Камни в почках оксалаты: Мочекаменная болезнь — причины, симптомы, диагностика и лечение

Гексаметафосфат как потенциальное средство для лечения и предотвращения образования камней в почках

Заболеваемость камнями в почках растет во всем мире, и рецидивы являются обычным явлением (50% в течение 5 лет). Цитрат, текущий золотой стандарт терапии, который обычно назначается в виде солей калия или натрия, используется потому, что он повышает pH мочи и хелатирует кальций, основной компонент до 94% камней.В этом исследовании было обнаружено, что гексаметафосфат (HMP), мощный хелатор кальция, в 12 раз более эффективен при растворении оксалата кальция, основного компонента почечных камней, чем цитрат. Также было обнаружено, что ГМФ эффективен против других распространенных компонентов камней в почках, а именно фосфата кальция и струвита (фосфат магния-аммония). Интересно, что HMP был способен повышать дзета-потенциал частиц оксалата кальция с -15,4 до -34,6 мВ, что может предотвратить рост камней за счет агрегации, самого быстрого механизма роста, и, таким образом, предотвратить окклюзию.Примечательно, что было показано, что HMP в 16 раз эффективнее цитрата при растворении камней в почках человека в смоделированных физиологических условиях. Таким образом, можно сделать вывод, что ГМФ является многообещающим потенциальным средством лечения кальциевых и струвитных камней в почках.

Эта статья в открытом доступе

Камень оксалата кальция — обзор

Осложненная инфекция мочевыводящих путей

Как упоминалось ранее, осложненная инфекция классифицируется как инфекция, которая плохо поддается лечению, или как инфекция, связанная с факторами хозяина, которые увеличивают риск неудачи терапии. ⁸ Важно распознавать пациентов с осложненными ИМП, поскольку это имеет значение для обследования и лечения. Какие факторы приводят к классификации осложненных ИМП? Эти факторы можно классифицировать как структурные или функциональные аномалии, состояния, которые ставят под угрозу реакцию хозяина, и состояния, способствующие инфицированию вирулентными бактериями (таблица 86-5).

Патогенные организмы, культивируемые при осложненных ИМП, отличаются от тех, которые наблюдаются при неосложненных ИМП (Таблица 86-6).

Если пациент достаточно хорошо себя чувствует, чтобы лечиться в амбулаторных условиях, то в качестве терапии первой линии следует выбрать фторхинолон. Однако, если у пациента тяжелая инфекция, требующая госпитализации, следует назначить противомикробные препараты широкого спектра действия. ⁷ Обычно для лечения требуется от 14 до 21 дня антимикробной терапии. ⁴⁰ Индивидуальные сценарии сложных инфекций обсуждаются в следующих параграфах.

Непроходимость

Случай: Женщина 32 лет с нефролитиазом в анамнезе, с болью в правом боку и лихорадкой.

Камни из оксалата кальция могут вызвать обструкцию мочеточника и вторичную колонизацию. Помимо камней, обструкция мочевыводящих путей также может быть вызвана опухолью, сгустком или папиллярным некрозом.

Бактерии, расщепляющие мочевину, вызывающие образование струвитных камней

Случай: 25-летняя женщина с рецидивом ИМП недавно прошла курс противомикробных препаратов после перенесенной ИМП, вызванной P. mirabilis . Посев мочи после терапии получают и выращивают тот же организм.В настоящее время у нее нет симптомов.

P. mirabilis вызывает ощелачивание мочи, что приводит к осаждению солей кальция, магния, аммония и фосфата и последующему образованию струвитных камней. Эти камни стали известны как камни оленьего рога, потому что они, как правило, представляют собой большие камни, принимающие форму собирающей системы почек. Бактерии сохраняются в этих струвитных камнях, и бактериурия имеет тенденцию повторяться почти сразу после прекращения противомикробной терапии.Струвитные камни часто содержат минимальное количество кальция и могут быть не видны на рентгенограммах. ⁷

Врожденные аномалии мочевыводящих путей

Случай: У 18-летней женщины с известной историей обструкции лоханочно-мочеточникового перехода в анамнезе имеются рецидивирующие ИМП.

У пациентов с аномалиями мочевыводящих путей и ИМП рецидивирующая бактериурия с одним и тем же организмом обычно возникает до тех пор, пока аномальная структура не будет исправлена ​​хирургическим путем.Такие аномалии включают дупликацию мочеточника с эктопическим мочеточником, перикаликулярные дивертикулы, урахальные кисты, односторонние медуллярные губчатые почки и врожденные обструкции с нефункционирующими почками. ⁷

Беременность

Случай: 29-летняя беременная женщина в третьем триместре беременности жалуется на лихорадку, боль в левом боку, тошноту и рвоту.

Хотя было показано, что частота бактериурии у беременных женщин аналогична таковой у небеременных женщин, частота острого пиелонефрита значительно выше у беременных женщин по сравнению с небеременными. ⁴⁷ Возможно, это связано с многочисленными анатомическими и физиологическими изменениями, которые происходят в мочевыводящих путях во время беременности (вставка 86-4). Неудивительно, что пиелонефрит чаще всего наблюдается в третьем триместре, когда застой и гидронефроз наиболее очевидны. ⁷

До появления противомикробной терапии у беременных с пиелонефритом был повышенный уровень недоношенности и перинатальной смертности. Сегодня в литературе продолжаются дискуссии о том, приводит ли гестационный пиелонефрит к преждевременным родам и последующей перинатальной смертности.В любом случае пациенты с пиелонефритом при беременности должны быть госпитализированы и пролечены парентеральными средствами. ⁷ Противомикробные препараты, которые можно использовать во время беременности, включают пенициллины, цефалоспорины и нитрофурантоин. Последний, однако, не следует использовать при пиелонефрите, поскольку он не обеспечивает адекватного проникновения в ткани. Следует избегать агентов, которые могут нанести вред развивающемуся плоду. Фторхинолоны могут нарушать развитие хряща, а TMP-SMX связан с тератогенным действием антифолатов в первом триместре и с неонатальной гипербилирубинемией в третьем триместре. ⁴⁸ После лечения женщинам следует либо назначить профилактику, либо внимательно наблюдать на протяжении оставшейся части беременности, поскольку существует повышенный риск повторных эпизодов пиелонефрита. ⁴⁹

Сахарный диабет

Случай: В больницу с острым пиелонефритом поступила 45-летняя женщина с плохо контролируемым диабетом. Несмотря на парентеральную антимикробную терапию в течение 3 дней, у нее по-прежнему наблюдаются резкие скачки температуры.

Показано, что заболеваемость ИМП у женщин с диабетом значительно выше, чем у женщин без диабета. ⁵⁰ Лечение может быть более трудным при наличии гломерулопатии, поскольку концентрация противомикробных препаратов в моче может быть ниже оптимальной. ⁷ Диабет также связан с определенными патологиями, такими как внутрипочечный и периренальный абсцесс, эмфизематозный пиелонефрит и цистит, ксантогранулематозный пиелонефрит и папиллярный некроз. ⁸ Дальнейшее обсуждение этих сущностей выходит за рамки данной главы.

Травмы спинного мозга

Случай: У 27-летней женщины с травмой грудного отдела спинного мозга в анамнезе наблюдается лихорадка и зловонная моча. Она управляет своим мочевым пузырем с помощью чистой периодической катетеризации.

Метод лечения мочевого пузыря играет большую роль при ИМП у этих пациентов. Пациенты с постоянными уретральными или надлобковыми катетерами имеют высокий уровень инфицирования. ⁵¹ Чистая периодическая катетеризация была введена в 1972 году и произвела революцию в лечении мочевого пузыря у пациентов с травмой спинного мозга.Было показано, что он снижает факторы риска ИМП за счет снижения внутрипузырного давления и количества камней. ⁵² Тем не менее, ИМП — обычная проблема у пациентов с травмой спинного мозга, и ее часто трудно диагностировать. Из-за потери чувствительности у пациентов нет типичных симптомов, таких как частые позывы, срочность позывов или дизурия. Кроме того, анализ мочи у этих пациентов часто демонстрирует бактериурию и пиурию независимо от наличия инфекции. Поэтому диагноз часто ставят клинически, основываясь на симптомах дискомфорта в боку, спине или животе; утечка между катетеризациями; высокая температура; повышенная спастичность; и / или мутная моча с неприятным запахом. ⁷ Посев мочи должен быть получен до начала терапии, поскольку высока вероятность бактериальной резистентности. ⁷ Пациентам с травмой спинного мозга и рецидивирующей ИМП следует пройти визуализацию мочевыводящих путей, уродинамическое тестирование и пересмотреть свою программу лечения мочевого пузыря. ⁵³

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Разнообразие протеиновых профилей отдельных почечных камней оксалата кальция

Abstract

Камни в почках из оксалата кальция содержат небольшое количество белков, некоторые из которых участвуют в прогрессировании или предотвращении образования камней в почках.Чтобы получить представление о патофизиологии мочекаменной болезни, мы охарактеризовали белковые компоненты оксалатных камней в почках с помощью протеомных подходов. Как сообщалось, белки, извлеченные из почечных камней, показали весьма гетерогенные модели миграции при гель-электрофорезе. Вероятно, это происходило главным образом из-за протеолитической деградации и сшивания белок-белок белка Тамма-Хорсфалла и протромбина. Белковые профили почечных камней из оксалата кальция были получены путем расщепления протеазой в растворе с последующей масс-спектрометрией nanoLC-MALDI-тандем, в результате которой было идентифицировано в общей сложности 92 белка в камнях от 9 пациентов с мочекаменной болезнью.Дальнейший анализ показал, что виды белков и их относительные количества сильно различались в зависимости от отдельных камней. Хотя белки, такие как протромбин, остеопонтин, кальгранулин A и кальгранулин B, были обнаружены в большинстве протестированных камней, в некоторых образцах было высокое содержание протромбина и остеопонтина, а в других — калгранулины. Кроме того, камни, богатые кальгранулином, содержали различные обогащенные нейтрофилами белки, такие как миелопероксидаза и лактотрансферрин. Эти протеомные профили отдельных камней в почках предполагают, что множественные системы, состоящие из разных групп белков, включая белки, полученные из лейкоцитов, по-разному участвуют в патогенезе отдельных камней в почках в зависимости от ситуации.

Образец цитирования: Окумура Н., Цуджихата М., Момохара С., Йошиока И., Суто К., Нономура Н. и др. (2013) Разнообразие белковых профилей отдельных почечных камней оксалата кальция. PLoS ONE 8 (7): e68624. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624

Редактор: Дульсе Елена Казарини, Федеральный университет Сан-Паулу (UNIFESP), Escola Paulista de Medicina, Бразилия

Поступила: 6 февраля 2013 г. ; Принята к печати: 30 мая 2013 г .; Опубликован: 9 июля 2013 г.

Авторские права: © 2013 Okumura et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий Японии. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.Дополнительного внешнего финансирования для этого исследования не получено.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Мочекаменная болезнь — распространенное заболевание почек, заболеваемость которым в течение жизни составляет более 10% мужчин и 5% женщин во многих странах с небольшими региональными различиями. Хотя сейчас доступны ударно-волновая литотрипсия и эндоскопия для неинвазивного удаления камней из почек, частота рецидивов мочекаменной болезни очень высока, особенно после лечения ударной волной [1].Чтобы уменьшить возникновение и рецидивы почечнокаменной болезни, важно знать патофизиологию образования камней в почках, но все еще оставалось нерешенным, как образуются камни в почках и как можно предотвратить образование камней.

Камни в почках более чем у 60% пациентов с мочекаменной болезнью содержат оксалат кальция (CaOx) в качестве основного компонента. Они образуются в результате сложных процессов, включая зарождение кристаллов, рост кристаллов, агрегацию кристаллов и взаимодействие кристалл-ячейка [1].Образование кристаллов CaOx может быть инициировано при перенасыщении CaOx, но у здоровых людей камни в почках не развиваются, даже если CaOx в моче часто перенасыщен [2]. Кроме того, небольшие кристаллы CaOx в моче обнаруживаются не только у камнеобразователей, но и у тех, кто не болел мочекаменной болезнью. Это указывает на то, что существуют физиологические системы, предотвращающие образование камней CaOx в почках.

CaOx обычно содержат различные белки на низком уровне [3].Белки, идентифицированные до сих пор в почечных камнях CaOx, включают белок Тамма-Хорсфалла (THP или уромодулин) [4], остеопонтин [5], протромбин [6], кальгранулин A (S100A8) [7], калгранулин B (S100A9) [7], сывороточный альбумин [8], дефенсин [8], белок Z [9] и несколько лейкоцит-специфических белков, включая катепсин G, лейкоцитарную эластазу, азуроцидин, эозинофильный катионный белок, лизоцим [10] и миелопероксидазу [11]. Недавно был проведен всесторонний анализ камней в почках с использованием протеомных методов, и в камнях почек CaOx было обнаружено больше видов белка [12] — [14].

Следует отметить, что некоторые из этих белков обладают ингибирующей или стимулирующей активностью в отношении камнеобразования, указывая на то, что они могут играть ключевую роль в патофизиологии мочекаменной болезни [15], [16]. Фрагмент 1 протромбина, который представляет собой N-концевую область протромбина, содержащую остатки γ-карбоксиглутамата (Gla), является одним из наиболее мощных ингибиторов образования камней в почках CaOx [17], [18]. Кальгранулин A и B [7], которые представляют собой кальцийсвязывающие белки семейства S100 с мотивами EF-hand, и остеопонтин [19], [20], который присутствует на апикальной поверхности мочевыводящих путей, также ингибируют инициацию и рост CaOx. кристаллы.С другой стороны, сообщалось, что THP способствует или ингибирует образование камней в почках в зависимости от условий [21]. В последнее время у THP-нулевых мышей наблюдается высокая частота образования камней в почках из оксалата кальция и фосфата кальция, что указывает на то, что THP также ингибирует камнеобразование в нормальных почках [22], [23].

Хотя камни в почках CaOx содержат множество белков, обычные биохимические методы не подходят для анализа из-за низкого содержания белков и низкой растворимости CaOx.Кроме того, белки экстракта камней обычно демонстрируют сильно диффузные картины миграции при электрофорезе в SDS-полиакриламидном геле (SDS-PAGE), что затрудняет анализ белков камней. В последние несколько лет протеомные подходы с использованием наножидкостной хроматографии (nanoLC) и тандемной масс-спектрометрии (MS / MS) были применены для изучения камней в почках [12] — [14]. В настоящем исследовании мы идентифицировали белковые компоненты в солюбилизированных камнях CaOx с помощью нано-ЖХ / MALDI-MS / MS и проанализировали различия в белковых компонентах в отдельных камнях CaOx.Результаты предоставят информацию о механизмах образования кристаллов CaOx и биологических системах, которые предотвращают рост мочевых камней CaOx.

Материалы и методы

Исследовательский проект, представленный в этом документе, был одобрен институциональным наблюдательным советом Высшей школы медицины Университета Осаки. Письменное информированное согласие всех испытуемых было получено в соответствии с процедурой, утвержденной советом.

