерства образования Китая (201300003), Шэньчжэньским комитетом по инновациям в области науки и технологий (JCYJ20160331152141936) и Shenzhen Peacock Plan (KQTD20140630165057031).

ССЫЛКИ

1. Khattak M, Fisher R, Turajlic S, Larkin J. Таргетная терапия и иммунотерапия при запущенной меланоме: развивающаяся парадигма. Терапевтические достижения в медицинской онкологии. 2013; 5:105–118.

2. Бандарчи Б., Джаббари К.А., Ведади А., Наваб Р. Молекулярная биология нормальных меланоцитов и клеток меланомы. Журнал клинической патологии. 2013; 66:644–648.

3. Kanteti R, Batra SK, Lennon FE, Salgia R. FAK и паксиллин, две потенциальные мишени при раке поджелудочной железы.Онкотаргет. 2016; 7:31586–31601. doi: 10.18632/oncotarget.8040.

4. Schaller MD. Клеточные функции киназ FAK: понимание молекулярных механизмов и новых функций. Журнал клеточной науки. 2010 г.; 123:1007–1013.

5. Мегисон М.Л., Стюарт Дж.Е., Наберс Х.К., Гиллори Л.А., Бейерле Э.А. Ингибирование FAK уменьшает инвазию, миграцию и метастазирование клеток в нейробластоме, амплифицированной MYCN. Клинические и экспериментальные метастазы. 2013; 30: 555–568.

6. Li S, Huang X, Zhang D, Huang Q, Pei G, Wang L, Jiang W, Hu Q, Tan R, Hua ZC.Необходимость PEA3 для активации транскрипции гена FAK при метастазировании опухоли. ПлоС один. 2013; 8:e79336.

7. Сюн С., Клаузен С., Ченг Дж. К., Леунг П. С. Активин B способствует миграции раковых клеток эндометрия путем подавления E-кадгерина посредством SMAD-независимой передачи сигналов MEK-ERK1/2-SNAIL. Онкотаргет. 2016; 7:40060–40072. doi: 10.18632/oncotarget.9483.

8. Song Y, Li J, Zhu Y, Dai Y, Zeng T, Liu L, Wang H, Qin Y, Zeng M, Guan XY, Li Y. МикроРНК-9 способствует метастазированию опухоли посредством подавления E-кадгерина в пищеводе. плоскоклеточная карцинома.Онкотаргет. 2014; 5:11669–11680. doi: 10.18632/oncotarget.2581.

9. Ван Рой Ф., Беркс Г. Молекула межклеточной адгезии Е-кадгерин. Клеточные и молекулярные науки о жизни. 2008 г.; 65:3756–3788.

10. Birchmeier W, Behrens J. Экспрессия кадгерина в карциномах: роль в формировании клеточных соединений и предотвращении инвазивности. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) — обзоры рака. 1994 год; 1198: 11–26.

11. Kong X, Li G, Yuan Y, He Y, Wu X, Zhang W, Wu Z, Chen T, Wu W, Lobie PE, Zhu T.МикроРНК-7 ингибирует эпителиально-мезенхимальный переход и метастазирование клеток рака молочной железы посредством нацеливания на экспрессию FAK. ПлоС один. 2012 г.; 7:e41523.

12. Ko HS, Choi SK, Kang HK, Kim HS, Jeon JH, Park IY, Shin JC. Онкостатин М стимулирует миграцию и пролиферацию клеток путем подавления Е-кадгерина в клеточной линии HTR8/SVneo посредством активации STAT3. Репрод Биол Эндокрин. 2013; 11.

13. Вендт М.К., Шиманн В.П. Терапевтическое воздействие на комплекс фокальной адгезии предотвращает онкогенную передачу сигналов TGF-бета и метастазирование.Исследование рака молочной железы. 2009 г.; 11:R68.

14. Надь Т., Вэй Х., Шен Т.Л., Пэн Х., Лян К.С., Ган Б., Гуань Дж.Л. Специфическая для эпителия молочной железы делеция гена киназы фокальной адгезии приводит к тяжелой лобуло-альвеолярной гипоплазии и секреторной незрелости молочной железы мышей. Журнал биологической химии. 2007 г.; 282:31766–31776.

15. Ikoma N, Yamazaki H, Abe Y, Oida Y, Ohnishi Y, Suemizu H, Matsumoto H, Matsuyama T, Ohta Y, Ozawa A, Ueyama Y, Nakamura M. Экспрессия S100A4 со сниженной экспрессией E-кадгерина предсказывает отдаленные метастазирование клеточных линий злокачественной меланомы человека в мышиной модели NOD/SCID/gammaCnull (NOG).Об этом сообщает онкология. 2005 г.; 14:633–637.

16. Tucci MG, Lucarini G, Brancorsini D, Zizzi A, Pugnaloni A, Giacchetti A, Ricotti G, Biagini G. Участие E-кадгерина, бета-катенина, Cdc42 и CXCR4 в прогрессировании и прогнозе меланомы кожи. Британский журнал дерматологии. 2007 г.; 157: 1212–1216.

17. Крайзенбек Г.М., Бергер А.Дж., Субтил А., Римм Д.Л., Гулд Ротберг Б.Е. Прогностическое значение молекул адгезии на основе кадгерина при злокачественной меланоме кожи. Эпидемиология рака, биомаркеры и профилактика.2008 г.; 17:949–958.

18. Wu X, Yang L, Zheng Z, Li Z, Shi J, Li Y, Han S, Gao J, Tang C, Su L, Hu D. Src способствует заживлению кожных ран, регулируя MMP-2 через ERK. путь. Международный журнал молекулярной медицины. 2016; 37:639–648.

19. Kanai M, Konda Y, Nakajima T, Izumi Y, Kanda N, Nanakin A, Kubohara Y, Chiba T. Фактор, индуцирующий дифференцировку-1 (DIF-1), ингибирует активность STAT3, участвующую в пролиферации клеток рака желудка через MEK. -ERK-зависимый путь. Онкоген.2003 г.; 22: 548–554.

20. Zhang CH, Xu GL, Jia WD, Li JS, Ma JL, Ren WH, Ge YS, Yu JH, Liu WB, Wang W. Активация сигнального пути STAT3 коррелирует с твист и экспрессией E-кадгерина при гепатоцеллюлярной карциноме. и их клиническое значение. Журнал хирургических исследований. 2012 г.; 174:120–129.

21. Гаур А., Джуэлл Д.А., Лян Ю., Ридзон Д., Мур Дж.Х., Чен С., Амброс В.Р., Израиль М.А. Характеристика уровней экспрессии микроРНК и их биологических коррелятов в линиях раковых клеток человека.Исследования рака. 2007 г.; 67:2456–2468.

22. Мюллер Д.В., Рели М., Боссерхофф А.К. Профилирование экспрессии миРНК в меланоцитах и ​​клеточных линиях меланомы выявляет миРНК, связанные с образованием и прогрессированием злокачественной меланомы. Журнал исследовательской дерматологии. 2009 г.; 129: 1740–1751.

23. Латчана Н., Ганджу А., Ховард Дж. Х., Карсон В. Е., 3-й. Дисрегуляция микроРНК при меланоме. Хирургическая онкология. 2016; 25:184–189.

24. Лю Л.Х., Ли Х., Ли Дж.П., Чжун Х., Чжан Х.К., Чен Дж., Сяо Т.миР-125b подавляет пролиферацию и миграцию клеток остеосаркомы за счет подавления STAT3. Biochem Biophys Res Commun. 2011 г.; 416:31–38.

25. Xiong H, Zhang ZG, Tian XQ, Sun DF, Liang QC, Zhang YJ, Lu R, Chen YX, Fang JY. Ингибирование передачи сигналов JAK1, 2/STAT3 вызывает апоптоз, остановку клеточного цикла и снижает инвазию опухолевых клеток в клетки колоректального рака. Неоплазия. 2008 г.; 10: 287–297.

26. Luo S, Wang J, Ma Y, Yao Z, Pan H. PPARgamma ингибирует пролиферацию клеток рака яичников за счет активации миР-125b.Связь биохимических и биофизических исследований. 2015 г.; 462:85–90.

27. Nyholm AM, Lerche CM, Manfe V, Biskup E, Johansen P, Morling N, Thomsen BM, Glud M, Gniadecki R. miR-125b индуцирует клеточное старение при злокачественной меланоме. Дерматология БМК. 2014; 14:8.

28. Ши З.Д., Ван Х., Тарбелл Дж.М. Гепарансульфатные протеогликаны опосредуют механотрансдукцию интерстициального потока, регулирующую экспрессию MMP-13 и подвижность клеток посредством FAK-ERK в 3D-коллагене. ПлоС один. 2011 г.; 6.

29.Раджпут С., Дей К.К., Ипсита П., Сен К., Дей Г., Бхарти Р., Парида С., Парех А., Мандал М. Комбинаторный эффект ZD6474 и тимохинона ингибирует Src-опосредованную передачу сигналов ERK-1/2/STAT3 и оказывает антиметастазное действие при раке молочной железы . Европейский журнал рака. 2012 г.; 48:61–61.

30. Glud M, Rossing M, Hother C, Holst L, Hastrup N, Nielsen FC, Gniadecki R, Jewiecki KT. Снижение экспрессии миР-125b при метастатической злокачественной меланоме кожи. Меланома рез. 2010 г.; 20:479–484.

31. Ван С.Х., Тан С., Ле С.И., Лу Р., Радер Дж.С., Мейерс С., Чжэн З.М.Аберрантная экспрессия онкогенных и опухолесупрессирующих микроРНК при раке шейки матки необходима для роста раковых клеток. ПлоС один. 2008 г.; 3.

32. Nyholm AM, Holst LMB, Lerche C, Manfe V, Biskup E, Glud M, Hastrup N, Thomsen BM, Pless V, Rosbjerg A, Wulf HC, Gniadecki R. miR-125b индуцирует клеточное старение в меланоцитах и злокачественная меланома. Джей Инвест Дерматол. 2011 г.; 131:S107–S107.

33. Лан И, Хуа З.К. [Создание стабильной клеточной линии с нокдауном киназы фокальной адгезии и предварительное изучение ее свойств].Acta Pharmaceutica Sinica. 2012 г.; 47:1128–1133.

Раков | Бесплатный полнотекстовый | Ингибирование взаимодействия FAK-Paxillin уменьшает миграцию и опосредованную инвадоподией деградацию матрикса в метастатических клетках меланомы

1. Введение

Меланома представляет собой очень агрессивную форму рака кожи, на долю которой приходится более 80% смертей, связанных с раком кожи. Прогноз при меланоме прямо пропорционален глубине новообразования, а у пациентов с распространяющейся меланомой прогноз очень неблагоприятный с пятилетней выживаемостью менее 5%.Распространение меланомы представляет собой многоэтапный процесс, включающий несколько генетических изменений [1]. При меланоме, как и при многих инвазивных эпителиальных раковых образованиях, таких как рак головы, шеи, молочной железы или предстательной железы, раковые клетки приобретают способность проникать через базальную мембрану с помощью надмолекулярных комплексов, называемых инвадоподиями. Инвадоподии представляют собой подкорковые выпячивания, которые локализуют активность разрушения матрикса в точках контакта клетки с субстратом и представляют собой основные узлы, где сходятся многие сигнальные пути [2]. Инвадоподии состоят из богатого актином ядра, которое включает активаторы актина, зародышеобразователи и регуляторы, окруженные адгезивными, каркасными и сигнальными белками [3].Эти структуры концентрируют протеолитические ферменты, такие как матриксные металлопротеиназы (ММП), тем самым опосредуя деградацию внеклеточного матрикса (ECM). Действительно, при инвазивной меланоме экспрессия MMP повышается, и имеются обширные доказательства того, что они играют роль в распространении меланомы [4]. циркуляцию, а также адгезию и миграцию клеток в окружающий субстрат.В мезенхимоподобных клетках клетки формируют фокальную адгезию (FA) путем кластеризации в местах взаимодействия интегрина с ECM, структурными, каркасными и сигнальными белками. Среди них киназа фокальной адгезии (FAK) является важным сигнальным белком, который интегрирует сигналы от интегринов в актиновые филаменты, тем самым контролируя оборот FA, который настраивает скорость миграции [5,6]. Этот контроль частично осуществляется процессами фосфорилирования и дефосфорилирования [7,8]. Структурно FAK представляет собой белок с молекулярной массой 125 кДа, который содержит N-концевой домен FERM, центральный киназный домен и С-концевой домен, содержащий сайт нацеливания фокальной адгезии (FAT) [9].При различных стимулах, включая кластеризацию интегрина, аутофосфорилирование FAK по Y397 создает сайт связывания для Src, который может фосфорилировать другие тирозины в последовательности FAK, создавая, таким образом, новые сайты связывания для белков, содержащих домен Sh3. Активированный комплекс FAK/Src также фосфорилирует многочисленные нижележащие мишени, играющие роль в выживании, пролиферации, миграции и инвазии клеток. Точная роль FAK во вторжении вызывает споры. Текущий консенсус заключается в том, что FAK не локализуется в инвадоподиях, но, по-видимому, регулирует их образование и активность на расстоянии, контролируя локализацию киназы Src.Действительно, истощение FAK в клетках меланомы и рака молочной железы высвобождает Src из FA, тем самым активируя мишени инвадоподий и способствуя активности инвадоподий [10,11,12]. Будут ли разрабатываемые в настоящее время ингибиторы FAK проявлять аналогичные неожиданные эффекты, еще предстоит определить. Тем не менее, при меланоме сообщалось, что FAK способствует агрессивному фенотипу, что может коррелировать с его ролью в стимулировании клеточной миграции [13]. связана с ростом опухоли, инвазией и резистентностью к лечению.Таким образом, разработка антагонистов FAK в качестве противоопухолевой терапии привела к созданию нескольких небольших ингибиторов функции киназы FAK. Например, PF-573,228 ингибирует фосфорилирование FAK на Tyr397 и снижает как хемотаксическую, так и гаптотактическую миграцию, одновременно с ингибированием оборота FA [14]. Ингибиторы киназы FAK, которые в настоящее время проходят клинические испытания, представляют собой почти все небольшие АТФ-конкурентные молекулы, которые ингибируют транс-аутофосфорилирование FAK по tyr397, что приводит к изменению рекрутирования Src. Тем не менее, помимо своей киназной функции, FAK также обладает функциями каркаса, очень важными для передачи сигналов рака.Действительно, будучи многодоменным белком, FAK может выступать в качестве платформы для сборки белковых комплексов, связывающих белки. Эти комплексы и мостики могут служить мишенями для разработки новых ингибиторов FAK, основанных на межбелковых взаимодействиях. Ингибиторы белок-белковых взаимодействий (PPII) сегодня представляют собой привлекательный новый инструмент для лечения рака, и в нескольких сообщениях описаны PPII для FAK, нацеленные либо на сайт связывания p53 в домене FERM [15], либо на сайт связывания VEGFR-3 в FAT. домен [16].Более того, некоторые из соединений, разработанных для этих целей, продемонстрировали интересную противоопухолевую активность в моделях ксенотрансплантата на мышах.

В этом исследовании мы продемонстрировали, что ингибирование FAK с помощью либо siRNA, либо небольшого ингибитора, нацеленного на домен киназы, при одновременном снижении миграции клеток меланомы приводило к увеличению активности invadopodia при метастатической меланоме, но не при меланоме in situ. Используя мутацию FAK в Tyr397, сайте связывания Src, мы подтвердили, что эта мутация, уменьшая миграцию клеток, высвобождает пул активного Src, который опосредует повышенную активность инвадоподий.В поисках альтернативных стратегий ингибирования FAK, которые сохраняют связывание FAK/Src, мы обнаружили, что изменение взаимодействия FAK-паксиллин либо с мутацией FAK в сайте связывания паксиллина, либо с пептидом, нарушающим взаимодействие FAK-паксиллин, резко снижает миграцию клеток и деградацию матрикса. В совокупности наши данные открывают новые горизонты для разработки и использования FAK PPII.

2. Материалы и методы

2.1. Антитела

Для иммунофлуоресценции анти-FAK (610088) были получены от BD; антикортактин (05-180) от Millipore; анти-фосфо-Y118 паксиллин (44-722G), анти-паксиллин (AHO0492) и анти-фосфо-Y397 FAK (44-625G) от Invitrogen; фаллоидин 568 (A12380), фаллоидин 647 (A22287) и вторичные антитела, конъюгированные с Alexa Fluor, от Molecular Probes.Для вестерн-блоттинга и коиммунопреципитации анти-фосфо-Y397 FAK (44-625G), анти-паксиллин (AHO0492) получали от Invitrogen; eGFP (66002-1-IG) от Proteintech, анти-FAK (610088) от BD; анти-b-актин (MA1115) от Boster; и конъюгированные с HRP вторичные антитела от Biorad.

2.2. Культура клеток

Нормальные первичные эпидермальные меланоциты человека от Lonza культивировали в среде MGM-4 (PS-200-041, ATCC). Первичные клеточные линии меланомы человека были приобретены у Rockland и культивированы в среде MCDB153/L-15 (M7403, Sigma, St.Луис, Миссури, США; 11415064, Invitrogen) с добавлением 2% эмбриональной бычьей сыворотки, 1,68 мМ CaCl ₂ и 1% пенициллина/стрептомицина. Клеточная линия меланомы A375 от ATCC поддерживалась в среде DMEM (11960044, Lonza, Базель, Швейцария) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки, 1 мМ L-глутамина и 1% антибиотиков пенициллин/стрептомицин.

