Как определить стафилококк: Инвитро. Стафилококковая инфекция, узнать цены на анализы и сдать в Москве

Анализы на антитела, стафилококк, вирусы

В клинике «Медлайн Сургут» вы можете сдать любые анализы, помимо традиционно назначаемых: анализ крови, мочи, кала, УЗИ.

Предполагаемый диагноз требует дополнительных исследований? Хотите убедиться в отсутствии заболевания?

Приглашаем вас в нашу современную лабораторию!

Если необходимо сдать анализы на паразитов

Наличие паразитов можно определить при помощи сдачи разных анализов. Это совершенно необходимо делать каждому человеку в профилактических целях, поскольку паразиты могут долгое время жить в нашем организме, ничем себя не проявляя, но вредя здоровью.

Если необходимо сдать анализ крови ПТИ

Анализ на протромбиновый индекс или, говоря проще, на свертываемость крови следует сдавать перед проведением хирургических вмешательств, а также в случае, если врач подозревает наличие патологию свертываемости или имеется недостаток витамина К или обнаружено варикозное расширение вен, а также в ряде других случаев.

Если необходимо сдать анализ крови АСТ

Анализ назначают при инфаркте миокарда, а также для определения наличия или отсутствия отклонений от нормы. В случае нарушений ткани миокарда показывается повышенный уровень фермента АТС. Также повышение фиксируется, если у пациента дистрофия мышц и ряд других заболеваний.

Если необходимо сдать анализы на антитела

Сдавать анализа на антитела к нам приходят пациенты, у которых лечащий врач заподозрил нарушение в работе иммунной системы.

Если необходимо сдать анализы на стафилококк

За результатами анализов на стафилококк чаще всего приходят родители детей, поскольку золотистый стафилококк — одна из самых «ходовых» инфекций у малышей.

Если необходимо сдать анализы на вирусы

Сдать анализы на вирусы необходимо для того, чтобы точно диагностировать вирусные инфекции, которые во многих случаях протекают без ярко выраженных симптомов.

В клинике «Медлайн Сургут» вы можете сдать анализы на вирусы, антитела, стафилококк и пройти другие исследования по предварительной записи в любое удобное для вас время.

Обращайтесь за достоверными результатами!

Сдать анализы на паразитов | Анализы на вирусы, стафилококк

Лабораторные анализы — один из методов диагностики организма, позволяющий выявить наличие инфекционно-воспалительных процессов, а также подобрать оптимальный метод лечения. Для их проведения от пациента требуется сдать биологический материал. Результат, как правило, можно получить в течение нескольких дней после сдачи.

В Эс Класс Клиник в Волгограде Вы можете не только обратиться за помощью к квалифицированным специалистам, но и сдать любые виды анализов, в том числе на паразитов. Вот лишь некоторые из них:

Анализ крови ПТИ

Анализ крови ПТИ (протробиновый индекс) позволяет оценить уровень свертываемости. В норме показатель должен находиться в пределах 70–100 %. В противном случае высока вероятность кровотечений (при низком ПТИ), инсульта, тромбофлебита (при слишком высоком ПТИ). Данная процедура в обязательном порядке назначается всем пациентам перед операцией.

Анализ крови ПТИ также проводят перед родами. Помимо этого показаниями к его осуществлению являются такие заболевания, как

• варикозное расширение вен,
• атеросклероз,
• патологии печени,
• аутоиммунные нарушения.

Анализ крови АСТ

При подозрениях на наличие патологий печени назначается такой вид исследования, как анализ АСТ. Аспартатаминотрансфераза (АСТ) — один из ферментов, синтезирующихся печенью. В норме его уровень в организме человека невелик: у мужчин — до 41 Ед/л, у женщин —до 31 Ед/л. Превышение показателей является признаком нарушения работы печени, а также может наблюдаться при инфекционном мононуклеозе и инфаркте миокарда. Данная процедура может выявить приближение инфаркта миокарда еще до того, как электрокардиограмма определит первые изменения.

Прежде чем проводить сдачу крови АСТ, необходимо исключить прием пациентом таких лекарственных средств, как аспирин, гормональные контрацептивы и некоторые другие препараты. Данные средства при их длительном приеме могут быть причиной нарушения нормы содержания аспартатаминотрансферазы в организме человека.

Анализы на антитела

Сдать анализы на антитела вам назначат в том случае, если есть подозрение на наличие инфекционного процесса, возбудителей которого не удается выявить каким-либо другим способом. Данное исследование также незаменимо в случае диагностики аутоиммунных заболеваний. Помимо этого результаты диагностики позволяют установить, какими инфекционными заболеваниями пациент переболел.