Приготовление экстрактов камней

Камни в почках человека были получены от 9 больных мочекаменной болезнью, а минеральные компоненты были определены методом ИК-спектроскопии.Камни в почках, содержащие моногидрат или дигидрат CaOx в качестве основного компонента, были использованы для следующего исследования. Камни в почках с CaOx весом 10-20 мг каждый трижды промывали дистиллированной водой с помощью вихревой мешалки и измельчали ​​до мелкого порошка с помощью ультразвукового дезинтегратора (Branson sonifier 250, Branson, Danbury, США) в 50 объемах солюбилизирующего раствора, состоящего из 10 мМ трис-HCl, pH 7,4, 1 мМ дитиотреитол (DTT) и 1 мМ фенилметилсульфонилфторид. К аликвоте суспензии объемом 3 мл добавляют 30 мл 10 мМ трис-HCl, pH 8.0, содержащий 50 мМ этилендиаминтетраацетат (EDTA), 7 M мочевину, 2 M тиомочевину и 10 мМ DTT, и инкубировали в течение 3 часов при комнатной температуре при постоянном встряхивании. Суспензию диализовали против 2 литров 10 мМ трис-HCl, pH 7,4, содержащего 1 мМ DTT, в течение ночи при 4 ° C, затем концентрировали ультрафильтрацией до примерно 50 мкл (Amicon Ultra-15, Millipore, Billerica, USA). Концентрацию белка определяли по методу Брэдфорда [24], используя бычий сывороточный альбумин в качестве стандарта.

Электрофорез в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия (SDS-PAGE) и расщепление трипсином в геле

Экстракт косточки, содержащий 0.2 мкг белка разделяли с помощью SDS-PAGE по методу Laemmli [25] и окрашивали серебром [26] или Sypro Ruby (Invitrogen) [27], как указано в легенде к рисунку. Для расщепления трипсином в геле полосу для образца разрезали на 14 частей и кусочки геля подвергали расщеплению в геле с 1 пмоль трипсина (Promega, Мэдисон, США), как описано ранее [28]. Полученную смесь пептидов наносили на колонку с гидрофобным картриджем объемом 0,1 мл (Intersep RP1, GL Science, Токио, Япония), промывая 0.1% трифторуксусной кислоты (TFA) и элюируется 50% ацетонитрилом / 0,1% TFA. Элюат концентрировали с помощью вакуумного концентратора и растворяли в 25 мкл 5% ацетонитрила / 0,1% TFA.

Ферментное расщепление экстрактов косточек в растворе

Для анализа методом дробовика каждый экстракт почечных камней (10 мкг белка в 10 мкл 50 мМ хлорида натрия, 25 мМ Трис-HCl, pH 7,4) инкубировали с 0,5 единицами N-гликаназы (Roche, Базель, Швейцария) в течение ночи при 37 ° C. ° C. К этому образцу добавляют 50 мкл денатурирующего раствора, состоящего из 10 мМ трис-HCl, pH 7.Добавляли 4,7 М мочевины, 2 М тиомочевины и 10 мМ DTT и инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем остатки цистеина алкилировали добавлением к раствору 1 М акриламида до конечной концентрации 50 мМ и инкубировали в течение 30 минут при комнатной температуре. Раствор диализовали против 10 мМ трис-HCl, содержащего 1 мМ DTT, в течение ночи при 4 ° C и концентрировали ультрафильтрацией с использованием Microcon 30 (Millipore). Образец инкубировали с 1 пмоль трипсина (Promega) или химотрипсина (Roche) в течение ночи при 37 ° C.Реакционную смесь обессоливали с использованием 0,1 мл колонки с гидрофобным картриджем (Intersep RP1), как описано выше.

Идентификация белков с помощью нано-LC / MALDI-MS / MS и статистического анализа

Концентрированную смесь пептидов разделяли на колонке C ₁₈ (0,075 × 150 мм) с использованием системы нано-ЖХ (Ultimate, Dionex, Саннивейл, США). Более подробно, 10 мкл образца наносили на колонку, промывали 97% растворителем A (0,1% TFA) / 3% растворителем B (ацетонитрил / 0,1% TFA) и элюировали 80-минутным градиентом 3–80%. растворитель B с расходом 300 нл / мин.Каждую 1-минутную фракцию собирали непосредственно на 192-луночном планшете-мишени MALDI с использованием Probot Microfraction Collector (Dionex) и анализировали с помощью масс-спектрометра MALDI-MS / MS (4700 Proteomics Analyzer, Applied Biosystems, Foster City, USA) с α-циано -4-гидроксикоричная кислота в качестве матрицы. Из полученных спектров МС / МС с помощью программного обеспечения Peak to Mascot (ABI) был создан список пиков со следующими параметрами; минимальный S / N: 12, минимальная площадь: 1000 и максимальный пик / предшественник: 100. Поиск в базе данных выполнялся с использованием MASCOT 1.0 (Matrix Science, Лондон, Великобритания) со следующими параметрами; база данных: swissprot (выпуск 54.5), таксономия: человек (содержит 17742 последовательности), толерантность к пептидам: 0,1 Да, заряд пептида: 1+, толерантность к МС / МС: 0,2 Да, фиксированные модификации: пропионамид (C), фермент: нет, вариабельный модификации: окисление (M), формилкинуренин (W) и дезамидирование (N), без ограничения массы белка. Белок-кандидат оценивался как пораженный белок, если оценка белка превышала 50 и по крайней мере один пептид соответствовал количеству ионов MS / MS более 30.Анализ главных компонентов проводился с использованием функции «prcomp» пакета «stat» программного обеспечения «R» (R Foundation проекта GNU).

Иммуноблоттинг

экстрактов почечных камней, содержащих 0,1 мкг белка каждый, разделяли с помощью SDS-PAGE с использованием 10% полиакриламидного геля с катодным буфером, состоящим из 82 мМ Трис, 100 мМ трицина и 0,1% SDS, и анодным буфером, состоящим из 100 мМ Трис-HCl, pH 8,8. Для иммуноблоттинга белки переносили на поливинилиденфторидную мембрану и инкубировали в T-TBS (10 мМ Tris-HCl, pH 7.4, 150 мМ NaCl и 0,1% твин 20), содержащего 1% бычий сывороточный альбумин, в течение ночи при комнатной температуре. Затем мембрану инкубировали с первичным антителом, разведенным в T-TBS. В качестве первичных используемых антител были овечий антипротромбиновый фрагмент 1 (разведение 150000, Cedarlane, Онтарио, Канада, CL20111AP), мышиный антикальгранулин A (разведение 1-200, Santa Cruz Biotechnology, Санта-Крус, США, sc-48352) , козьи антитела против кальгранулина B (разведение 1∶100, Santa Cruz Biotechnology, sc-8114) и кроличьи антитела против THP (1∶200, Santa Cruz Biotechnology, sc-20631).После промывания T-TBS мембрану инкубировали с меченными пероксидазой хрена антителами против овечьих IgG, против козьих IgG или против кроличьих IgG. Мембрану промывали T-TBS, инкубировали с хемилюминесцентными реагентами (Western lightning ™, Perkin Elmer Life Sciences, Уолтем, США) и детектировали иммунореактивные полосы с помощью анализатора изображений с охлаждаемым детектором CCD (LAS-1000, Fujifilm, Токио, США). Япония). Изображения сохраняли в 16-битном формате Tiff, а интенсивность полос количественно определяли с помощью программного обеспечения Image J (Национальный институт здравоохранения, Мэриленд, США).

Результаты

Получение экстрактов почечных камней и паттерны их миграции в паспорте безопасности (SDS-PAGE)

Камни почек из оксалата кальция были собраны у девяти больных мочекаменной болезнью. Инфракрасный спектроскопический анализ показал, что основным минеральным компонентом образцов 1 и 2 был моногидрат оксалата кальция, а в образцах 3–9 — дигидрат оксалата кальция (таблица). Каждый почечный камень измельчали ​​с помощью ультразвукового разрушителя клеток и солюбилизировали в буфере Tris-HCl, содержащем EDTA, мочевину, тиомочевину и DTT.Для солюбилизации CaOx необходима ЭДТА, тогда как мочевина и тиомочевина были добавлены для увеличения растворимости белков с низкой растворимостью. Несколько нерастворимых материалов были видны после обработки ЭДТА, но они исчезли после обработки протеазой (данные не показаны). Выход белка находился в диапазоне от 0,5 до 3 мкг белка / мг камня в почках, за исключением Образца 4, который содержал менее 0,1 мкг белка / мг камня в почках (Таблица 1).

Первоначальную характеристику белковых экстрактов из почечных камней CaOx проводили с помощью SDS-PAGE (рис.1). Все экстракты показали сильно рассеянную картину окрашивания, как сообщили другие группы [8], [9]. Лишь несколько широких полос белка были обнаружены при 30 кДа в образце 1 и 10–14 кДа в образце 6, 8 и 5, но различия в структуре белков между образцами не были четкими.

Рисунок 1. Анализ белков, экстрагированных из камней в почках с СаОх, методом SDS-PAGE.

Камни в почках CaOx, полученные от 8 человек, солюбилизировали, диализовали, концентрировали, а затем экстракты, содержащие 0.2 мкг каждого белка подвергали SDS-PAGE. Белки визуализировали окрашиванием серебром. Образец 4, выход которого составлял <0,1 мкг / мг камня, также показал аналогичную картину диффузного белка (данные не показаны). Электрофорез и окрашивание проводили трижды, и все они дали аналогичные результаты.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624.g001

Для характеристики структуры диффузного белка один из образцов (образец 3) был разделен с помощью SDS-PAGE и разделен на 14 частей в соответствии с электрофоретической подвижностью. (Инжир.2А). Мы выбрали образец 3, потому что он показал типичную электрофоретическую картину (рис. 1) и имел умеренную концентрацию белка (таблица 1). Белковый состав каждого кусочка геля анализировали с помощью расщепления трипсином в геле с последующим автономным анализом МС / МС наножидкостной хроматографией / MALDI. Список белков каждого кусочка геля показан в таблице 2, где представлены оценки Mascot вместе с количеством попаданий пептидов. Из 14 кусочков геля было идентифицировано в общей сложности 22 белка, и большинство из них было обнаружено в определенных областях геля.Однако пептидные фрагменты, полученные из протромбина и THP, были обнаружены почти на всей площади геля, что указывает на то, что по крайней мере эти два белка были сильно гетерогенными с точки зрения электрофоретической подвижности.

Рис. 2. Характеристика выделенных из геля белков из почечного камня CaOx с помощью анализа MALDI-MS / MS с помощью наноЖХ.

(A) Один из экстрактов почечных камней, Образец 3, был отделен с помощью SDS-PAGE, окрашен Sypro Ruby и разрезан на 14 частей, как указано. Каждый кусочек геля подвергали расщеплению трипсином в геле , и полученные пептиды анализировали с помощью nanoLC / MALDI MS / MS с последующим поиском в базе данных на MASCOT.Результаты представлены в таблице 2. (B) Доменная структура THP человека (SwissProt: UROM_HUMAN). (C) По результатам, показанным в таблице 2, пептиды, соответствующие THP, были картированы на аминокислотной последовательности THP человека.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624.g002

Чтобы дополнительно охарактеризовать модели диффузной миграции, фрагменты, полученные из THP, обнаруженные в каждом кусочке геля, были картированы на его аминокислотной последовательности (рис. 2B, C) . Фрагменты, соответствующие C-концевому домену zona pellucida-like (ZP), были обнаружены почти на всей площади геля, в то время как от средней до N-концевой части выявлялись только в кусочках геля 4–7.Эти результаты показывают, что THP в почечных камнях CaOx присутствует в виде гетерогенных форм в результате протеолитической деградации и сшивания.

Профилирование белков экстрактов почечных камней с CaOx

Поскольку электрофоретическая подвижность некоторых белков почечных камней была очень гетерогенной, белковые профили отдельных камней в почках CaOx были получены путем протеазного расщепления экстрактов протеина в растворе с последующим анализом nanoLC / MALDI-MS / MS (рис. 3). Для дальнейшего увеличения количества попаданий пептида и покрытия пептидом, расщепления химотрипсина в дополнение к расщеплениям трипсина были приготовлены и проанализированы независимо.

Рисунок 3. Процедура определения профиля белка CaOx почечных камней.

Для анализа белкового состава отдельных камней CaOx экстракты из почечных камней CaOx подвергали расщеплению протеазой в растворе и анализировали с использованием нано-ЖХ и MALDI-MS / MS, как показано на этой схеме.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624.g003

В этом анализе в 9 образцах было идентифицировано 92 различных белка. Полные результаты этого анализа были показаны в Таблице S1, где были представлены названия белков, количество попаданий пептидов и покрытия белков, поскольку ожидалось, что количество совпадений пептидов и покрытия последовательностей будут отражать относительное количество белка [29].Примечательно, что список белков включал по крайней мере 22 кальций-связывающих белка, которые имеют различные кальций-связывающие домены (Таблица S2). Как показано на Фиг.3, расщепленные трипсином и химотрипсином сначала были проанализированы с помощью LC-MS / MS и списки пиков, полученные отдельно. Когда каждый список пиков подвергался поиску в базе данных, данные из расщепления трипсина приводили к большему количеству попаданий белка, чем из перевариваемых химотрипсином (таблица S3). Однако объединение списков пиков перевариваемых трипсином и химотрипсином приводило к увеличению попаданий белка (таблица S3), увеличению количества белков и увеличению соответствия пептидов (данные не показаны).Поэтому в этом анализе использовались объединенные списки пиков.

Белки, обнаруженные в почечных камнях CaOx, можно разделить на три группы в зависимости от их возможного происхождения (рис. 4). Из 92 белков 51 присутствует во внутриклеточных областях или внеклеточном матриксе клеток почек. К ним относятся THP, который экспрессируется в толстой восходящей конечности Генле (TALH), и остеопонтин, который находится в TALH и некоторых других областях почек, таких как тонкая петля Генле и собирательный проток.Они также включают витронектин, фибронектин и несколько протеогликанов, которые являются компонентами внеклеточного матрикса или базальной мембраны. Все образцы также содержали клеточные белки, которых много в цитоскелете (актин, миозин, тубулин и т. Д.), Цитозоле (белки теплового шока, метаболические ферменты и т. Д.) И ядре (нуклеолин и т. Д.) В большинстве типов клеток.

Рис. 4. Классификация белковых компонентов, обнаруженных в камнях в почках с CaOx.

Экстракты из 9 отдельных образцов камня CaOx были исследованы отдельно с помощью дробового анализа, как показано на рис.3, а результаты подробно представлены в таблице S1. Как показано на этом рисунке, всего в этом анализе было идентифицировано 92 белка. Эти белки можно разделить на три основные группы в зависимости от их возможного происхождения, т.е. е. белки почек, белки крови и белки, связанные с лейкоцитами. Белки в каждой группе были дополнительно разделены на подгруппы.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624.g004

Вторая группа состоит из белков, преимущественно присутствующих в крови.К ним относятся (1) основные белки плазмы (например, сывороточный альбумин, иммуноглобулин G) (2) белки системы свертывания (например, протромбин, белок Z), (3) белки системы комплемента (например, маннан-связывающая лектин-серинпротеаза, комплемент C9 ), и (4) белки острой фазы ответа (например, амилоид β A4 белок и сывороточный амилоидный Р-компонент). Хотя эти белки, скорее всего, происходят из крови, некоторые белки этой категории, такие как протромбин, также экспрессируются в почках [30], поэтому мы не можем исключить возможность того, что некоторые из них происходят из клеток почек.

Третья группа состоит из белков, высоко экспрессируемых лейкоцитами, таких как макрофаги и нейтрофилы. К ним, в частности, относятся различные белки, обогащенные азурофильными гранулами нейтрофилов [31], такие как нейтрофильный дефенсин 3, α-HS-гликопротеин (фетуин A), лактотрансферрин, азуроцидин, миелопероксидаза и катепсин G. Также были обнаружены два специфичных для эозинофилов белка. в нескольких образцах. Кальгранулин A и кальгранулин B присутствовали в большинстве образцов, особенно в образцах 2, 5, 6 и 8.Известно, что эти калгранулины экспрессируются в моноцитах на высоком уровне и, таким образом, были отнесены к третьей группе на этом рисунке. Однако некоторые другие типы почечных клеток, такие как эпителиальные клетки, также могут продуцировать калгранулины в почках [7].

