Уреазные тесты.
Уреазные тесты основаны на выявлении высокой эндогенной активности фермента уреазы, вырабатываемой H.pylori. Под воздействием уреазы Нр мочевина желудочного содержимого катализируется на ионы аммония и угольной кислоты. Гидролиз мочевины завершается образованием щелочных продуктов, что приводит к алконизации и локальному повышению рН. Этот механизм является важным звеном защиты микроорганизма от агрессивных факторов макроорганизма, что приводит к образованию перифокального «аммиачного облака» нейтрализующего HCl желудочного содержимого. Интенсивность экспрессии фермента превышает в 2-10 раз аналогичные свойства других микроорганизмов и является ведущим энзимологическим маркером Нр-инфекции.
1. Дыхательный уреазный тест.
В исследованиях по определению H.pylori применяется дыхательный «Хелик-тест». Суть метода заключалась в том, что через индикаторную трубку при помощи электрического насоса пропускают выдыхаемый воздух пациента. Затем дают выпить больному 10 мл 5% водного раствора карбамида (0,5 г). Через 5 минут повторяется процедура измерения с другой стороны той же индикаторной трубки. Оценивается прирост концентрации аммиака (разница между первым и вторым темно-синим столбиком, образующимся в индикаторной трубке по результатами «прохождения», аспирируемого воздуха). Если прирост концентрации аммиака будет превышать 0,5 мг/мл, то тест на H.pylori считается положительным.
2. Быстрый уреазный тест
Биопсийный материал СОЖ помещается в жидкую среду теста. Стандартной средой для быстрой диагностики Нр является 2% бульон мочевины по Кристенсену. В состав жидкой среды входит мочевина и индикатор. Мочевина ферментируется уреазой H.pylori на аммиак и углекислый газ, вызывая изменение рН среды, в результате чего индикатор окрашивается от желтого до малинового цвета. Экспозиция биоптата в среде занимает от 5 до 25 минут.
CLO-тест
Разновидность уреазного теста промышленного изготовления. Представляет собой гелеобразную таблетку, содержащую мочевину, феноловый красный (индикатор рН) и бактериостатический агент. Биоптат помещают на поверхность таблетки. При наличии в исследуемом материале уреазы, мочевина гидролизируется, защелачивая среду. Это приводит к изменению окраски — от желтой до малиновой. Оценка результата проводится через 20 минут.
Для повышения специфичности метода предложен тест, который позволяет определять при комнатной температуре уреазную активность лишь накопленную в тканях, а не вырабатываемую микроорганизмами в процессе культивирования. Данная методика получила название «холодных» тестов. Представителем этой разновидности является тест на основе твердого волокнистого носителя – Хелпил-тест. Гигроскопический материал теста адсорбирует жидкость из биоптата, помещенного на него, биохимическая реакция происходит только под материалом и, как считают разработчики теста, является равнозначным с количеством уреазы и реакционной средой, что повышает чувствительность метода. Специфичность и чувствительность Хелпил-теста у детей составляет до 95%.
studfiles.net
13C-УРЕАЗНЫЙ ДЫХАТЕЛЬНЫЙ ТЕСТ
13C-УРЕАЗНЫЙ ДЫХАТЕЛЬНЫЙ ТЕСТ
HELICOBACTERPYLORI
В настоящее время доказано, что H.pylori является одной из ведущих причин развития атрофического гастрита, язвы и рака желудка. Основными направлениями профилактики развития онкологической патологии желудка являются наиболее ранняя диагностика инфицированности хеликобактером и проведение антихеликобактерной (эрадикационной) терапии.
Заболевания желудочно-кишечного тракта (гастрит, гастродуоденит. язвенная болезнь) занимают лидирующее место среди хронических заболеваний, согласно данным ВОЗ.
В чем причина?
Причиной этих заболеваний может стать стресс. курение, злоупотребление алкогольными напитками, наркомания, частый и необоснованный прием лекарств, побочные действия лекарств, генетическая предрасположенность, наследственность (близкие родственники с гастритами, язвенной болезнью, раком желудка).
Но основным этиологическим фактором является инфекция Helicobacterpylori– одна из наиболее широко распространенных хронических инфекций человека. В 1983г. австралийские ученые Б. Маршалл и Р.Уоррен открыли, что этот микроб почти всегда присутствует у пациентов с язвой желудка и двенадцатиперстной кишки.
Сейчас врачи считают, что Helicobacterpyloriсвязан с большей частью случаев хронического гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, злокачественными опухолями желудка. В одних случаях эта бактерия вызывает воспаление слизистой оболочки и приводит к усилению выработки соляной кислоты, что позже может вызвать появление язвы, в других – развитие атрофии с риском дальнейшего формирования рака желудка.