2.3. Трансфекция миРНК и обработка клеток

Клетки меланомы высевали по 2,5 × 10 ⁵ клеток в шестилуночные планшеты, трансфицировали 50 пмоль миРНК, направленной на 5′-UTR области FAK, как описано ранее [12], и инкубировали в течение 24 часов. ч при 37 °C перед использованием.Для трехмерного анализа коллагеновой матрицы клетки обрабатывали 10 мкМ ингибитора металлопротеазы GM6001 (S7157, Selleckchem). Для вестерн-блоттинга и анализа деградации матрицы клетки обрабатывали 1 мкМ ингибитора FAK PF-573228 (S2013, Selleckchem, Хьюстон, Техас, США) в течение 12 часов. Для анализа заживления ран клетки меланомы обрабатывали митомицином С (S8146, Selleckchem) в течение 2 часов в концентрации 10 мкг/мл перед царапиной для ингибирования репликации клеток и PF-573228 в концентрации 1 мкМ.

2.4. Трансфекции клеток

FAK-WT-GFP, FAK-Y397F-GFP и FAK-I936E I998E-GFP получали, как описано ранее [17].Последовательность паксиллина LD2-LD4-GFP (аминокислоты 136–296) встраивали в плазмиду pEGFP-C1 (Clontech, Kusatsu City, Япония), создавая слияние усиленного GFP (EGFP) с N-концом паксиллина. Клетки меланомы котрансфицировали миРНК и 4 мкг FAK WT или мутантной ДНК FAK или 4 мкг ДНК LD2-LD4-GFP с использованием липофектамина 2000 (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) в соответствии с инструкциями производителя. Трансфицированные клетки перед использованием инкубировали в течение 24 ч при 37°С.

2.5. 3D Collagen Matrix Assay

Анализ инвазии был адаптирован из Sadok et al.[18]. Линии клеток, меченные Hoechst 33,342, суспендировали в 3 мг/мл бессывороточного раствора нейтрализованного бычьего коллагена I типа (5005-B, Advanced biomatrix) при 3×10 ⁵ клеток/мл. Затем 600 мкл распределяли в черные 24-луночные планшеты (058062, Dutscher), покрытые бычьим сывороточным альбумином. Планшеты центрифугировали при 1500 об/мин при 4°С в течение 5 минут и инкубировали при 37°С в течение 3 часов. После полимеризации коллагена и добавления в среду 10% эмбриональной телячьей сыворотки поверх коллагена добавляли 100 нг/мл EGF с любым лекарственным средством.Через 24 часа клетки наблюдали с помощью конфокального микроскопа Leica TSC SPE (объектив ×20 HCX Pl Apo 0,7 NA, Wetzlar, Германия) и получали z-стеки с шагом 1 мкм в четырех полях на образец. Ядерная локализация была количественно определена Imaris в каждой плоскости. Индекс инвазии рассчитывали, сообщая количество клеток выше 10 мкМ от общего количества клеток по полю.

2.6. Анализ деградации матрикса и иммунофлуоресценция. Чашки Ibidi со стеклянным дном

(81158, Ibidi) покрывали желатином с флуоресцентно-меченым FITC или желатином Cy3, как описано ранее [12].Затем 3,5 × 10 ⁴ ранее голодающих клеток меланомы высевали на флуоресцентный желатин и инкубировали при 37 °C в течение 24 ч в среде с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки фиксировали с помощью 4% параформальдегида, пермеабилизировали с помощью тритона-Х-100 при 0,1% и инкубировали в 2% бычьего сывороточного альбумина при комнатной температуре. Затем клетки метили в течение 1 ч антикортактином (1/250), анти-фосфо-Y397 FAK (1/100), анти-FAK (1/250), анти-фосфо-Y118 паксиллином (1/250) или антипаксиллин (1/250).После трех промывок PBS клетки инкубировали с козьими антикроличьими антителами, конъюгированными с Alexa-488 (1/1000), козьими антикроличьими антителами, конъюгированными с Alexa-647 (1/1000), козьими антимышиными конъюгатами Alexa-405 (1/1000). 1/1000), Alexa-647-конъюгированный козий антимышиный (1/1000), Alexa-568-конъюгированный фаллоидин (1/250) или Alexa-647-конъюгированный фаллоидин (1/250) в течение 1 ч, промывают и смонтированы в монтажной среде Prolong Gold (Invitrogen). Клетки визуализировали с помощью конфокального микроскопа Leica TSC SPE (×63 HCX Pl Apo 1,40 NA или ×20 HCX Pl Apo 0.7 объектив NA, Вецлар, Германия). Инвадоподии идентифицировали как точечные структуры, богатые актином и кортактином. Области деградации идентифицировали как «черные дыры» внутри флуоресцентного желатина. Инвадоподии и области деградации количественно определяли с использованием программного обеспечения ImageJ. Измерения областей деградации были основаны на клетках, проявляющих активность деградации, а частота деградации была основана на случайно выбранных клетках.

2.7. Заживление ран

Клетки меланомы высевали в 12-луночные планшеты, содержащие среду с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки, и трансфицировали siCtrl или siFAK, как описано ранее.Через 24 ч слитые слои клеток обрабатывали митомицином С и PF-573228, как описано ранее, а затем наносили на них кончик пипетки. Изображения миграции клеток получали с помощью микроскопа Leica DMIRE2 (объектив ×10 N PLAN 0,25 NA), оснащенного системой управления ₂ (Life Imaging Services) с температурой 37 °C и 5% CO (Life Imaging Services) с ПЗС-камерой Leica DC350FX, управляемой программным обеспечением FW4000 ( 1 изображение каждые 30 минут в течение 24 часов).

2.8. Ко-иммунопреципитация и вестерн-блоттинг

Для ко-иммунопреципитации клетки меланомы A375 высевали в чашки Петри диаметром 90 мм и совместно трансфицировали, как описано ранее, с помощью siFAK, siFAK и FAK-GFP или siFAK и FAKI936E/I998E-GFP.Через 48 ч клетки дважды промывали ледяным PBS и лизировали модифицированным буфером RIPA (137 мМ NaCl, 20 мМ Трис, pH 8,0, 10% глицерин, 1% IGEPAL CA-630, 3 мМ Na ₃ VO ₄ ), дополненный смесью ингибиторов протеазы и фосфатазы (78441, Invitrogen). Лизаты центрифугировали при 15 000 g в течение 15 мин при 4°C. Затем 500 мкг клеточных лизатов инкубировали со специфическими антителами против FAK (1/100) в течение 3 ч при 4°С при непрерывном встряхивании. Затем добавляли гранулы протеина G-сефарозы (GE Healthcare) для инкубации в течение ночи.Затем шарики промывали 3 раза ледяным буфером RIPA и ресуспендировали в буфере Лэммли.

Для вестерн-блоттинга общие клеточные белки получали путем лизиса клеток в течение 15 минут при 4 °C в буфере RIPA (8990, Invitrogen), дополненном смесью ингибиторов протеаз и фосфатаз (78441, Invitrogen). Лизаты центрифугировали при 15 000 g в течение 15 мин при 4°C. Концентрацию белка определяли с использованием набора для анализа белка DC (BioRad, Hercules, CA, USA). Затем 20 мг белков суспендировали в буфере Лиамли, наносили на 8% полиакриламидный гель и переносили на мембрану из ПВДФ.Неспецифические сайты блокировали в течение 1 ч при комнатной температуре, используя 5% БСА в TBS-T (рН 7,4, 10 мМ Трис, 150 мМ NaCl и 0,1% Твин 20).

После этого мембраны инкубировали с первичными антителами, разведенными в TBS-T, содержащем 5 % BSA или 5 % обезжиренного молока, в течение ночи при 4 °C. После трехкратной промывки мембран в TBS-T в течение 5 мин специфические вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена, инкубировали с мембранами в течение 1 ч при комнатной температуре. Сигналы регистрировали с использованием набора ECLplus (170-5061, Biorad).Полосы количественно определяли с использованием ImageQuantTL (GE Healthcare).

2.9. Статистический анализ

Статистическая значимость была рассчитана с использованием непарного двустороннего критерия Стьюдента. Значения считались статистически значимыми, когда р-значение было <0,05. Для всех рисунков: *, p < 0,05; **, р < 0,01; ***, р < 0,001. Столбики погрешностей представляют SD.

4. Обсуждение

FAK участвует во многих аспектах развития рака, и исследования выявили четкую связь между экспрессией FAK и агрессивностью рака.Следовательно, разработка стратегий ингибирования FAK представляет потенциальный терапевтический интерес. Ингибиторы киназного домена FAK эффективны на животных моделях и продемонстрировали многообещающие цитостатические эффекты в клинических испытаниях. Однако альтернативным способом ингибиторов киназной активности может быть ингибирование каркасной функции FAK путем нацеливания на взаимодействие FAK с его партнерами по связыванию. Поскольку многие задачи FAK совпадают с локализацией FAK в FA, мы использовали сайт-направленный мутагенез или конкурентные лиганды, чтобы нарушить взаимодействие FAK-паксиллин.Мы наблюдали, что эта стратегия блокирует взаимодействие FAK-паксиллин и ингибирует как миграцию, так и протеолитическую активность инвадоподий в клетках меланомы человека.

Ранее сообщалось о высокой экспрессии FAK при нескольких типах рака, таких как карциномы и саркомы молочной железы, желудка, толстой кишки, печени, предстательной железы или мочевого пузыря [30], и может коррелировать с более плохим исходом [31,32,33] . Здесь, в соответствии с предыдущими исследованиями [13], мы сообщаем о высокой экспрессии FAK на панели клеточных линий меланомы человека по сравнению с нормальными меланоцитами человека.Эти результаты побудили нас оценить роль FAK в прогрессировании меланомы. Во-первых, мы не обнаружили повышения уровня экспрессии FAK в клетках метастатической меланомы по сравнению с меланомой in situ. Хотя эти результаты соответствуют клиническим исследованиям [34], они ставят под сомнение роль FAK в метастатическом каскаде. Распространение рака представляет собой сложный процесс, который требует координации между адгезией, миграцией и деградацией матрикса. В этом исследовании мы наблюдали invadopodia in situ и метастатические клеточные линии меланомы человека.Однако, несмотря на образование инвадоподий, мы обнаружили, что клетки меланомы in situ не способны разрушать внеклеточный матрикс, в отличие от метастатических клеточных линий. Инвадоподии первоначально образуют предшественники, обогащенные F-актином и кортактином, которые затем созревают и приобретают протеолитическую активность [11,35]. Мы предполагаем, что клетки меланомы in situ собирают предшественников инвадоподий. Затем во время прогрессирования меланомы происходит этап созревания инвадоподий, что согласуется с предыдущими исследованиями, описывающими участие сигнальных путей Notch в прогрессировании меланомы [36] и созревании инвадоподий [37].Мы также обнаружили, что ингибирование активности FAK путем либо опосредованного siRNA истощения FAK, либо обработки клеток ингибитором киназы FAK PF-573228 [14] эффективно ингибирует миграцию клеток меланомы, но повышает протеолитическую активность метастатической меланомы. Неудивительно, что ингибирование FAK снижает миграционный клеточный потенциал, учитывая обилие литературы, устанавливающей роль FAK в динамике FA [6,7]. С другой стороны, хотя мы и другие уже сообщали, что истощение FAK увеличивает активность инвадоподий, такой эффект наблюдался впервые при использовании низкомолекулярных ингибиторов активности FAK.Эти наблюдения подняли вопросы об использовании таких конкурентных ингибиторов АТФ в качестве противоопухолевого лечения. Действительно, этот класс малых молекул, включающий VS-4718 [38], GSK2256098 [39], PF-562271 [40] и дефактиниб (VS-6063) [41], которые в настоящее время находятся в стадии клинической разработки и продемонстрировали некоторые преимущества [42], связываются с киназным карманом FAK, ингибируя транс-аутофосфорилирование FAK и, таким образом, уровень фосфорилирования FAK-Y397. Однако, используя мутированную форму FAK по Y397, мы продемонстрировали здесь, что именно отсутствие фосфорилирования по этому остатку опосредует повышенную активность invadopodia при метастатической меланоме.Это увеличение связано с высвобождением Src из FA из-за мутации его партнера по связыванию FA, что приводит к усиленному фосфорилированию субстратов в инвадоподиях, таких как cortactin и Pyk2 [11]. Эти критические наблюдения подчеркивают несколько вопросов. Во-первых, можно ли рассматривать стратегию, альтернативную ингибиторам киназ, для подавления промиграционных функций FAK? Ранее мы обнаружили, что экспрессия FAK, мутировавшая в сайтах связывания паксилина в фибробластах FAK ^-/- , снижает адгезию и миграцию [17].Здесь мы показываем, что этот мутант при экспрессии в клетках меланомы, лишенных FAK, снижает их способность разрушать внеклеточный матрикс. Этот эффект сопровождается снижением локализации мутанта в ЖК и повышением уровня ФАК P-Y397 в цитоплазме. Сегодня все больше данных дает надежду на открытие небольших лекарствоподобных молекул, которые будут нацелены на интерфейсы PPII [43]. Для интерактома FAK поиск ингибиторов PPI был начат группой Уильяма Канса. Они обнаружили несколько небольших молекул, ингибирующих взаимодействия FAK/p53 [15] или FAK/VEGFR3 [16], которые проявляли противораковые эффекты в доклинических исследованиях in vitro и in vivo [44,45].Таким образом, в качестве доказательства концепции того, что нацеливание на взаимодействия FAK-паксиллин может представлять потенциальный терапевтический интерес, мы протестировали эффект небольшого пептида, содержащего домены LD2 и LD4 паксиллина. Мотивы LD2 и LD4 связываются с гидрофобным участком 1 и гидрофобным участком 2, расположенными на границе спирали 1–4 и спирали 2–3 домена FAT FAK [29]. Мы обнаружили, что этот пептид успешно снижал активность FAK в жирных кислотах, сохраняя при этом существенную активность в других частях клеток, как сообщалось в экспериментах по Вестерн-блоттингу.Мы также показали, что этот пептид способен уменьшать как миграцию меланомы, так и деградацию внеклеточного матрикса, что ясно показывает интерес такой стратегии к уменьшению клеточной инвазии. Остается неясным, как FAK остается активным, когда он не локализован в ЖК. Недавние исследования показали, что FAK существует в аутоингибируемой конформации в цитоплазме, а рекрутирование в FAs индуцирует образование димеров FAK посредством взаимодействий FERM-FERM [46]. Когда димеры FAK связываются через основной участок в домене FAK FERM с PI(4,5)P2, его аутоингибирование высвобождается, тем самым запуская аутофосфорилирование Y397, которому могут способствовать механические силы [47,48].Эту последовательность активации трудно согласовать с активацией FAK вне FA. Однако во многих сообщениях показано, что FAK остается активным в суспендированных клетках или в независимых от якоря раковых клетках [49]. Недавно было обнаружено, что активный FAK локализуется с активными интегринами на эндосомах. Механизм активации FAK в этих сайтах требует прямого связывания FAK с эндосомальными компонентами. Важно отметить, что паксиллин отсутствовал в эндосомах, что указывает на то, что рекрутирование и передача сигналов FAK организованы по-разному на эндосомах и FAs [50].Следовательно, ингибирование взаимодействий FAK-паксиллин может не влиять на эндосомальную активацию FAK. Ранние исследования также показали с использованием анализа димеризации, что аутофосфорилирование FAK не зависит от клеточной адгезии и не связано с образованием стабильных мультимерных комплексов [51]. ]. Кроме того, димеры FAK посредством взаимодействий FERM-FERM способны образовываться в растворе [52], а взаимодействия FAK-FAK могут существовать в цитозоле, как показано в исследованиях FCS [53]. Другие активаторы FAK включают Ezrin, который, как было показано, индуцирует его активацию в суспендированных почечных эпителиальных клетках LLC-PK1 [54].Изменения pH, которые приводят к депротонированию H58 в домене FERM, что приводит к конформационным изменениям FAK, также делают возможным автофосфорилирование FAK Y397 [55]. Наконец, следует также подчеркнуть, что в клетках меланомы связь между пигментацией меланина и метастатическим фенотипом была установлена. задокументировано. Действительно, гранулы меланина резко изменяют эластичные свойства пигментированных клеток меланомы, подавляя тем самым их способность к трансмиграции [56]. Более того, изменение эластичных свойств, наблюдаемое в мягких субстратах, коррелирует со снижением уровня P-FAK и подавлением генов, связанных с меланогенезом [57].Кроме того, было показано, что в зависимости от биофизического контекста меланогенез изменяет как рост опухоли, так и ее прогрессирование [58,59]. Таким образом, меланиновая пигментация, возможно, является важным фактором, который следует учитывать при использовании терапии против FAK, поскольку она может регулировать уровень активного FAK в клетках меланомы. Ясно, что потребуются дальнейшие исследования для идентификации механизма активации FAK внутри и вне FA в этих клетках.