Различия в белковом составе отдельных камней в почках с CaOx

Этот анализ также показал, что белковые составы отдельных камней в почках отличаются друг от друга (Таблица S1). Чтобы прояснить различия в составе белков, были рассчитаны процентные соотношения количества попаданий пептида основных компонентов почечного камня (рис.5А). В образце 1 почти 80% всех попаданий пептидов были получены из остеопонтина и протромбина. С другой стороны, в образцах 4, 3 и 9 пептиды из этих двух белков составляли 30–50%, а в образцах 6, 2 и 5 — менее 10%. В свою очередь, калгранулины, сывороточный альбумин и некоторые из них. нейтрофил-специфические белки преобладали в образцах 6, 2 и 5.

Рисунок 5. Сравнение относительных количеств пептидов, обнаруженных в отдельных камнях в почках с СаОх.

(A) После анализа нано-ЖХ / MALDI-MS / MS количество попаданий пептидов было представлено в виде гистограммы с общим количеством попаданий пептидов в каждом образце геля, равным 100%.(B) Количество попаданий пептида было подвергнуто анализу главных компонентов, и первый (слева) и второй (справа) собственные векторы были показаны в порядке убывания. (C) Оценка главного компонента 1 каждого образца была представлена ​​в виде гистограммы.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624.g005

Для дальнейшего анализа различий белковых компонентов отдельных камней в почках количество попаданий пептидов было подвергнуто анализу главных компонентов (рис.5Б, В). В компоненте 1 белки, включая сывороточный альбумин, кальгранулин A, кальгранулин B, миелопероксидазу и лактотрансферрин, дали положительные оценки, тогда как остеопонтин, протромбин и витамин K-зависимый белок Z дали отрицательные оценки. С другой стороны, Компонент 2 во многом зависит от содержания THP. Что касается компонента 1, образцы 2, 5 и 6 показали положительные оценки, а образцы 1, 3, 4, 7, 8 и 9 показали противоположные оценки (рис. 5C). Эти результаты показывают, что отдельные камни в почках содержат несколько разных групп белков, и что соотношение каждой группы варьируется от образца к образцу.Кроме того, было высказано предположение, что остеопонтин, протромбин и белок Z составляют одну группу, тогда как сывороточный альбумин, кальгранулин A, кальгранулин B, миелопероксидаза и лактотрансферрин составляют другую группу.

Для дальнейшего подтверждения различий в белковых профилях отдельных почечных камней протромбин, кальгранулин A, кальгранулин B и THP исследовали вестерн-блоттингом (рис. 6). Чтобы подтвердить специфичность используемых антител, концентрированный образец мочи здорового человека наносили на последнюю полосу каждого геля, поскольку известно, что эти белки присутствуют в моче [32] — [34].Это также позволяет нам сравнивать молекулярные формы антигенов в камнях в почках и в моче.

Рисунок 6. Вестерн-блот-анализ основных белков СаОх почечных камней.

Экстракты СаОх почечных камней, содержащие 0,1 мкг белков, разделяли с помощью SDS-PAGE и наносили на мембрану из PVDF. Чтобы подтвердить реактивность антител и указать размер белков в моче, концентрированный образец мочи нормального субъекта (1 мкг белка) наносили на последнюю полосу каждого геля.Затем мембрану зондировали анти-протромбиновым фрагментом 1, анти-кальгранулином A, анти-кальгранулином B или антителами против THP. Стрелки указывают положения протромбинового фрагмента 1 (вверху слева), полноразмерного THP (вверху справа), полноразмерного кальгранулина A (внизу слева) и полноразмерного кальгранулина B (внизу справа). Вестерн-блоттинг повторяли два раза и давали аналогичные результаты. Когда Образцы 1, 3, 9 и 7 (Группа 1) сравнивали с Образцами 8, 6, 2 и 5 (Группа 2), p-значение U-критерия Манна-Уитни было равно 0.028 для протромбина, кальгранулина A и кальгранулина B, а для THP — 0,8857.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624.g006

Протромбин, предшественник тромбина, состоит из фрагмента 1, фрагмента 2 и домена протеазы тромбина. Используя антитело против протромбинового фрагмента 1, белковые полосы, соответствующие фрагменту 1, который мигрировал чуть выше 31 кДа, были обнаружены в нескольких экстрактах почечных камней, а также в моче [32]. Количество протромбина было самым высоким в образце 1, затем в образце 3, в то время как его было трудно обнаружить в образцах 8, 6, 2 и 5.Этот рисунок также показывает, что экстракты почечных камней, но не моча, имеют низкоподвижные формы протромбина с кажущейся молекулярной массой 45-200 кДа, что указывает на наличие поперечно-сшитых форм в почечных камнях.

Кальгранулин A и кальгранулин B представляют собой небольшие белки с теоретической молекулярной массой 11 к и 13 к, соответственно. Вестерн-блоттинг подтвердил, что кальгранулин А присутствует в нормальной моче и мигрировал в положение, близкое к его теоретической массе (рис. 6). С другой стороны, в этом анализе кальгранулин B не был обнаружен в нормальной моче.Сообщалось, что содержание кальгранулина B в моче у мужчин намного ниже, чем у женщин [33]. Поскольку мы использовали нормальную мочу мужского пола, отсутствие полосы кальгранулина B могло быть связано с гендерными различиями. В экстрактах почечных камней кальгранулин A и кальгранулин B проявлялись в виде полос 8 и 12 кДа, соответственно, со слабыми сигналами мазка в области высокомолекулярного веса. В отличие от протромбина, их иммунореактивные полосы были самыми высокими в образце 5, за которым следовали образцы 2, 6 и 8.Эта обратная взаимосвязь между уровнями протеина протромбина и калгранулинов согласуется с результатами, показанными на рис. 5.

GPI-заякоренный мембранный гликопротеин, THP, является основным компонентом мочи с кажущейся молекулярной массой 60–90 кДа, как показано на рис. 2. В экстрактах почечных камней, однако, он мигрировал в виде полосы мазка> 30 кДа. , указывает на то, что он разлагается и перекрестно сшивается в почечных камнях. Это согласуется с результатом на фиг. 2. Интенсивность THP-иммунореактивности была самой высокой в ​​образце 6, за которым следовали 9, 3, 5 и 7, и не была связана с количеством протромбина и калгранулинов.Это также согласуется с результатами, показанными на рис. 5. Когда образцы 1, 3, 9 и 7 (группа 1) сравнивали с образцами 8, 6, 2 и 5 (группа 2) с помощью U-критерия Манна-Уитни, протромбин был значительно выше в группе 1 (p <0,05), в то время как кальгранулин A и кальгранулин B были выше в группе 2 (p <0,05). Напротив, THP не отличался статистически между двумя группами, поскольку значение p составляло 0,88.

Обсуждение

В настоящем исследовании белковые экстракты CaOx почечных камней были охарактеризованы с помощью анализа nanoLC-MALDI.Во-первых, мы провели первоначальную характеристику экстрактов почечных камней с помощью SDS-PAGE и подтвердили, что белки в почечных камнях очень гетерогенны по электрофоретической подвижности (рис. 1, 2). Распространение белков, по-видимому, частично связано с гетерогенностью основных компонентов камня, THP и протромбина (рис. 2B). В случае THP, C-концевой домен ZP был обнаружен в более высокой и более низкой области, чем исходное положение миграции, как обнаружено с помощью спектрометрии nanoLC-MALDI MS / MS. Это указывает на то, что некоторые белки в почечных камнях CaOx, такие как THP, подвержены протеолитической деградации и сшиванию белок-белок.

Поскольку белки в камнях почек CaOx плохо разделялись с помощью SDS-PAGE, профили белков отдельных камней в почках были исследованы методом дробовика, и в общей сложности 92 белка были идентифицированы в камнях CaOx у 9 пациентов. Список белков содержал типичные компоненты почечных камней, такие как протромбин, THP, кальгранулин A, кальгранулин B и миелопероксидаза [13]. Кроме того, было замечено, что белковые составы отдельных образцов отличаются друг от друга, как обсуждается ниже.Опубликованные на данный момент статьи иногда показывают некоторые несоответствия, например, миелопероксидаза была обнаружена в нескольких исследованиях, а в других не обнаружена. Настоящие результаты показывают, что эти расхождения, вероятно, связаны с разнообразием белкового состава отдельных образцов.

Белки, идентифицированные в образцах, были разделены на три группы. Одна из групп содержит те, которые, вероятно, происходят из почечных клеток, таких как эпителиальные клетки почечных канальцев и интерстициальные клетки.Остеопонтин и THP являются основными белками, экспрессируемыми на апикальной поверхности почечных канальцев, в то время как витронектин, фибронектин и протеогликаны являются компонентами внеклеточного матрикса. Фибронектин индуцируется CaOx [34] и предотвращает агрегацию камней CaOx в почках [34], повреждение клеток, вызванное CaOx [35], и эндоцитоз [36]. Эти результаты согласуются с идеей о том, что определенные молекулы клеточной поверхности могут предотвращать рост кристаллов и повреждение клеток.

Образцы также содержали белки крови, включая сывороточный альбумин, гамма-иммуноглобулин, и различные белки свертывания крови, такие как протромбин, белок Z, белок C, белок S, фибриногены, плазминоген и фактор свертывания крови X.Хотя они, скорее всего, происходят из крови, некоторые из этих белков, такие как протромбин, также экспрессируются в почках [30]. Сообщалось, что протромбин, белок Z, белок S и остеопонтин присутствовали в камнях из СаОх, но не в камнях из мочевой кислоты, что указывает на их важную роль в образовании камней из СаОх [14]. В соответствии с этим, протромбин и остеопонтин были обнаружены во всех камнях CaOx, протестированных в настоящем исследовании.

Все исследованные камни в почках с CaOx также содержали различные количества кальгранулина A и кальгранулина B (рис.5, таблица S1). Эти белки сильно экспрессируются в макрофагах и нейтрофилах и секретируются клетками. Кроме того, некоторые камни, богатые кальгранулином А, также содержат нейтрофилы дефенсин 3, кальгранулин С, фетуин А, лактотрансферрин, азуроцидин и миелопероксидазу, которые в основном экспрессируются в нейтрофилах [37]. Присутствие этих белков, происходящих из лейкоцитов, в почечных камнях СаОх согласуется с несколькими другими сообщениями [11], [13]. Это указывает на то, что лейкоциты присутствуют рядом с камнями в почках с CaOx в определенных ситуациях.

Различия в белковых профилях отдельных камней были дополнительно проанализированы несколькими способами. Анализ главных компонентов показал, что главный компонент 1 был осью, созданной в основном протромбином, остеопонтином и протеином Z по сравнению с миелопероксидазой, кальгранулином A и кальгранулином B (рис. 5B, C). Фактически, протромбин показал обратную связь с кальгранулином А и В, что было подтверждено вестерн-блоттингом (рис. 6). Эти различия могут отражать наличие или отсутствие клеток, продуцирующих кальгранулин и миелопероксидазу, рядом с камнями.Макрофаги или нейтрофилы обычно не наблюдаются вблизи места образования камней, но у крыс, нагруженных этиленгликолем, сообщалось об инфильтрации нескольких лимфоцитов [30]. Кроме того, ранние кристаллы CaOx, продуцируемые загрузкой этиленгликоля, окружены эпителиальными клетками и взаимодействуют с лимфоцитами, что указывает на наличие активных механизмов клиренса, которые удаляют отложения CaOx этими клетками [38]. Таким образом, настоящее исследование предполагает, что несколько различных систем клиренса, включая лимфоциты, могут действовать на камни СаОх в зависимости от ситуации у пациента с мочекаменной болезнью.

Дополнительная информация

Таблица S3.

Сравнение эффективности расщепления трипсином и химотрипсином для идентификации белка дробовика. Списки пиков МС / МС, полученные при расщеплении трипсина и химотрипсина, сначала отдельно подвергали анализу поиска в базе данных с использованием MASCOT. После этого два списка пиков были объединены и произведен поиск аналогичным образом. Количество попаданий белка, автоматически обнаруженных MASCOT (p <0,05), представлено в таблице.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0068624.s003

(XLSX)

Вклад авторов

Эксперимент задумал и спроектировал: MT NN AO TT. Проведены эксперименты: NO CM IY. Проанализированы данные: НЕТ КС ТТ. Написал газету: НЕТ.

