Щелочная фосфатаза понижение: что это значит, причины и лечение низких показателей

Причины, вызвавшие повышение уровня ЩФ

Изменение уровня ALKP  в большую сторону может быть симптомом для многих заболеваний. Для более детальной диагностики проводят дополнительные лабораторные исследования, сопоставляются данные различных ферментных показателей:

АЛТ и АСТ выше нормы – это верный признак поражения печени;

Повысились кальций, фосфор и ALKP  —  значит, повреждена костная ткань или мононуклеоз (острое инфекционное заболевание) на первой недели беременности.

Возможные причины высоких показателей, которые в медицинской практике считаются умеренными и неопасными:

Период срастания переломов;

Последние два триместра беременности, так как в этот период идет активное развитие костной ткани будущего малыша;

Употребление лекарственных препаратов – магнезии, антибиотиков;

Нехватка в рационе продуктов богатых кальцием и фосфором.

В медицинской практике, для удобства, все возможные причины повышенных показателей были разбиты на 4 группы:

Повреждение печени, вызванные такими заболеваниями:

Механическая желтуха;

Цирроз;

Гепатит;

Непроходимость желчных протоков;

Инфекционный мононуклеоз;

Послеоперационные рубцы в районе желчных протоков;

 Инфаркт миокарда, повреждения стенок кишечника, дефицит кальция в костях;

Физиологические процессы: беременность, прием лекарственных препаратов, переохлаждение;

остеомаляция (дефицит кальция и как результат  — размягчение кости), остеосаркома (опухоль костной ткани), болезнь Педжета (нарушен механизм восстановления костей), рахит (дефицит витаминов группы Д), миелома.

Что такое щелочная фосфатаза

В человеческом организме присутствует множество ферментов, принимающих участие в разнообразных процессах. К таким природным катализаторам относится и фосфатаза щелочная (ЩФ).

Эта группа ферментов присутствует практически во всех тканях человеческого тела. Свое название фосфатаза получила из-за того, что действует только в щелочной среде (при кислотности не меньше 8,6).

Человек употребляет в пищу продукты, в которых присутствует фосфорная кислота, необходимая для различных обменных реакций. Отделением этого вещества от органических соединений и занимается щелочная фосфатаза.

Исходя из своей локализации, эта группа ферментов может быть печеночной, почечной, костной, плацентарной, кишечной.

Показатели этих катализаторов не являются постоянными – в зависимости от возраста и пола человека щелочная фосфатаза повышена в разных местах.

Например, у детей и подростков больше всего фермента в костной ткани, поскольку в этот период наблюдается их активный рост.

У взрослых людей щелочная фосфатаза в большинстве своем присутствует в печени. У любой беременной женщины активную роль играет плацентарная ЩФ.

Щелочная фосфатаза синтезируется в клетках, затем после их разрушения попадает в кровь. Наблюдая за содержанием этого фермента, доктор может диагностировать определенные заболевания на ранней стадии.

Поэтому при общем анализе крови щелочная фосфатаза проверяется в обязательном порядке, особенно во время плановых медицинских осмотров или подготовки к хирургическому вмешательству.

Сама процедура практически всегда проводится по утрам, потому что обязательным является голодание на протяжении десяти – двенадцати часов перед забором материала.

Продукты, особенно жирные, острые и соленые, могут изменить содержание щелочной фосфатазы в крови, и результаты анализа будут недостоверными.

За несколько дней до проведения процедуры лучше отказаться от употребления спиртных напитков.

Алкоголь пагубно влияет на организм, вызывая определенные химические реакции, и может как понизить, так и повысить содержание некоторых веществ в крови.

Вследствие этого общая картина будет существенно искажена, и доктору будет довольно сложно поставить точный диагноз.

Похожая ситуация и с приемом лекарственных средств. Регулярный прием медикаментов оказывает влияние на уровень щелочной фосфатазы в крови, что значительно затрудняет работу доктора.

По этой причине за несколько дней до процедуры лучше отказаться от приема любых лекарств, кроме тех случаев, когда от этого зависит жизнь человека.

Однако в такой ситуации обязательно необходимо рассказать об этом доктору, чтобы он внес необходимые корректировки в результаты анализа.

Щелочная фосфатаза

Alkaline phosphatase (ALP)

Щелочная фосфатаза (ЩФ) катализирует гидролиз органических эфиров фосфорной кислоты в щелочной среде. Различают по меньшей мере 5 изоформ фермента: печеночная фрак   я (характерная для синусоидальной и канальцевой поверхности гепатоцитов), Щф костей,   кишечная   фракция  (клетки   слизистой  кишечника),   ЩФ  плаценты  и  Щф ассоциированная с тканями опухоли, определяющаяся при разделении. Плацентарная и опухольассоциированная ЩФ может быть устойчива к тепловой инактивации. Более чем 96% активности общей приходится на костную и печеночную фракции (соотношение ~ 1:1). Период полураспада ЩФ от 7 до 10 дней.

Почему уровень ферментов понижен

Пониженная щелочная фосфатаза у женщин может возникать по разнообразным причинам, самая безопасная из которых – неправильное питание.

Низкий уровень ферментов этой группы появляется при регулярном недоедании и отсутствии достаточного количества белка в пище.

Кроме того, причины могут крыться в недостатке в организме витамина C (очень часто при этом развивается цинга, характеризующаяся кровоточивостью десен, ломкостью сосудов, сыпью на коже), B₆, B₁₂, фолиевой кислоты.

Не меньшее значение имеют и микроэлементы – малое количество магния, цинка, фосфора в употребляемой пище тоже приводит к тому, что щелочная фосфатаза у женщины будет понижена.

Снизить уровень щелочной фосфатазы может и избыток в организме витамина D. Помимо этого, причины понижения могут крыться к донорстве – при регулярной сдаче крови анемия встречается довольно часто.

Содержание этой группы ферментов может быть понижено и при гипотиреозе – недостаточной выработке гормонов щитовидной железой.

По этой же причине у человека наблюдается йододефицит (малое количество йода в организме). Данный недуг приводит к отклонениям в физическом и умственном развитии (кретинизму), которые тоже способствуют возникновению ситуации, при которой понижена щелочная фосфатаза.

Видео:

Еще причины развития патологии могут быть связаны с состоянием костей, которые с возрастом иногда начинают разрушаться (развивается остеопороз).

Понизить уровень щелочной фосфатазы могут и такие редкие недуги, как квашиоркор (один из видов дистрофии, развивается из-за недостатка протеинов в пище), ахондроплазия (наследственное заболевание, часто приводящее к карликовости), целиакия (нарушение пищеварительных процессов, вызванное повреждением тонкой кишки некоторыми продуктами).

У беременных женщин содержание ферментов может быть понижено по причине недостаточности развития плаценты.

Еще одной довольно редкой причиной того, что понижена щелочная фосфатаза, является воздействие радиации.

Если уровень щелочной фосфатазы понижен по причине неправильного питания, то больному назначается специальная диета, призванная восполнить недостаток в организме определенных витаминов и микроэлементов.

Если же причина патологии кроется в каком-либо заболевании, то терапия направлена в первую очередь на устранение этого недуга. Нужно отметить, что любое лечение должно проходить под руководством квалифицированного доктора.

Щелочная фосфатаза представляет собой группу ферментов в тканях организма, которые выполняют определенные функции.

Видео:

Если содержание этого катализатора понижено, то довольно часто это значит, что у человека развиваются определенные заболевания.

Чтобы вернуть уровень щелочной фосфатазы в норму, нужно проконсультироваться с лечащим доктором и начать своевременное лечение.

Определение активности показателя

Для анализа нужна кровь из вены, которую берут утром натощак. За сутки до диагностики из рациона исключают жирные и острые продукты. Перерыв в приемах пищи должен быть не менее 10 — 12 часов. После этого можно пить воду. Утром в день исследования крови запрещается пить сок или кофе, чай. На протяжении часа нельзя курить, следует избегать физической активности и стрессовых ситуаций.

Медикаментозная терапия может привести к ложноположительным или ложноотрицательным результатам. Поэтому минимум за 3 дня нужно согласовать с лечащим врачом отмену лекарственных препаратов, биодобавок, следует на сутки исключить алкоголь.

Большинство лабораторий применяют реакцию с изменением окрашивания сыворотки крови после добавления в нее реактива (п-нитрофенилфосфата). Щелочная фосфатаза отщепляет от него фосфат, а нитрофенол в щелочной среде придает раствору желтый цвет. В зависимости от интенсивности окраски определяется активность фермента.

Смотрите на видео о щелочной фосфотазе в крови и проведении анализа:

Причины повышенияснижения щелочной фосфатазы

Как правило, в медицинской практике пациент, посмотрев на малейшие отклонения от референсных значений, начинает сразу же бить тревогу или всячески беспокоиться, но далеко не всегда повышенные/пониженные показатели являются следствием патологии.

Физиологические причины и особенности организма никогда нельзя списывать со счетов поэтому подробный осмотр и опрос пациента – необходимая диагностическая мера, которая позволит избежать ложной клинической картины. Конечные результаты зависят от возраста, пола, диеты, телосложения, перенесенных травм и переломов и т.д.