Для того чтобы сдать анализы на антитела, вы можете обратиться в международный медицинский центр Эс Класс Клиник. Для проведения исследования требуется сдать кровь из вены с утра натощак. С целью получения максимально точных результатов рекомендуется в течение 2–3 дней воздержаться от приема в пищу жирных, острых, жареных, соленых и копченных блюд, а также алкогольных напитков и фруктовых соков.

Анализы на вирусы

Сдать анализы на вирусы приходится рано или поздно каждому человеку. Существование в социуме делает невозможным пребывание в среде, свободной от вирусов. Некоторые из них не оказывают серьезного влияния на здоровье, другие же, напротив, причиняют множество неудобств, ухудшают уровень жизненного комфорта и являются угрозой жизни человека.

Как правило, врач назначает данную процедуру при подозрении на наличие инфекционных процессов в организме, а также в качестве общей профилактики, при беременности или ее планировании. Тип биологического материала, а также способ его взятия, напрямую зависит от патогенеза инфекции.

Анализ крови на ПСА

Анализ крови на ПСА позволяет диагностировать рак предстательной железы. ПСА (простатический специфический антиген) вырабатывается клетками предстательной железы. В норме его количество не должно превышать 4,0 нг/мл, у мужчин старше 40 лет предельный уровень ПСА должен быть ниже — до 2,5 нг/мл. Превышение этих показателей может свидетельствовать о наличии простатита или аденомы простаты, но наиболее выраженное повышение ПСА, как правило, свидетельствует о наличии онкологических процессов.

Для того чтобы сделать процедуру максимально корректно, необходимо:

• Воздержаться от приема пищи и жидкости в течение 8 часов до сдачи биологического материала.
• Исключить половые контакты за 5–7 дней до исследования.
• Исключить осмотр уролога до исследования, либо пройти его за 10–12 дней до сбора материала.

Анализ кала на стафилококк в Москве

Стафилококковые бактерии получили свое название благодаря своей форме в виде шара. На данный момент известно о существовании пятидесяти видов стафилококков. Данная группа микроорганизмов разделилась на две части. Одни стафилококки прекрасно уживаются с человеком, не причиняя ему вреда. Другие становятся причиной достаточно серьезных заболеваний.

Наибольшую опасность представляет золотистый стафилококк, который способен поражать любой орган, в том числе мозг сердце и мочеполовые органы. Сердечно-сосудистая, мочеполовая центральная нервная система являются самыми уязвимыми в этом отношении. Заражение может проходить как воздушно-капельным путем или при контакте через кожу и слизистые. Данный возбудитель является причиной многих заболеваний. Его очень трудно уничтожить, так как он с легкостью приспосабливается к любым неблагоприятным условиям, устойчив к действию большинства видов антибиотиков и антисептиков. Не боятся эти возбудители и 98% спирта, не погибая при обработке поверхностей. Для обнаружения бактерии используют анализ кала, мочи, крови, мазки со слизистых.

Показания к анализу

Проявление стафилококковой инфекции весьма специфично, поэтому врач отправляет пациента на обследование при обнаружении следующих симптомов:

• Кожных высыпаний.
• Насморка.
• Боли в горле.
• Кашля, влажного или сухого.
• Повышенной температуры.

В тяжелых случаях, из-за отравления токсинами выделяемыми бактериями, может произойти потеря сознания, так как продукты жизнедеятельности микроорганизмов вызывают падение давления.

При размножении стафилококков в кишечнике появляются все признаки дисбактериоза. В этом случае у пациента появляются следующие жалобы:

• Тошнота, которая сменяется частыми продолжительными рвотами.
• Плохой аппетит или отвращение к еде.
• Разлитые боли в области живота.
• Понос, при котором в кале имеется слизь и примесь крови.

Данные симптомы характерны для многих патологий и не всегда связанных со стафилококками, но в пяти процентах случаев при анализе обнаруживают именно бактерии этого вида.

В группу риска по инфекционным заболеваниям, спровоцированным золотистым стафилококком, входят люди с ослабленным иммунитетом:

• Новорожденные дети.
• Пожилые люди.
• Пациенты, прошедшие курс лучевой терапии.
• Страдающие СПИД и носители ВИЧ.