Ссылки

1. 1. Tsujihata M (2008) Механизмы образования почечных камней оксалатом кальция и повреждения клеток почечных канальцев. Int J Urol 15: 115–120.
2. 2. Робертсон В.Г., Пикок М., Нордин Б.Е.К. (1968) Продукты активности в моче, образующей и не образующей камни.Clin Sci 34: 579–594.
3. 3. Boyce WH (1968) Органический матрикс мочевых конкрементов человека. Am J Med 45: 673–683.
4. 4. Максфилд М. (1963) Мукополисахариды и камни в моче. Энн Рев Мед 14: 99–.
5. 5. Кохри К., Номура С., Китамура Ю., Нагата Т., Йошиока К. и др. (1993) Структура и экспрессия мРНК, кодирующей белок мочевых камней (остеопонтин). J Biol Chem 268: 15180–15184.
6. 6. Stapleton AM, Simpson RJ, Ryall RL (1993) Белок кристаллической матрицы связан с протромбином человека.Biochem Biophys Res Commun 195: 1199–1203.
7. 7. Pillay SN, Asplin JR, Coe FL (1998) Доказательства того, что кальгранулин вырабатывается клетками почек и является ингибитором кристаллизации оксалата кальция. Am J Physiol 275: F255–261.
8. 8. Канеко К., Яманобе Т., Онода М., Маватари К., Накагоми К. и др. (2005) Анализ мочевых камней, полученных от пациента с идиопатической гипурикемией, с использованием рентгеновской дифрактометрии на микроуровне и ЖХ-МС. Урол Res 33: 415–421.
9. 9.Канеко К., Яманобе Т., Накагоми К., Маватари К., Онода М. и др. (2003) Обнаружение белка Z в почечном камне, состоящем из моногидрата оксалата кальция, с использованием жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии / масс-спектрометрии после разделения электрофорезом в двумерном полиакриламидном геле. Анальная биохимия 324: 191–196.
10. 10. Chen W, Lai C, Tsai Y, Lin W, Tsai F (2008) Масс-спектроскопические характеристики низкомолекулярных белков, экстрагированных из оксалатных камней кальция: предварительное исследование.J Clin Lab Anal 22: 77–85.
11. 11. Муштак С., Сиддики А.А., Накви З.А., Раттани А., Талати Дж. И др. (2007) Идентификация миелопероксидазы, α-дефенсина и кальгранулина в почечных камнях, содержащих озалат кальция. Clin Chim Acta 384: 41–47.
12. 12. Merchant ML, Cummins TD, Wilkey DW, Salyer SA, Powell DW и др. (2008) Протеомный анализ почечных камней указывает на важную роль воспалительных процессов в образовании кальциевых камней. Am J Physiol Renal Physiol 295: F1254–1258.
13. 13. Каналес Б.К., Андерсон Л., Хиггинс Л., Энсруд-Боулин К., Робертс К.П. и др .. (2010) Протеом кальциевых камней в почках человека. Урология 76: 1017 e1013–1020.
14. 14. Канеко К., Кобаяши Р., Ясуда М., Изуми Ю., Яманобе Т. и др. (2012) Сравнение белков матрикса в различных типах мочевых камней с помощью протеомного анализа с использованием жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии. Int J Urol 19: 765–772.
15. 15. Nakagawa Y, Abram V, Kezdy FJ, Kaiser ET, Coe FL (1983) Очистка и характеристика основного ингибитора роста кристаллов моногидрата оксалата кальция в моче человека.J Biol Chem 258: 12594–12600.
16. 16. Ryall RL (2004) Макромолекулы и мочекаменная болезнь: параллели и парадоксы. Nephron Physiol 98: p37–42.
17. 17. Ryall RL, Grover PK, Stapleton AMF, Barrell DK, Tang Y и др. (1995) Пептид активации протромбина человека F1 в моче является мощным ингибитором кристаллизации оксалата кальция в неразбавленной человеческой моче in vitro. Clin Sci 89: 533–541.
18. 18. Grover PK, Ryall RL (2002) Эффект протромбина и его активационных фрагментов на рост кристаллов оксалата кальция и агрегацию в неразбавленной человеческой моче in vitro: взаимосвязь между структурой белка и ингибирующей активностью.Clin Sci (Лондон) 102: 425–434.
19. 19. Worcester EM, Blumenthal SS, Beshensky AM, Lewand DL (1992) Белок-ингибитор роста кристаллов оксалата кальция, продуцируемый кортикальными клетками почек мыши в культуре, представляет собой остеопонтин. J Bone Miner Res 7: 1029–1036.
20. 20. Worcester EM, Beshensky AM (1995) Остеопонтин ингибирует зародышеобразование кристаллов оксалата кальция. Ann NY Acad Sci 760: 375–377.
21. 21. Hess B (1992) Ингибитор или промотор процессов кристаллизации оксалата кальцим-моногидрата? Урол Res 20: 83–.
22. 22. Мо Л., Ву XR, Хуанг Х.Й., Чжу XH, Шапиро Э. и др. (2004) Белок Тамма-Хорсфалла является важным фактором защиты почек, защищающим от образования кристаллов оксалата кальция. Kidney Int 66: 1159–1166.
23. 23. Мо Л., Лиау Л., Эван А. П., Соммер А. Дж., Лиске Дж. К. и др. (2007) Почечный кальциноз и образование камней у мышей, лишенных остеопонтина, белка Тамма-Хорсфалла или того и другого. Am J Physiol Renal Physiol 293: F1935–1943.
24. 24. Брэдфорд М.М. (1976) Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип связывания белок-краситель.Анальная биохимия 72: 248–254.
25. 25. Laemmli UK (1970) Расщепление структурных белков во время сборки головки бактериофага Т4. Природа 227: 680–685.
26. 26. Шевченко А., Вильм М., Ворм О, Манн М. (1996) Масс-спектрометрическое секвенирование белков полиакриламидных гелей, окрашенных серебром. Anal Chem 68: 850–858.
27. 27. Берггрен К.Н., Шуленберг Б., Лопес М.Ф., Стейнберг Т.Х., Богданова А. и др. (2002) Улучшенный состав красителя геля белка SYPRO Ruby: сравнение с исходным составом и составом трис (дисульфоната батофенантролина) рутения II.Протеомика 2: 486–498.
28. 28. Окумура Н., Хашида-Окумура А., Кита К., Мацубаэ М., Мацубара Т. и др. (2005) Протеомный анализ медленно и быстро сокращающихся скелетных мышц. Протеомика 5: 2896–2906.
29. 29. Исихама Ю., Ода Ю., Табата Т., Сато Т., Нагасу Т. и др. (2005) Экспоненциально модифицированный индекс изобилия белка (emPAI) для оценки абсолютного количества белка в протеомике по количеству секвенированных пептидов на белок. Протеомика клеток Mol 4: 1265–1272.
30. 30. Grover PK, Miyazawa K, Coleman M, Stahl J, Ryall RL (2006) мРНК почечного протромбина значительно снижена в гипероксалурической модели нефролитиаза на крысах. Дж. Патол 210: 273–281.
31. 31. Ломинадзе Г., Пауэлл Д.В., Люерман Г.К., Линк А.Дж., Уорд Р.А. и др. (2005) Протеомный анализ гранул нейтрофилов человека. Mol Cel Proteomics 4: 1503–1521.
32. 32. Stapleton AM, Ryall RL (1995) Белки свертывания крови и мочекаменная болезнь связаны: белок кристаллического матрикса представляет собой активационный пептид F1 протромбина человека.Br J Urol 75: 712–719.
33. 33. Bergsland KJ, Kelly JK, Coe BJ, Coe FL (2006) Маркеры белка в моче отличают камнеобразование от некаменеющих родственников кальциевых камней. Am J Physiol Renal Physiol 291: F530–536.
34. 34. Цуджихата М., Мияке О, Йошимура К., Какимото К.И., Такахара С. и др. (2000) Фибронектин как мощный ингибитор оксалатно-кальциевой мочекаменной болезни. Дж. Урол 164: 1718–1723.
35. 35. Tsujihata M, Miyake O, Yoshimura K, Tsujikawa K, Tei N, et al.(2003) Повреждение почечных канальцев и фибронектин. Урол Res 31: 368–373.
36. 36. Tsujihata M, Yoshimura K, Tsujikawa K, Tei N, Okuyama A (2006) Фибронектин ингибирует эндоцитоз кристаллов оксалата кальция клетками почечных канальцев. Int J Urol 13: 743–746.
37. 37. Borregaard N, Sorensen OE, Theilgaard-Monch K (2007) Нейтрофильные гранулы: библиотека белков врожденного иммунитета. Тенденции Immunol 28: 340–345.
38. 38. Vervaet BA, Verhulst A, Dauwe SE, De Broe ME, D’Haese PC (2009) Активный механизм почечного клиренса кристаллов у крысы и человека.Kidney Int 75: 41–51.

Обращение с оксалатом в организме и происхождение оксалата в камнях из оксалата кальция — FullText — Urologia Internationalis 2020, Vol. 104, № 3-4

Аннотация

Мочекаменная болезнь — одно из самых распространенных урологических заболеваний в промышленно развитых странах. Более 80% почечных камней состоят из оксалата кальция, и небольшие изменения концентрации оксалата в моче влияют на риск образования камней.Выяснение источника оксалата и механизма его транспорта имеет решающее значение для понимания этиологии мочекаменной болезни. Источники оксалата могут быть как эндогенными, так и экзогенными. Что касается транспорта оксалатов, были проведены тесты для подтверждения функции связанного с растворенным веществом носителя 4 (SLC4) и SLC26. Молекулярный механизм мочекаменной болезни, вызываемой SLC4 и SLC26, до сих пор неясен. Растущее число исследований молекулярной физиологии SLC4 и SLC26, вместе с экспериментами на генетических мышах с нокаутом, предполагают, что SLC4 и SLC26 могут быть элементом, способствующим мочекаменной болезни.Этот обзор суммирует недавние исследования источников оксалата и характеристики оксалатных транспортных ионообменников SLC4 и SLC26, с акцентом на различные физиологические дефекты в моделях нокаутных мышей, включая образование камней в почках. Кроме того, обменники SLC4 и SLC26 позволяют по-новому взглянуть на мочекаменную болезнь и могут быть новой терапевтической мишенью для модификации экскреции оксалатов с мочой.

© 2019 S. Karger AG, Базель

Введение

Мочекаменная болезнь — это частое урологическое заболевание, заболеваемость которым возрастает [1-3].В Азии от 1 до 19,1% населения страдает мочекаменной болезнью [4]. Риск рецидива в течение жизни составляет 50%, с расчетным временем рецидива до 1 года в 10% случаев, до 5 лет в 35–50% и до 10 лет как минимум в 50% случаев [5]. В связи с изменением образа жизни и экономическим развитием заболеваемость мочекаменной болезнью в последние несколько десятилетий неуклонно возрастала. Оксалат кальция (CaOx) является наиболее распространенным типом камней, удаляемых у пациентов [6, 7]. Более 70% пациентов с почечнокаменной болезнью страдают мочекаменной болезнью, вызванной камнями СаОх; из них дигидрат CaOx является наиболее распространенным кристаллом в моче здорового человека, а моногидрат CaOx — наиболее распространенным кристаллом в почечных камнях [7, 8].Перенасыщение мочи CaOx является основным фактором образования камней CaOx [2]. Таким образом, гипероксалурия признана одним из независимых факторов риска камнеобразования. Оксалат получают из пищевых источников (например, растений и продуктов растительного происхождения), он может синтезироваться организмом и выводится с мочой [9, 10]. Этиология гипероксалурии имеет разные аспекты у разных людей. Считается, что частое употребление продуктов, содержащих оксалаты и предшественники оксалатов, способствует развитию гипероксалурии у некоторых людей.Низкая или неоптимальная колонизация оксалат-деградирующими бактериями в желудочно-кишечном тракте [11], заболевание короткого или мальабсорбтивного кишечника [12] и бариатрическая хирургия ожирения [13] также считаются факторами, способствующими этому.

В последнее время исследования были сосредоточены на транспорте оксалатов, который представляет собой трансклеточный процесс, который зависит от анионообменников. Таким образом, интерес к исследованиям SLC4 и SLC26 постепенно возрастал. SLC, который принадлежит к многофункциональной системе анионита, активно участвует в гомеостазе оксалатов [14].Белок полосы 3 эритроцитов человека (AE1 или SLC4A1), участвующий в транспорте оксалатов в красных кровяных тельцах, подробно не изучался, но в некоторых работах описывается обработка красных кровяных телец с различными концентрациями H ₂ DIDS (4,4 ‘ -диизотиоцианатостильбен-2,2’-дисульфонат) ингибирует Cl ^— -Cl ^— и оксалат-оксалатный обмен в той же степени, что позволяет предположить, что SLC4A1 является основным путем транспорта оксалата [15]. Мутации и нокаут SLC4A1 вызывают ацидоз дистальных почечных канальцев (dRTA) и сфероцитарную гемолитическую анемию [16].SCL26A6 представляет собой анионообменник, экспрессирующийся на апикальной мембране многих тканей, включая почки и кишечник [17-20]. Среди своих транспортных активностей SLC26A6 служит основным путем секреции оксалатов [21]. Мыши, лишенные SLC26A6, имеют дефект кишечной секреции оксалатов, приводящий к усиленному чистому всасыванию оксалата [22]. SLC26A1, A2, A3 и A7 также могут участвовать в обмене оксалатов [23]. Кроме того, члены семейств генов SLC4 и SLC26 кодируют Na ⁺ -независимые обмены Cl ^— / HCO ₃ ^— , которые экспрессируются во многих тканях, включая почки и желудочно-кишечный тракт.Секреция и реабсорбция кислотно-основных эквивалентов и Cl ^— , обменники Cl ^— / HCO ₃ ^— регулируют внутриклеточный pH и уровни Cl ^— , а также объем клеток [17]. Далее, текущие знания о механизмах оксалатных обменников SLC4 и SLC26 будут обсуждены в связи с различными этиологическими типами мочекаменной болезни.

Источники оксалата

Оксалат с мочой получают как из экзогенных, так и из эндогенных источников, которые, в зависимости от рациона, могут в равной степени способствовать выведению оксалатов с мочой [2].Появились новые данные о том, что оксалаты с пищей могут составлять до 50–80% оксалатов, выделяемых с мочой [2, 24]. Экзогенные источники оксалатов — овощи, фрукты и чай. Продукты с высоким содержанием оксалатов: шпинат, ревень, чай, шпинат и соевые бобы. Эндогенные источники оксалата в основном синтезируются эритроцитами и печенью. Эндогенные источники оксалата включают аскорбиновую кислоту, белок (через метаболизм аминокислот тирозина, триптофана, фенилаланина и гидроксипролина) и непосредственные предшественники оксалата, такие как L-глицерат. гликолят и глиоксилат [25].Процесс синтеза оксалатов в эритроцитах неизвестен, а вклад катаболизма аскорбата в содержание оксалатов в моче является спорным [26-31]. Печень является основным источником эндогенного оксалата, а глиоксилат — основным непосредственным предшественником оксалата [32, 33]. Концентрация глиоксилата в основном регулируется многими путями. Глиоксилат может метаболизироваться в оксалат гликолатоксидазой или лактатдегидрогеназой, а глиоксилат является важным промежуточным продуктом в нескольких реакциях.Избыток глиоксилата усиливает метаболизм глиоксилата в оксалат, что приводит к гипероксалурии. Глиоксилат и аланин могут быть преобразованы в глицин и пируват, соответственно, посредством трансаминирования аланин / глиоксилат аминотрансферазой (AGT). AGT — это специфический для печени фермент, локализованный в пероксисомах, полная активность которого зависит от кофактора пиридоксина (витамин B ₆ ) [34]. Глицин метаболизируется в невод, а серин превращается в ОН-пируват, который метаболизируется гликоальдегидом с помощью глиоксилатредуктазы / ОН-пируватредуктазы (GRHPR).В конечном итоге гликоальдегид может метаболизироваться до глиоксилата в несколько этапов. Другой источник метаболизма глиоксилата — расщепление гидроксипролина [35] через 4-гидрокси-2-оксоглутарат альдолазу (HOGA1).

Этиология первичной гипероксалурии

Гипероксалурию обычно делят на следующие 2 категории: первичная гипероксалурия (PH) и вторичная гипероксалурия. В зависимости от рациона суточная экскреция оксалатов с мочой у здоровых людей составляет от 10 до 40 мг в сутки (0.1–0,45 ммоль за 24 ч) [36]. Концентрации более 40–45 мг в сутки (0,45–0,5 ммоль в сутки) считаются показателями клинической гипероксалурии [34]. ЛГ — это редкая врожденная ошибка метаболизма глиоксилата, которая приводит к высокому производству оксалата в основном печенью [37, 38], и ЛГ делится на следующие 3 класса: PH I, PH II, PHII. ЛГ I, составляющая большинство всех случаев (70–80%) [38], является пероксисомальным заболеванием и является наиболее тяжелым типом. Это вызвано мутациями в AGT [39], пероксисомном ферменте, расположенном в печени; это заболевание с генетическим дефектом и наследуется по аутосомно-рецессивному типу.Мутация или отсутствие AGT, приводящие к серьезному снижению ферментативной активности AGT в пероксисоме, вызывают усиление агрегации глиоксилата, который метаболизируется в оксалат с помощью гликолатоксидазы или лактатдегидрогеназы, что приводит к гипероксалурии. ЛГ II, составляющая около 10% случаев ЛГ, вызвана дефицитом цитозольного фермента печени GRHPR [40, 41]. Дефицит или мутация активности GRHPR у пациентов с Ph3 приводит к увеличению концентрации оксалата и L-глицерата в моче.Симптомы гипероксалурии, вызванной ЛГ II, менее выражены, чем симптомы, вызванные ЛГ I. Тяжелая гипероксалурия является клиническим признаком этих 2 типов ЛГ, с зарегистрированными значениями в диапазоне от 88 до 352 мг в 24 часа (1–4 ммоль в 24 часа). ) для PH I и 88 и 176 мг в 24 ч (1-2 ммоль в 24 ч) для PH II [42]. PH III, составляющая 10% случаев PH, вызвана дефицитом HOGA1, митохондриального фермента, который расщепляет 4-гидрокси-2-оксоглутарат на пируват и глиоксилат и является последней стадией пути деградации гидроксипролина [43].Потеря активности фермента HOGA1, ведущая к широкому диапазону повышения оксалатов в моче, является характеристикой PH III, которая становится более частой, чем Ph3, как причина PH. Все типы ЛГ, вызывающие нарушения оксалатного обмена в раннем детстве и подростковом возрасте, оказывают большое влияние на перенасыщение СаОх, что приводит к формированию нефрокальциноза / нефролитиаза. Возраст выявления ЛГ варьирует от рождения до шестого десятилетия жизни, в среднем 5,5 лет [44]. Кроме того, ЛГ может серьезно повредить функцию почек и затруднить диагностику ЛГ из-за отсутствия значимых симптомов и эффективных методов обследования.У некоторых пациентов с терминальной стадией почечной недостаточности CaOx, депонированный во многих органах со снижением функции почек и повышенным уровнем оксалатов в крови, вызывает системный оксалоз, включая метаболическое заболевание костей, анемию и кожные язвы.