от 45-148 ед/лЗначительное повышение фосфатазы

• Патологии и заболевания печени: механическая желтуха, различные гепатиты, цирроз, раковые опухоли поджелудочной железы, желудка и других органов ЖКТ, рубцы на печеночной ткани после операции;
• Камни в желчном пузыре, закупорка желчных путей песком и камнями, холангит, холеоцистит и т.д.;
• Инфекционный мононуклеоз (ВЭБ), так как само заболевание приводит к нарушению работы печени;
• Патологические изменения костной ткани: миеломная болезнь, метастазы в костях, остеомаляция, рахит, болезнь Педжета и т.д.;
• Заболевания ЖКТ, кишечные инфекции, язвенный колит;
• Инфаркт миокарда;
• Физиологические причины.

В любом случае врач должен выяснить причину завышенных результатов. Обычно по физиологическим причинам у людей увеличены показатели фосфатазы при беременности, в детском или подростковом возрасте, в результате перелома костей, в ходе приема антибактериальных и гормональных препаратов и т.д.

Доктор обычно выясняет такие обстоятельства, подробно расспрашивая об анамнезе и образе жизни пациента, но незначительное превышение данного параметра на фоне других нормальных показателей не будет являться патологией, а индивидуальной нормой.

Для оценки клинической картины врач анализирует результаты и других лабораторных исследований, чтобы увидеть корреляционные связи. Неправильное хранение биоматериала в лаборатории тоже вызывает искажение результатов как в сторону увеличения, так и уменьшения, но этот фактор очень трудно проверить.

Низкие значения щелочной фосфатазы считаются менее опасными по сравнению с высокими, но чаще всего их наблюдают при следующих состояниях:

• Анемия, включая и ее злокачественное течение;
• Дефицит магния и цинка;
• Переливание крови или ее значительная потеря;
• Неправильная работа щитовидной железы;
• Наследственная аутоиммунная болезнь костей – гипофосфатозия;
• Плацентарная недостаточность;
• Неправильное хранение биоматериала, переохлаждение крови;
• Кретинизм;
• Ахондроплазия – тяжелое заболевание костей, связанное с нарушением их роста.

Причин может быть много, но главное – достоверно найти причину недуга, так как физиологические причины повышения/уменьшения фосфатазы не требуют особого лечения и ухода, а любая патология должна быть тщательно продиагностирована во избежание ложной трактовки результатов.

Если имеется симптоматика в виде болей в правом боку, подреберье, ухудшения самочувствия, то завышенные показатели будут следствием заболевания печени, но в таком случае неминуемо повышаются и печеночные фракции (прямой, общий, непрямой билирубин).

Очень часто фосфатаза повышена при инфекционном мононуклеозе, но, чтобы подтвердить этот диагноз одного такого показателя недостаточно, так как для этого нужно сдать все анализы крови на Вирус Эпштейн Барра (мононуклеоз)

К тому же врач принимает во внимание только значительное, диагностическое повышение фосфатазы наряду с другими параметрами, которые при различных заболеваниях точно отклоняются от нормы. В таком случае целесообразно сдать развернутый биохимический анализ крови, так как обособленные значения фосфатазы мало, что могут сказать врачу

Это только побудит доктора назначить дополнительные исследования, а особенно в тех случаях, когда у пациента имеется сильная симптоматика.

Нормы содержания ферментов в крови

Здоровое количество щелочной фосфатазы изменяется с возрастом и зависит от пола человека. Показатели измеряются в международных единицах на литр крови (МЕ/л, Ед/л).

Для новорожденного ребенка нормой будут значения от 70 до 370 Ед/л. В пять лет нормальные показатели у мальчиков варьируются в диапазоне от 180 до 415 международных единиц щелочной фосфатазы в одном литре крови, а у девочек – от 160 до 350. В десятилетнем возрасте нормы следующие: 190 – 430 Ед/л и 215 – 475 Ед/л.

Поскольку девочки физиологически развиваются немного раньше, у них наибольший уровень фермента наблюдается в одиннадцать лет – 175 – 520 международных единиц в литре крови. В дальнейшем у представителей обоих полов начинается уменьшение норм.

У шестнадцатилетних подростков щелочная фосфатаза в крови должна быть в таких пределах: от 100 до 415 Ед/л у мальчиков и от 65 до 265 Ед/л у девочек.

Видео:

https://youtube.com/watch?v=EUFnd5uVOH8

Взрослый здоровый мужчина имеет следующие нормальные показатели: от 100 до 125 международных единиц на один литр крови. У женщин от девятнадцати до шестидесяти лет в норме должно быть 55 – 110 Ед/л.

С возрастом нормальное значение содержания щелочной фосфатазы в крови повышается. У мужчин старше шестидесяти лет, как и на протяжении всей жизни, этот показатель немного выше, чем у женщин.

Представители сильного пола в норме имеют 180 – 190 Ед/л, в то время как слабого – 155 – 165 международных единиц щелочной фосфатазы в одном литре крови.

Тело женщины перестраивается на все время вынашивания ребенка, поскольку теперь нужно снабжать пищей уже двоих. У здоровой будущей мамы в норме анализ крови на щелочную фосфатазу должен показать следующие значения: от 60 до 250 международных единиц на литр.

Если исследование показало, что у женщины понижена щелочная фосфатаза, то доктор обязательно должен насторожиться.

Подобное явление может свидетельствовать как о плохом питании, так и о серьезных заболеваниях, требующих немедленного лечения.

Для постановки более точного диагноза могут назначаться дополнительные обследования, призванные обнаружить недуг.

Нужно учитывать, что если понижена щелочная фосфатаза, то это не является болезнью как таковой, а всего лишь признаком, указывающим на развитие других патологий. Как правило, после окончания лечения содержание этой группы ферментов в крови приходит в норму само собой.

Что может оказывать влияние на результаты анализов

Говоря о непосредственном влиянии на результаты, следует понимать, что при беременности в нормальном состоянии показатели активности щелочной фосфатазы увеличены, потому что она сосредоточена в плаценте. Еще одним фактором, связанным с временным увеличением показателей активности фермента, следует считать временной промежуток после полученных переломов (как открытых, так и закрытых).

Следует понимать также, что у детей и юношей показатели активности фосфатазы выше, чем у взрослого человека, потому что именно у них отмечается рост костных структур. По мнению специалистов, такие лекарственные средства, как аспирин, парацетамол, аллопуринол, антибиотики и некоторые другие вполне в состоянии увеличивать критерии активности щелочной фосфатазы. Еще одним фактором можно назвать применение оральных контрацептивов. Однако это далеко не всегда приводит к усугублению показателей активности представленного фермента.

Примечательно также, что активность, с которой ассоциируется щелочная фосфатаза в крови, может оказаться завышенной, если кровь после забора была охлаждена. Таким образом, ни в коем случае не следует пренебрегать диагностической значимостью такого фермента, как фосфатаза. Именно она демонстрирует, насколько нормально работает организм, а именно такие органы, как печень, желудок и некоторые другие

Очень важно знать, какой является норма для каждого конкретного возраста, и почему она будет изменяться в ту или иную сторону

Важно!
КАК ЗНАЧИТЕЛЬНО СНИЗИТЬ РИСК ЗАБОЛЕТЬ РАКОМ?

Лимит времени:

Навигация (только номера заданий)

из 9 заданий окончено

Вопросы:

1. 1
2. 2
3. 3
4. 4
5. 5
6. 6
7. 7
8. 8
9. 9

Информация

ПРОЙДИТЕ БЕСПЛАТНЫЙ ТЕСТ! Благодаря развернутым ответам на все вопросы в конце теста, вы сможете в РАЗЫ СОКРАТИТЬ вероятность заболевания!

Вы уже проходили тест ранее. Вы не можете запустить его снова.

Тест загружается…

Вы должны войти или зарегистрироваться для того, чтобы начать тест.

Вы должны закончить следующие тесты, чтобы начать этот:

Результаты

Время вышло

1. 1
2. 2
3. 3
4. 4
5. 5
6. 6
7. 7
8. 8
9. 9

1. С ответом
2. С отметкой о просмотре

1. 1.

   Можно ли предотвратить рак?

   • да
   • нет
   • можно лишь сократить степень риска

2. 2.

   Как влияет курение на развитие рака?

   • способствует
   • не способствует
   • кури не кури, ничего не будет
   • затрудняюсь ответить

3. 3.

   Влияет ли лишний вес на развитие рака?

   • никак не влияет
   • да, влияет
   • лишний вес вообще никаким образом не относится к раку

4. 4.

   Способствуют ли занятия физкультурой снижению риска рака?

   • да, спорт убивает клетки рака
   • нет
   • затрудняюсь ответить

5. 5.

   Как влияет алкоголь на клетки рака?

   • способствует развитию
   • никак, алкоголь лишь убивает печень
   • он полезен и способствует уничтожению клеток рака

6. 6.

   Какая капуста помогает бороться с раком?

   • брокколи
   • заячья или кислица обыкновенная
   • белокочанная

7. 7.