Проблемы с желудочно-кишечным трактом, спровоцированные стафилококками, могут возникнуть не только по причине отравления, но и из-за длительного приема антибиотиков и других типов препаратов, уничтожающих нормальную флору в кишечнике. Обследование на стафилококки проходят все работники хирургических и родильных отделений.

Подготовка к процедуре

При подготовке к данному виду обследований необходимо соблюсти ряд правил, лишь в этом случае будет получен максимально точный результат.

• За семь дней до проведения исследования прекращают прием всех медикаментов, особенно антибиотиков и противовоспалительных.
• Накануне анализа нельзя принимать слабительные средства.
• Материал для изучения должен оказаться в лаборатории не позднее трех часов с момента взятия.
• Кал непродолжительное время можно хранить в холодильнике.
• Для хранения и доставки кала используют только стерильную емкость.

Ложный результат может появиться из-за подавления патологической бактериальной флоры лекарственными препаратами. А также при нарушении правил забора образца для исследования.

Как проводится анализ

При обнаружении стафилококков в кале могут быть использованы несколько методов:

• Микроскопический.
• Серологический.
• Бактериологический.

При первом случае кокки определяются и подсчитываются при окрашивании по Граму. Второй метод является скорее вспомогательным и проводится параллельно с изучением фекалий. На пробу берут кровь и в плазме ищут антитела к возбудителю.

При третьем методе проводят посев в питательную среду бактерий, и после увеличения колонии проводят изучение внешнего вида выращенных бактерий. К примеру, колония золотистого стафилококка имеет ровный край с радужным венчиком вокруг и цвет окрашивания от золотистого до белого.

Анализ кала при положительном результате первого анализа берется повторно через три дня.

Нормы и расшифровка результата

Анализ может иметь два значения: положительный и отрицательный.

При отрицательном вредных микроорганизмов не обнаруживают среди выращенных экземпляров.

При положительном возбудители в кале есть, и значение приобретает их количественный показатель. При незначительном количестве, речь идет о носительстве. Потенциальный возбудитель есть, но его рост подавляется иммунитетом. Если число бактерий превышает 10 в 4 степени, то речь идет о полноценном воспалительном процессе, вызванном стафилококками.

Данная статья размещена исключительно с целью ознакомления в познавательных целях и не является научным материалом или профессиональным медицинским советом. За диагностикой и лечением обратитесь к врачу.

Анализ на выявление стафилококка и устойчивость к антибиотикам

Исследование эякулята (спермы) направлено на выделение возбудителя заболевания и на определение количественной оценки выявленных микроорганизмов.
Инфекции урогенитального тракта у мужчин в основном обусловлены возбудителями инфекций, передающихся половым путем (Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas vaginalis и др.) и типичными представителями уропатогенов (E. coli, Proteus spp., Klebsiella spp., Serratia spp., Enterobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, Ureaplasma spp., Staphylococcus spp., Streptococcus pyogenes, Mycoplasma spp. и др.).
Приблизительно около 15% сексуально активных пар не достигают беременности в течении 1 года. У половины бездетных пар бесплодие связано с «мужским фактором», проявляющимся отклонениями параметров эякулята, которые в 8% обусловлены урогенитальными инфекциями.

Стафилококки — неподвижные грамположительные кокки, широко распространены в окружающей среде. Золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus) относится к патогенным микроорганизмам, но данный микроорганизм чрезвычайно распространён среди людей и может быть обнаружен у 15-30% здоровых лиц. S.aureus вызывает различные виды гнойно-септических инфекций: кожные гнойничковые и раневые инфекции, сепсис, эндокардиты, пневмонии, артриты, остеомиелиты, перитониты, инфекции моче-выводящих путей.

Материал для исследования следует брать до начала антибактериальной терапии или через 12-14 дней после завершения курса лечения. Рекомендуется половое воздержание в течение 3 дней.

Перед сбором материала тщательно вымыть с мылом руки и наружные половые органы. Насухо вытереть чистым полотенцем. Получить эякулят путем мастурбации и собрать в стерильный контейнер. Не дотрагиваться руками до внутренних стенок и крышки контейнера. Плотно закрыть контейнер крышкой и доставить в лабораторию в наиболее короткие сроки, до 24 часов при +4 — + 8оС. При пролонгированном сроке хранения материала, использовать тубу с гелевой угольной средой Эймса и зонд (стерильный тампон — вискоза на пластиковой основе). Стерильный тампон пропитывается эякулятом и помещается в тубу с транспортной средой Эймса. Допускается хранение и доставка до 48 часов при +4 — + 8оС.