Этиология вторичной гипероксалурии

Вторичная гипероксалурия включает множество аспектов, включая: (1) диету с высоким содержанием оксалатов (2) кишечную гипероксалурию, (3) оксалат-разлагающие микроорганизмы (4) и ионообменники SLC4 и SLC26.

Вторичная гипероксалурия — главный фактор риска мочекаменной болезни, которая может быть вызвана либо увеличением абсорбции оксалатов в кишечнике, либо потреблением диеты с высоким содержанием оксалатов [45].В течение многих лет считалось, что пищевой источник оксалатов вносит только 10–15% суточной экскреции оксалатов. Однако сообщалось, что диетические оксалаты могут составлять до 50–80% оксалатов, выделяемых с мочой [2, 24]. Ежедневное потребление оксалатов с пищей находится в диапазоне 0,05–0,2 г, но может превышать 1 г, если употребляются продукты, богатые оксалатами [46–48]. Некоторые продукты, включая клубнику, листовой шпинат, ревень, свеклу, орехи, пшеничные отруби, шоколад, чай, щавель, кунжут, карамболу, миндаль и кофе, имеют значительно высокие концентрации оксалатов [47, 49].Исследования показали, что достаточное количество кальция [50], особенно когда оно распределяется с пищей, защищает от риска образования камней CaOx у пациентов с камнеобразованием [51, 52], по-видимому, из-за взаимодействия и экскреции кальция с оксалатом. в желудочно-кишечном тракте. Предполагается, что прием магния снижает всасывание оксалатов и выведение с мочой почти так же эффективно, как кальций, путем связывания оксалатов в кишечнике [53]. Кроме того, гипомагнезиурия является известным фактором риска образования кальциевых камней, поскольку магний связывается с оксалатом и снижает насыщение мочи CaOx [54].Белок играет важную роль в процессе камнеобразования [55]. Некоторые аминокислоты, такие как L-гидроксипролин, являются предшественниками оксалата, который увеличивает концентрацию оксалата в моче и относительное перенасыщение CaOx и, по-видимому, увеличивает экскрецию оксалата почками [56].

Оксалат является эндогенным побочным продуктом метаболизма аминокислот, а также всасывается в желудке, тонкой кишке и толстой кишке [57]. Кишечная гипероксалурия — это форма вторичной гипероксалурии, вызванная заболеванием или резекцией желудочно-кишечного тракта, приводящим к синдромам мальабсорбции.Резекция тонкой кишки или воспалительное заболевание кишечника могут нарушить энтерогепатическую циркуляцию солей желчных кислот, что приводит к потере желчных кислот и мальабсорбции жиров, что приводит к влиянию стеатореи на движение оксалатов. Энтеральная гипероксалурия может иметь следующие 2 основных механизма: (1) изменение проницаемости оксалатов слизистой оболочки (как соли дигидроксил желчных кислот, так и жирные кислоты увеличивают проницаемость слизистой оболочки кишечника для оксалатов; перфузия слизистой оболочки толстой кишки крыс с помощью 5 мМ дезоксихолата натрия заметно увеличивает проницаемость толстой кишки). проницаемость для оксалата) [58] и (2) повышенная концентрация ионного оксалата в просвете (при мальабсорбции со стеатореей пищевой кальций связывается свободными жирными кислотами в просвете кишечника, поэтому с оксалатом связывается меньше кальция; комплексообразование жирных кислот с кальцием в просвете увеличивает количество растворимого оксалата, доступного для абсорбции, поскольку нерастворимые комплексы CaOx больше не образуются) [13].Следовательно, растворимый оксалат присутствует в относительно высоких концентрациях в толстой кишке и может пассивно диффундировать в кровь, где он фильтруется и выводится почками [61]. У ряда пациентов с резекцией тонкой кишки или воспалительным заболеванием кишечника высокая частота образования камней из СаОх. У пациентов с бариатрическими хирургическими вмешательствами это уже давно связано с более высокой частотой впервые возникшего нефролитиаза, при этом средний интервал от операции до диагностики нефролитиаза составляет от 1,5 до 3,6 лет [59–61].Риск нефролитиаза варьируется в зависимости от процедуры, он является самым высоким для процедур, связанных с нарушением всасывания (22–28,7%) [59, 62], что может привести к кишечной гипероксалурии. Связь между резекцией тонкой кишки и повышенной экскрецией оксалатов с мочой была впервые обнаружена в 1970 году [63]; впоследствии были зарегистрированы многочисленные случаи, и многие пациенты, перенесшие обходной желудочный анастомоз по Руссен-Y по поводу морбидного ожирения, имеют риск гипероксалурии, нефролитиаза и оксалатной нефропатии [64]. Кишечная гипероксалурия может вызвать CaOx-каменную болезнь, и, как и при ЛГ, экскреция оксалатов с мочой может быть достаточно высокой, чтобы вызвать повреждение почек и, в конечном итоге, терминальную стадию почечной недостаточности [65].

В течение нескольких десятилетий было признано, что кишечные микроорганизмы могут разлагать оксалат и снижать концентрацию оксалата в крови и моче. Существует множество бактерий, включая Enterococcus faecalis [66], Bifidobacterium infantis [67] и Oxalobacter formigenes [68]. Наиболее известным микроорганизмом, разлагающим оксалаты, является O. formigenes , грамотрицательная анаэробная бактерия, выделенная из фекалий человека и других животных, способная снижать всасывание оксалатов в кишечнике. O. formigenes потенциально метаболизирует оксалат с образованием формиата и CO ₂ посредством фермента формил-КоА трансферазы и фермента оксалил-КоА декарбоксилазы. Многие случаи и данные подтвердили, что O. formigenes играют важную роль в разложении оксалатов в кишечном тракте. В исследовании, отсутствие O. formigenses у камнеобразователей связано с повышением содержания оксалата в моче [69], а у камнеобразователей обычно более низкий уровень колонизации O.formigenses на больше, чем у некаменеющих [70-72]. Кроме того, бариатрическая хирургия, заболевания кишечника и пациенты с муковисцидозом могут ингибировать реколонизацию O. formigenses в просвете кишечника, что приводит к увеличению абсорбции свободного оксалата и концентрации оксалата в крови и моче.

Транспортеры SLC4

Семейство генов SLC4 включает 3 основные клады [73], включая Na ⁺ -независимый электронейтральный Cl ^— / HCO ₃ ^— обменников (SLC4A1 / AE1, SLC4A2 и SLC4A2 / AE4 / AE3), Na ⁺ -независимые переносчики HCO ₃ ^— транспортеры (электрогенные SLC4A4 / NBCel и SLC4A5 / NBCe2), электронейтральные Na ⁺ / HCO ₃ ^{/ SLCA4 / SLCA4 NBCn2) и Na + -2HCO ₃ — обменник (SLC4A8 / NDCBE) и SLC4A11 / BTR1.Все полипептиды SLC4 имеют общий структурный образец из 3 доменов. За N-концевым цитоплазматическим доменом из 400–700 аминокислот следует C-концевой политопный трансмембранный домен из ∼500 аминокислот и C-концевой цитоплазматический домен из ∼30–100 аминокислот [17]. Кроме того, анионообменники SLC4 участвуют в транспорте анионов, например, плазмалемма Cl — / HCO ₃ — обменники, которые регулируют внутриклеточный pH и Cl — и объем клеток и способствуют трансэпителиальной секреции и реабсорбции кислотно-основных эквиваленты и Cl — .Кроме того, сообщалось об обменниках SLC4, участвующих в транспорте оксалатов. SLC4A1, член обменников SLC4, был изучен в отношении транспорта оксалатов. Мы сосредоточимся на структуре и функциях SLC4A1.}

Ген SLC4A1 / AE1 человека, кодирующий анионообменник 1 (AE1 / band3), расположен на хромосоме 17q21-q22, занимает примерно 20 т.п.н. и состоит из 20 экзонов, разделенных 19 интронами [74]. SLC4A1 человека кодирует как эритроидную (eAE1 / band3), так и почечную (kAE1) изоформы белка AE1 с использованием различных промоторов и альтернативного сплайсинга.МРНК полосы 3 транскрибируется со всех экзонов его вышестоящим промотором, тогда как мРНК kAE1 транскрибируется промотором в интроне 3. Таким образом, в мРНК kAE1 отсутствуют последовательности экзонов 1–3 eAE1 и последовательности короче, чем eAE1, которые у человека инициируются при Met66. Белок полосы 3 человека или eAE1, состоящий из гликопротеина из 911 аминокислот, включает 2 различных структурных и функциональных домена, то есть N-концевой цитоплазматический домен 40 кДа и интегральный мембранный домен C-концевого участка 50 кДа. N-концевой цитозольный домен из остатков 1–360 взаимодействует с гемоглобином [75], гликолитическими ферментами [76] и белками цитоскелета, включая анкирин [77], белок 4.1 [78] и белок 4.2 [79], тогда как N-концевой цитоплазматический домен kAE1 (который на 65 аминокислот короче, чем у eAE1) не связывается с анкирином или гликолитическими ферментами и его взаимодействующими белками в a-интеркалированном ячейка еще предстоит идентифицировать. Тетрамеры eAE1 связываются с белками анкирина и цитоскелета. что имеет решающее значение для поддержания формы двояковогнутого диска эритроцитов. С-конец 50 кДа в тергальном мембранном домене с 12-13 трансмембранными остатками простирается от остатка 361 до остатка 882 и опосредует обмен Cl ^— / HCO ₃ ^— [80], в то время как область опосредованного оксалатом пока неизвестно.И eAE1, и kAE1 имеют короткий кислый цитоплазматический C-концевой хвост (остатки 883–911), содержащий сайты связывания для карбоангидразы (CA) II [81]. Идентичные C-концевые хвосты AE1 и kAE1 могут связываться с CAII через кислотный мотив (-LDADD-). Бикарбонат (HCO ₃ ^—) от разложения угольной кислоты (H ₂ CO ₃ ), образующийся при гидратации углекислого газа (CO ₂ ) под действием CA II, переносится через клеточную мембрану в обмен на хлорид (Cl ^— ) по AE1 [74].EAE1 эритроцитов, экспрессируемый в плазматической мембране эритроцитов, опосредует электронейтральный обмен 1: 1 многих анионов, в то время как Cl ^– и HCO ₃ ^– являются его основными физиологическими субстратами [82]. Было также подтверждено, что eAE1 опосредует обмен оксалата на Cl ^—. Кузен и Мотаис [93] показали, что различные обратимо действующие ингибиторы оказывают параллельное действие на Cl ^— -Cl ^— и оксалат-оксалатный обмен, предполагая, что транспорт оксалата эритроцитов опосредуется полосой 3, но характеристики транспорта оксалат через мембрану эритроцитов до сих пор неизвестен.Дженнингс и Адам [16] использовали низкую концентрацию H ₂ DIDS (4,4’-диизотиоцианатостильбен-2,2’-дисульфонат) с эритроцитами для изучения кинетики обмена оксалата и Cl ^—. Результаты показали, что eAE1 эритроцитов опосредует котранспорт H ⁺ / оксалат в электронейтральном обмене на Cl ^—, а очевидное сродство к Cl ^— в 2–3 раза выше, чем у оксалата. Кроме того, оксалат при низком внеклеточном pH переносится полосой 3 почти так же быстро, как Cl ^— при нейтральном pH.Чтобы изучить функциональные различия белка полосы 3 эритроцитов у пациентов с камнеобразованием и здоровых пациентов, Oehlschläger et al. [84] обнаружили, что концентрация транспортного белка полосы 3 эритроцитов у пациентов с камнеобразованием примерно в 2 раза выше, чем у здоровых пациентов, но потоки оксалата в плазме, клеточного оксалата и оксалата эритроцитов не отличаются у пациентов с камнеобразованием у мужчин по сравнению с нормальными. пациенты. Более того, в нормальных условиях (pH 7,55) отток оксалата у пациентов с камнеобразованием примерно в 2 раза выше, чем у здоровых пациентов in vivo.SLC4A1 может влиять на клеточные уровни оксалатов и клиренс оксалатов мочи посредством обмена Cl ^— / HCO ₃ ^— и уровней pH.

Полипептид SLC4A1 широко экспрессируется в эритроцитах и ​​в секретирующих кислоту интеркалированных клетках почечного собирательного канала. В эритроцитах eAE1 стабилизирует липидный бислой и его связь с анкирином и белками цитоскелета, чтобы поддерживать форму двояковогнутого диска эритроцитов. В почках интеркалированные клетки типа A реабсорбируют HCO ₃ ^— через апикальную экскрецию H ⁺ с мочой.Мутации или нокаут гена SLC4A1 человека подразделяются на эритроидный и почечный фенотип и связаны с рядом заболеваний человека. Одна групповая мутация eAE1 кодирует почти полностью бессимптомный полиморфизм, кодирующий антигены группы крови, распознаваемые антисывороткой пациента в интактных эритроцитах [85]. Самая большая группа мутаций или нокаут eAE1 может привести к наследственному сфероцитозу, распространенной аутосомно-доминантной наследственной сфероцитарной анемии с уменьшением осмотической хрупкости и площади поверхности.Наследственный сфероцитоз, вовлеченный во многие полипептиды, такие как E40K, G130R и L707P, может происходить из-за бессмысленных мутаций гена, сдвига рамки считывания и миссенс-мутаций SLC4A1. Многие мутантные аллели гена генерируют нестабильную мРНК, и образующиеся эритроциты экспрессируют пониженные уровни полипептида eAE1 дикого типа, часто в условиях дозовой компенсации аллелем дикого типа. Обычно эти пациенты имеют нормальный фенотип почечного закисления, но гомозиготная мутация SLC4A1 V488M может вызывать тяжелый наследственный сфероцитоз и dRTA [86].Клинические фенотипы широко варьируются: от бессимптомных пациентов до пациентов с тяжелой гемолитической анемией, требующей переливания крови [87]. Кроме того, овалоцитоз в Юго-Восточной Азии — это морфологическая аномалия эритроцитов, вызванная мутационной делецией 27 п.н. в экзоне 11 SLC4A1, ведущей к делеции 9-аминокислот в рамке считывания с участием Ala400-Ala408 eAE1 на стыке между N-концом домен и первый трансмембранный промежуток [88]. Делеция Ala400-Ala408 из eAE1 нарушает встраивание мутантного белка в мембрану [89].Мутантный белок неактивен для функции транспорта анионов и снижает способность к образованию эритроцитов за счет образования олигомеров. Гомозиготная мутация является полностью летальной in utero при отсутствии экстраординарного медицинского вмешательства [90], в то время как гетерозиготная мутация проявляет неактивность в отношении транспорта анионов и жесткости мембран. Гетерозиготная мутация овалоцитоза SLC4A1 Юго-Восточной Азии не вызывает dRTA [91]. Однако мутации или нокаут kAE1 могут вызывать dRTA. dRTA — это заболевание, связанное с нарушением закисления мочи, которое вызвано недостаточной экскрецией чистой кислоты с мочой интеркалированными клетками почек типа А.Интеркалированные клетки типа A опосредуют реабсорбцию бикарбоната в кровь в обмен на хлорид, а протоны переносятся в мочу апикальным V-типом H ⁺ . Пациенты с dRTA нарушают секрецию кислоты и показывают повышенный pH мочи даже после введения кислоты. Эти пациенты с dRTA более подвержены мочекаменной болезни, чем здоровые люди. При заболевании почек dRTA бывает доминантной и рецессивной [92]. Доминантные мутанты kAE1, такие как R589Q, могут образовывать гетеродимеры с AE1 дикого типа и сохранять белок широкого типа в эндоплазматическом ретикулуме [93].Гомозиготные мутанты kAE1, такие как s773p [94], вызывающие рецессивный почечный канальцевый ацидоз, нарушают перенос белков на поверхность клетки. Составные гетерозиготные рецессивные мутанты, такие как G701D и A858D kAE1, могут образовывать гетеродимеры, которые преимущественно удерживаются в эндоплазматическом ретикулуме [95], в то время как гетеродимеры с белком дикого типа могут перемещаться к плазматической мембране в трансфицированных почках эмбриона человека. Недавно разработанный метод плавления с высоким разрешением является эффективным и воспроизводимым для обнаружения мутаций и полиморфизмов SLC4A1 [96], что упрощает диагностику dRTA, вызванного SLC4A1.