   На заболевание раком какого органа влияет красное мясо?

   • прямая кишка
   • желудок
   • желчный пузырь

8. 8.

   Какие средства из предложенных защищают от рака кожи?

   • обычный детский крем для увлажнения
   • солнцезащитное средство
   • мёд

9. 9.

   Как вы думаете, влияют ли стрессы на развитие рака?

   • да
   • нет, они лишь убивают нервную систему
   • затрудняюсь ответить

Причины для проведения анализа крови

В норме щелочная фосфатаза имеет неизменный показатель активности, так как постоянно участвует в переносе ионов фосфора через мембрану клеток. В организме ее можно найти практически в каждой ткани, но самыми важными считают почечную, печеночную, костную и плацентарную. У здоровых людей преимущественно определяется печеночная форма. Особенностью фермента является то, что он в крови не работает, а появляется в ней только при разрушении клеток.

Наибольшую значимость анализ активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови имеет для исследования работы печени. Этот лабораторный тест входит в состав биохимического анализа, а именно в группу печеночных проб. Его назначают в таких случаях:

• при жалобах на общую слабость, нарушение аппетита, тошноту, горечь во рту, боль в правой подреберной области, пожелтение кожи, потемнение мочи и обесцвечивание каловых масс;
• для диагностики гепатита и цирроза печени;
• с целью выявления ракового перерождения печеночных клеток;
• пациентам с застоем желчи в желчевыводящих протоках.

В травматологической и ортопедической практике исследование назначают при переломах, болях в костях, подозрении на опухоли костной ткани или метастазирование раковых клеток в кости. Анализ крови помогает выявлению рака почек. Наблюдение за активностью щелочной фосфатазы в динамике показано при проведении медикаментозной терапии для оценки ее результатов. Направление на анализ может выдать хирург перед проведением операции.

Неинформативной бывает диагностика при недавнем приеме пищи, так как резко повышается активность фермента, который находится в кишечнике. Недостаточно показательные результаты встречаются у детей, так как в период активного роста костей возрастает костная фракция белка. Недостоверные показатели получают на фоне интенсивной терапии антибиотиками.

Что такое щелочная фосфатаза

Что такое щелочная фосфатаза? Это совокупность 11 изоферментов, относящихся к группе гидролаз (ферменты, гидролизующие ковалентную связь).  Чаще остальных типов изоферментов в диагностике используются   следующие локализации:

Печеночные;

Желчные;

Костной ткани;

Кишечника;

Опухолей и новообразований;

Плаценты.

Щелочной фосфатазой является белок со сложным химическим строением. В ее состав входит два атомов цинка. Этот фермент очень активен в щелочной среде с pН 9-10. В биохимических процессах ему отведена функция катализатора.

Основные источники «естественного катализатора» это:

Почки;

Селезенка;

Плацента,

Кости;

Печень;

Слизистые оболочки.

Ее назначение в нашем организме – это отделение фосфорной кислоты от пищи и обогащение ею тканей. Все это оказывает прямое влияние на метаболизм.

Если человек здоров, тогда концентрация щелочной фосфатазы в крови поровну разделяется на печеночную и костную фракции. Следует заметить, что источником печеночной фракции являются гепатоциты, а костная образуется в остеобластах.  Другие типы также входят в состав крови, но их содержание минимально. При патологии и ряде физиологических изменений соотношение изоферментов изменяется. Этот процесс успешно используется в диагностике.

Уровень показателя при беременности

Физиологической нормой рассматривается повышение щелочной фосфатазы во время беременности. Связано это в первую очередь с развитием плода и плаценты, а организм в такой период начинает усиленно работать «за двоих», выделяя много ферментов и гормонов. Это не требует медицинской корректировки и лечения, а угрозой беременности повышенная фосфатаза не является.

Однако, если у женщины до зачатия имелись хронические заболевания печени, ЖКТ, костей, то данный показатель будет иметь диагностическое значение, а результаты фермента нужно будет постоянно контролировать, чтобы избежать внутриутробных и родовых осложнений. Значительное увеличение фосфатазы требует врачебного наблюдения и диагностики, так, как и во время беременности можно заболеть гепатитом и другими недугами.

достаточного количества кислорода

Отклонения от нормы

Физиологической причиной повышения щелочной фосфатазы у детей или понижения ее активности является интенсивный рост костей или же остановка их роста в силу возраста человека. Но также есть и патологические причины изменения концентрации этих ферментов.

Повышенная щелочная фосфатаза

Повышение щелочной фосфатазы в сыворотке крови может происходить по причине заболеваний органов, в которых содержатся эти ферменты. Щелочная фосфатаза повышена при таких заболеваниях:

Патологии печени – гепатит, некроз паренхимы, цирроз, интоксикации лекарственного, токсического типа, поражение органа паразитами и т.д.

Патологии желчевыводящих путей и желчного пузыря – холецистит, желтуха механического типа, спаечный процесс.

   Мононуклеоз инфекционный;

   Миеломная болезнь.

   Цитомегалия.

   тяжелые острые кишечные инфекции;

   Лимфогранулематоз.

Довольно часто патологически повышенная щелочная фосфатаза у детей возникает по причине болезней костей. Это могут быть опухолевый процесс локализованный в костной ткани, рахит, нарушение метаболических процессов, в период реабилитации после тяжелых переломов костей. При сращивании костей после переломов всегда регистрируется высокий показатель ЩФ.

Опухолевый процесс в организме также вызывает стремительное увеличение этого показателя. Если концентрация этих ферментов повысилась до очень больших значений, то это может свидетельствовать о злокачественности опухоли.

У детей и подростков повышена щелочная фосфатаза в крови если происходит слишком стремительный рост тела приводящий к различным патологическим состояниям или же обусловленный патологиями эндокринной системы.

Прием некоторых лекарств также может повысить уровень щелочной фосфатазы в сыворотке крови. Например, это парацетамол, эритромицин, антибиотики группы пенициллина и т.д.

Безопасное отклонение от нормы

Высокая концентрации ферментов в организме ребенка может быть и безопасной для ребенка. Согласно статистике, у 1-5 % детей это происходит в раннем возрасте. Такое состояние называется переходящей гиперфосфатаземией. Чаще всего такое состояние наблюдается у детей до 5 лет.

Диагностировать это можно только случайно, при проведении профилактического обследования, так как такие отклонения не проявляют симптомов, так как не свидетельствуют о патологиях печени или костей. Переходящая гиперфосфатаземия у детей – это состояние временное. То есть спустя несколько недель, а в некоторых случаях нескольких месяцев нормальный уровень ЩФ восстанавливается. При этом никаких негативных последствий для здоровья ребенка не будет.

Пониженная щёлочная фосфатаза

Снижаются показатели щелочной фосфатазы у детей в случае, когда организм не получает нужное количество минералов и витаминов. А именно, фосфора, магния и цинка. Это возникает если у ребенка неполноценное питание.

В редких случаях у детей проявляются такие состояния как:

   гипофосфатазия;

   генетическое расстройство, при котором происходит нарушение в обмене фосфатазы.

Сниженный уровень ЩФ очень опасен для детей до 6 месяцев. Так как такое отклонение вызывает задержку развития, патологически повышается кальций в организме, деформируются кости. Нередко такая патология приводит и к смерти. Для  старших детей снижение уровня щелочной фосфатазы не так опасно. Но все ровно может приводить к деформациям костной ткани и частым переломам. Также эти дети будут медленно расти.

Норма щелочной фосфатазы в сыворотке крови

Единицей измерения активности белка в крови являются международные единицы – МЕ/л. В зависимости от возраста имеются различия физиологических показателей. У взрослых людей есть и отличия по половой принадлежности.

У мужчин

Показатели, соответствующие норме, можно определить по таблице.

В некоторых лабораториях измерения проводят в ЕД/л. Поэтому могут быть различия в границах референсных (нормальных) значений.

У женщин

Помимо возрастных колебаний уровня изменения может вызывать и беременность, так как возрастает плацентарная щелочная фосфатаза.

У детей

Самые большие показатели встречаются после одного года и до 8 лет – 350 МЕ/л. У новорожденных средние значения составляют 250 МЕ/л. С десятилетнего возраста начинают проявляться отличия по полу – у мальчиков нормальный уровень – 270, а у девочек 280 МЕ/л.

АСЛО антистрептолизин-о что означает повышение АСЛО в крови. Связь АСЛО и ревматизма.

Антстрептолизин
О (АСЛО)
– это группа антител
направленных против
токсинов (стрептолизина
типа О) микробов стрептококков.

Анализ 
АСЛ-О является диагностической 
процедурой, при помощи
которой определяется
наличие в крови обследуемого
человека антител против
стрептококка из группы
А. Повышение уровня
АСЛО наблюдается в
том случае, если пациент
недавно перенес инфекцию,
вызванную стрептококком
группы А (например,
ангина, фарингит и пр.).

В основном,
данный анализ используется в ходе диагностики
постстрептококковых осложнений — острая
ревматическая лихорадка (ревматизм) и гломерулонефрит.  
Уровень АСЛО максимален спустя 4-6 недель
после последнего эпизода стрептококковой
инфекции.