Исследование обычно проводится при бесплодии, простатитах, орхите (воспаление яичек), эпидидимите (воспаление придатка яичка).

Основной целью определения чувствительности микроорганизмов к АБП является прогнозирование их эффективности при лечении инфекций у конкретных пациентов. Определение чувствительности также проводят при наблюдении за распространением резистентности среди микроорганизмов.
Определение чувствительности к АБП проводится при выявлении этиологически значимых микроорганизмов в количестве 103 и более КОЕ/мл.
Основой для выбора АБП, подлежащих включению в исследование, являются данные о природной чувствительности обнаруженных микроорганизмов или их групп, о распространении среди них приобретенной резистентности, а также клинической эффективности АБП.
В этом исследовании для определения чувствительности к АБП обычно используется 6 различных антибактериальных препаратов.
При определении чувствительности выявленного золотистого стафилококка в первую очередь исследуются АБП, имеющие основное клиническое значение: бета-лактамы, макролиды, фторхинолоны, аминогликозиды и ванкомицин.
Определять чувствительность к АБП представителей нормальной микрофлоры человека (при их выделении из естественных мест обитания) не проводится.

4.5.1. Методика количественного определения Staph. aureus / КонсультантПлюс

4.5.1. Методика количественного определения Staph. aureus.

Методика выделения St. aureus предусматривает его количественное определение в пищевых продуктах и наличие его в смывах.

1 этап. Из исходной 10% взвеси продукта производят посев на элективные среды: желточно-солевой (ЖСА) или молочно-солевой (МСА) агары. Основную 10% взвесь в количествах 0,5 и 0,1 мл (0,05 и 0,01 г продукта) наносят на поверхность среды, равномерно распределяют и тщательно растирают шпателем. Кроме этого, 1 мл исходной взвеси (0,1 г продукта) засевают в пробирки с 5 мл 6,5-процентного солевого бульона. Продукты жидкой консистенции высевают на плотные среды в количестве 0,5 и 0,1 мл, а в жидкие — 1,0 мл. Продукты с пониженной водной активностью (aw 0,86) или с повышенным содержанием поваренной соли дополнительно засевают также в количестве 1,0 мл (0,1 г, мл продукта) на сахарный бульон, разлитый в пробирки по 5 мл.

Посевы инкубируют при 37 град. C в течение 18 — 24 часов, чашки с плотными средами оставляют еще на сутки при комнатной температуре <*>.

———————————

<*> На средах, содержащих желток, стафилококк, выделенный от человека, образует у 60 — 70% выделенных культур венчик вокруг колонии (положительная лецитовителлазная реакция). Стафилококки животного происхождения дают положительную лецитовителлазную реакцию в 5 — 10% культур.

 

2 этап: а) Просматривают посевы на МСА или ЖСА, на ЖСА колонии стафилококков дают радужный венчик, на МСА — образуют пигмент: золотистый, кремовый, эмалево-белый и др. Изолированные колонии, подозрительные на стафилококк, изучают, микроскопируют с окраской по Граму и высевают на скошенный МПА или на сектора чашки с молочным агаром. Число колоний, взятых для идентификации, должно быть не менее 5 — 7.

б) Из сред обогащения производят высевы на сектора чашки с молочным агаром.

Все посевы инкубируют при 37 град. C в течение 18 — 24 часов.

3 этап. Выделенную чистую культуру с секторов на чашках с молочным или из пробирок со скошенным МПА подвергают микроскопии с окраской по Граму. При наличии мелких грамположительных кокков ставят реакцию плазмокоагуляции.

Открыть полный текст документа

Посев из носа, зева, уха, глаз

Адреса клиник г. Казань

Адрес: ул. Гаврилова, 1, ост. «Гаврилова» (пр. Ямашева)

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00

Автобус: 10, 10а, 18, 33, 35, 35а, 36, 44, 45, 46, 49, 55, 60, 62, 76

Троллейбус: 2, 13

Трамвай: 5, 6

Адрес: ул. Т.Миннуллина, 8а, (Луковского) ост. «Театр кукол»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00

Автобус: 1, 2, 31, 37, 47, 74

Троллейбус: 6, 8, 12

Метро: Суконная слобода

 

 

Адрес: ул. Сыртлановой, 16, ст. метро Проспект Победы, ост. ул. Сыртлановой (проспект Победы)

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 5, 34, 37, 62 77

Трамвай: 5

Метро: Проспект Победы

Адрес: ул. Назарбаева, 10, ст. метро «Суконная Слобода», ост. «Метро Суконная Слобода»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной

Автобус: 1, 4, 25, 43, 71

Метро: Суконная слобода

 

 

Адрес: ул. Декабристов, 180, ст. метро «Северный вокзал», ост. «Гагарина»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной

Автобус: 6, 18, 29, 33, 37, 40, 43, 53, 62, 76, 78, 89

Троллейбус: 13

Трамвай: 1, 6

Метро: Северный вокзал

Адрес: пр. А.Камалеева, 28/9, (жилой комплекс «XXI век»), ост. «Новый ипподром»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Троллейбус: 3

 

 

Адрес: Дербышки, ул. Мира, 20, ост. «Магазин Комсомольский», «Гвоздика»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 1, 19, 25, 34, 44, 60, 84

Адрес: ул. Серова, 22/24, ост. «ул. Серова»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 10, 10а

 

 

Адрес: ул. Беломорская, 6, ст. метро «Авиастроительная», ост. «ул. Ленинградская»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 6, 18, 33, 37, 40, 42, 43, 53, 60, 78, 89, 93

Троллейбус: 13

Трамвай: 1

Метро: Авиастроительная

Адрес: ул. Закиева, 41а, ост. «Кабельное телевидение»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00 

Автобус: 5, 18, 30, 31, 34, 45, 46, 62, 63, 77, 89

Троллейбус: 3, 5, 9, 12

 

 

Адрес: ул. Кул Гали, 27, ост. «ул. Кул Гали» (ул. Габишева)

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной

Автобус: 46, 90

Адрес: ул. Рихарда Зорге, 95, м. «Дубравная», ост. «ул. Юлиуса Фучика»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: 8.00-14.00

Автобусы: 5, 18, 30, 31, 33, 34, 45, 68, 74, 77

Троллейбусы: 5, 9, 12

Трамвай: 4

Метро: Дубравная

Адрес: ул. Фрунзе, 3а, ост. «Идель»

Пн-Пт: 7.00-20.00, Сб: 7.30-16.00, Вс: выходной 

Автобусы: 10а, 36, 49, 53, 63, 72, 106

Троллейбус:1

 