границ | Звездчатые клетки печени и гепатокарциногенез

Введение

Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) является шестой по значимости причиной смерти от рака в западных странах (Choo et al., 2016; Bray et al., 2018), на которые приходится до 90% всех первичных раков печени (Lozano et al., 2012). Хотя процент случаев ГЦК значительно выше в Восточной Азии и большинстве африканских стран, рост ГЦК в Соединенных Штатах (США) (Rawla et al., 2018). Эта тенденция в первую очередь связана с увеличением числа случаев хронического воспаления печени, включая жировую болезнь печени (ЖБП) (Nordenstedt et al., 2010) и инфекцию хронического гепатита C (HCV) (Kanwal et al., 2011). Хотя распределение этиологии ГЦК варьируется в зависимости от географических регионов, наиболее распространенной этиологией во всем мире является вирусный гепатит.В развивающихся регионах, таких как страны Африки к югу от Сахары и Восточная Азия, вирус гепатита В (ВГВ), передаваемый вертикально при рождении, является наиболее распространенной этиологией (El-Serag, 2012). В развитых странах, таких как Северная Америка, инфицирование ВГС в более позднем возрасте является эндемичным (Armstrong et al., 2006; Barazani et al., 2007; Wasley et al., 2008). В дополнение к вирусному гепатиту и FLD, алкогольный цирроз является основной причиной ГЦК; все это может вызвать фиброз, цирроз печени и в конечном итоге привести к развитию ГЦК.Этот путь к злокачественному новообразованию, обусловленный в основном фиброзом, подтверждается тем фактом, что у 90% пациентов с ГЦК имеется цирроз печени (Parkin et al., 2005; Anantakrishnan et al., 2006).

Одним из основных компонентов в развитии фиброза, цирроза и ГЦК (Wynn, 2008; Sokolovic et al., 2010) являются специфичные для печени перициты, известные как звездчатые клетки печени (HSCs), которые располагаются в перисинусоидальном пространстве. печени (Tsuchida and Friedman, 2017). В нормальных условиях ГСК находятся в состоянии покоя, содержа обильные липидные капли витамина А (Blaner et al., 2009), и очень чувствительны к внеклеточным сигналам от фиброзных стимулов (Yin et al., 2013), включая гепатит, воспаление или повреждение тканей (Wynn, 2008). При повреждении печени ГСК активируются, переходя от покоящегося фенотипа к миофибробластному фенотипу с пролиферативной, мигрирующей и инвазивной способностью (Coulouarn et al., 2012; Carloni et al., 2014; Novikova et al., 2017). Хорошо известную последовательность активации HSC можно разделить на два пути. Первый включает «инициацию», которая описывает изменения в экспрессии генов HSC и фенотипе, делающие их более чувствительными к паракринным стимулам.Второй путь включает «увековечивание», которое усиливает фенотип, инициированный HSC, за счет усиленной пролиферации и провоспалительной передачи сигналов (т. е. поврежденных ассоциированных молекулярных паттернов, DAMP), интерлейкинов, комплементарных факторов и факторов роста из близлежащих поврежденных гепатоцитов, эндотелиальных клеток и иммунных клеток, в результате чего в продвижении фиброгенеза (Фридман, 2000) (рис. 1). Молекулы внеклеточного матрикса (ECM) (например, коллаген типа I и III) секретируются активированными HSCs и накапливаются с образованием рубцовой ткани в пространстве Disse (Friedman, 2008a) (Fig. 1).Эта рубцовая ткань защищает печень от дальнейшего повреждения; однако устойчивая активация HSC приводит к хроническому фиброзу и циррозу печени (Lee and Friedman, 2011; Friedman et al., 2013).

Рисунок 1. Активация покоящихся ГСК способствует фиброзу печени. В предфиброзной печени покоящиеся ГСК в пространстве Диссе получают воспалительные сигналы, такие как поврежденные ассоциированные молекулярные паттерны (DAMP) и комплиментарные факторы (CF), от близлежащих гепатоцитов и синусоидальных эндотелиальных клеток.В ответ HSCs активируются, принимая миофибробластный фенотип и теряя свои липидные капли, содержащие витамин A. Активированные HSC индуцируют передачу сигналов рецептора фактора роста (TGFB, PDGF) и привлекают иммунные клетки, такие как NK-клетки и макрофаги, ассоциированные с опухолью (TAM), из кровотока. которые производят больше воспалительных стимулов. Эти воспалительные сигналы стимулируют ГСК к секреции избыточных белков ВКМ (например, коллагеновых волокон), создавая фиброзную среду.

Активированные ГСК играют важную роль в фиброзе и гепатокарциногенезе (Tsuchida and Friedman, 2017).Медиаторы в активации HSCs и микроокружения опухоли печени (TME) состоят из трансформирующего фактора роста бета (TGFB), тромбоцитарного фактора роста (PDGF), фактора роста соединительной ткани (CCN2, ранее CTGF), фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). , вирусная инфекция, передача сигнала киназа-матриксная металлопротеиназа 9 (FAK-MMP9), p53/21, фосфатидилинозитол-3-киназа/протеинкиназа B (AKT) (PI3K/AKT), митоген-активируемая протеинкиназа/киназа, регулируемая внеклеточным сигналом (MAPK/ERK) и интерлейкин 6/сигнальный преобразователь и активатор сигнальных путей транскрипции 3 (IL-6/STAT3) (Han et al., 2014; Фабрегат и др., 2016; Макино и др., 2018). Кроме того, предыдущие исследования показали, что активация HSC регулируется фосфатазой-супрессором опухолей и гомологом tensin, делетированным на хромосоме 10 (PTEN) (Takashima et al., 2009; Bian et al., 2012). Эти характеристики активированных HSCs и роль TME закладывают основу для изучения взаимосвязи между TME печени, активированными HSCs и гепатоканцерогенезом. В этом обзоре основное внимание будет уделено механизмам, регулирующим активацию ЗКП, и тому, как они способствуют развитию фиброза, цирроза и ГЦК (Wright et al., 2014; Колл и др., 2015; Das et al., 2020) и многообещающие клинические методы лечения, связанные с ГСК (Dong et al., 2018; Li et al., 2020).

Роль активированных звездчатых клеток печени в фиброзе печени, циррозе и прогрессировании ГЦК

Фиброз печени является основным фактором риска развития ГЦК. Кроме того, активация HSCs является движущей силой фиброза печени, цирроза и HCC (Tsuchida and Friedman, 2017). Из-за отсутствия эффективных методов лечения фиброза печени необходимо лучше понять молекулярные пути и медиаторы активации HSC, чтобы разработать эффективные таргетные методы лечения заболеваний печени.Фиброз печени является результатом хронического воспаления (после повреждения печени), характеризующегося секрецией избыточных компонентов ВКМ, что приводит к реакции заживления ран, которая приводит к образованию «рубца» в печени (Friedman, 2008b; Lee and Friedman, 2011). Хроническое воспаление может быть вызвано инфекцией HBV/HCV, злоупотреблением алкоголем, FLD (включая неалкогольную жировую болезнь печени и неалкогольный стеатогепатит) или другими метаболическими нарушениями нормальной печени (Higashi et al., 2017). Во время постхронического воспаления печени активация ГСК способствует развитию фиброза, а затем и цирроза, характеризующегося нарушением функции печени, гипертензией воротной вены и желтухой (Gines et al., 1987; де Франши, 2000; Д’Амико и др., 2006). Таким образом, предотвращение активации и пролиферации ГСК в случаях фиброза печени может отсрочить прогрессирование до ГЦК.

Роль метилирования ДНК в активации HSC

Недавно начались исследования, посвященные эпигенетической регуляции HSC, чтобы раскрыть сложность активации HSC (Tsuchida and Friedman, 2017). Ген-супрессор опухоли PTEN является важным негативным регулятором активации HSC, которая подавляется гиперметилированием промотора в опухолях (Cairns et al., 1997; Салвесен и др., 2001; Сориа и др., 2002; Фурута и др., 2004 г.; Роман-Гомез и др., 2004 г.; Мирмохаммадсадех и др., 2006 г.; Винке и др., 2007 г.; Тао и др., 2011; ван Эггермонд и др., 2011 г.; Биан и др., 2012). Кроме того, ингибирование активности PTEN приводит к конститутивной активации HSC, что может поддерживать фиброз печени (Bian et al., 2012). Кроме того, было показано, что активированные HSC обладают измененными метками метилирования ДНК и гидроксиметилирования. Например, Пейдж и др. (2016) показали, что активированные HSCs теряют свой фиброгенный фенотип, когда ДНК-метилтрансфераза 3a (DNMT3a) подавляется в четыреххлористой углеродной (CCl ₄ ) крысиной модели фиброза печени in vivo .Продолжающееся открытие новых медиаторов активации HSC, включая эпигенетические регуляторы, поможет лучше понять роль активированных HSC в фиброзе печени.

Профиброгенные цитокины в активации HSC при фиброзе печени

Трансформирующий фактор роста бета является одним из ключевых фиброгенных цитокинов, которые вызывают фиброз печени и регулируют активацию HSC (Fabregat et al., 2016; Tsuchida and Friedman, 2017; Dewidar et al., 2019). Надежный сигнальный путь TGFB требует расщепления и активации латентного TGFB тромбоспондином 1 (TSP1).Затем активированный TGFB связывается с рецептором 2 TGFB (TGFBR2), индуцируя фосфорилирование матерей против декапентаплегических гомологов 2 и 3 (SMAD2, SMAD3), которые перемещаются в ядро, чтобы регулировать нижестоящую экспрессию профибротических генов (Breitkopf et al., 2006; Friedman, 2008a; Liu et al., 2013; Meng et al., 2016; Tsuchida and Friedman, 2017; Murphy-Ullrich and Suto, 2018). TGFB также может активировать MAPK p38, ERK и пути N-концевой киназы c-jun (JNK) для регуляции активации HSC (Engel et al., 1999; Ханафуса и др., 1999). Центральное место в повреждении печени и активации HSC занимает патологическое увеличение экспрессии и активация TGFB в ECM (Tsuchida and Friedman, 2017). Во время активации HSC TGFB нацеливается на HSC и связывается с ними, индуцируя фосфорилирование SMAD3, чтобы способствовать продукции коллагена типа I и II (Breitkopf et al., 2006; Friedman, 2008a). Активированные HSC также способствуют увеличению продукции TGFB1 и TSP1, дополнительно усиливая профиброгенную активность TGFB (Breitkopf et al., 2005).Кроме того, аттенуация TGFB, активированного TSP1, может быть достигнута с помощью пептида-антагониста TSP1, и было показано, что он уменьшает фиброз печени на модели фиброза печени с применением диметилнитрозамина (Li et al., 2017; Murphy-Ullrich and Suto, 2018), демонстрируя важность этих отношений. Наряду с TGFB, ДНК-деметилаза тет-метилцитозиндиоксигеназа 3 (TET3) также активируется в фиброзной печени мыши и человека (Xu et al., 2020). Сюй и др. (2020) установили, что стимуляция TGFB1 может повышать уровни TET3 наряду с повышенной экспрессией профибротических генов в клетках LX-2, линии клеток HSC человека.Кроме того, было показано, что TET3 активирует гены пути TGFB TSP1 и TGFBR2, предполагая петлю положительной обратной связи между TET3 и TGFB1, которая способствует активации HSC и фиброзу печени (Xu et al., 2020). В дополнение к передаче сигналов TGFB, влияющей на активацию HSC, было показано, что продуцируемый гепатоцитами белок внеклеточного матрикса 1 (ECM1) подавляет уровни TGFB и предотвращает активацию HSC на мышиной модели in vivo с нокаутом ECM1 (Fan et al., 2019). Хотя TGFB остается сильным медиатором активации HSC и фиброгенеза, в этот процесс также вносят свой вклад дополнительные профиброгенные цитокины.

Другим важным цитокином, участвующим в активации HSC, является PDGF (Tsuchida and Friedman, 2017). Уровни PDGF повышены в печени человека с циррозом по сравнению с нормальной здоровой печенью (Pinzani et al., 1996; Ikura et al., 1997; Stock et al., 2007; Tsuchida and Friedman, 2017). При повреждении печени как у людей, так и у грызунов экспрессия бета-рецептора PDGF (PDGFRB) увеличивается в HSC, что приводит к активации, пролиферации и миграции HSC (Wong et al., 1994; Borkham-Kamphorst et al., 2004). Pdgf-C, член семейства Pdgf, в высокой степени экспрессируется на мембранных рецепторах гепатоцитов в модели трансгенных мышей Pdgf-c, что приводит к динамическому фиброзу печени (Wright et al., 2014), предполагая, что активация HSC может включать передачу сигналов Pdgf-c. Кроме того, подтверждается, что Pdgf является эффективным активатором HSC благодаря фиброзной роли Agrin (Agrn), секретируемого протеогликана, индуцируемого Pdgf-индуцированной активацией HSC в HCC в модели крыс Sprague Dawley, индуцированной диэтилнитрозамином (DEN), HCC (Lv et al. , 2017). В этом исследовании авторы показали, что Pdgf действует как активатор HSCs, который ингибируется путем блокирования связывания Pdgf с его рецептором. Авторы также продемонстрировали, что агрин из активированного супернатанта HSC увеличивает пролиферацию, метастазирование и инвазию SMMC-7721 (линия клеток HCC человека) и способствует эпителиально-мезенхимальному переходу (EMT) (Lv et al., 2017). В целом, это исследование подтверждает роль PDGF-индуцированной активации HSC, приводящей к фиброзу и HCC.

Матрицеллюлярный белок CCN2, известный как опосредующий фиброз в различных органах, включая печень (Hall-Glenn and Lyons, 2011; Jun and Lau, 2011; Kodama et al., 2011; Lipson et al., 2012), также был показан для активации HSC и стимулирования прогрессирования опухоли посредством секреции HSC IL-6 и STAT3 in vitro (Makino et al., 2018). Потенциальным клиническим игроком в клеточных перекрестных помехах между клетками HCS и HCC является фактор роста 9 фибробластов, полученный из стромы (FGF9).Интересно, что исследование 2020 года, проведенное Seitz et al. обнаружили, что только активированные HSC экспрессируют FGF9 по сравнению с клетками HCC. В тканях ГЦР активированная гиперэкспрессия FGF9 в HSC снижала чувствительность к терапевтическим агентам и была связана с плохим прогнозом (Seitz et al., 2020), что позволяет предположить, что FGF9 является потенциальной терапевтической мишенью и прогностическим инструментом для HCC. В целом, эти результаты подтверждают представление о факторах роста PDGF-C и CCN2 как активаторах HSC и FGF9 как потенциальной клинической мишени для HCC.

Ассоциация резидентных лимфоцитов печени с активированными ГСК при фиброзе и циррозе печени

В патогенезе фиброза печени также участвуют резидентные лимфоциты печени, включая Т-киллеры типа I и типа II (NKT), клетки-естественные киллеры (NK) и врожденные лимфоидные клетки (ILC) (Wang and Zhang, 2019). В частности, важно взаимодействие между активированными HSCs и этими печеночными лимфоцитами (Wang and Zhang, 2019). Врожденная роль NKT-клеток заключается в защите от патогенов путем рекрутирования циркулирующих лимфоцитов (Racanelli and Rehermann, 2006).После активации NKT-клетки могут индуцировать активацию HSC за счет продукции провоспалительных цитокинов и высвобождения остеопонтина и лигандов Hedgehog (Hh) (Syn et al., 2012; Wehr et al., 2013), чтобы способствовать развитию фиброза (Wang and Yin, 2015; Bandyopadhyay et al., 2016). Однако установлено, что NK-клетки, наряду с NKT-клетками, защищают печень, предотвращая инфекцию, образование опухолей (Racanelli, Rehermann, 2006) и фиброгенез (Melhem et al., 2006; Radaeva et al., 2006) в печени. мышиные модели фиброза (Muhanna et al., 2011; Гур и др., 2012; Hou et al., 2012) и пациентов с ВГС в различных клинических исследованиях (Glassner et al., 2012; Gur et al., 2012; Kramer et al., 2012). Кроме того, NK-клетки оказывают антифибротическое действие на ГСК, индуцируя активированный апоптоз ГСК (Радаева и др., 2006). Однако это временный эффект, который может привести к появлению устойчивых к апоптозу активированных ГСК (Радаева и др., 2007). Кроме того, врожденные лимфоидные клетки 3-го типа (ILC3) действуют как профибротические эффекторы в печени (Muhanna et al., 2007; Бьорклунд и др., 2016). В экспериментах по совместному культивированию с клетками LX-2 ILC3 стимулировали фиброгенез через интерлейкин-17A (IL-17A) и интерлейкин-22 (IL-22), что приводило к ингибированию IL-22 гамма-интерферона (IFNG) для косвенного усиления фиброгенеза. Ван и др., 2018). Эти данные свидетельствуют о важной роли резидентных иммунных клеток печени в фиброзе печени посредством взаимодействия с активированными HSCs (Schon and Weiskirchen, 2014). Кроме того, они предполагают участие врожденной иммунной системы в отношении активации HSC при фиброзе; таким образом, требуется дальнейшее изучение роли активированных HSCs в усилении и подавлении фиброза.