Величина 
АСЛО не дает никакого
представления о 
возможности развития
ревматизма.

При помощи теста АСЛО
определяется количество антистрептолизина
О (АСЛ-О) в крови. АСЛ-О это специальные
антитела, которые вырабатываются нашим
организмом против стрептолизина О. Стрептолизин
О является токсином, выделяемым бактерией
стрептококк группы А.

Стрептококк группы А
(Streptococcus pyogenes) – это бактерия, которая
вызывает стрептококковую ангину (скарлатину). Если ангина не выявляется
и не лечится соответствующим образом,
могут появиться специфические постстрептококковые
осложнения, а именно острая ревматическая
лихорадка (ревматизм) и гломерулонефрит
и пр. см. также Осложнения
скарлатины.

Очень часто повышение 
уровня АСЛО наблюдается у больных 
страдающих хроническим тонзиллитом.

Как
проводится анализ на
АСЛО? Подготовка к 
анализу.

Для анализа на АСЛО
забирается кровь из вены. За 6 часов 
до проведения анализа необходимо воздержаться
от приема пищи (как правило, анализ
берется утром, натощак).

Для
чего делается анализ
АСЛ-О?

Анализ АСЛ-О делается
для того, чтобы определить факт
недавно перенесенной пациентом 
стрептококковой инфекции.

В тех случаях когда
длительная стрептококковая инфекция
протекает бессимптомно и/или по ее поводу
не было проведено соответствующее лечение,
у некоторых пациентов (особенно у детей
и молодых людей) могут развиться постстрептококковые
осложнения, в частности острая ревматическая
лихорадка и гломерулонефрит. Соответственно,
анализ АСЛО назначается в случае, если
у пациента наблюдаются симптомы ревматической
лихорадки или гломерулонефрита, и если
он недавно перенес ангину или длительное
время страдает хроническим тонзиллитом.

Иногда анализ назначается 
дважды за период 10-14 дней, для того,
чтобы определить, если уровень антител 
возрастает, спадает или остается
неизменным.

Что
означают результаты
анализа АСЛ-О?

Щелочная фосфатаза понижена

Щелочная фосфатаза – фермент-катализатор, проявляющий максимальную активность в щелочной среде. Щелочная фосфатаза присутствует во всех тканях организма, но больше всего ее содержится в костях, печени, слизистой кишечника, а у женщин, помимо того, в молочных железах. Тест на определение уровня фермента в крови входит в стандартное исследование при плановых осмотрах, подготовке к операциям и еще при ряде показаний. Норма щелочной фосфатазы зависит от возраста и пола человека, но в некоторых случаях выявляется увеличение или уменьшение показателя относительно физиологической нормы.

Пониженная щелочная фосфатаза в крови

Если щелочная фосфатаза понижена, то это сигнал о том, что в организме имеются серьезные нарушения, которые следует лечить. Среди причин, по которым щелочная фосфатаза понижена:

• тяжелая степень анемии;
• гипофункция щитовидной железы;
• гипофосфатазия – врожденное заболевание, приводящее к размягчению костной ткани;
• возрастной остеопороз;
• кретинизм;
• недостаток в организме витамина C, B6, B12, фолиевой кислоты, магния и цинка.

У беременных женщин щелочная фосфатаза бывает понижена при плацентарной недостаточности. Иногда понижение уровня фермента в крови является следствием приема лекарственных препаратов, влияющих на печень.

Внимание! Уровень щелочной фосфатазы может не соответствовать норме и у вполне здоровых людей, в связи с чем проводится комплексное обследование для постановки диагноза.

Что делать, если щелочная фосфатаза понижена?

Как уже отмечалось, пониженная щелочная фосфатаза наблюдается при ряде заболеваний. Чтобы привести показатели в норму, проводят комплексную терапию, направленную на лечение основного заболевания. Если же низкий уровень фермента – результат дефицита витаминов и элементов, то рекомендуется потребление продуктов с богатым содержанием данных веществ:

1. При недостатке витамина C следует употреблять больше сырого репчатого лука, цитрусовых, черной смородины.

2. Нехватка витаминов группы В – показание к тому, чтобы в ежедневный рацион включать красные сорта мяса, разнообразные овощи и фрукты.
3. Магний содержится в орехах, семечках тыквы и подсолнечника, фасоли, чечевице, шоколаде.
4. Содержащие цинк продукты – птица, мясо, сыр, соя, морепродукты.
5. Фолиевой кислоты много в зелени, различных видах капусты, бобовых.

С целью устранения дефицита веществ могут применяться витаминные комплексы.

Щелочная фосфатаза в стволовых клетках

Щелочная фосфатаза — это фермент, обычно экспрессируемый почти во всех живых организмах. У людей и других млекопитающих определения экспрессии и активности щелочной фосфатазы часто использовались для определения клеток в исследованиях развития и / или в клинических испытаниях. Щелочная фосфатаза также, по-видимому, является одним из ключевых маркеров в идентификации плюрипотентного эмбрионального ствола, а также родственных клеток. Однако щелочные фосфатазы существуют в некоторых изоферментах и ​​изоформах, которые имеют тканеспецифические выражения и функции.Здесь подробно обсуждается роль щелочной фосфатазы как маркера стволовых клеток. Во-первых, мы кратко суммируем современные знания о щелочных фосфатазах млекопитающих в целом. Во-вторых, мы сосредоточимся на известных фактах его роли и потенциальной значимости для идентификации стволовых клеток.

1. Щелочная фосфатаза

Щелочная фосфатаза (AP, EC 3.1.3.1 ортофосфорно-моноэстераза, щелочной оптимум) представляет собой мембраносвязанный фермент, который встречается почти во всех живых организмах.AP млекопитающих имеют низкую идентичность последовательности с E.coli , но остатки, вовлеченные в активный сайт фермента и лиганды, координирующие два атома цинка и ион магния, являются консервативными; таким образом, каталитический механизм считается сходным в прокариотических и эукариотических ПД [1, 2]. Отдельные щелочные фосфатазы млекопитающих отличаются своей термостабильностью и неконкурентными ингибирующими свойствами. Это является результатом их негомологичных дисульфидных связей, их структурного значения и неконсервативных остатков [3, 4].У людей и, вероятно, также у других млекопитающих, четыре изофермента развились во время эволюции и кодируются до четырех генов. Эти четыре изофермента можно найти в различных тканях, где они имеют разные физиологические функции. Мы знаем три изофермента АР, которые специфичны для определенных тканей человека; это тканеспецифичные щелочные фосфатазы (TSAP). Это кишечная щелочная фосфатаза (IAP; изофермент Kasahara), плацентарная щелочная фосфатаза (PLAP; изофермент Regan) и щелочная фосфатаза половых клеток (GCAP; изофермент Нагао), которые экспрессируются эмбриональными клетками, но также и клетками карциномы.Четвертый изофермент является повсеместным, и мы называем его тканевой неспецифической щелочной фосфатазой (TNAP). TNAP встречается в трех изоформах, которые являются TNAP костей, печени и почек [5].

У мышей также есть четыре AP; три из них являются тканеспецифичными, а четвертый — тканеспецифичными. Кишечные, кишечные (IAP-подобные) и эмбриональные AP (EAP) являются TSAP. IAP-подобный AP был идентифицирован у мышей, у которых есть ген нокаута для IAP и все еще измеряемая остаточная активность в кишечнике. EAP мыши похож на GCAP человека [6].Многие важные факты о структуре, физических и химических свойствах, локализации генов, регуляции, функции и экспрессии AP в тканях могут быть получены из Millán (2006) и McComb et al. (2011) [7, 8]. В области биологии стволовых клеток TNAP представляют основной интерес, но EAP или GCAP, которые выражаются в плюрипотентной массе внутреннего звонка и первичных клетках, соответственно, нельзя игнорировать (см. Ниже). В общем, TNAP и EAP / GCAP часто ассоциируются с зародышевыми слоями, предшественниками и наивными недифференцированными клетками.

Напротив, TSAP экспрессируются с возрастающей дифференцировкой и созреванием отдельных клеточных линий и тканей из-за их связи с функциями таких клеток, например, энтероцитов (IAP) [9–11].

2. Экспрессия АР во время развития

Подобно другим линиям и генам, специфичным для развития, которые распознаются как детерминанты стволовых клеток, характер экспрессии АР во время онтогенеза в некоторых частях тканей также соответствует конкретным предшественникам стволовых клеток и их нишам.Таким образом, здесь мы кратко суммируем экспрессию и предполагаемую функцию конкретного AP, связанного с потенциалом дифференцировки клеток (таким как плюрипотентность, например), и стеблем во время развития в целом.