Транспортеры SLC26

Изоформы SLC26 составляют консервативное семейство анионных транспортеров с 10 отдельными членами [97], включая SLC26A1, SLC26A2, SLC26A3, SLC26A4, SLC26A5, SLC26A6, SLC26A7, SLC26A8 и SLC26A9. SLC26A10 является псевдогеном и поэтому не участвует. Полипептиды SLC26 характеризуются N-концевыми цитоплазматическими доменами, 10–14 гидрофобными трансмембранными промежутками и C-концевыми цитоплазматическими STAS доменами и, по-видимому, являются гомоолигомерными [24]. Семейство генов SLC26, за исключением SLC26A5 / prestin, кодирует многофункциональный анион обменники и каналы, по которым транспортируются количества субстратов, включая Cl ^— , HCO ₃ ^— , оксалат, сульфат и формиат.Некоторые члены семейства SLC26 могут конкретно функционировать как Cl ^— / HCO ₃ ^—, включая SLC26A3, SLC26A4, SLC26A6, SLC26A7, SLC26A9 и SLC26A9. Члены семейства SLC26, включая SLC26A1, SLC26A2, SLC26A3, SLC26A6 и SLC26A7, могут участвовать в транспорте оксалатов.

SLC26A1 / Sat1, первый член семейства SLC26, был клонирован из печени крысы [98] и локализован на базолатеральной плазматической мембране гепатоцитов и клетках проксимальных канальцев почек (сегменты S1, S2 и S3). соответственно [99, 100].Ген SLC26A1 / Sat1 человека картирован на хромосоме 4p 16.3 [101]. SLC26A1 / Sat1 представляет собой анионообменник для сульфата и бикарбоната, который способен опосредовать транспорт оксалата, а сродство к оксалату ниже, чем к противоанионам. Некоторые исследования на крысах и мышах показали, что гендерные различия в экспрессии SLC26A1 / Sat1 с преобладанием мужской экспрессии могут объяснять заболеваемость оксалатным мочекаменным заболеванием у мужчин и женщин. Исследование SLC26A1 / Sat1 на крысах показало, что самцы крыс по сравнению с самками крыс демонстрируют более высокие уровни оксалата в плазме, более высокую почечную экспрессию SLC26A1 / Sat1 и более высокую экскрецию оксалата с мочой [102].У крыс, получавших этиленгликоль, самки крыс демонстрировали бодрствующую оксалемию и отсутствие оксалурии по сравнению с самцами крыс, у которых наблюдалась гипероксалиемия, гипероксалурия и оксалатный мочекаменная болезнь за счет повышения экспрессии белков печеночного и почечного транспортера оксалата SCL26A1 / Sat1 [103]. У людей заболеваемость мочекаменной болезнью в 2–3 раза выше у пациентов мужского пола среднего возраста (возраст 30–59 лет), но одинакова для обоих полов у молодых и пожилых пациентов [104]. Эти исследования показали, что половые гормоны могут способствовать развитию оксалатного нефролитиаза у людей и крыс в зависимости от пола.Исследования на SLC26A1 / Sat1-нулевых мышах продемонстрировали, что Sat1 играет важную роль в гомеостазе как сульфата, так и оксалата [105]. Slc26A1 / Sat1-нулевые мыши имеют гипероксалиемию: уровень оксалата в плазме выше у Sat1-нулевых мышей, чем у мышей Sat1 дикого типа, а у Sat1-нулевых мышей наблюдается гипероксалиемия, гипероксалурия и кальциевый мочекаменный болезнь. Потеря SLC26A1 / Sat1 приводит не только к образованию мочевых камней и вызванной лекарствами гепатотоксичности, но также к гипосульфатемии, гиперсульфатурии и усилению гепатотоксичности у SLC26A1 / Sat1-нулевых мышей [106].Недавние исследования показали, что мутации SLC26A1 могут вызывать рецессивную менделевскую форму нефролитиаза [107].

SLC26A2 / переносчик сульфата диастрофической дисплазии (DTDST) был впервые идентифицирован путем позиционного клонирования как ген, лежащий в основе аутосомно-рецессивной диастрофической дисплазии [108]. У человека SLC26A2 / DTDST содержит 3 экзона и кодирует белок из 739 аминокислот. SLC26A2 / DTDST представляет собой DTDST и располагается на апикальной мембране тонкой кишки крысы, проксимальных канальцах крысы, толстой кишке человека и заметно в хондроцитах.SLC26A2 / DSDST может опосредовать SO ₄ ^2–, Cl ^–, HCO ₃ ^– и транспорт оксалатов [109]. Обмен SO ₄ ^2– на SLC26A2 / DSDST имеет решающее значение для развития и функции хряща [110], а функция SLC26A2 / DSDST в хондроцитах не может быть компенсирована каким-либо другим SLC26 SO ₄ ^2– транспортеров, таких как вездесущие SCL26A1 и SLC26A6 или SLC26A3 [111, 118]. Мутации в SLC26A2 / DSDST связаны с диастрофической дисплазией [112].Особенности заболевания обычно объясняются отсутствием транспорта SO ₄ ^2–, который необходим для сульфатирования белков внеклеточного матрикса, а нокдаун и сверхэкспрессия SLC26A2 / DSDST выявили важную роль SLC26A2 / DSDST в хондроцитах. дифференциация и созревание [113]. Некоторые результаты показали, что свойства транспорта оксалата очень похожи на свойства транспорта SO ₄ ^2–, но скорость транспорта оксалата примерно на 50% ниже, чем скорость транспорта SO ₄ ^2– [114].Кроме того, SLC26A2 вряд ли играет важную роль в метаболизме оксалатов в толстой кишке или почках [114]; ни у мышей, ни у пациентов с хондродисплазией SLC26A2 не было отмечено ни гипероксалурии, ни литиаза.

SLC26A3 / DRA (подавленный в аденоме) был впервые идентифицирован как кандидатный ген-супрессор опухоли [115]. SLC26A3 / DRA экспрессируется на апикальной мембране энтероцитов человека и опосредует транспорт оксалатов Cl ^— , HCO ₃ ^— , OH ^— .Недавние исследования показали, что делеция SLC26A3 / DRA у мышей с нокаутом приводит к значительному снижению экскреции оксалатов с мочой и концентраций оксалатов в сыворотке [116], предполагая, что SLC26A3 / DRA играет решающую роль в транспорте оксалатов в энтероцитах, уменьшая слизистую оболочку. транспорт оксалатов к серозе в подвздошной и толстой кишке. Заболевания человека связаны с мутациями SLC26A3 / DRA, такими как врожденная диарея с потерей хлоридов, которая характеризуется водянистым стулом с избытком хлоридов и метаболическим алкалозом [117].Мыши, лишенные SLC26A3 / DRA, демонстрируют пониженную транспортную способность Cl ^— / HCO ₃ ^— в эпителии толстой кишки, что приводит к кислой диарее с содержанием хлоридов, уменьшению объема и задержке роста [118].

SLC26A6 / PAT1 был впервые клонирован гомологично от человека [19], охватывая 21 кодирующий экзон и около 10 т.п.н. геномной ДНК. Экспрессия гена SLC26A6 / PAT1 человека на хромосоме 3p21 человека [18] широко распространена со значительным количеством транскриптов в нескольких эпителиальных и неэпителиальных тканях [119], включая кишечник, проксимальные канальцы почек и сердце.SLC26A6 / PAT1 — это многофункциональный режим анионного обмена с участием Cl ^— , HCO ₃ ^— , сульфата, гидроксила и оксалата. Опосредованный SLC26A6 мыши обмен Cl ^— / формиат является электронейтральным [120], тогда как Cl ^— / оксалат является электронным [121]. SLC26A6 / PAT1 экспрессируется на апикальной мембране во многих тканях желудочно-кишечного тракта, включая поджелудочную железу и тонкий кишечник [19]. SLC26A6 / PAT1 экспрессируется на высоких уровнях в тонкой кишке (на эквивалентных уровнях в двенадцатиперстной и тощей кишках и на более низких уровнях в подвздошной кишке) с гораздо более низкими уровнями экспрессии в толстой кишке [21].Недавно было обнаружено, что мыши с нокаутом SLC26A6 имеют пониженную (50-75%) кишечную секрецию оксалата и повышенное чистое количество оксалата, абсорбируемого в желудочно-кишечном тракте, а не чистую секрецию оксалата проксимальными канальцами, повышая содержание оксалата в плазме и вызывая гипероксалурия. Более того, у мышей с нокаутом SLC26A6 в моче присутствуют оксалатно-кальциевые камни, тогда как у мышей дикого типа двулучепреломляющие отложения в почках отсутствуют. Это исследование подтверждает тот факт, что SLC26A6 / PAT1 является основным транспортером, секретирующим оксалат, и может быть новой мишенью для лечения камней CaOx в желудочно-кишечном тракте.SLC26A6 / PAT1 человека имеет более низкое сродство к внеклеточному Cl ^–, а обмен Cl ^– -оксалата, по-видимому, является электронейтральным, что позволяет предположить, что секреция оксалата в кишечнике человека менее эффективна по сравнению с мышами, не содержащими SLC26A6 [121].

SLC26A7 клонировали на основании гомологии с другими изоформами SLC26 [122]. У человека SLC26A7 отображается на хромосоме 8 и кодирует белок из 656 аминокислот. Сообщалось, что SLC26A7 проявляет Cl ^—, HCO ₃ и активность обмена оксалата.SLC26A7 локализован на базолатеральной мембране париетальных клеток желудка и базолатеральной мембране интеркалированных клеток типа А собирательного канала почек [123]. Механизм оксалатного транспорта SLC26A7 неизвестен, но транспорт может участвовать в отложении кристаллов CaOx в просветах мозговых собирательных каналов у гипероксалурических крыс [124]. Кроме того, одно исследование показало, что транспорт оксалата через эпителиальную мембрану сосочков может быть вовлечен в отложение кристаллов CaOx на бляшках Рэндалла [125].SLC26A7-нулевые мыши отличались dRTA и гипохлоргидрией желудка [126] из-за пониженной базолатеральной анионообменной активности Cl ^— -HCO ₃ ^— .

Заключение

Транспорт оксалатов в организме человека, включая кишечник, эритроциты и почки) затруднен. Существует множество факторов, которые могут изменить нормальный способ транспорта оксалатов, способствуя повышению концентрации оксалатов в крови и моче и увеличивая частоту образования камней CaOx.Однако важно знать, что транспортеры анионного обмена SLC26 и SLC4 играют незаменимую роль в поддержании оксалатного гомеостаза. В будущем транспортеры анионного обмена SLC26 и SLC4 могут стать новыми мишенями для лечения камней CaOx. Наше следующее исследование будет посвящено взаимосвязи камней CaOx и переносчиков анионного обмена.

Благодарность

Спасибо профессору YuChen Liu за редактирование языка.

Заявление о раскрытии информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Источники финансирования

Нет.

Вклад авторов

И Хуанг, Цзэ Пай Чи и Ру Хуанг являются первыми авторами. Юн Хай Чжан является автором-корреспондентом. И Хуанг подготовил этот документ. Цзэ Пай Чи и Ру Хуанг внесли свой вклад в переработку этого документа на предмет важного содержания. Юн Хай Чжан отредактировал и одобрил окончательную версию этого документа. Все авторы прочитали и одобрили окончательную версию этой статьи.