Несмотря на то, что было показано, что стимуляция врожденного иммунитета играет ключевую роль в противовирусной и противоопухолевой защите в дополнение к подавлению фиброза, регуляция врожденного иммунитета при хроническом повреждении печени все еще нуждается в выяснении. В мышиной модели CCl ₄ индуцированная Infg активация NK-клеток была снижена при позднем фиброзе печени (продвинутое рубцевание) по сравнению с ранним фиброзом (минимальное рубцевание) (Jeong et al., 2011). Авторы также продемонстрировали, что антифибротическая роль NK-клеток подавляется при прогрессирующем повреждении печени за счет повышенной экспрессии супрессора передачи сигналов цитокинов 1 (Socs1) и Tgfb (Jeong et al., 2011). Это исследование также показало in vitro доказательств того, что ранняя активация HSC (4-дневная совместная культура HSCs и NK-клеток печени) индуцировала активацию NK-клеток с помощью члена группы 2 натуральных киллеров D (NKG2D), тогда как это было отменено в промежуточно активированных HSC ( 8-дневное совместное культивирование HSCs и NK-клеток печени) из-за повышенных уровней TGFB1 и подавления NKG2D (Jeong et al., 2011). Эти результаты показывают, что хотя NK-клетки взаимодействуют с активированными HSCs, чтобы смягчить фиброз печени во время хронического повреждения печени, этот процесс может быть подавлен посредством увеличения TGFB и SOCS1, продуцируемых активированными HSCs in vitro .

В исследовании 2017 года Shi et al. (2017) показали, что у пациентов с циррозом печени активированные HSCs взаимодействуют с очищенными NK-клетками посредством TGFB-производной HSC-регуляции эмпериполиза (присутствие интактной клетки в цитоплазме другой клетки). Этот процесс был опосредован через TGFB, о чем свидетельствует значительное снижение эмпериполеза NK-клеток, когда активированные HSC обрабатывали антителом против TGFB. NK-клетки внутри активированных HSC также были апоптотичными, что наблюдалось по положительному окрашиванию терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазой dUTP nick end labeling (TUNEL), что указывает на фрагментацию ДНК, признак клеточного апоптоза (Kyrylkova et al., 2012). Это предполагает, что активированные HSC снижают антифиброзную роль NK-клеток in vitro за счет активированного TGFB, происходящего из HSC, и запрограммированной гибели NK-клеток, что способствует фиброзу (Shi et al., 2017). Это исследование демонстрирует, что активированные TGFB и NK-клетки, полученные из HSC, работают вместе, чтобы уменьшить антифиброзные способности NK-клеток и способствовать фиброзу у пациентов с циррозом печени.

Клеточное старение активированных ГСК при фиброзе печени

Было показано, что старение активированных ГСК подавляет фиброз печени (Hoare et al., 2010; Джин и др., 2016; Нисидзава и др., 2016). При раке клеточное старение является известным механизмом подавления опухоли (Sager, 1991), активируемым онкогенным стрессом (Campisi and d’Adda di Fagagna, 2007), а также может иметь важное значение для регуляции фиброза и цирроза печени (Tsuchida and Friedman, 2017). Старение раковых клеток поддерживается белками-супрессорами опухолей p53/p21, p16 ^Ink4a и ретинобластомой (Rb) (Campisi and d’Adda di Fagagna, 2007; Collado et al., 2007). Кроме того, у трансгенных мышей p53 ^-/- с нокаутом p53, специфически в HSC, которых лечили CCl ₄ , наблюдался повышенный фиброз по сравнению с мышами WT p53.Этот фенотип указывает на то, что активированные HSCs обладают способностью подвергаться старению, что приводит к уменьшению фиброза печени in vivo (Krizhanovsky et al., 2008). Это исследование также выявило сохраняющиеся фиброзные поражения в p53 ^-/- ; Cdkn2a/Arf ^–/– мышей через 20 дней после обработки CCl ₄ , наряду с повышенной экспрессией гладкомышечного актина (Acta2), Tgfb и Ki67 (маркер пролиферативных клеток). Эти данные свидетельствуют о том, что активированные ГСК во время фиброза печени могут также избегать клеточного старения, чтобы пролиферировать и секретировать компоненты ВКМ, чтобы начать развитие печеночного ТМЭ (Крижановский и соавт., 2008).

Активация

HSC является одним из первых ответов на повреждение LSEC (синусоидальных эндотелиальных клеток печени) в печени. LSEC служат проницаемым барьером между гепатоцитами и кровотоком и характеризуются фенестрациями и дезорганизованной базальной мембраной, что делает их одним из наиболее проницаемых типов эндотелиальных клеток (DeLeve and Maretti-Mira, 2017; Poisson et al., 2017). Эта проницаемость обеспечивает эффективный транспорт растворенных веществ и метаболитов по всей печени.Кроме того, LSEC вносят активный вклад в продукцию избыточных белков ECM при фиброзе печени (Natarajan et al., 2017). Недавние данные показывают, что удаление стареющих LSEC способствует фиброзу печени (Grosse et al., 2020). Отслеживая генетическое происхождение моделей мышей, Grosse et al. продемонстрировали, что большинство стареющих клеток были эндотелиальными клетками сосудов, в основном LSEC в синусоидах печени, в дополнение к макрофагам и адипоцитам в уменьшенной степени. Авторы также показали, что как постоянная, так и острая элиминация стареющих клеток нарушают барьеры крови, что приводит к фиброзу печени и периваскулярной ткани.В целом, это исследование устанавливает, что стареющие клетки, участвующие в предотвращении фиброза печени, в первую очередь представляют собой LSEC, а не звездчатые клетки печени (Grosse et al., 2020). В то время как стареющие LSEC служат барьером против фиброза, активация, пролиферация и трансформация HSC, вызванные повреждением печени, в дополнение к их способности избегать старения после активации, являются важными процессами развития, которые обеспечивают подходящую микросреду, необходимую для фиброза, цирроза и более поздних изменений. Развитие ГЦК (Lashen et al., 2020).

Активированные звездчатые клетки печени в микроокружении опухоли печени

Взаимодействие между опухолевыми клетками печени и TME печени имеет решающее значение для возникновения и прогрессирования ГЦК (Hernandez-Gea et al., 2013; Zhou et al., 2019). TME определяется как перитуморальное пространство (Alfarouk et al., 2011; Joyce and Fearon, 2015; Spill et al., 2016), способствующее приобретению различных характерных признаков рака, включая устойчивую пролиферативную передачу сигналов и активацию инвазии, метастазирование и ангиогенез (Hanahan and Weinberg, 2011).Кроме того, TME можно разделить на два основных компонента: (1) клеточный и (2) неклеточный. Активированные HSC являются частью клеточного компонента и выполняют важные биологические функции, такие как стимулирование фиброгенеза и ремоделирование ECM, чтобы положительно влиять на онкогенез HCC (Friedman, 2008a; Amann et al., 2009; Coulouarn and Clement, 2014).

В дополнение к HSC клеточные компоненты TME печени включают стромальные гепатоциты, иммунные клетки, такие как супрессорные клетки миелоидного происхождения (MDSC) (Fu et al., 2007; Hoechst et al., 2008), ассоциированные с опухолью макрофаги (TAM) (Budhu and Wang, 2006; Budhu et al., 2006; Jeong et al., 2011) и ассоциированные с раком фибробласты (CAF) (Yin et al., 2019). ). Неклеточные компоненты включают цитокины, такие как интерлейкин-6 (IL-6) (Budhu and Wang, 2006; Budhu et al., 2006) и интерлейкин-22 (IL-22) (Jiang et al., 2011), факторы роста такие как VEGF (Coulouarn et al., 2012), TGFB (Thompson et al., 2015), PDGF (Tsuchida and Friedman, 2017) и CCN2 (Makino et al., 2018).Дополнительные неклеточные компоненты включают матриксные металлопротеиназы (ММП), их ингибиторы (Новикова и др., 2017) и протеогликаны (Теохарис и др., 2010) (табл. 1). В следующих исследованиях будут рассмотрены различные роли, которые активированные ГСК играют в прогрессировании ГЦР посредством их взаимодействия с другими клеточными и неклеточными компонентами печеночного ТМЭ.

Таблица 1. Компоненты печеночного МЭ.

Перекрестные помехи между активированными ГСК и клеточными компонентами TME печени

TME печени состоит из различных иммунных клеток, создающих иммуносупрессивную среду для поддержания роста опухоли ГЦР (Lu et al., 2019). Активированные HSC вносят свой вклад в эту иммуносупрессивную среду, секретируя цитокины, которые индуцируют экспансию MDSC (Maher, 2001; Hui et al., 2004; Yu et al., 2004; Pan et al., 2008; Gabrilovich and Nagaraj, 2009; Hsieh et al. , 2013). В мышиной модели ортотопической опухоли печени активированные HSC значительно увеличивали экспрессию регуляторных T-клеток (Treg) и MDSC, что способствовало росту HCC в селезенке, костном мозге и опухолевых тканях (Zhao et al., 2014). Кроме того, активированные HSCs секретируют ангиогенные факторы роста для формирования новой сосудистой сети в пределах TME (Coulouarn et al., 2012; Хайндрикс и Гервинс, 2015). Эти функции активированных HSCs создают связь с системой кровообращения для снабжения опухоли питательными веществами. Иммунные клетки могут также регулировать активацию HSC in vitro , о чем свидетельствует активация HSC интерлейкином 20 (IL-20), что приводит к усилению TGFB1 и коллагена I типа, а также к увеличению пролиферации и миграции активированных HSC (Chiu et al., 2014). Это же исследование также показало, что эти фиброгенные фенотипы могут быть ослаблены с помощью моноклонального антитела против рецептора IL-20 (IL-20R1), предполагая, что IL-20 является важным активатором HSCs и фиброгенеза.В совокупности активированные HSC могут играть важную роль в стимулировании иммуносупрессивного и ангиогенного TME печени для поддержки агрессивного роста клеток HCC.

Перекрестные помехи между активированными HSCs и неклеточными компонентами TME печени

Помимо взаимодействия с другими клеточными компонентами ТМЭ печени, ГСК также реагируют на неклеточные компоненты ТМЭ печени (Hall-Glenn and Lyons, 2011; Jun and Lau, 2011; Kodama et al., 2011; Lipson et al. ., 2012). Примером этого является ответ на CCN2, продуцируемый опухолевыми клетками печени (Makino et al., 2018). Макино и др. (2018) продемонстрировали, что повышенная экспрессия CCN2 положительно коррелирует с активированными HSC, на что указывает экспрессия гладкомышечного актина (ACTA2) в опухолях печени как мыши, так и человека. Кроме того, авторы показали, что анти-CCN2 снижает продукцию IL-6 в клетках LX-2 и ингибирует активацию STAT3 в клетках HepG2 (человеческая линия клеток HCC) (Makino et al., 2018). Это исследование было первым, в котором было установлено, что CCN2, полученный из клеток HCC, активирует HSCs в TME, тем самым ускоряя прогрессирование HCC за счет продукции цитокинов.Эти результаты также подтверждают необходимость дальнейшего изучения CCN2 и др. белков ECM, участвующих в активации HSCs.

В то время как HSCs реагируют на факторы роста, такие как CCN2; после активации HSC также могут модулировать ECM посредством секреции и активации белков, таких как MMP (Lachowski et al., 2019), которые необходимы для миграции опухоли HCC (Scheau et al., 2019). Исследования показали, что MMP2 и MMP9 (наиболее часто изучаемые MMP при ЕМТ при ГЦК) важны для инвазивного потенциала опухолей ГЦР за счет деградации и ремоделирования коллагена в ВКМ (Wang et al., 2014; Сан и др., 2018). Более того, передача сигналов между FAK и MMP9 считается одним из основных путей, который способствует инвазии и метастазированию клеток HCC (Chen et al., 2010; Jia et al., 2011). Таким образом, правдоподобно предположить, стимулируется ли этот сигнальный путь через активацию HSC. Эта гипотеза была исследована Han et al. (2014), которые исследовали, способствуют ли активированные HSCs передаче сигналов FAK-MMP9 in vitro . Во-первых, было показано, что повышенное количество активированных HSC связано с инвазией опухоли в воротную вену, поздней стадией метастазирования опухолевых узлов и меньшей дифференцировкой опухоли.После этого количество активированных HSCs, количественно оцененное цитоплазматической экспрессией ACTA2, положительно коррелировало с уровнями экспрессии фосфорилированных FAK (p-FAK) и MMP9 при HCC. Кроме того, авторы использовали эксперимент по совместному культивированию, чтобы продемонстрировать активацию передачи сигналов FAK-MMP9 в клетках HCC в присутствии активированной кондиционированной среды HSC и при совместном культивировании активированных HSC. Кроме того, ингибирование передачи сигналов FAK-MMP9 с помощью малой интерферирующей РНК (siRNA) для FAK (siFAK) устраняло миграционные и инвазивные эффекты активированных HSCs на клетки HCC (Han et al., 2014). Эти данные показывают, что передача сигналов FAK-MMP9 стимулируется активированными HSCS и играет роль в модулировании метастазирования HCC после активации HSC; таким образом, подчеркивая перекрестные помехи между опухолевыми клетками и активированными HSCs в TME печени.

Участие микроРНК в активации HSC в TME печени

В дополнение к компонентам ECM, таким как MMPs и факторы роста, недавние достижения подчеркнули важную роль, которую играют микро-РНК (miRNAs) в TME (Cheng et al., 2015). Это демонстрируется способностью miRNAs в опухолевых клетках преобразовывать микроокружение, поддерживая характерные признаки рака и неклеточно-автономные сигнальные пути (Suzuki et al., 2015). miRNAs представляют собой небольшие некодирующие РНК (длиной 20-25 нуклеотидов), которые регулируют экспрессию генов путем связывания с транскриптами мРНК-мишеней через начальную последовательность на 5′-конце miRNA (Bartel, 2004). В раковых клетках микроРНК экспрессируются аберрантно по сравнению с нормальными клетками, при этом паттерны экспрессии различаются между различными типами раковых клеток (Karube et al., 2005; Лу и др., 2005; Меррит и др., 2008 г.; Гарзон и др., 2009). Кроме того, активация и инактивация HSC могут контролироваться профиброгенными и антифиброгенными микроРНК (Tsuchida and Friedman, 2017). Интересно, что miRNAs, как было показано, выполняют двойную роль онкогенов и опухолевых супрессоров в раковых клетках (Zhang et al., 2007). Следующие исследования исследуют эти двойные роли в отношении активации HSCs в TME печени.

Онкогенные миРНК (онкомиР), происходящие из внеклеточных везикул (ВВ) клеток ГЦК, опосредуют связь между клетками ГЦК и активированными ГСК (Daugaard et al., 2017). Интересно, что взаимодействие между miRNAs и компонентами TME частично обеспечивается экзосомами, типом EV, продуцируемым в эндосомах эукариотических клеток, которые могут переносить ДНК, РНК и белки в другие клетки (Zhang et al., 2015; Kosaka, 2016). Результаты Li J. et al. (2019) обнаружили, что ЭВ, высвобождаемые клетками HepG2 и Huh7 (линия клеток ГЦК человека), содержат повышенный уровень онкомиР. В результате активированные HSC высвобождали свои собственные EV, которые стимулировали инвазию HCC, эпителиально-мезенхимальный переход (EMT) и активацию сигнального пути AKT/ERK (Li J.и др., 2019). Это указывает на петлю положительной обратной связи между экзосомальными онкомиР активированных HSCs и клетками HCC, способствующей гепатокарциногенезу. Более того, авторы наблюдали активацию трех специфических онкомиР: миР-21, миР-221 и миР-151. Эти результаты являются еще одним примером перекрестных помех между клетками HCC и активированными HSC, создающими прометастатический фенотип (Li J. et al., 2019).

Аналогичным образом, миР-1426 является онкомиР, которая, как было показано, способствует онкогенезу, метастазированию и миграции при множественных типах рака (Xu et al., 2019). Недавно исследование экспрессии микрочипов miRNA выявило сильное увеличение miR-1246 в клеточных линиях HCC при совместном культивировании с активированными HSC (Huang et al., 2020). Эти результаты отражают in vitro доказательства того, что активированные HSC индуцируют экспрессию миР-1246 в клеточных линиях HCC, способствуя метастазированию. Более того, миР-1246 и ее целевой RAR-родственный орфанный рецептор альфа (RORA) стимулировали EMT in vitro и in vivo у голых мышей, на что указывает усиленная миграция клеток HCC, снижение E -кадгерина и увеличение экспрессии белка виментина. .В результате сверхэкспрессии миР-1246 в клетках PLC (клеточная линия гепатомы печени человека) увеличивалось связывание RORA и бета-катенина (CTNNB1) в цитоплазме. Этот процесс был обращен вспять при нокдауне RORA, указывая на то, что связывание RORA с бета-катенином предотвращает ядерную транслокацию бета-катенина и активацию сигнального пути Wnt/бета-катенин. Кроме того, как miR-1246, так и RORA эффективно использовались в качестве независимых прогностических маркеров в ткани HCC (Huang et al., 2020). Эти данные свидетельствуют о том, что миР-1246:RORA является ключевым компонентом онкогенного влияния активированных ГСК на клетки ГЦК, и что нацеливание на ось миР-1246:РОРА может замедлить прогрессирование ГЦК (Huang et al., 2020).