По данным Российской группы по изучению Helicobacterpylori, на территории РФ и в странах СНГ уровень инфицированности достигает 80%.
Каковы пути заражения этой инфекцией?
Инфекция Helicobacterpyloriраспространяется путем передачи от человека к человеку. Микроб является анаэробом, то есть погибает на воздухе, а передается в слюне и слизи. Заражение чаще происходит внутри семьи или других тесно общающихся групп, так как инфекция распространяется при использовании одной и той же посуды, несоблюдении правил гигиены, скученности проживания. Часто инфекция передается от матери к ребенку (через слюну, попавшую на соску, ложку и другие предметы).Заразиться инфекцией Helicobacterpyloriможно даже при поцелуе.
Серьезных последствий инфицированияHelicobacterpylori можно избежать, если вовремя провести обследование и лечение.
Как можно определить наличиеHelicobacterpylori?
13C-УРЕАЗНЫЙ ДЫХАТЕЛЬНЫЙ ТЕСТ
Ведущим методом диагностики H.pylori в мире и в РФ является 13С-уреазный дыхательный тест (13С-УДТ), основным преимуществом которого является его высокая точность, приближающаяся к 100 %. Достоверность 13С-УДТ в диагностике инфицированности желудка H.pyloriдаже выше, чем эндоскопическое исследование с биопсией и исследованием биоптатов на наличие инфекции. С 2000 года 13С-УДТ признан международным гастроэнтерологическим сообществом в качестве «золотого стандарта» диагностики H.pylori (Маастрихтские международные соглашения II – V, 2000-2015). Кроме того, к неоспоримым преимуществам теста относятся его неинвазивность, простота и комфортность выполнения для пациентов. Тест не сопровождается аллергическими или другими нежелательными реакциями, не имеет осложнений.
Биохимический механизм теста основан на способности H.pylori выделять фермент уреазу, при участии которой в желудке происходит расщепление 13С-карбамида с выделением 13С-углекислого газа, который всасывается в кровь, попадает в легкие и с дыханием выделяется в окружающую среду (Рисунок 1).
Выделение 13СО2 с выдыхаемым воздухом обнаруживается с помощью специального прибора – инфракрасного спектрометра.
ПОДГОТОВКА К ТЕСТУ
При подготовке к тесту пациенты должны знать и соблюдать следующие ограничения:
1. Тест проводится натощак утром, или не ранее, чем через 6 часов после необильного завтрака
2. Тест можно проводить не ранее, чем через 24 часа после гастроскопии
3. Повторный тест можно проводить не ранее, чем через 4 – 6 недель после окончания приема антибиотиков (по любому поводу) и/или препаратов висмута (Де-нол)
4. Повторный тест можно проводить не ранее, чем через 2 недели после окончания приема ингибиторов протонной помпы (омепрозол, рабепразол (Париет, хайрабезол) и т.д.)
5. Для проведения теста пациенту необходимо принести с собой 200 мл цитрусового (апельсинового или грейпфрутового) сока. При непереносимости цитрусовых допускается яблочный сок из кислых (зеленых) яблок.
ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ВЫПОЛНЕНИЯ ТЕСТА
За 5-10 минут до начала теста пациент выпивает 200 мл апельсинового сока (полностью)
Последовательность выполнения теста изображена на рисунке:
1. Через 5-10 минут после приема цитрусового сока пациент делает выдох «базовой» пробы воздуха в первый пакет, который герметично закрывается.
2. Непосредственно после первого выдоха пациент принимает 50 мл свежеприготовленного водного раствора 13С-карбамида (ХЕЛИКАРБ).
3. После приема ХЕЛИКАРБА пациент 30 минут пребывает в спокойном сидячем положении без физической активности.
4. Через 30 минут пациент делает выдох «диагностической» пробы воздуха во второй пакет, который герметично закрывается.
5. Оба пакета с пробами выдыхаемого воздуха исследуются на специальном приборе (инфракрасном спектрометре) и определяется инфицированность пациента H.pylori.
Общая длительность исследования до получения результата – 45 – 50 минут.
www.hepatocentre.ru
Принцип метода и показания к проведению уреазного теста
На сегодняшний день основным этиологическим (причинным) фактором развития воспалительной патологии желудка с последующим формированием дефекта его стенок, считается специфическая патогенная бактерия – Helicobacter pylori. Для ее выявления в слизистой оболочке применяются различные методики исследования, одной из которых является быстрый уреазный тест.