доступные цены на экспресс анализ

Вид исследования	Цена	Срок выполнения, рабочих дней
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ (НОС)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (нос) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	700	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	500	3 р.д.
Посев на возбудителя дифтерии отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	580	5 р.д.
Посев на возбудителя коклюша отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	1200	6 р.д.
Посев на пиогенный стрептококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	640	4 р.д.
Посев на N.meningitidis (менингококк) и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (нос)	1300	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ (ЗЕВ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (зев) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	700	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	500	3 р.д.
Посев на возбудителя дифтерии отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	580	5 р.д.
Посев на возбудителя коклюша отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	1200	6 р.д.
Посев на пиогенный стрептококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	640	4 р.д.
Посев на N.meningitidis (менингококк) и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (зев)	1300	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ (ПАЗУХИ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	500	3 р.д.
Посев на возбудителя дифтерии отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	580	5 р.д.
Посев на возбудителя коклюша отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	1200	6 р.д.
Посев на пиогенный стрептококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	640	4 р.д.
Посев на N.meningitidis (менингококк) и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (пазухи)	1300	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ВЕРХНИХ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ПУТЕЙ (ДРУГОЕ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (другое) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	500	3 р.д.
Посев на возбудителя дифтерии отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	580	5 р.д.
Посев на возбудителя коклюша отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	1200	6 р.д.
Посев на пиогенный стрептококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	640	4 р.д.
Посев на N.meningitidis (менингококк) и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого верхних дыхательных путей (другое)	1300	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ИЗ ГЛАЗА (ПРАВЫЙ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (правый)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (правый)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (правый) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого из глаза (правый)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого из глаза (правый)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (правый)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (правый)	500	3 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к aнтибиотикам отделяемого из глаза (правый)	1000	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ИЗ ГЛАЗА (ЛЕВЫЙ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (левый)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (левый)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (левый) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого из глаза (левый)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого из глаза (левый)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (левый)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из глаза (левый)	500	3 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к aнтибиотикам отделяемого из глаза (левый)	1000	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ИЗ УХА (ПРАВОЕ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (правое)	600	4 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (правое)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (правое) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого из уха (правое)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого из уха (правое)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (правое)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (правое)	500	3 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ОТДЕЛЯЕМОГО ИЗ УХА (ЛЕВОЕ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (левое)	600	4 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (левое)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (левое) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого из уха (левое)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого из уха (левое)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (левое)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого из уха (левое)	500	3 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА (ШЕЙКА МАТКИ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	500	3 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. и M.hominis с определением титра и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	1400	5 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. с определением титра и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	750	5 р.д.
Посев на M.hominis с определением титра и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	750	5 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (шейка матки)	1000	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА (ВЛАГАЛИЩЕ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	500	3 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. и M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	1400	5 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	750	5 р.д.
Посев на M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	750	5 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (влагалище)	1000	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА (ЦЕРВИКАЛЬНЫЙ КАНАЛ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	1000	5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	800	5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	700	4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	500	3 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. и M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	1400	5 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	750	5 р.д.
Посев на M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	750	5 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (цервикальный канал)	1000	8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА (ПОЛОСТЬ МАТКИ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	600	3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	800	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки) (расширенный спектр)	1000	5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	500		3 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. и M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	1400		5 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	750		5 р.д.
Посев на M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	750		5 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae иопределение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (полость матки)	1000		8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА (ОТДЕЛЯЕМОЕ УРЕТРЫ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	500		3 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. и M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	1400		5 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	750		5 р.д.
Посев на M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	750		5 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (отделяемое уретры)	1000		8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА (СЕКРЕТ ПРОСТАТЫ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	500		3 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. и M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	1400		5 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	750		5 р.д.
Посев на M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	750		5 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (секрет простаты)	1000		8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА (ДРУГОЕ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого урогенитального тракта (другое)	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого урогенитального тракта (другое)	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	500		3 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. и M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	1400		5 р.д.
Посев на Ureaplasma spp. с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	750		5 р.д.
Посев на M.hominis с определением титра и чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	750		5 р.д.
Посев на Neisseria gonorrhoeae и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого урогенитального тракта (другое)	1000		8 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПУНКЦИОННОЙ ЖИДКОСТИ (СУСТАВ)
Посев пункционной жидкости на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам (сустав)	600		3 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (сустав)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (сустав) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам (сустав)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам (сустав)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам (сустав)	700		4 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам (сустав)	500		3 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПУНКЦИОННОЙ ЖИДКОСТИ (ПЛЕВРАЛЬНАЯ ЖИДКОСТЬ)
Посев пункционной жидкости на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам (плевральная жидкость)	600		3 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (плевральная жидкость)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (плевральная жидкость) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам (плевральная жидкость)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам (плевральная жидкость)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам (плевральная жидкость)	700		4 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам (плевральная жидкость)	500		3 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПУНКЦИОННОЙ ЖИДКОСТИ (БРЮШНАЯ ПОЛОСТЬ)
Посев пункционной жидкости на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам (брюшная полость)	600		3 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (брюшная полость)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (брюшная полость) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам (брюшная полость)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам (брюшная полость)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам (брюшная полость)	700		4 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам (брюшная полость)	500		3 р.д.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПУНКЦИОННОЙ ЖИДКОСТИ (ДРУГОЕ)
Посев пункционной жидкости на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам (другое)	600		3 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (другое)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам (другое) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам (другое)	1000		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам (другое)	800		5 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам (другое)	700		4 р.д.
Посев пункционной жидкости на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам (другое)	500		3 р.д.
ДРУГОЙ БИОМАТЕРИАЛ (ТКАНЬ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (ткань)	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (ткань)	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (ткань) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого ран (ткань)	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого ран (ткань)	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (ткань)	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (ткань)	500		3 р.д.
ДРУГОЙ БИОМАТЕРИАЛ (ТРАНССУДАТ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (транссудат)	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (транссудат)	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (транссудат) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого ран (транссудат)	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого ран (транссудат)	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (транссудат)	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (транссудат)	500		3 р.д.
ДРУГОЙ БИОМАТЕРИАЛ (ЭКССУДАТ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (экссудат)	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (экссудат)	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (экссудат) (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого ран (экссудат)	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого ран (экссудат)	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (экссудат)	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (экссудат)	500		3 р.д.
ДРУГОЙ БИОМАТЕРИАЛ (ОТДЕЛЯЕМОЕ РАН)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого ран	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого ран	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого ран	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого ран	500		3 р.д.
ДРУГОЙ БИОМАТЕРИАЛ (ОТДЕЛЯЕМОЕ ИНФИЛЬТРАТОВ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого инфильтратов	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого инфильтратов	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого инфильтратов (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого инфильтратов	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого инфильтратов	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого инфильтратов	700		4 р.д.
Посев на золотистый стафилококк без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого инфильтратов	500		3 р.д.
ДРУГОЙ БИОМАТЕРИАЛ (ОТДЕЛЯЕМОЕ АБСЦЕССОВ)
Посев на микрофлору без определения чувствительности к антибиотикам отделяемого абсцессов	600		3 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого абсцессов	800		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого абсцессов (расширенный спектр)	1000		5 р.д.
Посев на микрофлору и определение чувствительности к бактериофагам отделяемого абсцессов	1000		5 р.д.
Посев на Candida spp. и определение чувствительности к антимикотическим препаратам отделяемого абсцессов	800		5 р.д.
Посев на золотистый стафилококк и определение чувствительности к антибиотикам отделяемого абсцессов	700		4 р.д.