900–20 Однако miRNAs могут также функционировать как супрессоры опухолей в раковых клетках (Zhang et al., 2007). Например, было показано, что миРНК-212-3p подавляет рост раковых клеток при других формах рака, таких как почечно-клеточная карцинома (Gu et al., 2017), немелкоклеточный рак легкого (Tang et al., 2017) и глиобластома (Tang et al., 2017). Однако эффекты, если таковые имеются, при ГЦК оставались неясными. Так, Чен и соавт. (2019) исследовали взаимосвязь между miRNA-212-3p и CCN2 в TME печени. Авторы показали, что микроРНК-212-3p ингибирует пролиферацию клеточных линий HCC посредством подавления CCN2.Кроме того, миР-212-3p подавлялась в клеточных линиях и тканях HCC и отрицательно коррелировала с инвазией сосудов и отсутствием капсулы фиброзной опухоли. Эта фиброзная капсула образована мезенхимальными клетками печени хозяина вместо клеток ГЦК и предотвращает возможную инвазию ГЦК в печень хозяина (Ishizaki et al., 2001). Эти находки демонстрируют роль miRNA-212-3p в качестве супрессора опухолей посредством ее взаимодействия с CCN2, важным компонентом ECM печеночного TME. Кроме того, результаты этого исследования поднимают вопрос о том, ингибирует ли микроРНК-212-3p также опосредованную CCN2 продукцию цитокинов в активированных HSC, учитывая, что эксперименты в этом исследовании проводились только на клеточных линиях и тканях HCC.

Активированная HSC регуляция ангиогенеза в TME печени

Эффекты активированных HSCs на ангиогенез при HCC также исследовались в течение последнего десятилетия. Ангиогенез в TME необходим для прогрессирования опухоли, метастазирования и инвазии (Mittal et al., 2014). Чжу и др. (2015) определили интерлейкин-8 (ИЛ-8) как фактор, способствующий ангиогенезу при ГЦК. Интересно, что IL-8 был сильно экспрессирован в строме HCC и в основном был получен из активированных HSC, а не из клеток HCC.Кроме того, было показано, что нейтрализующее IL-8 антитело подавляет ангиогенез опухоли в клетках Hep3B (линия клеток HCC человека), обработанных кондиционированной средой из активированных HSC. Авторы также продемонстрировали аналогичные результаты in vivo с помощью анализа хориоаллантоисной мембраны куриного эмбриона (САМ). Совсем недавно Лин и соавт. наблюдали, что активированные HSCs являются первичным источником секретируемого ангиопоэтина-1 (Ang-1) в человеческих клетках HCC in vitro . Это не только описывает стимулирование ангиогенеза ГЦК посредством активированных ГСК и экспрессии Ang-1, но также открывает потенциал Ang-1 в качестве антиангиогенной терапевтической мишени при ГЦК (Lin et al., 2020). Эти результаты идентифицируют ангиогенные факторы, продуцируемые активированными HSCs в TME печени, которые способствуют гепатоканцерогенезу.

Интересно, что исследование 2019 года показало, что активированные HSCs индуцируют ангиогенез при HCC посредством усиления регуляции ассоциированного с глиомой онкогена 1 (Gli-1), члена сигнального пути Hh (Yan et al., 2017). Кроме того, это исследование установило, что 3,5,4′-тригидрокси- транс--стильбен (торговое название: ресвератрол), полифенольное соединение, содержащееся в красном вине, винограде, ягодах и арахисе и предположительно действующее как антиоксидант, также препятствовали прогрессированию HCC, вызванному HSCs через нацеливание на Gli-1.В частности, активированные HSC индуцировали ангиогенез при HCC посредством усиления экспрессии Gli-1, стимулировали выработку активных форм кислорода (АФК) и увеличивали инвазивность клеток HCC. Кроме того, ресвератрол отменял активированный HSC-стимулированный ангиогенез и подавлял продукцию АФК, а также экспрессию IL-6 и хемокинового рецептора C-X-C типа 4 (CXCR4) в клетках HepG2 путем подавления экспрессии Gli-1 (Yan et al., 2017). В отдельном исследовании Han et al. (2019) также описали, что ресвератрол обладает эффектом подавления опухолей за счет модуляции микроокружения опухоли при нескольких типах рака, включая ГЦК.Это предполагает возможность использования Gli-1 в качестве потенциальной мишени для предотвращения ангиогенеза при ГЦР.

Покоящиеся звездчатые клетки печени

В то время как активированные HSCs играют важную роль в формировании фиброза и TME печени, недавние исследования также углубились в роль покоящихся HSCs (qHSCs), поскольку они необходимы для поддержания здоровой печени (Coll et al., 2015; Дас и др., 2020). Выявление механизмов, сохраняющих этот фенотип, может расширить возможности таргетной терапии ГСК.

Колл и др. (2015) провели исследование, в котором изучались эти механизмы и включали анализ микрочипов miRNA изолированных человеческих qHSC. Микрочип показал, что HSCs экспрессируют 259 микроРНК. Напротив, когда HSC были активированы in vitro , 212 из этих miRNAs активировались, а другие 47 miRNAs подавлялись (Coll et al., 2015), что указывает на роль miRNAs в поддержании qHSCs. Кроме того, взаимодействия между генами-мишенями miRNA в qHSCs также были связаны с активацией HSC.В частности, miRNA-192 была выбрана для дальнейшего исследования in vivo из-за наличия 28 генов-мишеней в qHSCs и демонстрации сниженной экспрессии в образцах печени с циррозом по сравнению со здоровыми образцами. Чтобы выяснить роль miRNA-192 в qHSCs in vivo , HSCs были выделены из двух моделей мышей с фиброзом печени и показали снижение экспрессии miRNA-192 по сравнению со здоровыми HSCs мыши. Более того, сверхэкспрессия miRNA-192 приводила к ингибированию передачи сигналов Tgfb1 и индуцированной Pdgf миграции HSC в первичных клетках HSC мыши.Эти данные подтверждают, что miRNA-192 является регулятором qHSCs посредством подавления генов-мишеней, необходимых для активации HSC (Coll et al., 2015). Таким образом, эти результаты подтверждают дополнительное исследование генов-мишеней miRNA-192, участвующих в активации HSC, для расширения возможностей таргетной терапии HSC.

Еще раз подтверждая значение qHSCs, Das et al. продемонстрировали индукцию in vitro qHSC апоптоза раковых клеток посредством независимого от каспазы механизма (Das et al., 2020). Этот механизм был установлен в клетках гепатомы крыс, обработанных средами, кондиционированными qHSC.Исследование показало, что для индукции апоптоза qHSC требуется повышенная экспрессия фактора, индуцирующего апоптоз (AIF), ядерная локализация и фрагментация ДНК, что в конечном итоге приводит к гибели клеток (Das et al., 2020). Эти данные иллюстрируют способность qHSC повышать токсичность и чувствительность к установленным химиотерапевтическим агентам, таким как доксорубицин (Das et al., 2020), и могут привести к расширению уже существующих терапевтических стратегий для повышения их эффективности.

Клинические последствия и актуальность

Заболеваемость ГЦК в США.S. значительно увеличился за последние два десятилетия (Singal et al., 2019; Das et al., 2020; Wu et al., 2020), и, по оценкам Американского онкологического общества, в 2020 году будет диагностировано 32 107 новых случаев ГЦК наряду с с 22 620 смертельными исходами (Society, 2020). Кроме того, заболеваемость ГЦК в три раза выше у мужчин, чем у женщин, и самая высокая заболеваемость наблюдается среди пациентов старше 70 лет, при этом высокая смертность наблюдается у пациентов в возрасте 55–69 лет и старше (Beal et al., 2017; Society, 2020). ). К сожалению, более 80% пациентов с ГЦР на поздних стадиях не поддаются потенциально излечивающему хирургическому лечению, что в сочетании с недостатком эффективных системных методов лечения приводит к высокой заболеваемости и смертности (Zhou et al., 2018; Ли Д. и др., 2019). Текущие исследования были сосредоточены на процессе прогрессирования опухоли и потенциальных терапевтических целях для создания клинически значимых методов лечения пациентов с ГЦК. В этом исследовании замешана критическая роль активированных HSC, из которых развиваются 80–90% клеток HCC (Shiraha et al., 2020).

Метформин

Как упоминалось ранее, TGFB и PDGF индуцируют активацию HSC, чтобы способствовать клеточным перекрестным помехам между опухолевыми и стромальными клетками (Zhang and Friedman, 2012; Tsuchida and Friedman, 2017).GDF15, член суперсемейства TGFB, является биомаркером стрессовых реакций в результате лечения рака, такого как гипоксия и химиотерапия (Kelly et al., 2009; Corre et al., 2013), и может быть клинически значимой мишенью для ГЦК. Обычная терапия рака печени использует трансартериальную химиоэмболизацию (ТАХЭ), которая включает гипоксию, вызванную химиотерапевтической эмболизацией, для повреждения клеток ГЦК; однако эта терапия также вызывает стресс в окружающей ткани ГЦР (Dong et al., 2018). В результате сильного клеточного стресса GDF15 секретируется поврежденными лечением клетками ГЦР и может иметь способность способствовать фиброзу через активированные ГСК (Dong et al., 2018). Чтобы объяснить этот процесс, Dong et al. (2018) продемонстрировали, что клетки ГЦК в «TACE-подобных» условиях демонстрируют повышенные уровни GDF15 за счет активации путей p38 MAPK, ERK1/2 и JNK. Известно, что метформин, широко распространенный препарат, одобренный FDA, воздействует на путь JNK/p38MAPK (Wu et al., 2011). Донг и др. (2018) также продемонстрировали, что в активированных клетках HSC GDF15 способствует пролиферации HSC и выработке коллагена, на что указывает повышенный уровень белка коллагена I типа. клеток (Salic and Mitchison, 2008).И наоборот, метформин был способен нацеливаться на путь JNK и подавлять экспрессию GDF15, что приводило к снижению синтеза коллагена и пролиферации активированных HSC in vitro и in vivo (Dong et al., 2018). Эти результаты предполагают возможность замедления прогрессирования ГЦК путем воздействия на активированные ГСК широко доступным препаратом метформином.

Сорафениб

Другой одобренный FDA препарат, сорафениб, представляет собой многоцелевой антиангиогенный ингибитор тирозинкиназы (Hasskarl, 2014).Сорафениб был первым системным препаратом, одобренным для лечения ГЦК, после того как было показано, что он увеличивает среднюю продолжительность жизни на 2–3 месяца (Llovet et al., 2008; Cheng et al., 2009). Недавно опубликованное исследование показало, что новая система биоразлагаемых дендритных полимерных наночастиц, нагруженных сорафенибом, улучшает терапию ГЦК (Li et al., 2020). Благодаря анализу МТТ эта система индуцировала более высокую цитотоксичность клеток ГЦК, чем система наночастиц, конъюгированных с ПЭГ, содержащая сорафениб и свободный сорафениб in vitro .Кроме того, у мышей с ксенотрансплантатами HepG2 рост опухоли был значительно замедлен с минимальными побочными эффектами (Li et al., 2020). Более того, предыдущее исследование, связанное с наночастицами, опубликованное в 2018 году, продемонстрировало, что комбинированная доставка сорафениба с ингибитором митогенактивируемой протеинкиназы (MEK) с использованием наночастиц, нацеленных на хемокиновый рецептор 4 мотива CXC (CXCR4), уменьшала фиброз печени и предотвращала развитие опухоли (Sung et al. , 2018). В этом исследовании дополнительно оценивалось влияние сорафениба на активированные ГСК и было установлено, что комбинированная доставка сорафениба и ингибитора МЕК через наночастицы, нацеленные на CXCR4, предотвращала активацию ERK в активированных ГСК и оказывала антифибротическое действие в модели CCl ₄ на мышах (Sung и другие., 2018).

Бевацизумаб

Сохраняющийся интерес к критической роли активированных ГСК в регуляции ангиогенеза, вероятно, возрастет в свете недавно опубликованных предварительных результатов исследования IMbrave150, которое бросает вызов давней парадигме сорафениба первой линии для лечения далеко зашедшей нерезектабельной ГЦК. Это исследование представляло собой рандомизированное контролируемое исследование фазы III с участием 336 пациентов, получавших либо атезолизумаб (ингибитор PD-L1), либо бевацизумаб (ингибитор VEGF-A), либо сорафениб.Предварительные результаты исследования продемонстрировали значительное улучшение общей выживаемости: пациенты в комбинированной группе не достигли медианы выживаемости по сравнению с медианой выживаемости 13,2 месяца при применении сорафениба ( p < 0,0001) (Cheng et al., 2019). Было показано, что бевацизумаб in vivo снижает экспрессию профиброгенных генов TGFB и ACTA2, а также снижает общую активацию HSC, полностью ослабляя фиброз печени в модели CCl ₄ на крысах (Huang et al., 2013). Хотя окончательные результаты исследования еще не опубликованы, ожидается, что оно изменит практику и подчеркнет важность как иммунных, так и ангиогенных перекрестных помех в прогрессировании TME и HCC в печени.

Возможные альтернативные методы лечения

Наконец, существует интерес к терапевтическому нацеливанию на взаимодействие цитокинов и HSC. Нейтрализующее IL-8 антитело (Zhu et al., 2015) и нейтрализующее антитело против CCN2, которые приводят к снижению продукции IL-6 (Makino et al., 2018) продемонстрировали терапевтический потенциал в подавлении прогрессирования опухоли HCC in vitro и in vivo с ксенотрансплантатом мышиной модели. Эти нейтрализующие антитела, которые нацелены на цитокины интерлейкина, являются потенциальными клиническими терапевтическими средствами, сосредоточенными на взаимосвязи между активированными HSCs и TME. Кроме того, исследование 2015 года установило, что ингибитор ангиогенина неомицин является потенциальным средством терапии ГЦК. Это исследование показало, что неомицин снижал активацию HSC с кондиционированной средой или рекомбинантным ангиогенином in vitro (Barcena et al., 2015). Кроме того, введение неомицина уменьшало рост опухоли клеток HepG2-LX2, совместно введенных мышам, что свидетельствует о том, что секреция ангиогенина клетками ГЦК способствует развитию опухоли посредством индукции активации ГСК и ремоделирования ВКМ. Эти результаты не только предполагают, что воздействие на передачу сигналов ангиогенина может иметь потенциальное значение для лечения ГЦК, но также делают неомицин потенциальным клиническим средством лечения ГЦК.

Обсуждение

Активация звездчатых клеток печени является центральным событием фиброза печени и развития цирроза и ГЦК.Фундаментальным пробелом в знаниях являются перекрестные помехи между активированными HSCs, ECM печени и опухолевыми клетками HCC. Недавние исследования были сосредоточены на целевых стратегиях молекулярной терапии фиброза и цирроза печени (van der Heide et al., 2019). Таким образом, использование нескольких биомаркеров может привести к оптимизации раннего выявления ГЦК (Ismail and Pinzani, 2011; Tuohetahuntila et al., 2017). Данные, опубликованные в 2017 году, предполагают новый терапевтический вариант для нацеливания и повышения активности NK у пациентов с хроническим гепатитом, предшествующим фиброзу печени (Shi et al., 2017). Другие недавние исследования, в которых обсуждаются потенциальные таргетные методы лечения, такие как PDGF-C и TGFB, находятся в стадии изучения. В конечном счете, выяснение механистических связей между активированными ГСК на всех стадиях фиброза и цирроза приведет к лучшему пониманию онкогенеза ГЦК.

В связи со сложной взаимосвязью между TME печени, развитием опухоли и прогрессированием HCC, недавние исследования начали сосредотачиваться на роли активированных HSCs, одного из важных факторов, вовлеченных в TME печени.TME печени обеспечивает нишу, которая включает как клеточные компоненты, такие как HSCs, так и неклеточные компоненты, представляющие собой ECM и белки ECM. По мере того, как активированные HSC становятся клетками, продуцирующими ECM во время фиброза печени, секретируемые хемокины, цитокины и факторы роста стимулируют общий TME для поддержки пролиферации HCC.

Из-за сложности TME трудно терапевтически нацелить один путь, поскольку все они имеют функциональную избыточность; однако нацеливание на ключевой клеточный компонент TME печени, такой как активированные HSCs, может быть более осуществимым.Применительно к этому обзору исследования, посвященные роли активированных HSC в TME, могут привести к таргетной терапии активированных HSC, которая может воздействовать на факторы, связанные с активированными HSC, такие как TGFB, PDGF, MMP-9, CCN2 и онкогенные микроРНК. Другие мишени, которые требуют дальнейшего изучения и служат перспективными областями для терапевтических исследований, включают IL-8, Ang-1 и Gli-1. Предлагаемая схема, иллюстрирующая взаимосвязь между активированными HSCs в TME печени и HCC, показана на рисунке 2.