Экспрессия щелочной фосфатазы уже может быть обнаружена у 2-клеточных эмбрионов на стадии предимплантации у мышей, и она одинаково экспрессируется в каждой эмбриональной клетке до стадии раннего бластоцисты. Сначала он выражается как трофэктодермой, так и внутренней клеточной массой (ICM). Похоже, что в стадии поздней бластоцисты AP строго экспрессируется в ICM.Lepire и Ziomek [12] описали изофермент AP на преимплантационной стадии эмбрио-эмбриональной щелочной фосфатазы (EAP). До этого открытия у мышей определяли только два изофермента AP: EAP и TNAP. TNAP также экспрессируется у предимплантационного эмбриона, но в 10 раз меньше, чем EAP. Приблизительно через 7 дней после коитуса (dpc) экспрессия Akp5 (EAP) быстро снижается, и Akp2 (TNAP) становится основным геном AP, который экспрессируется между 7–14 dpc в клетках первичного зародыша (PG) [6].Клетки PG проявляют высокую активность TNAP во время миграции в развивающуюся гонаду. В этих клетках активность TNAP снижается на 14-15 dpc [13]. У людей известно, что экспрессия щелочных фосфатаз выявляется до 4 недель беременности [14, 15].

В отличие от мышей PG-клеток (которые экспрессируют TNAP), активность GCAP наблюдается в мигрирующих PG-клетках человека [15-17]. У взрослых он в основном синтезируется в яичках, шейке матки и тимусе. Следовые количества синтезируются в тканях плаценты и легких [18].Неизвестно, экспрессируется ли AP на преимплантационной стадии эмбрионов человека. Кроме того, мало что известно о экспрессии других изоферментов в эмбриональном развитии человека из-за этических ограничений. На 8-й день после коитуса (у мышей) TNAP также экспрессируется в нейроэктодерме [19]. Позднее (9,5 dpc) активность TNAP наблюдается в области головного и спинного мозга. Между 10,5 и 14,5 dpc активность TNAP наблюдается в среднем мозге и ромбическом мозге, вдоль всего спинного мозга и черепных нервов, а в конце этой стадии TNAP-положительные волокна находятся в мышцах.Через четырнадцать с половиной дней после полового акта экспрессия TNAP снижается в нейроэпителии. У взрослых TNAP-позитивные кластеры наблюдаются в субэпендимальном слое, где локализуются нейронные предшественники. Предполагается, что TNAP участвует в развитии нервной системы частично как эктонуклеотидаза в нейрогенных зонах [20, 21] или, в частности, путем взаимодействия с коллагеном во время миграции нейронов [22, 23]. Однако активность TNAP обнаруживается в сосудистом сплетении вплоть до взрослого возраста [23].

Однако среди всех позвоночных (включая людей) активность TNAP является доминирующей в развивающемся скелете, поскольку TNAP участвует в минерализации тканей. Активность внутри развивающегося скелета связана с экспрессией TNAP в хондроцитах и ​​остеобластах. У мышей это происходит между 13 и 14 dpc [19].

Экспрессия другой AP, TSAP, также в основном связана с дифференцировкой клеток, и такая активность AP обычно распознается как маркер отличной клетки

ALP | eClinpath

Синонимы

Сывороточная щелочная фосфатаза (SAP, SALP, ALP) или плазменная щелочная фосфатаза

Физиология

Щелочная фосфатаза (ALP, AP) представляет собой неспецифический металлофермент, который гидролизует многие типы сложных эфиров фосфатов при щелочных значениях pH в присутствии ионов цинка и магния. Основное использование ALP является чувствительным индикатором холестаза у собаки (он будет увеличиваться до билирубина), однако он неспецифичен, поскольку кортикостероиды (экзогенный или эндогенный «стресс») вызывают выработку этого фермента с последующим увеличением сыворотки или активность плазмы.У кошки, однако, ALP является специфическим индикатором заболевания печени, тогда как у крупных животных этот фермент не очень полезен, так как он нечувствителен, холестатические расстройства нечасты, и референтные интервалы довольно широки.

Изоферменты и изоформы ALP

Существует два изофермента (продукты разных генов) и несколько изоформ (полученных из посттрансляционной модификации изоферментов) ALP. Изоферменты образуются из кишечных и тканевых неспецифических генов ALP и отличаются по аминокислотной последовательности.Изоформы различаются по каталитическим сайтам и активности, иммуногенности и электрофоретической подвижности. Основными изоформами, которые можно измерить у животных, являются печеночная ALP (L-ALP), кортикостероидная ALP (C-ALP; только у собак), костная ALP (B-ALP) и кишечная ALP (I-ALP), но есть другие, включая лейкоцит-ALP и плацентарный-ALP.

• Ген кишечного АЛП / изофермент: Это продуцирует изоформы C-ALP и I-ALP. C-ALP уникален для собак и индуцируется кортикостероидами (эндогенными или экзогенными).Несмотря на то, что это продукт кишечного гена, он на самом деле производится в гепатоцитах, а не в кишечном эпителии.

• Тканевый ген неспецифического АЛП / изофермент: Это продуцирует оставшиеся изоформы АЛП, включая L-АЛП, В-АЛП, плацентарный-АЛП и лейкоцитарный -АЛП.

Органоспецифичность

ALP при собачьей лейкемии

ALP — это белок, связанный с микросомой и клеточной мембраной, который присутствует во многих тканях. Он прикрепляется к клеточным мембранам с помощью белков гликофосфатидилинозитола (GPI).Расщепление этих белков желчными кислотами, фосфолипазой D и протеазами высвобождает ALP из мембран, что приводит к увеличению активности ALP в сыворотке / плазме.

• Печень: Гепатоциты и эпителий желчных путей являются источником изоформы L-ALP (все виды) и изоформы C-ALP у собаки. Экспрессия ALP обычно ограничивается канальцевой мембраной гепатоцитов, но может индуцироваться (как правило, вторично по отношению к холестазу, но также и кортикостероидами) на синусоидальной мембране (где она может быть легко выделена в кровь).
• Кость: Эта изоформа продуцируется остеобластами и будет увеличиваться в сыворотке в связи с остеобластической активностью (молодые животные, некоторые заболевания костей). Высокие концентрации ALP в сыворотке можно также наблюдать при остеосаркоме, злокачественном новообразовании остеобластов.
• Кишечные, почечные, молочные и плацентарные ткани: Обычно они не являются важными источниками повышенной активности ALP в сыворотке, хотя некоторая плацентарная изоформа присутствует в сыворотке крови поздних беременных (Everett et al 1977) и кобыл (Dumas and Spano 1980) ,Незначительно повышенная активность ALP наблюдается у собак с различными типами опухолей молочной железы (Karayannopoulou et al 2006).
• Лейкоциты: Экспрессия клеточной линии зависит от вида. Собачьи монобласты (незрелые моноциты) и эозинофилы богаты ALP, как и лошадиные нейтрофилы (Stokol et al 2015). Присутствие ALP в клетке можно обнаружить путем нанесения ALP-специфического субстрата на цитологические мазки — этот метод (обнаружение ферментов на основе их способности расщеплять субстрат) называется цитохимическим окрашиванием.В Корнелльском университете мы используем цитохимическое окрашивание ALP в качестве маркера миелоидных клеток при остром лейкозе. Хотя опухолевые монобласты могут экспрессировать ALP в своей цитоплазме, высокая активность ALP в сыворотке или плазме обычно не наблюдается. Цитохимическое окрашивание на ALP также используется для дифференциации остеобластов от других мезенхимальных клеток в цитологических аспиратах от опухолей, то есть ожидается высокая экспрессия в остеосаркомах, но не в хондросаркомах или фибросаркомах (Barger et al 2005). Мы используем цитохимическое окрашивание ALP, чтобы подтвердить диагноз остеосаркомы в цитологических образцах.

Период полураспада

Период полураспада ALP варьируется в зависимости от источника (изоформа) и вида (Hoffman and Dorner 1977, Hoffman et al 1977). Изоформы с более длительным периодом полувыведения вносят больший вклад в нормальные и повышенные уровни ALP в сыворотке или плазме, т.е. повышенные уровни изоформ с очень коротким периодом полувыведения (минуты по сравнению с днями) вряд ли будут наблюдаться в одном образце крови (поскольку пик может быть пропущено и значения будут быстро уменьшаться).

Методы

Ниже приведен метод, используемый для измерения общей активности ALP на нашем химическом анализаторе в Корнелльском университете.

Тип реакции

Конечная точка

Процедура

В одностадийной реакции ALP расщепляет р -нитрофенилфосфат в фосфат и р -нитрофенол. Образование п-нитрофенола измеряется фотометрически и пропорционально активности ALP. Эта реакция происходит в присутствии ионов магния и цинка (таким образом, измерение ALP не может быть выполнено в EDTA, потому что это будет хелатировать магний и цинк).

p -Нитрофенилфосфат + H ₂ O ^ALP > p -нитрофенол (желтый) + фосфат

Единицы измерения

Активность фермента измеряется в единицах U / L (U = международная единица) и мккат / л (единицы СИ), что определяется как количество фермента, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в минуту при определенных условиях.Формула конверсии показана ниже:

Ед / л x 0,0167 = мккат / л

Изоформа измерения

Дифференцирование изоформ может быть выполнено с помощью электрофоретического (аффинного агарозного электрофореза, иммуноанализа, электрофореза ацетата целлюлозы или изоэлектрического фокусирования на агарозе) или дифференциального метода ингибирования с использованием левамизола (особенно ингибирует L-ALP и B-ALP), нагревания (инактивирует L-ALP и B-ALP) и лектин зародышей пшеницы (выделяет B-ALP и C-ALP) (Wellman и др., 1982, Syakalima и др., 1997, Allen и др., 2000, Hatayama и др., 2011),

Примерные соображения

Тип образца

Сыворотка или плазма

Антикоагулянт

Гепарин (литий, натрий, аммоний).ЭДТА не может быть использована.