Какой принцип методики
Бактерия хеликобактер обладает способностью выделять фермент уреазу, который расщепляет мочевину (органическое соединение) на углекислый газ и аммиак. Анализ на хеликобактер включает определение углекислого газа с мечеными изотопами углерода в выдыхаемом воздухе до и после перорального приема (внутрь) раствора мочевины. При этом мочевина содержит меченый изотоп атомов углерода. Появление изотопа в углекислом газе выдыхаемого воздуха указывает на то, что часть газа образовалась вследствие расщепления принятого раствора мочевины бактериями Helicobacter pylori в желудке.
Когда проводится уреазный тест
Основным показанием к проведению данного исследования является подозрение на развитие инфекционного процесса в желудке, вызванного хеликобактер пилори. Обычно это проявляется воспалительными изменениями в слизистой оболочке с появлением следующих признаков:
- Появление болевых ощущений в области эпигастрия (верхний отдел живота), которые могут иметь различный характер (покалывание, сдавливание, интенсивная боль в одной точке). Обычно боль может быть более интенсивной натощак или непосредственно после еды.
- Изжога – ощущение жжения в области пищевода (за грудиной), спровоцированное забросом кислого желудочного сока.
- Появление отрыжки кислым или воздухом с неприятным запахом.
- Диспептические нарушения, которые характеризуются тошнотой, снижением аппетита, метеоризмом, неустойчивым стулом и являются следствием нарушения процесса пищеварения.
- Язык обложенный белым налетом – патогномоничный клинический признак патологического процесса в желудке, вызванного различными причинами, включая инфекцию.
Такие клинические симптомы развиваются при нескольких заболеваниях, основной причиной которых является инфекция, вызванная данной бактерией – язвенная болезнь, гастрит с повышенной (чаще) или сниженной функциональной активностью слизистой оболочки, эрозии (небольшие дефекты).
Также дыхательный тест на хеликобактер проводится для контроля эффективности этиотропной терапии инфекционного процесса, направленной на уничтожение патогенных микроорганизмов.
Как проводится уреазный тест
Данное исследование является лабораторным. Оно включает забор выдыхаемого воздуха, в котором затем при помощи спектрографических методик определяется наличие и концентрация меченных изотопов углерода. Для этого пациент в специальный мешочек после 5-ти минут спокойного дыхания выдыхает воздух, после чего мешочек плотно закупоривается специальной пробкой. Затем пациенту дают выпить раствор с мочевиной, а через 20 минут (время необходимое для расщепления мочевины бактериями, при условии их наличия) проводится повторный забор выдыхаемого воздуха в другой мешочек. Обе пробы отправляются в специализированную лабораторию, где проводится их исследование. В целом само взятие материала для исследования выполняется в течение 20-25 минут, оно является безболезненным и не причиняет ощущений дискомфорта для пациента.
Подготовка к сдаче анализа
Для получения максимально достоверных результатов исследования следует выполнять несколько обязательных подготовительных рекомендаций, к которым относятся:
- Сдача анализа натощак, так как она обычно проводится утром, то последний прием еды должен быть вечером (ужин не позднее 22 часов).
- Исключение приема лекарственных средств фармакологической группы нестероидные противовоспалительные медикаменты, анальгетики, антациды (препараты, снижающие кислотность желудочного сока) в течение 5-ти дней до проведения исследования.
- В течение нескольких недель (обычно 4-6) не рекомендуется использовать антибактериальные средства (они снижают количество бактерий в желудке, что может стать причиной ложноотрицательного результата исследования), а также антисекреторные препараты (они уменьшают секрецию железистых клеток).
- Исключается прием любых спиртных напитков в течение 3-х дней перед сдачей анализа.
- За день до проведения исследования не рекомендуется употреблять в пищу продукты, содержащие в себе бобовые культуры (соя, бобы, фасоль, горох).
- В течение 3-х часов перед сдачей анализов курящим людям следует постараться воздержаться от курения. Также не рекомендуются жвачки.
Выполнение данных рекомендаций позволит избежать получения ложноотрицательных или ложноположительных результатов дыхательного уреазного теста.
Более подробные рекомендации дает врач, который назначает данное лабораторное исследование, во время приема.
Расшифровка результатов
Оценка результата проводится по наличию меченных изотопов углерода в выдыхаемом воздухе (проба воздуха после приема раствора мочевины). Положительный результат характеризуется появлением углекислого газа с мечеными изотопами углерода, что указывает на наличие хеликобактера в желудке. При отсутствии изотопов результат считается отрицательным, инфекции нет. Обнаружение инфекционного процесса в желудке, вызванного Helicobacter pylori является показанием к назначению этиотропной терапии, направленной на уничтожение возбудителя при помощи антибиотикотерапии.
Уреазный анализ хеликобактер позволяет выявить с высокой долей вероятности, он проводится быстро и относится к неинвазивным методам диагностики инфекционного процесса в желудке.
prof-med.info