Рис. 2. Взаимосвязь между опухолевыми клетками ГЦК, опухолевым ангиогенезом и ГСК в ТМЭ печени. Покойные HSC активируются многочисленными факторами, такими как повреждение печени, воспаление, передача сигналов PDGF и TGFB, гепатит и вирусная инфекция. Кроме того, активация HSC может эпигенетически регулироваться путем деметилирования опухолевого супрессора PTEN и активации HSC IL-20 посредством активации TGFB1. Активированные HSC продолжают продуцировать белки ECM и изменять ECM в сопровождении протеогликанов и VEGF.Высвобождаются цитокины, такие как IL-6, которые способствуют пролиферации опухолевых клеток HCC. CCN2, продуцируемый из клеток HCC, может активировать HSCs, в отличие от этого, CCN2 ингибируется с помощью онкогенной miRNA (oncomir) miR-212-3p, которая снижает инвазию клеток HCC in vitro . Другие онкомиры, секретируемые внеклеточными везикулами HCC, могут регулировать передачу сигналов между HSCs и клетками HCC. Кроме того, IL-8, MMP-9 и Ang-1 вносят вклад в ассоциированный с опухолью ангиогенез. Эти факторы способствуют пролиферации, инвазии и метастазированию опухоли ГЦК.

В совокупности литература, охваченная в этом обзоре, описывает значение активированных HSCs в печени TME. В дополнение к клеточным перекрестным помехам в TME активированные HSCs играют решающую роль в прогрессировании HCC через неклеточные компоненты TME. Эти недавние исследования предоставляют примеры цитокинов, факторов роста, компонентов ECM и микроРНК, которые являются важными неклеточными компонентами TME печени, участвующими во взаимосвязи между активированными HSCs и развитием HCC.

Этот обзор также сконцентрирован на клинических последствиях, которые подчеркивают потенциальные методы лечения ГЦК посредством нацеливания на активированные ГСК и их взаимосвязь с клетками ГЦК. В дополнение к повышению эффективности современных терапевтических средств, таких как метформин, сорафениб и атезолизумаб/бевацизумаб, потенциальные альтернативные методы лечения включают неомицин и нейтрализующие антитела против IL-22 и CCN2.

Более глубокое понимание того, как TME печени, в первую очередь активированные HSC, взаимодействует с первичной опухолью и неопухолевыми клетками, будет способствовать развитию эффективных диагностических и прогностических инструментов.Текущие исследования необходимы для разработки более эффективных методов лечения ГЦК и дополнения существующих методов лечения для повышения их эффективности.

Вклад авторов

AB и RB в равной степени подготовили обзор, собрали материалы и ссылки авторов, написали рукопись и подготовили таблицу и рисунки. Р.Л., КП, К.З., Д.Д., Р.Б., А.С. и К.К. внесли свой вклад, написав и отредактировав различные разделы рукописи. HD обеспечила общую поддержку, интеллектуальный вклад, критическую оценку и все этапы редактирования.Все авторы прочитали и одобрили рукопись.

Финансирование

Эта работа была поддержана грантами Американского фонда печени (A20-0085), Американской гастроэнтерологической ассоциации (AGA2020-21-04) и Американского онкологического общества (130042-IRG-16-244-10-IRG).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Ссылки

Amann, T., Bataille, F., Spruss, T., Muhlbauer, M., Gabele, E., Scholmerich, J., et al. (2009). Активированные звездчатые клетки печени способствуют онкогенности гепатоцеллюлярной карциномы. Науки о раке. 100, 646–653. doi: 10.1111/j.1349-7006.2009.01087.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Армстронг Г.Л., Васли А., Симард Э.П., Маккуиллан Г.М., Кунерт В.Л. и Альтер М.Дж. (2006). Распространенность вируса гепатита С в США с 1999 по 2002 год. Энн. Стажер Мед. 144, 705–714. дои: 10.7326/0003-4819-144-10-200605160-00004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Bandyopadhyay, K., Marrero, I., and Kumar, V. (2016). Субпопуляции NKT-клеток как ключевые участники физиологии и патологии печени. Сотовый. Мол. Иммунол. 13, 337–346. doi: 10.1038/cmi.2015.115

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Barazani, Y., Hiatt, J.R., Tong, M.J., и Busuttil, R.В. (2007). Хронический вирусный гепатит и гепатоцеллюлярная карцинома. World J. Surg. 31, 1243–1248. doi: 10.1007/s00268-007-9041-3

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Барсена, К., Стефанович, М., Тутусаус, А., Мартинес-Ньето, Г.А., Мартинес, Л., Гарсия-Руис, К., и другие. (2015). Секреция ангиогенина из клеток гепатомы активирует звездчатые клетки печени, усиливая самоподдерживающийся цикл, способствующий раку печени. наук. Респ. 5:7916. дои: 10.1038/srep07916

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бартель, Д. П. (2004). МикроРНК: геномика, биогенез, механизм и функция. Сотовый 116, 281–297. doi: 10.1016/s0092-8674(04)00045-5

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Beal, E.W., Tumin, D., Kabir, A., Moris, D., Zhang, X.F., Chakedis, J., et al. (2017). Тенденции смертности от гепатоцеллюлярной карциномы в США. Ж. Гастроинтест. Surg. 21, 2033–2038 гг. doi: 10.1007/s11605-017-3526-7

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бянь, Э.Б., Хуанг, К., Ма, Т.Т., Тао, Х., Чжан, Х., Ченг, К., и др. (2012). Опосредованное DNMT1 гиперметилирование PTEN вызывает активацию звездчатых клеток печени и фиброгенез печени у крыс. Токсикол. заявл. Фармакол. 264, 13–22. doi: 10.1016/j.taap.2012.06.022

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бьорклунд, А.К., Форкель М., Пичелли С., Конья В., Теорелл Дж., Фриберг Д. и соавт. (2016). Гетерогенность врожденных лимфоидных клеток CD127(+) человека выявлена ​​с помощью секвенирования одноклеточной РНК. Нац. Иммунол. 17, 451–460. doi: 10.1038/ni.3368

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Бланер, В. С., О’Бирн, С. М., Вонгсирирой, Н., Клуве, Дж., Д’Амброзио, Д. М., Цзян, Х., и соавт. (2009). Капли липидов звездчатых клеток печени: специализированные капли липидов для хранения ретиноидов. Биохим. Биофиз. Acta 1791, 467–473. doi: 10.1016/j.bbalip.2008.11.001

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Borkham-Kamphorst, E., Herrmann, J., Stoll, D., Treptau, J., Gressner, A.M., and Weiskirchen, R. (2004). Доминантно-негативный растворимый рецептор PDGF-бета ингибирует активацию звездчатых клеток печени и ослабляет фиброз печени. Лаб. Вкладывать деньги. 84, 766–777. doi: 10.1038/labinvest.3700094

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Брей, Ф., Ferlay, J., Soerjomataram, I., Siegel, R.L., Torre, L.A., and Jemal, A. (2018). Глобальная статистика рака 2018: GLOBOCAN оценивает заболеваемость и смертность во всем мире от 36 видов рака в 185 странах. CA Cancer J. Clin. 68, 394–424. doi: 10.3322/caac.21492

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Брейткопф, К., Годой, П., Чуклан, Л., Сингер, М.В., и Дули, С. (2006). Передача сигналов TGF-бета/Smad в поврежденной печени. З Гастроэнтерол. 44, 57–66. doi: 10.1055/s-2005-858989

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Брейткопф К., Савица И., Вестхофф Дж. Х., Викерт Л., Дули С. и Гресснер А. М. (2005). Тромбоспондин 1 действует как сильный промотор эффектов трансформирующего фактора роста бета посредством двух различных механизмов в звездчатых клетках печени. Гут 54, 673–681. doi: 10.1136/gut.2004.042911

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Будху, А., Forgues, M., Ye, Q.H., Jia, H.L., He, P., Zanetti, K.A., et al. (2006). Прогнозирование венозных метастазов, рецидивов и прогноз при гепатоцеллюлярной карциноме на основе уникальной сигнатуры иммунного ответа микроокружения печени. Раковая клетка 10, 99–111. doi: 10.1016/j.ccr.2006.06.016

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кэрнс, П., Оками, К., Халахми, С., Халахми, Н., Эстеллер, М., Герман, Дж. Г., и соавт. (1997). Частая инактивация PTEN/MMAC1 при первичном раке предстательной железы. Рак Res. 57, 4997–5000.

Академия Google

Карлони, В., Луонг, Т.В., и Ромбаутс, К. (2014). Звездчатые клетки печени и внеклеточный матрикс при гепатоцеллюлярной карциноме: сложнее, чем когда-либо. Печень, внутр. 34, 834–843. doi: 10.1111/liv.12465

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Chen, J.Q., Ou, Y.L., Huang, Z.P., Hong, Y.G., Tao, Y.P., Wang, Z.G., et al. (2019). МикроРНК-212-3p ингибирует пролиферацию и инвазию клеток гепатоцеллюлярной карциномы человека путем подавления экспрессии CCN2. наук. Респ. 9:9820. doi: 10.1038/s41598-019-46088-w

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Chen, J.S., Huang, X.H., Wang, Q., Chen, X.L., Fu, X.H., Tan, H.X., et al. (2010). FAK участвует в инвазии и метастазировании гепатоцеллюлярной карциномы. клин. Эксп. Метастаз 27, 71–82. doi: 10.1007/s10585-010-9306-3

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ченг А.Л., Канг Ю.К., Чен З., Tsao, C.J., Qin, S., Kim, J.S., et al. (2009). Эффективность и безопасность сорафениба у пациентов с распространенной гепатоцеллюлярной карциномой в Азиатско-Тихоокеанском регионе: рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование III фазы. Ланцет Онкол. 10, 25–34. дои: 10.1016/S1470-2045(08)70285-7

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Ченг А.Л., Цинь С., Икеда М., Галле П., Дюкре М., Чжу А. и др. (2019). IMbrave150: результаты эффективности и безопасности исследования III фазы, в котором оценивали атезолизумаб (атезо) + бевацизумаб (bev) по сравнению с сорафенибом (Sor) в качестве первого лечения (tx) для пациентов (pts) с нерезектабельной гепатоцеллюлярной карциномой (HCC). Энн. Онкол. 30, ix186–ix187. doi: 10.1093/annonc/mdz446.002

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Cheng, C.J., Bahal, R., Babar, I.A., Pincus, Z., Barrera, F., Liu, C., et al. (2015). Сайленсинг микроРНК для терапии рака, нацеленной на микроокружение опухоли. Природа 518, 107–110. doi: 10.1038/nature13905

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чиу, Ю. С., Вэй, К. С., Линь, Ю. Дж., Хсу, Ю. Х., и Чанг, М.С. (2014). Антитела IL-20 и IL-20R1 защищают от фиброза печени. Гепатология 60, 1003–1014. doi: 10.1002/hep.27189

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Choo, S.P., Tan, W.L., Goh, BKP, Tai, W.M., and Zhu, A.X. (2016). Сравнение гепатоцеллюлярной карциномы в восточных и западных популяциях. Рак 122, 3430–3446. doi: 10.1002/cncr.30237

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Колл, М., El Taghdouini, A., Perea, L., Mannaerts, I., Vila-Casadesus, M., Blaya, D., et al. (2015). Интегративный анализ профиля экспрессии микроРНК и генов покоящихся звездчатых клеток печени человека. наук. Реп. 5:11549. дои: 10.1038/srep11549

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Корре, Дж., Хебрауд, Б., и Бурен, П. (2013). Краткий обзор: фактор дифференцировки роста 15 при патологии: клиническая роль? Стволовые клетки Перевод. Мед. 2, 946–952.doi: 10.5966/sctm.2013-0055

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кулуарн, К., и Клеман, Б. (2014). Звездчатые клетки и развитие рака печени: терапевтический потенциал нацеливания на строму. Дж. Гепатол. 60, 1306–1309. doi: 10.1016/j.jhep.2014.02.003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кулуарн, К., Корлу, А., Глейз, Д., Генон, И., Торгейрссон, С.С., и Клеман, Б. (2012).Взаимодействие гепатоцитов и звездчатых клеток в печени создает благоприятную воспалительную микросреду, которая способствует прогрессированию гепатоцеллюлярной карциномы. Рак Res. 72, 2533–2542. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-11-3317

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Д’Амико, Г., Гарсия-Цао, Г., и Пальяро, Л. (2006). Естественная история и прогностические показатели выживаемости при циррозе печени: систематический обзор 118 исследований. Дж. Гепатол. 44, 217–231.doi: 10.1016/j.jhep.2005.10.013

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Das, D., Fayazzadeh, E., Li, X., Koirala, N., Wadera, A., Lang, M., et al. (2020). Покоящиеся звездчатые клетки печени вызывают токсичность и чувствительность к доксорубицину в раковых клетках через каспазо-независимый путь гибели клеток: центральная роль фактора, индуцирующего апоптоз. J. Cell Physiol. 235, 6167–6182. doi: 10.1002/jcp.29545

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Даугард, И., Sanders, K.J., Idica, A., Vittayarukskul, K., Hamdorf, M., Krog, J.D., et al. (2017). миР-151a индуцирует частичную ЭМП, регулируя Е-кадгерин в клетках НМРЛ. Онкогенез 6:e366. doi: 10.1038/oncsis.2017.66

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

де Франши, Р. (2000). Обновление консенсуса по портальной гипертензии: отчет консенсусного семинара Baveno III по определениям, методологии и терапевтическим стратегиям при портальной гипертензии. Дж.Гепатол. 33, 846–852. doi: 10.1016/s0168-8278(00)80320-7

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Девидар, Б., Мейер, К., Дули, С., и Майндл-Бейнкер, А. Н. (2019). TGF-бета в активации звездчатых клеток печени и фиброгенезе печени, обновлено в 2019 г. Cells 8:1419. doi: 10.3390/cells8111419

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Донг, Г., Ма, М., Лин, X., Лю, Х., Гао, Д., Цуй, Дж., и др. (2018). Поврежденная лечением гепатоцеллюлярная карцинома способствует активности звездчатых клеток печени и фиброзу через GDF15. Экспл. Сотовый рез. 370, 468–477. doi: 10.1016/j.yexcr.2018.07.011

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Engel, M.E., McDonnell, M.A., Law, B.K., and Moses, H.L. (1999). Взаимозависимая передача сигналов SMAD и JNK при трансформации транскрипции, опосредованной бета-фактором роста. Дж. Биол. хим. 274, 37413–37420. doi: 10.1074/jbc.274.52.37413

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фабрега, И., Морено-Касерес, Дж., Санчес, А., Дули, С., Девидар, Б., Джаннелли, Г., и соавт. (2016). Передача сигналов TGF-бета и заболевание печени. FEBS J. 283, 2219–2232. дои: 10.1111/февраль 13665

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Fan, W., Liu, T., Chen, W., Hammad, S., Longerich, T., Hausser, I., et al. (2019). ECM1 предотвращает активацию бета-трансформирующего фактора роста, звездчатых клеток печени и фиброгенез у мышей. Гастроэнтерология 157, 1352–1367.е13. doi: 10.1053/j.gastro.2019.07.036

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фридман, С. Л., Шеппард, Д., Даффилд, Дж. С., и Виолетта, С. (2013). Терапия фиброзных заболеваний: приближаемся к линии старта. наук. Перевод Мед. 5:167ср161. doi: 10.1126/scitranslmed.3004700

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Fu, J., Xu, D., Liu, Z., Shi, M., Zhao, P., Fu, B., et al. (2007). Увеличение количества регуляторных Т-клеток коррелирует с поражением Т-клеток CD8 и плохой выживаемостью у пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой. Гастроэнтерология 132, 2328–2339. doi: 10.1053/j.gastro.2007.03.102

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Фурута Дж., Умебаяси Ю., Миямото К., Кикучи К., Оцука Ф., Сугимура Т. и др. (2004). Профилирование метилирования промотора 30 генов злокачественной меланомы человека. Науки о раке. 95, 962–968. doi: 10.1111/j.1349-7006.2004.tb03184.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гинес, П., Quintero, E., Arroyo, V., Teres, J., Bruguera, M., Rimola, A., et al. (1987). Компенсированный цирроз: естественное течение и прогностические факторы. Гепатология 7, 122–128. doi: 10.1002/hep.1840070124

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гласснер, А., Эйзенхардт, М., Крамер, Б., Корнер, К., Коенен, М., Зауэрбрух, Т., и соавт. (2012). NK-клетки от HCV-инфицированных пациентов эффективно индуцируют апоптоз активированных первичных звездчатых клеток печени человека TRAIL-, FasL- и NKG2D-зависимым образом. Лаб. Вкладывать деньги. 92, 967–977. doi: 10.1038/labinvest.2012.54

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гросс Л., Вагнер Н., Емельянов А., Молина С., Лакас-Жерве С., Вагнер К. Д. и соавт. (2020). Определенные типы стареющих клеток p16 ^High необходимы для сохранения здоровья мышей. Клеточный метаб. 32, 87–99.e6. doi: 10.1016/j.cmet.2020.05.002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гу, К., Wang, Z., Jin, Z., Li, G., Kou, Y., Jia, Z., et al. (2017). МикроРНК-212 ингибирует пролиферацию, миграцию и инвазию почечно-клеточной карциномы путем нацеливания на Х-связанный ингибитор белка апоптоза (XIAP). Онкотарджет 8,

–. doi: 10.18632/oncotarget.20786

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Гур, К., Дорон, С., Кфир-Эренфельд, С., Хорвиц, Э., Абу-Таир, Л., Сафади, Р., и соавт. (2012). Опосредованное NKp46 уничтожение звездчатых клеток печени человека и мыши ослабляет фиброз печени. Гут 61, 885–893. doi: 10.1136/gutjnl-2011-301400