Стабильность

Стабильность активности ALP в образцах человеческой сыворотки и плазмы является следующей: 7 дней при 15-25 ° C или 2-8 ° C и 2 месяца при замораживании примерно при -20 ° C. Сообщается, что в плазме или сыворотке животных ALP стабилен в течение 2-3 дней при охлаждении.

Помехи

• Липемия / Мутность, желтуха: Нет значимых выводов.
  
• Гемолиз: Может увеличить ALP с тяжелой гемолиз (индекс гемолиза> 500)
  
• Наркотики или гормоны
  • C-ALP (только для собак): Эта изоформа индуцируется экзогенными кортикостероидами.
  • L-ALP индукция лекарственными средствами:
    Сообщалось, что
    • противосудорожные препараты (например, фенобарбитал, примидон) увеличивают активность ALP, что объясняется индукцией (стимуляцией экспрессии генов) (Muller et al 2000), но увеличение может быть вызвано повреждением печени, вызванным лекарственными средствами.
    • Кортикостероиды будут влиять на ALP в различной степени у собак, в зависимости от состава или дозы, с сохранением увеличения в течение до 3 недель после прекращения терапии с одной подкожной дозой 1.1 мг / кг метилпреднизолона (Ginel et al 2002). В одном исследовании лечение собак в течение 32 дней с помощью 4 мг / кг преднозона первоначально увеличивало L-ALP, а затем C-ALP через 5-7 дней (Sanecki et al 1987). Увеличение активности ALP выше контрольных интервалов из-за лечения кортикостероидами не было зарегистрировано у других видов. Увеличение L-ALP после кортикостероидов, как было показано, связано с индукцией синтеза (Wiedmeyer et al 2002).

Тестовая интерпретация

Рутинное измерение ALP дает общую сывороточную активность (все изоформы) без специфичности в отношении источника.У здоровых животных L-ALP является преобладающей изоформой в крови, за которой следует B-ALP. Доля B-ALP выше у молодых животных (указывает на остеобластическую активность при росте). Изоформа C-ALP вносит лишь небольшой вклад в общую активность ALP в сыворотке. Доля C-ALP увеличивается с возрастом у собак.

Измерение изоформы чаще всего применяется к образцам собак для различения изоформ L-ALP и C-ALP в случаях с повышенной активностью общего ALP в сыворотке по неопределенной причине (чтобы определить, увеличивается ли общий ALP из-за заболевания печени или эндогенных кортикостероидов).Тем не менее, это не очень надежный тест для этой цели, потому что любое хроническое заболевание (включая поражение печени) может привести к выделению эндогенного кортикостероида (хронический стресс), что приведет к увеличению C-ALP.

Увеличение активности ALP

ALP окрашивание в печени

Повышение активности ALP в сыворотке обычно происходит из-за изоформ, индуцируемых печенью, костью и кортикостероидами (помните, что собаки являются единственным видом, который имеет стероид-индуцируемую изоформу). Поэтому мы приписываем высокую активность ALP из-за холестаза, повышенной активности остеобластов (не остеолиз) и стероидов (только собаки).Повышение ALP в сыворотке или плазме из-за увеличения других изоформ встречается редко, вероятно потому, что фермент высвобождается в просвет органов или имеет очень короткий период полураспада (см. Таблицу выше).

• Физиологический:
  • Возраст: Активность ALP у молодых, растущих животных всех видов может быть в 2-10 раз выше, чем у взрослых, из-за увеличения изоформы B-ALP. Значения снижаются в течение 3 месяцев и находятся в пределах взрослого к 15 месяцам. Новорожденные также показывают повышенные уровни ALP; Считается, что это происходит либо из-за высокого уровня ALP в молозиве, либо из-за индуцированного производства ALP в результате фактического употребления молозива.
  • Порода собаки: У некоторых сибирских хаски наблюдается доброкачественная (преходящая) семейная гиперфосфатаземия. Это характеризуется высокой активностью ALP (> 1100 ед / л в возрасте 11 недель и> 700 ед / л в возрасте 16 недель). Это не связано с какими-либо клиническими эффектами и связано в первую очередь с изоформой кости (Lawler et al 1996). О высокой активности ALP также сообщалось у шотландских терьеров, но это может быть вторичным по отношению к основной субклинической дисфункции надпочечников (увеличение происходит из-за C-ALP) (Zimmerman et al 2010, Cortright et al 2014; см. Ниже), что может быть генетический дефект в этой породе.
  • Эндогенный выброс кортикостероидов (хронический стресс): Первоначально увеличение ALP связано с изоформой L-ALP; Изоформа C-ALP требует нескольких дней (до 10) для индукции. Это только у собак.

• Патофизиологический:
  
  • Гепатобилиарная болезнь: Увеличение ALP (прежде всего изоформы L-ALP) используется в качестве показателя холестаза (внутри- или внепеченочного) у животных. Накопление желчных кислот в гепатоцитах стимулирует выработку L-ALP.У кошек ALP является специфическим, но нечувствительным маркером гепатобилиарной болезни (Center et al 1986). Увеличение ALP действительно происходит при гепатобилиарной болезни у кошек, но увеличение менее надежно и имеет меньшую величину по сравнению с ситуацией у собак. Более низкая концентрация ALP в цитоплазме гепатоцитов кошачьих и короткий период полураспада этого фермента у кошки (6 часов) заставляют многих клиницистов чувствовать, что небольшие изменения в ALP следует исследовать на кошке. Широкий спектр активности ALP и нечувствительность этого теста к холестазу у крупных животных ограничивают полезность ALP у этих видов.У лошадей увеличение билирубина из-за холестаза может предшествовать увеличению ALP (личные наблюдения). По этой причине ALP больше не входит в наши биохимические или печеночные панели для крупных животных.
    • Структурный холестаз: Это связано с физическим препятствием для оттока желчи, которое может быть внутрипеченочным или внепеченочным (или их комбинацией).
      • Внепеченочный холестаз (обструкция желчных протоков): Это вызывает очень резкое увеличение ALP. Увеличение ALP может произойти до развития желтухи или увеличения общей или прямой концентрации билирубина, особенно у собак или при локализованном холестазе.Панкреатит (острый или хронический) может привести к повышению уровня ALP от отека и / или фиброза вокруг желчного протока (особенно у кошек из-за их общего желчного протока и протока поджелудочной железы).
      • Внутрипеченочный холестаз: Локализованный или генерализованный холестаз от отека гепатоцитов будет вызывать ALP. Повреждения, которые в первую очередь центрилобулярные, обычно вызывают лишь незначительное увеличение ALP, в то время как поражения, затрагивающие периферию (перипортальные области) дольки, обычно приводят к более резким подъемам в результате нарушения оттока желчи.Причины внутрипеченочного холестаза включают неоплазию (первичную или метастатическую), печеночный липидоз (заметное увеличение возможно при идиопатическом печеночном липидозе у кошек — липидоз является причиной наиболее значительного увеличения активности ALP у этого вида, часто без одновременного увеличения ГГТ, которое является полезным диагностическим признаком), острое гепатоцеллюлярное повреждение (внутрипеченочный холестаз возникает из-за гепатоцеллюлярного отека; повышенная активность ALT ожидается одновременно у собак и кошек или SDH / GLDH у крупных животных), а также перипортальный фиброз и воспаление (возможно заметное увеличение).
    • Функциональный холестаз: Это определяется как уменьшение потока желчи из-за опосредованного цитокинами подавления или ингибирования транспортеров, ответственных за выделение солей желчных кислот или конъюгированного билирубина в желчь. Это происходит без каких-либо физических препятствий или нарушений желчи. Сообщалось о собаках с инфекциями E. coli . Вероятно, это происходит и у других видов. Цитокин-опосредованный холестаз обычно характеризуется высоким общим билирубином (из-за прямого и непрямого билирубина) с небольшим увеличением ферментов гепатоцеллюлярной утечки (ALT, AST, SDH, GLDH).Уровни ALP могут быть нормальными в этом состоянии.
    • Неоплазия: При первичном раке печени (гепатоцеллюлярный / желчный) возможно значительное увеличение ALP (из-за L-ALP или C-ALP у собак). Метастатическая неоплазия в печени часто увеличивает ALP из-за локализованного холестаза. Во многих случаях печеночной неоплазии, ALP может быть единственным ферментом, который увеличен на панели. В одном исследовании 114 шотландских терьеров с дисфункцией надпочечников, вакуолярной или медно-ассоциированной гепатопатией активность ALP не отличалась значительно у тех животных с гепатоцеллюлярной карциномой и без нее (Cortright et al 2014).
    • Острое гепатоцеллюлярное повреждение: Как упоминалось выше, легкое или умеренное повышение активности ALP связано с внутрипеченочным холестазом, связанным с гепатоцеллюлярным отеком, а не с гепатоцеллюлярным повреждением per se. Можно ожидать сопутствующих высоких значений ALT, SDH и GLDH.
  • Гиперадренокортицизм у собак: Уровни варьируются от умеренного до выраженного (до 100 раз) и часто обусловлены индукцией изоформы C-ALP (хотя также наблюдается увеличение L-ALP) у собак.До 83-100% собак с болезнью Кушинга имеют высокий уровень C-ALP, но хронический эндогенный стресс (вследствие какого-либо основного заболевания) может увеличить C-ALP и общий уровень ALP в сыворотке (до 2-3 раз выше нормы). Следовательно, активность C-ALP является чувствительным, но не специфическим тестом на гипердренокортицизм у собак.
  • Дисфункция надпочечников у собак : Болезнь надпочечников, вызывающая увеличение половых гормонов или секрецию кортизола, связана с повышенной активностью ALP (до 22000 / мкл) у шотландских терьеров (Cortright et al 2014).
  • Не печеночная неоплазия: Доброкачественные или злокачественные опухоли молочной железы у собак были связаны с повышением ALP, независимо от метастазирования или наличия костной метаплазии. Увеличение активности ALP, как правило, незначительное (средняя активность ALP составляет 170 ед / л, в диапазоне от 50 до 480 ед / л), с увеличением изоформ костей, печени и кортикостероидов (Karayannopoulou et al 2006). ALP возможно имеет происхождение миоэпителиальных клеток. Собаки с остеосаркомой (опухолью остеобластов) могут иметь высокие концентрации ALP и являются негативным прогностическим показателем (Boerman et al 2012), с активностью> 120 Ед / л, связанной с плохим прогнозом в некоторых исследованиях.Высокий уровень ALP может быть связан с пролиферативной природой новообразования, однако клеточные линии, полученные от пациентов с высокой или низкой активностью сыворотки, не показали различий в показателях пролиферации in vitro (Holmes et al 2015).
  • Повышенная активность остеобластов (неопухолевых): Активность остеобластов в ответ на гормоны (паратиреоидный гормон, тироксин) может увеличивать общий сывороточный АЛП из-за изоформы B-ALP. Это можно наблюдать у собак с первичным и вторичным гиперпаратиреозом (увеличение в 2-3 раза) и заживающими переломами (ожидается умеренное увеличение) и гипертиреозом у кошек.У кошек с гипертиреозом может наблюдаться умеренное повышение общей активности ALP в сыворотке, что в основном обусловлено высоким уровнем B-ALP и меньшим увеличением изоформы L-ALP (Archer and Taylor 1986). У них также может быть одновременное умеренное увеличение ALT и AST, но не GGT, действия, имитирующие картину изменений ферментов, наблюдаемых при липидозе печени. Успешное лечение гипертиреоза приводит к значительному снижению активности ALP (Williams et al 2014).