Идентификация золотистого стафилококка: ДНКаза и маннитоловый солевой агар повышают эффективность пробирочного теста на коагулазу | Annals of Clinical Microbiology and Antimicrobials

Тестирование на коагулазу — единственный наиболее надежный метод идентификации Staphylococcus aureus [9]. Выработку коагулазы можно определить с помощью теста на коагулазу на слайдах (SCT) или теста на коагулазу в пробирке (TCT). Слайд-коагулаза обнаруживает связанную коагулазу (также называемую «фактором слипания») [9], которая непосредственно реагирует с фибриногеном в плазме, вызывая быструю агглютинацию клеток.Отрицательные изоляты после SCT требуют подтверждения с помощью лучшего TCT, поскольку штаммы, дефицитные по фактору слипания, обычно продуцируют свободную коагулазу. Пробирка коагулаза обнаруживает секретируемую внеклеточную свободную коагулазу, которая реагирует с веществом в плазме, называемым «коагулазо-реагирующим фактором» (CRF), с образованием комплекса, который, в свою очередь, реагирует с фибриногеном с образованием фибрина (сгустка) [9]. Штаммы коагулазо-положительных стафилококков животных были выделены из клинических образцов человека, однако некоторые изоляты стафилококков животных также ферментируют маннит [13].В этом исследовании оценивалась эффективность TCT, ДНКазы и MSA, фенотипических методов, обычно используемых для идентификации Staphylococcus aureus .

Обнаружение

Staphylococcus aureus с помощью доступных фенотипических тестов

ПЦР-амплификация гена nuc , которая использовалась в качестве исходного теста, выявила 32 Staphylococcus aureus из 60 штаммов стафилококков, см. Таблицу 2. Из Из 32 изолятов nuc -позитивных Staphylococcus aureus MSA выявила наибольшее количество изолятов (30 из 32, 94%), в то время как TCT (плазма человека и овцы соответственно) обнаружила 29 и 27 из 32 изолятов (91% и 84% соответственно), таблица 2.ДНКаза выявила наименьшее количество изолятов (24 из 32, 75%).

Таблица 2 Идентификация S. aureus с помощью общих тестов по сравнению с ПЦР-детекцией гена nuc

Девять из 32 nuc -положительных Staphylococcus aureus изолятов (28%) были коагулазо-отрицательными , подразумевая, что некоторые изоляты могут быть ошибочно идентифицированы TCT как единственный тест. Коагулазонегативные штаммы Staphylococcus aureus , вероятно, могут быть изолятами MRSA, которые, как сообщается, слабо или отрицательно реагируют с TCT [17], или редкими штаммами Staphylococcus aureus , которые, как сообщается, являются коагулазонегативными [9].Два изолята Staphylococcus aureus (6%) также были отрицательными по MSA. Shittu et al. также сообщили о маннитол-отрицательном Staphylococcus aureus , который был устойчив к метициллину [15]. Кроме того, восемь из 32 изолятов nuc -позитивных Staphylococcus были ДНКазотрицательными (25%). Rao и др. сообщили об отрицательной ДНКазе Staphylococcus aureus , но без объяснения этих результатов [18]. Шесть стафилококков, отличных от nuc -подтвержденных изолятов Staphylococcus aureus , образовывали желтые колонии на MSA, и аналогичные результаты были получены другими исследователями [19–24].Другой редкой находкой в ​​этом исследовании был изолят, который был положительным по ДНКазе, но отрицательным по MSA и отрицательным по коагулазе в пробирке (т.е.не Staphylococcus aureus ). Мы предполагаем, что этим изолятом мог быть Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans , который согласно национальному стандарту также является ДНКазо-положительным [9].