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хан, С., Хан, Л., Яо, Ю., Сунь, Х., Зан, X., и Лю, К. (2014). Активированные звездчатые клетки печени способствуют миграции и инвазии клеток гепатоцеллюлярной карциномы посредством активации передачи сигналов FAK-MMP9. Онкол. Респ. 31, 641–648. doi: 10.3892/or.2013.2872

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хан, Ю., Джо, Х., Чо, Дж. Х., Дханасекаран, Д. Н., и Сонг, Ю. С. (2019). Ресвератрол как нутрицевтик, подавляющий опухоль, модулирующий микроокружение опухоли и злокачественное поведение рака. Междунар. Дж. Мол. науч. 20:925. дои: 10.3390/ijms20040925

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ханафуса, Х., Ниномия-Цудзи, Дж., Масуяма, Н., Нишита, М., Фудзисава, Дж., Сибуя, Х., и др. (1999). Участие пути митоген-активируемой протеинкиназы p38 в трансформации экспрессии генов, индуцированной бета-фактором роста. Дж. Биол. хим. 274, 27161–27167. doi: 10.1074/jbc.274.38.27161

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хаскарл, Дж. (2014). Сорафениб: нацеливание на несколько тирозинкиназ при раке. Недавние результаты Cancer Res. 201, 145–164. дои: 10.1007/978-3-642-54490-3_8

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Эрнандес-Хеа, В., Тоффанин, С., Фридман, С.Л., и Лловет, Дж.М. (2013). Роль микроокружения в патогенезе и лечении гепатоцеллюлярной карциномы. Гастроэнтерология 144, 512–527. doi: 10.1053/j.gastro.2013.01.002

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hoechst, B., Ormandy, L.A., Ballmaier, M., Lehner, F., Kruger, C., Manns, M.P., et al. (2008). Новая популяция супрессорных клеток миелоидного происхождения у пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой индуцирует Т-клетки CD4(+)CD25(+)Foxp3(+). Гастроэнтерология 135, 234–243. doi: 10.1053/j.gastro.2008.03.020

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хоу, Х., Yu, F., Man, S., Huang, D., Zhang, Y., Liu, M., et al. (2012). Отрицательная регуляция Schistosoma japonicum , индуцированного яйцами фиброза печени, естественными клетками-киллерами. PLoS Негл. Троп. Дис. 6:e1456. doi: 10.1371/journal.pntd.0001456

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hsieh, C.C., Chou, H.S., Yang, H.R., Lin, F., Bhatt, S., Qin, J., et al. (2013). Роль компонента комплемента 3 (С3) в дифференцировке супрессорных клеток миелоидного происхождения. Кровь 121, 1760–1768. дои: 10.1182/кровь-2012-06-440214

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Huang, J.L., Fu, Y.P., Gan, W., Liu, G., Zhou, P.Y., Zhou, C., et al. (2020). Звездчатые клетки печени способствуют прогрессированию гепатоцеллюлярной карциномы через ось микроРНК-1246-RORальфа-Wnt/бета-катенин. Рак Летт. 476, 140–151. doi: 10.1016/j.canlet.2020.02.012

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Хуан Ю., Feng, H., Kan, T., Huang, B., Zhang, M., Li, Y., et al. (2013). Бевацизумаб ослабляет фиброз печени у крыс, ингибируя активацию звездчатых клеток печени. PLoS One 8:e73492. doi: 10.1371/journal.pone.0073492

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Hui, A.Y., Dannenberg, A.J., Sung, J.J., Subbaramaiah, K., Du, B., Olinga, P., et al. (2004). Простагландин Е2 ингибирует опосредованную трансформирующим фактором роста бета 1 индукцию коллагена альфа 1(I) в звездчатых клетках печени. Дж. Гепатол. 41, 251–258. doi: 10.1016/j.jhep.2004.04.033

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Икура Ю., Моримото Х., Огами М., Джомура Х., Икеока Н. и Сакураи М. (1997). Экспрессия тромбоцитарного фактора роста и его рецептора в печени пациентов с хроническим заболеванием печени. Дж. Гастроэнтерол. 32, 496–501. дои: 10.1007/bf02934089

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ишизаки, М., Ашида К., Хигаси Т., Накацукаса Х., Канеоши Т., Фудзивара К. и др. (2001). Формирование капсулы и перегородки при гепатоцеллюлярной карциноме человека. Арка Вирхова. 438, 574–580. дои: 10.1007/s004280000391

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чон, В. И., Пак, О., Сух, Ю. Г., Бьюн, Дж. С., Пак, С. Ю., Чой, Э., и др. (2011). Подавление врожденного иммунитета (естественные клетки-киллеры/интерферон-гамма) на поздних стадиях фиброза печени у мышей. Гепатология 53, 1342–1351. doi: 10.1002/hep.24190

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Jia, Y.L., Shi, L., Zhou, J.N., Fu, C.J., Chen, L., Yuan, H.F., et al. (2011). Эпиморфин способствует инвазии и метастазированию гепатоцеллюлярной карциномы человека посредством активации оси киназы фокальной адгезии/регулируемой внеклеточным сигналом киназы/матриксной металлопротеиназы-9. Гепатология 54, 1808–1818. doi: 10.1002/hep.24562

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Цзян Р., Tan, Z., Deng, L., Chen, Y., Xia, Y., Gao, Y., et al. (2011). Интерлейкин-22 способствует развитию гепатоцеллюлярной карциномы человека путем активации STAT3. Гепатология 54, 900–909. doi: 10.1002/hep.24486

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Цзинь, Х., Лиан, Н., Чжан, Ф., Чен, Л., Чен, К., Лу, С., и другие. (2016). Активация передачи сигналов PPARgamma/P53 необходима для того, чтобы куркумин индуцировал старение звездчатых клеток печени. Дис. клеточной смерти. 7:e2189.doi: 10.1038/cddis.2016.92

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Kanwal, F., Hoang, T., Kramer, J.R., Asch, S.M., Goetz, M.B., Zeringue, A., et al. (2011). Увеличение распространенности ГЦК и цирроза печени у пациентов с хронической вирусной инфекцией гепатита С. Гастроэнтерология 140, 1182–1188.e1. doi: 10.1053/j.gastro.2010.12.032

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Карубе Ю., Танака Х., Осада Х., Tomida, S., Tatematsu, Y., Yanagisawa, K., et al. (2005). Снижение экспрессии Dicer связано с плохим прогнозом у больных раком легких. Науки о раке. 96, 111–115. doi: 10.1111/j.1349-7006.2005.00015.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Келли, Дж. А., Люсия, М. С., и Ламберт, Дж. Р. (2009). p53 контролирует экспрессию гена фактора предстательной железы/ингибирующего макрофаги цитокина/НПВП в ответ на плотность клеток, повреждение ДНК и гипоксию с помощью различных механизмов. Рак Летт. 277, 38–47. doi: 10.1016/j.canlet.2008.11.013

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кодама Т., Такехара Т., Хикита Х., Симидзу С., Шигекава М., Цунэмацу Х. и другие. (2011). Увеличение экспрессии p53 индуцирует синтез CCN2 гепатоцитами мыши и человека и приводит к фиброзу печени у мышей. Дж. Клин. Вкладывать деньги. 121, 3343–3356. дои: 10.1172/JCI44957

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Крамер, Б., Korner, C., Kebschull, M., Glassner, A., Eisenhardt, M., Nischalke, H.D., et al. (2012). Натуральный киллер p46Высокая экспрессия определяет подмножество естественных киллерных клеток, которые потенциально участвуют в контроле репликации вируса гепатита С и модуляции фиброза печени. Гепатология 56, 1201–1213. doi: 10.1002/hep.25804

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Крижановский В., Йон М., Диккинс Р. А., Хирн С., Саймон Дж., Митинг С. и соавт.(2008). Старение активированных звездчатых клеток ограничивает фиброз печени. Сотовый 134, 657–667. doi: 10.1016/j.cell.2008.06.049

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Кирилкова К., Киряченко С., Лейд М. и Киусси К. (2012). Обнаружение апоптоза с помощью анализа TUNEL. Методы Мол. биол. 887, 41–47. дои: 10.1007/978-1-61779-860-3_5

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Лачовски Д., Кортес Э., Райс А., Пинато, Д., Ромбаутс, К., и Дель Рио Эрнандес, А. (2019). Жесткость матрикса модулирует активность MMP-9 и TIMP-1 в звездчатых клетках печени, поддерживая фиброз. наук. Респ. 9:7299. doi: 10.1038/s41598-019-43759-6

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лашен С.А., Эльшафей М.М., Хабласс Ф.Х., Альсайед Э.А. и Хассан А.А. (2020). Жесткость печени как предиктор поведения гепатоцеллюлярной карциномы у пациентов с циррозом печени, связанным с гепатитом С. Гепатобилиарная дисплазия поджелудочной железы. Междунар. 19, 22–28. doi: 10.1016/j.hbpd.2019.11.004

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли Д., Седано С., Аллен Р., Гонг Дж., Чо М. и Шарма С. (2019). Текущий ландшафт лечения распространенной гепатоцеллюлярной карциномы: результаты лечения пациентов и влияние на качество жизни. Раки 11:841. doi: 10.3390/cancers11060841

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, Дж., Yan, Y., Ang, L., Li, X., Liu, C., Sun, B., et al. (2019). OncomiR, происходящие из внеклеточных везикул, опосредуют связь между раковыми клетками и ассоциированными с раком звездчатыми клетками печени в микроокружении гепатоцеллюлярной карциномы. Канцерогенез 41, 223–234. doi: 10.1093/carcin/bgz096

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ли, З., Йе, Л., Лю, Дж., Лиан, Д., и Ли, X. (2020). Нагруженные сорафенибом наночастицы на основе биоразлагаемых дендритных полимеров для усиленной терапии гепатоцеллюлярной карциномы. Междунар. Дж. Наномед. 15, 1469–1480. DOI: 10.2147/IJN.S237335

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Линь Н., Мэн Л., Лин Дж., Чен С., Чжан П., Чен К. и др. (2020). Активированные звездчатые клетки печени способствуют ангиогенезу при гепатоцеллюлярной карциноме путем секреции ангиопоэтина-1. J. Cell Biochem. 121, 1441–1451. doi: 10.1002/jcb.29380

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Липсон, К.Э., Вонг К., Тенг Ю. и Спонг С. (2012). CCN2 является центральным медиатором ремоделирования тканей и фиброза, и его ингибирование может обратить вспять процесс фиброза. Восстановление тканей при фиброгенезе 5(Приложение 1):S24. дои: 10.1186/1755-1536-5-S1-S24

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Liu, Y., Liu, H., Meyer, C., Li, J., Nadalin, S., Konigsrainer, A., et al. (2013). Трансформирующий фактор роста-бета (TGF-бета)-опосредованная экспрессия фактора роста соединительной ткани (CCN2) в звездчатых клетках печени требует активации передачи сигналов Stat3. Дж. Биол. хим. 288, 30708–30719. doi: 10.1074/jbc.M113.478685

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лловет, Дж. М., Риччи, С., Маццаферро, В., Хилгард, П., Гейн, Э., Блан, Дж. Ф., и другие. (2008). Сорафениб при распространенной гепатоцеллюлярной карциноме. Н. англ. Дж. Мед. 359, 378–390. дои: 10.1056/NEJMoa0708857

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лосано Р., Нагави М., Форман К., Лим С., Шибуя К., Абоянс В. и др. (2012). Глобальная и региональная смертность от 235 причин смерти для 20 возрастных групп в 1990 и 2010 гг.: систематический анализ исследования глобального бремени болезней, 2010 г. Lancet 380, 2095–2128. doi: 10.1016/S0140-6736(12)61728-0

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Лу, К., Ронг, Д., Чжан, Б., Чжэн, В., Ван, X., Чен, З., и др. (2019). Современные взгляды на микроокружение иммуносупрессивной опухоли при гепатоцеллюлярной карциноме: проблемы и возможности. Мол. Рак 18:130. doi: 10.1186/s12943-019-1047-6

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Лу, Дж., Гетц, Г., Миска, Э.А., Альварес-Сааведра, Э., Лэмб, Дж., Пек, Д., и соавт. (2005). Профили экспрессии микроРНК классифицируют рак человека. Природа 435, 834–838. doi: 10.1038/nature03702

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Lv, X., Fang, C., Yin, R., Qiao, B., Shang, R., Wang, J., et al. (2017).Агрин, пара-секретируемый PDGF-активированными звездчатыми клетками печени человека, способствует гепатокарциногенезу in vitro и in vivo. Онкотарджет 8, 105340–105355. doi: 10.18632/oncotarget.22186

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Макино Ю., Хикита Х., Кодама Т., Шигекава М., Ямада Р., Сакамори Р. и др. (2018). CCN2 Опосредует взаимодействие опухоль-строма между клетками гепатомы и звездчатыми клетками печени для ускорения прогрессирования ГЦК. Рак Res. 78, 4902–4914. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-17-3844

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мельхем, А., Муханна, Н., Бишара, А., Альварес, К.Е., Илан, Ю., Бишара, Т., и др. (2006). Антифибротическая активность NK-клеток при экспериментальном повреждении печени путем уничтожения активированных HSC. Дж. Гепатол. 45, 60–71. doi: 10.1016/j.jhep.2005.12.025

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мерритт, В. М., Лин, Ю.G., Han, L.Y., Kamat, A.A., Spannuth, W.A., Schmandt, R., et al. (2008). Дайсер, Дроша и исходы у больных раком яичников. Н. англ. Дж. Мед. 359, 2641–2650. дои: 10.1056/NEJMoa0803785

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мирмохаммадсадех, А., Марини, А., Намбиар, С., Хассан, М., Таннапфель, А., Ружичка, Т., и соавт. (2006). Эпигенетическое молчание гена PTEN при меланоме. Рак Res. 66, 6546–6552. дои: 10.1158/0008-5472.CAN-06-0384

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Миттал, К., Эбос, Дж., и Рини, Б. (2014). Ангиогенез и микроокружение опухоли: фактор роста эндотелия сосудов и не только. Семин. Онкол. 41, 235–251. doi: 10.1053/j.seminoncol.2014.02.007

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Муханна Н., Абу Таир Л., Дорон С., Амер Дж., Аззех М., Махамид М. и др. (2011). Уменьшение фиброза печени за счет активации NK-клеток. Гут 60, 90–98. doi: 10.1136/gut.2010.211136

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Муханна, Н., Хорани, А., Дорон, С., и Сафади, Р. (2007). Близость лимфоцитов и звездчатых клеток печени предполагает прямое взаимодействие. клин. Эксп. Иммунол. 148, 338–347. doi: 10.1111/j.1365-2249.2007.03353.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Мерфи-Ульрих, Дж. Э., и Суто, М. Дж. (2018). Регуляция тромбоспондином-1 латентной активации TGF-бета: терапевтическая мишень при фиброзном заболевании. Матрица биол. 6, 28–43. doi: 10.1016/j.matbio.2017.12.009

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Натараджан В., Харрис Э. Н. и Кидамби С. (2017). SECs (синусоидальные эндотелиальные клетки), микроокружение печени и фиброз. Биомед. Рез. Междунар. 2017:4097205. дои: 10.1155/2017/4097205

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Нисидзава Х., Игучи Г., Фукуока Х., Такахаши М., Суда К., Bando, H., et al. (2016). IGF-I индуцирует старение звездчатых клеток печени и ограничивает фиброз р53-зависимым образом. наук. Респ. 6:34605. дои: 10.1038/srep34605

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Норденштедт, Х., Уайт, Д.Л., и Эль-Сераг, Х.Б. (2010). Изменение картины эпидемиологии при гепатоцеллюлярной карциноме. Коп. Дис печени. 42(Прил. 3) S206–S214. doi: 10.1016/S1590-8658(10)60507-5

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Новикова М.В., Хромова Н.В., Копнин П.Б. (2017). Компоненты микроокружения гепатоцеллюлярной карциномы и их роль в опухолевой прогрессии. Биохимия (Москва) 82, 861–873. дои: 10.1134/S00062970016

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пейдж А., Паоли П., Моран Сальвадор Э., Уайт С., Френч Дж. и Манн Дж. (2016). Трансдифференцировка звездчатых клеток печени включает полногеномное ремоделирование ландшафта метилирования ДНК. Дж.Гепатол. 64, 661–673. doi: 10.1016/j.jhep.2015.11.024

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Pan, P.Y., Wang, G.X., Yin, B., Ozao, J., Ku, T., Divino, C.M., et al. (2008). Реверсия иммунной толерантности при распространенном злокачественном новообразовании: модуляция развития супрессорных клеток миелоидного происхождения путем блокады функции фактора стволовых клеток. Кровь 111, 219–228. doi: 10.1182/blood-2007-04-086835

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Пинцани, М., Milani, S., Herbst, H., DeFranco, R., Grappone, C., Gentilini, A., et al. (1996). Экспрессия тромбоцитарного фактора роста и его рецепторов в нормальной печени человека и во время активного фиброгенеза в печени. утра. Дж. Патол. 148, 785–800.