Список литературы

1. Ли Ю. Х., Чжан Дж., Лю Х. Я.Куркумин улучшает вызванное глиоксилатом отложение оксалата кальция и почечные повреждения у мышей. Фитомедицина. 2019 Август; 61: 152861.
2. Холмс Р.П., Гудман ХО, Ассимос Д.Г. Вклад диетических оксалатов в экскрецию оксалатов с мочой. Kidney Int. 2001 Янв; 59 (1): 270–6.
3. Ортис Ю.В., Арестин С.Ч., Медина П.Г., Торрес П.П.Мочекаменная болезнь: популяционный анализ и состав. Clin Chim Acta. 2019; 493: S460–92.
4. Лю Ю., Чен Ю.Т. Эпидемиология мочекаменной болезни в Азии. Азиатский Дж. Урол. 2018 Октябрь; 5 (4): 205–14.
5. Пеннистон KL, McLaren ID, Greenlee RT, Nakada SY.Мочекаменная болезнь в сельской местности штата Висконсин с 1992 по 2008 год: сужение соотношения мужчин и женщин. J Urol. 2011 Май; 185 (5): 1731–6.
6. Цуджихата М. Механизм образования почечных камней оксалатом кальция и повреждение клеток почечных канальцев. Int J Urol. Февраль 2008; 15 (2): 115–20.
7. Ивановский О., Дрюке ТБ.Новая эра в лечении камней из оксалата кальция? Kidney Int. 2013 июнь; 83 (6): 998–1000.
8. Шуберт Г. Каменный анализ. Urol Res. 2006 Апрель; 34 (2): 146–50.
9. Холмс Р.П., Ассимос Д.Г.Влияние диетических оксалатов на образование камней в почках. Urol Res. 2004 Октябрь; 32 (5): 311–6.
10. Холмс Р.П., Амброзиус В.Т., Ассимос Д.Г. Диетические оксалатные нагрузки и обращение с оксалатами почек. J Urol. 2005 сентябрь; 174 (3): 943–7.
11. Люк M, Freel RW.Роль и механизмы кишечного транспорта оксалатов в гомеостазе оксалатов. Семин Нефрол. Март 2008 г .; 28 (2): 143–51.
12. Worcester EM. Камни от болезней кишечника. Endocrinol Metab Clin North Am. 2002 декабрь; 31 (4): 979–99.
13. Lieske JC, Kumar R, Collazo-Clavell ML.Нефролитиаз после бариатрических операций по поводу ожирения. Семин Нефрол. Март 2008 г .; 28 (2): 163–73.
14. Клета Р. Ключевой камень полицейского регулирует гомеостаз оксалатов. Нат Жене. 2006 Апрель; 38 (4): 403–4.
15. Дженнингс М.Л., Адам М.Ф.Характеристика транспорта оксалатов белком полосы 3 эритроцитов человека. J Gen Physiol. 1996, январь; 107 (1): 145–59.
16. Alper SL. Молекулярная физиология анионитов SLC4. Exp Physiol. Январь 2006 г., 91 (1): 153–61.
17. Waldegger S, Moschen I., Ramirez A, Smith RJ, Ayadi H, Lang F, et al.Клонирование и характеристика SLC26A6, нового члена семейства гена носителя 26 растворенного вещества. Геномика. 2001 февраль; 72 (1): 43–50.
18. Lohi H, Kujala M, Kerkelä E, Saarialho-Kere U, Kestilä M, Kere J. Картирование пяти новых предполагаемых генов переносчиков анионов у человека и характеристика SLC26A6, гена-кандидата для анионообменника поджелудочной железы.Геномика. 2000 ноя; 70 (1): 102–12.
19. Knauf F, Yang CL, Thomson RB, Mentone SA, Giebisch G, Aronson PS. Идентификация хлорид-формиатного обменника, экспрессируемого на мембране щеточной каймы клеток проксимальных канальцев почек. Proc Natl Acad Sci USA. Июль 2001 г .; 98 (16): 9425–30.
20. Ван З., Петрович С., Манн Э., Сулеймани М.Идентификация апикального обменника Cl (-) / HCO3 (-) в тонком кишечнике. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2002 Март; 282 (3): G573–9.
21. Мукайбо Т., Мунемаса Т., Джордж А.Т., Тран Д.Т., Гао Х, Херче Д.Л. и др. Апикальный анионообменник Slc26a6 способствует секреции оксалата ацинарными клетками подчелюстных желез мышей.J Biol Chem. 2018 апр; 293 (17): 6259–68.
22. Цзян З., Асплин Дж. Р., Эван А. П., Раджендран В. М., Веласкес Х., Ноттоли Т. П. и др. Оксалат кальция мочекаменная болезнь у мышей, лишенных транспортера анионов Slc26a6. Нат Жене. 2006 Апрель; 38 (4): 474–8.
23. Альпер С.Л., Шарма А.К.Семейство генов SLC26 переносчиков и каналов анионов. Мол Аспекты Мед. 2013 апрель-июнь; 34 (2-3): 494–515.
24. Ассимос Д.Г., Холмс Р.П. Роль диеты в терапии мочекаменной болезни. Urol Clin North Am. 2000 Май; 27 (2): 255–68.
25. Фарг С., Найт Дж., Холмс Р.П., Рамсби Дж., Дэнпур СиДжей.Влияние вариантов аланин: глиоксилатаминотрансферазы и чувствительности к пиридоксину на метаболизм оксалатов в клеточном анализе цитотоксичности. Biochim Biophys Acta. 2016 июнь; 1862 (6): 1055–62.
26. Чай В., Либман М., Кинаст-Гейлс С., Месси Л. Поглощение оксалатов и эндогенный синтез оксалатов из аскорбата в образователях оксалата кальция и образователях камней, не образующих камни.Am J Kidney Dis. 2004 декабрь; 44 (6): 1060–9.
27. Massey LK, Liebman M, Kynast-Gales SA. Аскорбат увеличивает риск оксалурии и образования камней в почках. J Nutr. Июль 2005 г., 135 (7): 1673–7.
28. Тейлор Э. Н., Штампфер М. Дж., Курхан Г. К..Факторы питания и риск возникновения камней в почках у мужчин: новые данные после 14 лет наблюдения. J Am Soc Nephrol. 2004 декабрь; 15 (12): 3225–32.
29. Ауэр Б.Л., Ауэр Д., Роджерс А.Л. Влияние приема аскорбиновой кислоты на биохимические и физико-химические факторы риска, связанные с образованием камней в почках из оксалата кальция.Clin Chem Lab Med. 1998 Март; 36 (3): 143–147.
30. Hatch M, Mulgrew S, Bourke E, Keogh B, Costello J. Влияние мегадоз аскорбиновой кислоты на сыворотку и мочевой оксалат. Eur Urol. 1980. 6 (3): 166–9.
31. Ауэр Б.Л., Ауэр Д., Роджерс А.Л.Относительная гипероксалурия, кристаллурия и гематурия после приема мегадоз витамина С. Eur J Clin Invest. 1998 Сен; 28 (9): 695–700.
32. Бейкер П.Р., Крамер С.Д., Кеннеди М., Ассимос Д.Г., Холмс Р.П. Гликолят и метаболизм глиоксилата в клетках HepG2. Am J Physiol Cell Physiol. 2004 ноябрь; 287 (5): C1359–65.
33. Бехнам Дж. Т., Уильямс Э. Л., Бринк С., Рамсби Дж., Дэнпур Си Джей. Реконструкция метаболических путей глиоксилата гепатоцитов человека в стабильно трансформированных клетках яичников китайского хомячка. Biochem J. 2006 Mar; 394 (Pt 2): 409–16.
34. Marengo SR, Romani AM.Оксалат при почечно-каменной болезни: конечный метаболит, который просто никуда не денется. Нат Клин Практ Нефрол. Июль 2008 г .; 4 (7): 368–77.
35. Рыцарь Дж., Цзян Дж., Ассимос Д.Г., Холмс Р.П. Проглатывание гидроксипролина и экскреция оксалатов и гликолатов с мочой. Kidney Int. 2006 декабрь; 70 (11): 1929–34.
36. Робин С., Хоппе Б., Вервет Б.А., Д’Хэз П.С., Ферхюльст А. Гипероксалурия: ось кишечник-почки? Kidney Int. 2011 декабрь; 80 (11): 1146–58.
37. Хоппе Б., Бек ББ, Миллинер Д.С.Первичная гипероксалурия. Kidney Int. 2009 июнь; 75 (12): 1264–71.
38. Danpure CJ. Молекулярная этиология первичной гипероксалурии 1 типа: новые направления лечения. Am J Nephrol. 2005 Май-июнь; 25 (3): 303–10.
39. Вуд Д.К., Холмс Р.П., Эрбе Д.Снижение экскреции оксалата с мочой на мышиных моделях первичной гипероксалурии путем ингибирования РНК-интерференции активности лактатдегидрогеназы печени. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis. 1 сентября 2019 г .; 1865 (9): 2203–09.
40. Бобровский А.Е., Лангман CB. Первичная гипероксалурия.Семин Нефрол. Март 2008 г., 28 (2): 152–62.
41. Леуманн Э., Хоппе Б. Первичные гипероксалурии. J Am Soc Nephrol. 2001 Сен; 12 (9): 1986–93.
42. Де Бро МЭ, Портер Г.А.Глава 32: Оксалат. В: De Broe ME, Porter GA, редакторы. Клинические нефротоксины: почечная травма от наркотиков и химических веществ. 3-е изд. Нью-Йорк, Нью-Йорк, США: Springer; 2008. С. 749–56.
43. Phang JM, Hu CA, Valle D. Нарушения метаболизма пролина и гидроксипролина. В: Scriver CR, Beaudet AL, Sly WS, Valle D, Childs B, редакторы.Метаболические и молекулярные основы наследственного заболевания. 8-е изд. Нью-Йорк: Макгроу-Хилл; 2001. с. 1821–38.
44. Кочат П., Рамсби Г. Первичная гипероксалурия. N Engl J Med. 2013 август; 369 (7): 649–58.
45. Siener R, Bade DJ, Hesse A, Hoppe B.Диетическая гипероксалурия не уменьшается при лечении молочнокислыми бактериями, J Transl Med. 2013; 11: 306e313.
46. Siener R, Schade N, Nicolay C. Эффективность диетического вмешательства на факторы риска мочевого образования камней у пациентов с рецидивирующими камнями из оксалата кальция. J Urol.2005; 173: 1601e1605.
47. Siener R, Honow R, Voss S, Seidler A, Hesse A. Содержание оксалатов в зерновых и зерновых продуктах, J Agric Food Chem. 2006; 54: 3008e3011.
48. Тейлор Э. Н., Курхан Г. С..Потребление оксалатов и риск нефролитиаза, J Am Soc Nephrol. 2007; 18: 2198e2204.
49. Дункан С.Х., Ричардсон А.Дж., Каул П., Холмс Р.П., Эллисон и М.Дж., Стюарт С.С. О. Формиген и его потенциальная роль в здоровье человека. Appl Environ Microbiol. 2002; 68: 3841e3847.
50. Борги Л., Скианки Т., Мески Т., Герра А., Аллегри Ф, Маджоре У и др.Сравнение двух диет для профилактики рецидивов камней при идиопатической гиперкальциурии. N Engl J Med. 2002 Янв; 346 (2): 77–84.
51. Domrongkitchaiporn S, Sopassathit W, Stitchantrakul W, Prapaipanich S, Ingsathit A, Rajatanavin R. График приема кальциевых добавок и риск нефролитиаза.Kidney Int. 2004 Май; 65 (5): 1835–41.
52. де ОГ Мендонса С., Мартини Л.А., Баксманн А.С., Нишюра Дж.Л., Куппари Л., Сигулем Д.М. и др. Влияние оксалатной нагрузки на экскрецию оксалатов с мочой у лиц, образующих кальциевые камни. J Ren Nutr. 2003, январь; 13 (1): 39–46.
53. Либман М., Коста Г.Влияние кальция и магния на экскрецию оксалатов с мочой после оксалатных нагрузок. J Urol. 2000 Май; 163 (5): 1565–9.
54. Хорнбергер Б., Боллнер МР. Камни в почках. Врач Ассист Клин. 2018; 3 (1): 37–54.
55. Каналес Б.К., Андерсон Л., Хиггинс Л., Слейтон Дж., Робертс К.П., Лю Н. и др.Второй приз: комплексный протеомный анализ матрикса почечных камней человека моногидрата оксалата кальция. J Endourol. 2008 июн; 22 (6): 1161–7.
56. Mendonca FS, Pedreira RS. Потребление гидроксипролина и крахмала и перенасыщение мочи оксалатом кальция у кошек. Anim Feed Sci Technol.2018; 18: S0377.
57. Наззал Л., Пури С., Гольдфарб Д.С. Кишечная гипероксалурия: важная причина терминальной стадии болезни почек, Nephrol Dial Transpl. 2016; 31: 375e382
58. Доббинс Дж. В., Биндер Х. Дж.Влияние солей желчных кислот и жирных кислот на абсорбцию оксалата толстой кишкой. Гастроэнтерология. Июнь 1976 г .; 70 (6): 1096–100.
59. Синха МК, Коллазо-Клавелл М.Л., Правило А, Миллинер Д.С. Гипероксалурический нефролитиаз является осложнением операции шунтирования желудка по Ру. Kidney Int. 2007; 72: 100e107,
60. Асплин-младший, Коу, Флорида.Гипероксалурия у почечно-камнеобразователей, леченная с помощью современной бариатрической хирургии. J Urol. 2007; 177: 565e569
61. Дуррани О., Моррисро С., Джекман С., Аверч Т. Анализ каменной болезни у пациентов с болезненным ожирением, перенесших операцию обходного желудочного анастомоза. J Endourol. 2006; 20: 749e752,
62. Requarth JA, Burchard KW, Colacchio TA, Stukel TA, Mott LA, Greenberg ER, et al.Долгосрочные осложнения после тощего шунтирования: сохраняющаяся потенциальная потребность в хирургическом вмешательстве. Arch Surg. 1995 Март; 130 (3): 318–25.
63. Кей М.С., Стрим С.Б., Зал PM. Кишечная гипероксалурия, связанная с оттоком наружных желчевыводящих путей. J Urol. 1994 Февраль; 151 (2): 396–7.
64. Даффи Б.Г., Алани С.Гипероксалурия является долгосрочным следствием желудочного обходного анастомоза по Ру: двухлетнее проспективное продольное исследование. Амстердам: Elsevier; 2010. п. 211
65. Моле Д.Р., Томсон С.Р., Мортенсен Н., Виньярлз К.Г. Почечные осложнения тощено-подвздошного шунтирования при ожирении. QJM. 2001 февраль; 94 (2): 69–77.
66. Hokama S, Honma Y, Toma C, Ogawa Y. Enterococcus faecalis, разлагающий оксалаты. Microbiol Immunol. 2000. 44 (4): 235–40.
67. Campieri C, Campieri M, Bertuzzi V, Swennen E, Matteuzzi D, Stefoni S, et al.Уменьшение оксалурии после перорального приема молочнокислых бактерий в высокой концентрации. Kidney Int. 2001 сентябрь; 60 (3): 1097–105.
68. Туркмен К, Эрдур FM. Взаимосвязь между колонизацией щавелевой кислотой Oxalobacter formigenes в сыворотке и эндотелиальной дисфункцией у гемодиализных пациентов: от нарушения ободочной кишки до нарушения эндотелия.Мед-гипотезы. 2015 Март; 84 (3): 273–5.
69. Квак С., Ким Х. К., Ким Е. С., Чой М. С., Ким Х. Х. Уровни оксалатов в моче и кишечные бактерии Oxalobacter formigenes у пациентов с оксалатно-кальциевой мочекаменной болезнью. Eur Urol. 2003 Октябрь; 44 (4): 475–81.
70. Кумар Р., Мукерджи М., Бхандари М., Кумар А., Сидху Х., Миттал Р.Д.Роль Oxalobacter formigenes в оксалатнокаменной болезни кальция: исследование из Северной Индии. Eur Urol. 2002 Март; 41 (3): 318–22.
71. Троксель С.А., Сидху Х., Каул П., Низкий РК. Кишечная колонизация Oxalobacter formigenes у образующих камни оксалата кальция и ее связь с оксалатом мочи.J Endourol. 2003 Апрель; 17 (3): 173–6.
72. Миками К., Акакура К., Такеи К., Уэда Т., Мизогучи К., Нода М. и др. Связь отсутствия кишечных бактерий, разлагающих оксалат, с образованием камней из оксалата кальция в моче. Int J Urol. 2003 июн; 10 (6): 293–6.
73. Alper SL.Генетические заболевания кислотно-основных переносчиков. Annu Rev Physiol. 2002. 64 (1): 899–923.
74. Yenchitsomanus PT, Kittanakom S, Rungroj N, Cordat E, Reithmeier RA. Молекулярные механизмы аутосомно-доминантного и рецессивного дистального почечного канальцевого ацидоза, вызванного мутациями SLC4A1 (AE1).J Mol Genet Med. 2005 ноя; 1 (2): 49–62.
75. Басу А., Чакрабарти А. Белки, взаимодействующие с гемоглобином, и последствия взаимодействия спектрина с гемоглобином. J Proteomics. 2015 октябрь; 128: 469–75.
76. Чу Х, низкий PS.Картирование сайтов связывания гликолитических ферментов на полосе эритроцитов человека 3. Biochem J. 2006 Nov; 400 (1): 143–51.
77. Чанг Ш., Низкий PS. Идентификация критической анкирин-связывающей петли на цитоплазматическом домене полосы 3 мембраны эритроцитов с помощью анализа кристаллической структуры и сайт-направленного мутагенеза.J Biol Chem. 2003 февраль; 278 (9): 6879–84.
78. Ломбардо CR, Уиллардсон BM, Низкий PS. Локализация сайта связывания белка 4.1 на цитоплазматическом домене полосы мембраны эритроцита 3. J. Biol Chem. 1992 Май, 267 (14): 9540–6.
79. Низкий PS.Структура и функция цитоплазматического домена полосы 3: центр взаимодействия мембраны эритроцита с периферическим белком. Biochim Biophys Acta. 1986 сентябрь; 864 (2): 145–67.
80. Groves JD, Tanner MJ. Исследования топологии с биосинтетическими фрагментами идентифицируют взаимодействующие трансмембранные области анионообменника красных клеток человека (полоса 3; AE1).Biochem J. 1999 Dec; 344 (Pt 3): 687–97.
81. Винс Дж. У., Райтмайер Р. А.. Карбоангидраза II связывается с карбоксильным концом полосы 3 человека, С1- / НСО3-обменником эритроцитов. J Biol Chem. Октябрь 1998 г., 273 (43): 28430–7.
82. Alper SL.Молекулярная физиология и генетика Na + -независимых анионитов SLC4. J Exp Biol 2009; 212: 1672–83.
83. Кузен Дж. Л., Мотаис Р. Ингибирование проницаемости анионов амфифильными соединениями в эритроцитах человека: доказательства взаимодействия нифлумовой кислоты с белком полосы 3.J Membr Biol. 1979, апрель; 46 (2): 125–53.
84. Oehlschläger S, Fuessel S, Meye A, Herrmann J, Lotzkat U, Froehner M и др. Важность переносчика анионов полосы III эритроцитов (SLC4A1) для клиренса оксалата у пациентов с камнеобразованием моногидрата оксалата кальция по сравнению с нормальным контролем.Урология. 2011 Янв; 77 (1): 250.e1–5.
85. Alper SL. Молекулярная физиология анионитов SLC4. Exp Physiol. 2006; 91: 153–61.
86. Ribeiro ML, Alloisio N, Almeida H, Gomes C, Texier P, Lemos C и др.Тяжелый наследственный сфероцитоз и ацидоз дистальных почечных канальцев, связанные с полным отсутствием полосы 3. Кровь. 2000 августа; 96 (4): 1602–4.
87. Тромпетер S, король MJ. Наследственный сфероцитоз. Педиатр детского здоровья. 2019; 8: 368–79.
88. Яролим П., Палек Дж., Амато Д., Хассан К., Сапак П., медсестра Г. Т. и др.Делеция гена 3 полосы эритроцитов при устойчивом к малярии овалоцитозе в Юго-Восточной Азии. Proc Natl Acad Sci USA. 1991 декабрь; 88 (24): 11022–6.
89. Cheung JC, Li J, Reithmeier RA. Топология трансмембранных сегментов 1-4 в человеческом хлорид / бикарбонатном анионообменнике 1 (AE1) путем сканирования мутагенеза N-гликозилирования.Biochem J., август 2005 г .; 390 (Pt 1): 137–44.
90. Пикард В., Пруст А., Эвейяр М., Флатт Дж. Ф., Куэк М. Л., Кайо Дж. И др. Гомозиготный овалоцитоз Юго-Восточной Азии — тяжелая дизеритропоэтическая анемия, связанная с ацидозом дистальных почечных канальцев. Кровь. 2014 Март; 123 (12): 1963–5.
91. Брюс LJ, Wrong O, Toye AM, Young MT, Ogle G, Ismail Z и др.Мутации группы 3, почечный канальцевый ацидоз и овалоцитоз Юго-Восточной Азии в Малайзии и Папуа-Новой Гвинее: потеря до 95% транспорта группы 3 в эритроцитах. Biochem J., август 2000; 350 (Pt 1): 41–51.
92. Cordat E, Reithmeier RA. Экспрессия и взаимодействие двух сложных мутантов гетерозиготного дистального почечного канальцевого ацидоза анионообменника 1 почки в эпителиальных клетках.Am J Physiol Renal Physiol. 2006 декабрь; 291 (6): F1354–61.
93. Куилти Дж. А., Ли Дж., Райтмайер Р. А.. Нарушение транспорта мутантов дистального почечного канальцевого ацидоза анионообменника почки человека kAE1. Am J Physiol Renal Physiol. 2002 Май; 282 (5): F810–20.
94. Kittanakom S, Cordat E, Reithmeier RA.Доминантно-негативный эффект анионообменника 1 овалоцитоза Юго-Восточной Азии при сложном гетерозиготном дистальном почечном канальцевом ацидозе. Биохим Дж. Март 2008 г .; 410 (2): 271–81.
95. Ungsupravate D, Sawasdee N, Khositseth S, Udomchaiprasertkul W, Khoprasert S, Li J, et al. Нарушение транспортировки и внутриклеточного удержания мутантных белков почечного анионообменника 1 (G701D и A858D), связанных с ацидозом дистальных почечных канальцев.Mol Membr Biol. 2010 Апрель; 27 (2-3): 92–103.
96. Неттувакул К., Савасди Н., Йенчитсоманус П.Т. Быстрое обнаружение мутаций и полиморфизмов члена 1 семейства растворенных носителей 4 (SLC4A1) с помощью анализа плавления с высоким разрешением. Clin Biochem. 2010 Март; 43 (4-5): 497–504.
97. Сулеймани М.SLC26 Cl- / HCO3 — обменники в почках: роль в здоровье и болезни. Kidney Int. 2013; 2013 (4): 138
98. Bissig M, Hagenbuch B, Stieger B, Koller T, Meier PJ. Клонирование функциональной экспрессии канальцевой системы транспорта сульфата гепатоцитов крысы. J Biol Chem. 1994, январь; 269 (4): 3017–21.
99. Karniski LP, Lötscher M, Fucentese M, Hilfiker H, Biber J, Murer H. Иммунолокализация анионита sat-1 сульфат / оксалат / бикарбонат в почках крысы. Am J Physiol. 1998 Июль; 275 (1): F79–87.
100. Quondamatteo F, Krick W., Hagos Y, Krüger MH, Neubauer-Saile K, Herken R, et al.Локализация сульфат / анионита в печени крысы. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2006 Май; 290 (5): G1075–81.
101. Регер Р.Р., Ли А., Маркович Д. Характеристика белка и гена переносчика сульфат-аниона человека (hsat-1) (SAT1; SLC26A1). ДНК Cell Biol.2003 Февраль; 22 (2): 107–17.
102. Brzica H, Breljak D, Krick W, Lovrić M, Burckhardt G, Burckhardt BC и др. Экспрессия транспортера сульфат-аниона sat-1 в печени и почках у крыс демонстрирует доминирующие гендерные различия. Pflugers Arch. 2009 Апрель; 457 (6): 1381–92.
103. Бреляк Д., Бржица Х., Врховач И., Мичек В., Караица Д., Любоевич М. и др.У самок крыс обработка этиленгликолем повышает экспрессию белка печеночного и почечного транспортера оксалата sat-1 (Slc26a1), не вызывая гипероксалурии. Croat Med J., октябрь 2015 г .; 56 (5): 447–59.
104. Коста-Бауза А., Рамис М., Монтесинос В., Грассес Ф., Конте А., Пиза П. и др. Тип почечных камней: варьируется в зависимости от возраста и пола.Мир Дж Урол. 2007 августа; 25 (4): 415–21.
105. Маркович Д. Модели KO Slc13a1 и Slc26a1 раскрывают физиологические роли переносчиков анионов. Физиология (Bethesda). 2012 фев; 27 (1): 7–14.
106. Доусон П.А., Рассел С.С., Ли С., Маклей С.К., ван Донген Дж.М., Каули Д.М. и др.Мочекаменная болезнь и гепатотоксичность связаны с переносчиком анионов Sat1 у мышей. J Clin Invest. 2010 Март; 120 (3): 706–12.
107. Джи Х.Й., Джун I, Браун Д.А., Лоусон Дж. А., Халбриттер Дж., Шрил С. и др. Мутации в SLC26A1 вызывают нефролитиаз. Am J Hum Genet. 2016 июн; 98 (6): 1228–34.
108. Hästbacka J, de la Chapelle A, Mahtani MM, Clines G, Reeve-Daly MP, Daly M, et al. Ген диастрофической дисплазии кодирует новый переносчик сульфатов: позиционное клонирование с помощью тонкоструктурного неравновесного картирования сцепления. Клетка. 1994 сентябрь; 78 (6): 1073–87.
109. Дорварт М.Р., Щейников Н., Ян Д., Муаллем С.Семейство белков-переносчиков растворенного вещества 26 в эпителиальном ионном транспорте. Физиология (Bethesda). 2008 Апрель; 23 (2): 104–14.
110. Hästbacka J, Superti-Furga A, Wilcox WR, Rimoin DL, Cohn DH, Lander ES. Сульфатный транспорт при хондродисплазии. Ann NY Acad Sci. Июнь 1996 г., 785 (785): 131–6.
111. Маркович Д., Аронсон П.С.Специфичность и регуляция переносчиков почечных сульфатов. Annu Rev Physiol. 2007; 69 (1): 361–75.
112. Двайер Э, Хайленд Дж, Модафф П., Паули Р.М. Взаимосвязь генотипа и фенотипа при дисплазиях DTDST: ателостеогенез II типа и вариант диастрофической дисплазии в одной семье. Am J Med Genet A.2010 декабрь; 152A (12): 3043–50.
113. Park M, Ohana E, Choi SY, Lee MS, Park JH, Muallem S. Множественные роли обменного белка SO4 (2 -) / Cl- / OH- Slc26a2 в функциях хондроцитов. J Biol Chem. 2014 Янв; 289 (4): 1993–2001.
114. Охана Э, Щейников Н, Парк М, Муаллем С.Белок a2 (Slc26a2) семейства 26 носителей растворенного вещества функционирует как электронейтральный обменник SOFormula / OH- / Cl-, регулируемый внеклеточным Cl-. J Biol Chem. 2012 февраль; 287 (7): 5122–32.
115. Швайнфест CW, Хендерсон KW, Сустер S, Кондо Н., Папас Т.С. Идентификация гена слизистой оболочки толстой кишки, который подавляется в аденомах и аденокарциномах толстой кишки.Proc Natl Acad Sci USA. 1993 Май; 90 (9): 4166–70.
116. Freel RW, Whittamore JM, Hatch M. Трансцеллюлярная абсорбция оксалата и Cl- в кишечнике мыши опосредуется анионообменником DRA Slc26a3, а делеция DRA снижает содержание оксалата в моче. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.2013 Октябрь; 305 (7): G520–7.
117. Стенсон П.Д., Морт М., Болл Е.В., Шоу К., Филлипс А., Купер Д.Н. База данных мутаций генов человека: создание всеобъемлющего хранилища мутаций для клинической и молекулярной генетики, диагностического тестирования и персонализированной геномной медицины. Hum Genet. 2014 Янв; 133 (1): 1–9.
118. Schweinfest CW, Spyropoulos DD, Henderson KW, Kim JH, Chapman JM, Barone S и др. slc26a3 (dra) -дефицитные мыши демонстрируют диарею с потерей хлоридов, усиленную пролиферацию толстой кишки и отчетливую активацию переносчиков ионов в толстой кишке. J Biol Chem. 2006 декабрь; 281 (49): 37962–71.
119. Лохи Х., Лампрехт Г., Маркович Д., Хейл А., Куяла М., Зейдлер У. и др. Изоформы SLC26A6 опосредуют транспорт анионов и имеют функциональные домены взаимодействия PDZ. Am J Physiol Cell Physiol. 2003 Март; 284 (3): C769–79.
120. Охана Э., Щейников Н., Ян Д., Со И, Муаллем С.Детерминанты связанного транспорта и несвязанного тока электрогенными транспортерами SLC26. J Gen Physiol. 2011 февраль; 137 (2): 239–51.
121. Чернова MN, Jiang L, Friedman DJ, Darman RB, Lohi H, Kere J, et al. Функциональное сравнение анионообменника slc26a6 мыши с вариантами полипептида SLC26A6 человека: различия в анионной селективности, регуляции и электрогенности.J Biol Chem. Март 2005 г., 280 (9): 8564–80.
122. Лохи Х., Куяла М., Макела С., Лехтонен Э., Кестила М., Саариалхо-Кере У. и др. Функциональная характеристика трех новых тканеспецифичных анионообменников SLC26A7, -A8 и -A9. J Biol Chem. 2002 апр; 277 (16): 14246–54.
123. Петрович С., Бароне С., Сюй Дж., Конфорти Л., Ма Л., Куяла М. и др.SLC26A7: базолатеральные клетки Cl / HCO3 наружного мозгового собирательного канала. Am J Physiol Renal Physiol. 2004; 286 (1): F161–9.
124. Маренго С.Р., Чен Д.Х., Эван А.П., Соммер А.Дж., Стоу Н.Т., Фергюсон Д.Г. и др. Непрерывное введение оксалата мини-насосами вызывает нефрокальциноз оксалата кальция.Urol Res. 2006 июн; 34 (3): 200–10.
125. Эван А. П., Коу Флорида, Лингеман Дж. Э., Шао Ю., Соммер А. Дж., Бледсо С. Б. и др. Механизм образования почечных камней оксалата кальция человека на бляшке Рэндалла. Анат Рек (Хобокен). 2007 Октябрь; 290 (10): 1315–23.
126. Сюй Дж., Сонг П., Накамура С., Миллер М., Бароне С., Альпер С.Л.Делеция транспортера хлоридов slc26a7 вызывает ацидоз дистальных почечных канальцев и нарушает секрецию кислоты желудочного сока. J Biol Chem. 2009. 284 (43): 29470–9.