паттернов ALP / GGT

Пожалуйста, обратитесь к странице GGT для получения информации о некоторых изменениях в этих двух холестатических ферментах.

— БИОПРОТОКОЛ

Аннотация

Две основные особенности характеризуют плюрипотентные клетки; самообновление (неограниченное деление клеток) и способность рождать все клетки взрослого организма. Учитывая недавнее влияние индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) и продолжающееся использование плюрипотентных эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) в основных открытиях, разработке лекарственных средств и потенциальном использовании для терапии стволовыми клетками и регенеративной медицины, методы, позволяющие окончательно отличить плюрипотентные клетки от их необходимы дифференцированные производные.Это позволит нам лучше понять факторы, способствующие их выживанию, самообновлению и дифференцировке по происхождению.

Недифференцированные эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) и индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) могут быть идентифицированы с помощью биомаркера и функциональных анализов. Анализы биомаркеров включают в себя тесты на экспрессию транскриптов и белков важных факторов транскрипции плюрипотентности (OCT4, SOX2 и NANOG), маркеры клеточной поверхности (SSEA-1, -3 и -4; TRA-1-60, TRA-1-81) и активность щелочной фосфатазы (AP) (Brambrink et.и др. , 2008; Джинис и соавт. , 2004). Функциональные анализы включают в себя: (1) способность генерировать тератомы, состоящие из клеток всех трех зародышевых слоев (энтодермы, эктодермы и мезодермы), при пересадке мышам с иммунодефицитом или после дифференцировки in vitro ; (2) способность генерировать химеру; и (3) передача зародышевой линии (Marti и др. , 2013; Buehr и др. , 2008). Последние два теста этически выполнимы только для мышиных и других плюрипотентных клеток, кроме человека.

В этом протоколе (Campbell and Rudnicki, 2013) мы описываем быстрый метод скрининга плюрипотентных клеток по активности AP. AP, также известный как Basic Phosphatase, катализирует дефосфорилирование многих молекул, включая нуклеотиды и белки. Активность АР высока в плюрипотентных клетках, но значительно снижается в более дифференцированных типах клеток. Описанная здесь методика может использоваться для подсчета плюрипотентных клеток во время дифференцировки в присутствии или в отсутствие специфических генетических манипуляций или небольших химических модуляторов.Он также может быть использован для мониторинга индуцированной плюрипотентности с использованием определенных факторов из более дифференцированных типов клеток.

Ключевые слова: плюрипотентность, Oct4, стволовые клетки, щелочная фосфатаза, анализ in vitro

Материалы и реагенты

1. ЭСК мыши (МЭСК)
   
2. 0,1% желатин (Sigma-Aldrich, каталожный номер: G1393)
   
3. Фидерные клетки мышиных эмбриональных фибробластов (MEF)
   
4. Набор для окрашивания щелочной фосфатазы (Stemgent, каталожный номер: 00-0009)
   1. Фиксация Решение
      
   2. Красящий раствор AP A
      
   3. Окрашивающий раствор AP B
      
5. 1x PBS (см. Рецепты)
   
6. 1x PBS-T (см. Рецепты)
   
7. 1x PBS-глицерин (см. Рецепты)
   

Оборудование

1. 6-луночный планшет или 24-луночный планшет
2. Алюминиевая фольга
3. Световой микроскоп с 10-кратным объективом
   

Процедура

1. Культура клеток
   1. Пальто пластины с 0.1% желатин. Теплый желатин до 37 ° С. В каждую лунку 6-луночного планшета асептически добавьте 1,5 мл 0,1% желатина. Инкубируйте чашки в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 30 минут. Аспирируйте желатин и дайте высохнуть в течение 10 минут до добавления носителя и клеток для нанесения покрытия.
      
   2. Посеять каждую лунку с 4,75 х 10 ⁵ мышиных эмбриональных фидерных клеток (MEF) в 2 мл среды. Разрешить MEF прикрепить в течение ночи до размещения мыши ESCs.
      
   3. Пассаж активно делящихся клеток и культуры в течение 3-5 дней до плотности субконфлюента до окрашивания. Для мышиных ESC (mESC) приблизительно 1 x 10 ⁵ клеток высевают в каждую лунку 6-луночного планшета (или 1 x 10 ⁴ клеток для 24-луночного планшета), который был предварительно покрыт 0,1% желатином и покрывали фидерными клетками мышиных эмбриональных фибробластов (MEF).
2. Окрашивание щелочной фосфатазой
   4. Аспирируйте питательную среду из каждой лунки и промойте 1x PBS-T.
      
   5. придыхательный промойте раствор и зафиксируйте клетки раствором фиксации в комнате температура в течение двух минут. Используйте достаточный объем, чтобы терпеть покрытие ячеек. Это будет 500 мкл для каждой лунки 24-луночного планшет или 2 мл на каждую лунку 6-луночного планшета. Важно не превышать время фиксации два мин. Чрезмерная фиксация приведет к потеря активности AP и неточные результаты.
      
   6. Аспирируйте раствор для фиксации и промойте 1x PBS-T.Колодцы не должны высыхать.
      
   7. Подготовить окрашивающий раствор путем смешивания раствора A и раствора B в соотношении 1: 1 соотношение. Чтобы обеспечить достаточный объем для окрашивания, подготовьте (n + 1) y объемов раствора, где n — количество лунок, а y — объем на лунку. Для 24-луночного планшета у = 500 мкл. Для 6-луночного планшета у = 2 мл. Окрашивающий раствор должен быть свежеприготовленным и использованным в течение пяти минут подготовки.
      
   8. Аспирируйте 1x PBS-T и пипеткой приготовленный окрашивающий раствор. Накройте тарелку алюминиевая фольга в темноте примерно 15 мин. Контролировать цвет изменить (плюрипотентные клетки будут окрашены в красный / фиолетовый, MEFs останутся бесцветный), чтобы избежать неспецифического окрашивания.
      
   9. Удалить окрашивание раствора путем аспирации и промыть клетки два раза с 1x PBS. Не используйте 1x PBS-T, так как это может вымыть пятно.
      