Академия Google

Poisson, J., Lemoinne, S., Boulanger, C., Durand, F., Moreau, R., Valla, D., et al. (2017). Синусоидальные эндотелиальные клетки печени: физиология и роль в заболеваниях печени. Дж. Гепатол. 66, 212–227.doi: 10.1016/j.jhep.2016.07.009

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Радаева С., Сун Р., Яруга Б., Нгуен В. Т., Тиан З. и Гао Б. (2006). Естественные клетки-киллеры улучшают фиброз печени, убивая активированные звездчатые клетки в зависимости от NKG2D и лиганд-зависимого апоптоза, связанного с фактором некроза опухоли. Гастроэнтерология 130, 435–452. doi: 10.1053/j.gastro.2005.10.055

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Радаева С., Ван, Л., Радаев, С., Чон, В. И., Пак, О., и Гао, Б. (2007). Передача сигналов ретиноевой кислотой сенсибилизирует звездчатые клетки печени к уничтожению NK-клеток за счет активации лиганда RAE1, активирующего NK-клетки. утра. Дж. Физиол. Гастроинтест. Физиол печени. 293, G809–G816. doi: 10.1152/jpgi.00212.2007

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Равла, П., Сункара, Т., Муралидхаран, П., и Радж, Дж. П. (2018). Обновление глобальных тенденций и этиологии гепатоцеллюлярной карциномы. Контемп. Онкол. (поз.) 22, 141–150. doi: 10.5114/wo.2018.78941

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Роман-Гомес, Дж., Хименес-Веласко, А., Кастильехо, Дж. А., Агирре, X., Барриос, М., Наварро, Г., и др. (2004). Гиперметилирование промотора связанных с раком генов: сильный независимый прогностический фактор при остром лимфобластном лейкозе. Кровь 104, 2492–2498. doi: 10.1182/blood-2004-03-0954

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Салич, А.и Митчисон, Т.Дж. (2008). Химический метод быстрого и чувствительного обнаружения синтеза ДНК in vivo. Проц. Натл. акад. науч. США 105, 2415–2420. doi: 10.1073/pnas.0712168105

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Salvesen, H.B., MacDonald, N., Ryan, A., Jacobs, I.J., Lynch, E.D., Akslen, L.A., et al. (2001). Метилирование PTEN связано с поздней стадией и микросателлитной нестабильностью при карциноме эндометрия. Междунар.Дж. Рак 91, 22–26. doi: 10.1002/1097-0215(20010101)91:1<22::aid-ijc1002<3.0.co;2-s

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Scheau, C., Badarau, I.A., Costache, R., Caruntu, C., Mihai, G.L., Didilescu, A.C., et al. (2019). Роль матриксных металлопротеиназ в эпителиально-мезенхимальном переходе гепатоцеллюлярной карциномы. Анал. Сотовый патол. (Амст) 2019:9423907. дои: 10.1155/2019/9423907

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Шон, Х.Т. и Вайскирхен Р. (2014). Иммуномодулирующие эффекты трансформирующего фактора роста бета в печени. Гепатобилиарная хирургия. Нутр. 3, 386–406. doi: 10.3978/j.issn.2304-3881.2014.11.06

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Зейтц Т., Фриз К., Дитрих П., Таслер В. Э., Боссерхофф А. и Хеллербранд К. (2020). Фактор роста фибробластов 9 экспрессируется активированными звездчатыми клетками печени и способствует прогрессированию гепатоцеллюлярной карциномы. наук. Реп. 10:4546. doi: 10.1038/s41598-020-61510-4

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Sevic, I., Spinelli, F.M., Cantero, M.J., Reszegi, A., Kovalszky, I., Garcia, M.G., et al. (2019). «Роль микроокружения опухоли в развитии и прогрессировании гепатоцеллюлярной карциномы», в Гепатоцеллюлярная карцинома , изд. JEE Tirnitz-Parker (Брисбен: Codon Publications).

Академия Google

Ши, Дж., Zhao, J., Zhang, X., Cheng, Y., Hu, J., Li, Y., et al. (2017). Активированные звездчатые клетки печени нарушают антифиброзную способность NK-клеток через ТФР-бета-зависимый эмпериполез у пациентов с циррозом ВГВ. наук. Респ. 7:44544. дои: 10.1038/srep44544

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сираха, Х., Ивамуро, М., и Окада, Х. (2020). Звездчатые клетки печени в опухоли печени. Доп. Эксп. Мед. биол. 1234, 43–56. дои: 10.1007/978-3-030-37184-5_4

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Сингал, А.Г., Парих, Н.Д., Рич, Н.Е., Джон, Б.В., и Пиллаи, А. (2019). «Наблюдение за гепатоцеллюлярной карциномой и ее постановка», в Hepatocellular Carcinoma: Translational Precision Medicine Approaches , ed. Ю. Хосида (Чам: Humana Press), 27–51. дои: 10.1007/978-3-030-21540-8_2

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Общество

, AC (2020). Факты и цифры о раке, 2020 г. Атланта: Американское онкологическое общество.

Академия Google

Соколович, А., Соколович М., Бурс В., Эльферинк Р. П. и Босма П. Дж. (2010). Белок 5, связывающий инсулиноподобный фактор роста, повышает выживаемость звездчатых клеток печени человека LX2. Фиброгенез для восстановления тканей 3:3. дои: 10.1186/1755-1536-3-3

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Soria, J.C., Lee, H.Y., Lee, J.I., Wang, L., Issa, J.P., Kemp, B.L., et al. (2002). Отсутствие экспрессии PTEN при немелкоклеточном раке легкого может быть связано с метилированием промотора. клин. Рак рез. 8, 1178–1184.

Академия Google

Spill, F., Reynolds, D.S., Kamm, R.D., and Zaman, M.H. (2016). Влияние физического микроокружения на прогрессирование опухоли и метастазирование. Курс. мнение Биотехнолог. 40, 41–48. doi: 10.1016/j.copbio.2016.02.007

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Stock, P., Monga, D., Tan, X., Micsenyi, A., Loizos, N., and Monga, S.P. (2007). Рецептор-альфа тромбоцитарного фактора роста: новая терапевтическая мишень при гепатоцеллюлярном раке человека. Мол. Рак Тер. 6, 1932–1941 гг. doi: 10.1158/1535-7163.MCT-06-0720

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сун, С.Дж., Ван, Н., Сун, З.В., Чен, Дж., и Цуй, Х.В. (2018). МиР-5692a способствует инвазии и метастазированию гепатоцеллюлярной карциномы посредством MMP9. евро. преподобный мед. Фармакол. науч. 22, 4869–4878. doi: 10.26355/eurrev_201808_15623

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Сун Ю.К., Лю Ю.К., Chao, P.H., Chang, C.C., Jin, P.R., Lin, T.T., et al. (2018). Комбинированная доставка сорафениба и ингибитора MEK с использованием наночастиц, нацеленных на CXCR4, уменьшает фиброз печени и предотвращает развитие опухоли. Тераностика 8, 894–905. doi: 10.7150/thno.21168

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Syn, W.K., Agboola, K.M., Swiderska, M., Michelotti, G.A., Liaskou, E., Pang, H., et al. (2012). Связанный с NKT hedgehog и остеопонтин стимулируют фиброгенез при неалкогольной жировой болезни печени. Гут 61, 1323–1329. doi: 10.1136/gutjnl-2011-301857

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тахмасеби Биргани, М., и Карлони, В. (2017). Микроокружение опухоли, парадигма прогрессирования и терапии гепатоцеллюлярной карциномы. Междунар. Дж. Мол. науч. 18:405. дои: 10.3390/ijms18020405

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Такашима М., Парсонс С.Дж., Икедзима К., Ватанабэ С., Уайт Э.С. и Риппе, Р. А. (2009). Белок-супрессор опухолей PTEN ингибирует активацию звездчатых клеток печени крыс. Дж. Гастроэнтерол. 44, 847–855. doi: 10.1007/s00535-009-0073-3

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тан, Т., Хуан, Л., Чжан, С., Чжоу, Х., Гу, Л., Чен, X., и другие. (2017). МикроРНК-212 действует как опухолевой супрессор при немелкоклеточном раке легкого человека путем нацеливания на SOX4. Онкол. Респ. 38, 2243–2250. дои: 10.3892/или.2017.5885

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Тао, Х., Хуанг, К., Ян, Дж. Дж., Ма, Т. Т., Биан, Э. Б., Чжан, Л., и другие. (2011). MeCP2 контролирует экспрессию RASAL1 при фиброзе печени у крыс. Токсикология 290, 327–333. doi: 10.1016/j.tox.2011.10.011

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Теохарис, А.Д., Скандалис, С.С., Цанакакис, Г.Н., и Караманос, Н.К. (2010). Протеогликаны в норме и болезни: новые роли протеогликанов в злокачественных новообразованиях и их фармакологическая направленность. ФЕБС J . 277, 3904–3923. doi: 10.1111/j.1742-4658.2010.07800.x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Томпсон, А.И., Конрой, К.П., и Хендерсон, Северная Каролина (2015). Звездчатые клетки печени: центральные модуляторы печеночного канцерогенеза. ВМС Гастроэнтерол. 15:63. doi: 10.1186/s12876-015-0291-5

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Туохетахунтила, М., Моленаар, М. Р., Шпее, Б., Брауэрс, Дж.F., Wubbolts, R., Houweling, M., et al. (2017). Опосредованная лизосомами деградация отдельного пула липидных капель во время активации звездчатых клеток печени. Дж. Биол. хим. 292, 12436–12448. doi: 10.1074/jbc.M117.778472

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

ван дер Хайде, Д., Вайскирхен, Р., и Бансал, Р. (2019). Терапевтическое нацеливание печеночных макрофагов для лечения заболеваний печени. Фронт. Иммунол. 10:2852. дои: 10.3389/fimmu.2019.02852

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

van Eggermond, M.C., Boom, D.R., Klous, P., Schooten, E., Marquez, V.E., Wierda, R.J., et al. (2011). Эпигенетическая регуляция экспрессии CIITA в Т-клетках человека. Биохим. Фармакол. 82, 1430–1437. doi: 10.1016/j.bcp.2011.05.026

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ван Б., Дин Ю. М., Фан П., Ван Б., Сюй Дж. Х. и Ван В.Х. (2014). Экспрессия и значение MMP2 и HIF-1alpha при гепатоцеллюлярной карциноме. Онкол. лат. 8, 539–546. doi: 10.3892/ol.2014.2189

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ван Х. и Инь С. (2015). Естественные Т-клетки-киллеры при повреждении печени, воспалении и раке. Эксперт Преподобный Гастроэнтерол. Гепатол. 9, 1077–1085. дои: 10.1586/17474124.2015.1056738

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ван, С., Li, J., Wu, S., Cheng, L., Shen, Y., Ma, W., et al. (2018). Врожденные лимфоидные клетки 3 типа: новый игрок в развитии фиброза печени. клин. науч. (Лондон.) 132, 2565–2582. дои: 10.1042/CS20180482

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Васли А., Гритдал С., Галлахер К. и Центры по контролю и профилактике заболеваний (2008 г.). Надзор за острым вирусным гепатитом – США, 2006 г. MMWR Surveill. Сумма. 57, 1–24.

Академия Google

Вер, А., Baeck, C., Heymann, F., Niemietz, P.M., Hammerich, L., Martin, C., et al. (2013). Хемокиновый рецептор CXCR6-зависимое накопление NK Т-клеток в печени способствует воспалению и фиброзу печени. Дж. Иммунол. 190, 5226–5236. doi: 10.4049/jimmunol.1202909

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Wiencke, J.K., Zheng, S., Jelluma, N., Tihan, T., Vandenberg, S., Tamguney, T., et al. (2007). Метилирование промотора PTEN определяет глиомы низкой степени злокачественности и вторичную глиобластому. Нейроонкол. 9, 271–279. дои: 10.1215/15228517-2007-003

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Вонг Л., Ямасаки Г., Джонсон Р. Дж. и Фридман С. Л. (1994). Индукция рецептора бета-тромбоцитарного фактора роста в липоцитах печени крыс во время клеточной активации in vivo и в культуре. Дж. Клин. Вкладывать деньги. 94, 1563–1569. дои: 10.1172/JCI117497

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Райт, Дж.H., Johnson, M.M., Shimizu-Albergine, M., Bauer, R.L., Hayes, B.J., Surapisitchat, J., et al. (2014). Паракринная активация звездчатых клеток печени у трансгенных мышей с тромбоцитарным фактором роста С: свидетельство стромальной индукции гепатоцеллюлярной карциномы. Междунар. Дж. Рак 134, 778–788. doi: 10.1002/ijc.28421

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ву М., Мяо Х., Фу Р., Чжан Дж. и Чжэн В. (2020). Звездчатые клетки печени: потенциальная мишень для гепатоцеллюлярной карциномы. Курс. Мол. Фармакол. doi: 10.2174/1874467213666200224102820 [Epub перед печатью].

Полнотекстовая перекрестная ссылка | PubMed Резюме | Академия Google

Ву, Н., Гу, К., Гу, Х., Ху, Х., Хан, Ю. и Ли, К. (2011). Метформин индуцирует апоптоз клеток рака легкого посредством активации пути JNK/p38 MAPK и GADD153. Новообразование 58, 482–490. дои: 10.4149/neo_2011_06_482

Полнотекстовая перекрестная ссылка | Академия Google

Сюй, Ю., Сунь, X., Чжан, Р., Cao, T., Cai, S.Y., Boyer, J.L., et al. (2020). Петля положительной обратной связи TET3 и TGF-бета1 способствует фиброзу печени. Cell Rep. 30, 1310–1318.e5. doi: 10.1016/j.celrep.2019.12.092

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Сюй Ю. Ф., Ханнафон Б. Н., Хатри У., Джин А. и Дин В. К. (2019). Происхождение экзосомальной миР-1246 в раковых клетках человека. РНК биол. 16, 770–784. дои: 10.1080/15476286.2019.1585738

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ян Ю., Zhou, C., Li, J., Chen, K., Wang, G., Wei, G., et al. (2017). Ресвератрол ингибирует прогрессирование гепатоцеллюлярной карциномы, вызванное звездчатыми клетками печени, путем нацеливания на Gli-1. Мол. Клетка. Биохим. 434, 17–24. doi: 10.1007/s11010-017-3031-z

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Инь, К., Эвасон, К.Дж., Асахина, К., и Стайнер, Д.Ю. (2013). Звездчатые клетки печени в развитии, регенерации и раке печени. Дж. Клин. Вкладывать деньги. 123, 1902–1910 гг.дои: 10.1172/JCI66369

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Инь, З., Донг, К., Цзян, К., Сюй, З., Ли, Р., Го, К., и др. (2019). Гетерогенность фибробластов, связанных с раком, и роль в прогрессировании, прогнозе и терапии гепатоцеллюлярной карциномы. J. Гематол. Онкол. 12:101. doi: 10.1186/s13045-019-0782-x

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Ю, М. К., Чен, С. Х., Лян, С., Ван, Л., Gandhi, C.R., Fung, J.J., et al. (2004). Ингибирование ответов Т-клеток звездчатыми клетками печени посредством B7-h2-опосредованного апоптоза Т-клеток у мышей. Гепатология 40, 1312–1321. doi: 10.1002/hep.20488

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжан, Л., Валенсия, К.А., Донг, Б., Чен, М., Гуань, П.Дж., и Пан, Л. (2015). Перенос микроРНК микровезикулами внеклеточной мембраны: зарождающаяся модель перекрестных помех в патогенезе опухоли, особенно взаимодействия опухолевых клеток с микроокружением. J. Гематол. Онкол. 8:14. doi: 10.1186/s13045-015-0111-y

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжао В., Чжан Л., Сюй Ю., Чжан З., Рен Г., Тан К. и др. (2014). Звездчатые клетки печени способствуют прогрессированию опухоли за счет усиления иммуносупрессивных клеток в мышиной модели ортотопической опухоли печени. Лаб. Вкладывать деньги. 94, 182–191. doi: 10.1038/labinvest.2013.139

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжоу, Б.Y., Gong, J.H., Cai, X.Y., Wang, J.X., Luo, F., Jiang, N., et al. (2019). Дисбаланс между звездчатыми клетками и гамма-дельтаТ-клетками способствует агрессивности и рецидивированию гепатоцеллюлярной карциномы. Гепатол. Междунар. 13, 631–640. doi: 10.1007/s12072-019-09969-w

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Zhou, Y., Ren, H., Dai, B., Li, J., Shang, L., Huang, J., et al. (2018). Экзосомальная миРНК-21, полученная из гепатоцеллюлярной карциномы, способствует прогрессированию опухоли путем превращения звездчатых клеток гепатоцитов в ассоциированные с раком фибробласты. Дж. Экспл. клин. Рак рез. 37:324. doi: 10.1186/s13046-018-0965-2

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

Чжу Б., Лин Н., Чжан М., Чжу Ю., Ченг Х., Чен С. и др. (2015). Активированные звездчатые клетки печени способствуют ангиогенезу через интерлейкин-8 при гепатоцеллюлярной карциноме. Дж. Пер. Мед. 13:365. doi: 10.1186/s12967-015-0730-7

Реферат PubMed | Полный текст перекрестной ссылки | Академия Google

.

Сифак болезнь: Что такое сифилис, симптомы и лечение