Автор Контакты

Yong Hai Zhang

Отделение урологии

Больница Шаньтоу при Университете Сунь Ятсена

Район Цзинь Пин Да Хуа ул.№ 114, Шаньтоу, Гуандун 515000 (Китай)

Электронная почта [email protected]

Подробности статьи / публикации

Предварительный просмотр первой страницы

Получено: 15 августа 2019 г.
Принято: 28 октября 2019 г.
Опубликовано онлайн: 5 декабря 2019 г.
Дата выпуска: май 2020

Количество страниц для печати: 10
Количество рисунков: 0
Количество столов: 0

ISSN: 0042-1138 (печатный)
eISSN: 1423-0399 (онлайн)

Для дополнительной информации: https: // www.karger.com/UIN

Авторские права / Дозировка препарата / Заявление об ограничении ответственности

Авторские права: Все права защищены. Никакая часть данной публикации не может быть переведена на другие языки, воспроизведена или использована в любой форме или любыми средствами, электронными или механическими, включая фотокопирование, запись, микрокопирование, или с помощью какой-либо системы хранения и поиска информации, без письменного разрешения издателя. .
Дозировка лекарств: авторы и издатель приложили все усилия, чтобы гарантировать, что выбор и дозировка лекарств, указанные в этом тексте, соответствуют текущим рекомендациям и практике на момент публикации.Тем не менее, ввиду продолжающихся исследований, изменений в правительственных постановлениях и постоянного потока информации, касающейся лекарственной терапии и реакций на них, читателю настоятельно рекомендуется проверять листок-вкладыш для каждого препарата на предмет любых изменений показаний и дозировки, а также дополнительных предупреждений. и меры предосторожности. Это особенно важно, когда рекомендованным агентом является новое и / или редко применяемое лекарство.
Отказ от ответственности: утверждения, мнения и данные, содержащиеся в этой публикации, принадлежат исключительно отдельным авторам и соавторам, а не издателям и редакторам.Появление в публикации рекламы и / или ссылок на продукты не является гарантией, одобрением или одобрением рекламируемых продуктов или услуг или их эффективности, качества или безопасности.