   10. Аспирируйте 1x PBS. Добавить 1x PBS-глицерин для длительного хранения при 4 ° C.
   
   
3. Перечень плюрипотентных клеток
   11. Подсчитайте количество окрашенных АР (красных / пурпурных) плюрипотентных колоний и дифференцированных (прозрачных) колоний на глаз или с помощью светового микроскопа с 10-кратным увеличением. Ячейки подачи MEF останутся чистыми.

Рецепты

1. 1x PBS (на 1 л)
   800 мл MilliQ H ₂ O
   8 г NaCl
   0.2 г KCl
   1,44 г Na ₂ PO ₄
   0,24 г KH ₂ PO ₄
   Отрегулируйте рН до 7,4 с помощью HCl
   Добавить MilliQ H ₂ O до конечного объема 1 л
   Фильтр стерилизуют и хранят при 4 ° С до использования
   
2. 1x PBS-T (1 л)
   800 мл MilliQ H ₂ O
   8 г NaCl
   0,2 г KCl
   1,44 г Na ₂ PO ₄
   0,24 г KH ₂ PO ₄
   500 мкл Твин-20
   Отрегулируйте рН до 7.4 с HCl
   Добавить MilliQ H ₂ O до конечного объема 1 л
   Фильтр стерилизуют и хранят при 4 ° С до использования
   
3. 1x PBS-глицерин (1 л)
   500 мл MilliQ H ₂ O
   8 г NaCl
   0,2 г KCl
   1,44 г Na ₂ PO ₄
   0,24 г KH ₂ PO ₄
   200 мл глицерина
   Отрегулируйте рН до 7,4 с помощью HCl
   Добавить MilliQ H ₂ O до конечного объема 1 л
   Фильтр стерилизуют и хранят при 4 ° С до использования
   

Подтверждения

Эта работа была поддержана грантами Канады, Института геномики Онтарио, Сети стволовых клеток и Канадского института исследований здоровья.

Ссылки

1. Брэмбринк Т., Форман Р., Уэлстед Г., Ленгнер К.Дж., Верниг М., Су Х. и Джениш Р. (2008). Последовательная экспрессия маркеров плюрипотентности при прямом перепрограммировании соматических клеток мыши. Cell Stem Cell 2 (2): 151-159.
   
2. Buehr, M., Meek, S., Blair, K., Yang, J., Ure, J., Silva, J., McLay, R., Hall, J., Ying, QL and Smith, A. (2008). ). Захват подлинных эмбриональных стволовых клеток от бластоцист крысы. Cell 135 (7): 1287-1298.
   
3. Кэмпбелл, П. А. и Рудницки, М. А. (2013). Взаимодействие Oct4 с Hmgb2 регулирует передачу сигналов Akt и плюрипотентность. стволовых клеток 31 (6): 1107-1120.
   
4. Гинис И., Луо Ю., Миура Т., Тис С., Бранденбергер Р., Герехт-Нир С., Амит М., Хок А., Карпентер М.К., Ицковиц-Эльдор, J. and Rao, MS (2004). Различия между эмбриональными стволовыми клетками человека и мыши. Dev Biol 269 (2): 360-380.
   
5. Марти М., Мулеро Л., Пардо С., Морера С., Каррио М., Лариккиа-Роббио Л., Эстебан С. Р. и Изписуа Белмонте, Дж. С. (2013). Характеристика плюрипотентных стволовых клеток. Nat Protoc 8 (2): 223-253.

Посмотреть полный текст

Скачать PDF

Вопрос &

Авторские права: © 2014 Авторы; эксклюзивный лицензиат био-протокола ООО.

Лейкоцитарная щелочная фосфатаза: что это?

Тест на лейкоцитарную щелочную фосфатазу (LAP) — это лабораторный тест, который можно провести на образце вашей крови. Ваш врач может назначить его для измерения количества щелочной фосфатазы, группы ферментов, в определенных белых кровяных клетках.

До появления более продвинутых тестов тест LAP обычно использовался для диагностики хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ). Это тип рака, который влияет на лейкоциты. Если у вас ХМЛ, уровень щелочной фосфатазы в ваших белых кровяных клетках будет ниже, чем обычно.Некоторые врачи все еще назначают тест LAP для выявления признаков ХМЛ. Это также может помочь им исключить другие расстройства. Но сейчас общепризнанно, что для подтверждения диагноза ХМЛ необходим цитогенетический тест (тест ваших клеток и хромосом). В результате, тест LAP используется реже, чем в прошлом.

Щелочная фосфатаза — это группа ферментов, которые удаляют фосфатные группы из многих типов молекул в вашем организме. Они лучше всего работают в щелочной или щелочной среде, а не в кислой.Они встречаются по всему телу, но они, как правило, особенно сконцентрированы в вашей печени, почках, костной ткани и желчных протоках. Они также сосредоточены в плаценте беременных женщин.

Щелочная фосфатаза лейкоцитов (LAP) — это термин для щелочной фосфатазы, которая содержится в лейкоцитах. Другое название лейкоцитов — лейкоциты. Это несколько типов лейкоцитов. Каждый из них играет свою роль в защите вашего тела от вирусов, бактерий и других микробов.Они являются важной частью вашей иммунной системы.

Если у вас хронический миелолейкоз (ХМЛ), у вас меньше щелочной фосфатазы в ваших белых кровяных клетках, чем обычно. В результате, в прошлом врачи заказывали LAP-тест для диагностики ХМЛ. Теперь они обычно заказывают цитогенетический тест вместо этого. В цитогенетическом тесте лаборанты проверяют хромосомы в ваших белых кровяных клетках, чтобы проверить аномалии, которые вызывают ХМЛ.

В некоторых случаях ваш доктор может заказать LAP-тест для выявления признаков ХМЛ или других состояний.Например, они могут назначить тест, чтобы исключить или поставить диагноз:

• лейкемоидная реакция, повышенный уровень лейкоцитов, который не вызван инфекцией или раком
• эссенциальный тромбоцитоз, перепроизводство тромбоцитов
• миелофиброз, расстройство при котором происходит рубцевание костного мозга
• полицитемия вера, расстройство, при котором ваш костный мозг вырабатывает слишком много эритроцитов
• апластическая анемия, расстройство, при котором ваш костный мозг вырабатывает слишком мало клеток крови
• пернициозная анемия, капля в эритроцитах, часто вызванных неспособностью желудка усваивать витамин B12

Для проведения теста LAP ваш врач должен будет собрать образец вашей крови, чтобы отправить его в лабораторию для тестирования.Перед забором крови ваш врач может попросить вас предпринять определенные шаги для подготовки. Например, они могут посоветовать вам прекратить есть или пить за шесть часов до забора крови. Они также могут попросить вас прекратить прием определенных лекарств заранее, включая лекарства, которые могут повлиять на результаты вашего теста. Убедитесь, что ваш врач знает, какие лекарства и добавки вы принимаете.

Ваша кровь может быть взята в кабинете вашего врача или в ближайшей клинике или лаборатории. Медсестра или флеботомист вставит маленькую иголку в одну из ваших вен, скорее всего, в вашей руке.Они будут использовать иглу, чтобы набрать небольшое количество крови во флакон.

Им нужно всего несколько минут, чтобы взять у тебя кровь. После этого они, вероятно, попросят вас надавить на место инъекции или наложить повязку, чтобы остановить кровотечение. Затем они отправят ваш образец крови в лабораторию для тестирования.

Лаборант смазывает вашу кровь на предметное стекло микроскопа. Они добавят специальный окрашивающий агент, который поможет им увидеть, какие лейкоциты содержат щелочную фосфатазу.Они будут использовать микроскоп для подсчета доли клеток, которые содержат щелочную фосфатазу.

Когда будут получены результаты вашего теста, ваш врач обсудит их с вами. Они помогут вам понять, что означают результаты, и обсудят последующие шаги. Баллы за тест LAP могут варьироваться от нуля до 400, при этом баллы от 20 до 100 считаются нормальными.

Оценка выше нормы может быть вызвана:

• лейкемоидной реакцией
• эссенциальный тромбоцитоз
• миелофиброз
• полицитемия вера

Оценка ниже нормы может указывать:

• CML
• апластическая анемия
• пернициозная анемия

Если ваш врач подозревает, что у вас может быть ХМЛ на основании результатов вашего теста, он, скорее всего, закажет цитогенетический тест.Это поможет им подтвердить свой диагноз.

Взятие крови связано с незначительными рисками. Если вам не удастся надавить на место иглы после забора крови, у вас могут возникнуть легкие кровоподтеки. Хотя это редко, вы также можете испытать флебит, воспаление в области вашей вены.

Сообщите своему врачу, если у вас есть нарушение свертываемости крови, прежде чем брать кровь. Расстройства кровотечения повышают риск осложнений.

Для большинства людей преимущества прохождения теста LAP, вероятно, перевешивают риски.Это может помочь вашему врачу диагностировать потенциально серьезные заболевания и назначить соответствующее лечение. Спросите их для получения дополнительной информации о потенциальных выгодах и рисках.