Отдельные фенотипические тесты неэффективны для идентификации

Staphylococcus aureus

Мы использовали чувствительность и специфичность для оценки эффективности отдельных тестов при обнаружении Staphylococcus aureus .Рост на MSA был наиболее чувствительным (чувствительность 94%), за ним следовали TCT (человеческая и овечья плазма, чувствительность 91% и 81% соответственно), в то время как тест ДНКазы был наименее чувствительным (чувствительность 75%). И наоборот, тест на ДНКазу был наиболее специфичным (специфичность 96%), за ним следовал MSA (специфичность 79%), в то время как TCT (плазма человека и плазма овцы) был наименее специфичным (11% и 7% соответственно), таблица 3. В целом, из отдельных изученных тестов рост на MSA был лучшим при выявлении Staphylococcus aureus (чувствительность 94% и специфичность 79%).Наши результаты немного отличаются от результатов Han и др. , которые сообщили о чувствительности и специфичности 76,5% и 99,6% соответственно для MSA [25]. D’Souza и др. также сообщили о чувствительности 71%, что немного ниже, чем у нас [26]. Высокая чувствительность MSA при обнаружении Staphylococcus aureus может быть связана с его способностью изолировать патогенный Staphylococcus aureus [27], дифференцируя коагулазонегативные стафилококки от коагулазоположительных стафилококков.

Таблица 3 Чувствительность, специфичность, отрицательные / положительные значения Прогностические значения для общих диагностических тестов для клинических S. aureus

Для пробирочной коагулазы человеческая плазма была более чувствительной, чем овечья плазма (91% против 81% чувствительности), что означает что использование овечьей плазмы с ТСТ может выявить больше ложноотрицательных изолятов. Таким образом, в этих условиях маловероятно, что овечья плазма заменит человеческую плазму для рутинных ТСТ. Наши данные согласуются с предыдущими результатами, в которых чувствительность 94–100% была сообщена другими исследователями [28–30].Однако в этом исследовании чувствительность к плазме человека и овцы была выше, чем та, о которой сообщалось в других условиях, где сообщалось о таких низких значениях, как 54,5% (плазма человека) и 45,5% (плазма овцы) [28]. Следовательно, при тестах на коагулазу характеристики плазмы зависят от настроек, и выбор плазмы может влиять на эффективность теста. Кроме того, использование ЭДТА или цитрата в качестве антикоагулянта влияет на эффективность теста. Следует отметить, что цитрат влияет только на коагулазные реакции энтерококков, где он используется [16], но не влияет на организмы, продуцирующие коагулазу, такие как Staphylococcus aureus [16].

Тест ДНКазы имел чувствительность 75% и специфичность 96%, что сопоставимо с другими исследованиями, в которых сообщалось о чувствительности 75% и специфичности 100% [31]. В этом исследовании ДНКазный тест был наиболее специфичным из всех тестов и имел наименьшее количество ложноположительных изолятов (был только один ложноположительный результат). Это согласуется с другими сообщениями, в которых тест на ДНКазу превосходил ТСТ [28, 31]. Рост на MSA также был высокоспецифичным (специфичность 79%), в то время как наименее специфическим тестом был тест на коагулазу в пробирке (человеческая и овечья плазма, специфичность 11% и 7% соответственно).

Напротив, другие исследования сообщили о высокой специфичности (93,6%) для плазмы человека и овцы с ТСТ [32]. Низкая специфичность в нашем исследовании отчасти может быть связана с неспецифическим обнаружением других коагулаза-положительных стафилококков, таких как Staphylococcus schleiferi , подвид , коагулянты , Staphylococcus delphini, Staphylococcus intermediateus и Staphylococcus . Staphylococcus delphini и Staphylococcus intermediateus — редкие клинические изоляты, а Staphylococcus hyicu s — неопределенный (с распространенностью от 11% до 89% [17]).Распространенность этих изолятов может быть высокой в ​​определенных условиях. Хотя MSA и ДНКаза обладали высокой специфичностью и чувствительностью в качестве индивидуальных тестов, их использование в рутинной идентификации Staphylococcus aureus ограничено их способностью обнаруживать другие бактериальные изоляты [14] и в основном используются во время начальных скринингов [6]. Действительно, в Нигерии и Японии были зарегистрированы положительные по солям маннита CoNS ( Staphylococcus caprae, S. hemolyticus и S. saprophyticus ) [13, 14].Таким образом, в определенных условиях при индивидуальном использовании для идентификации Staphylococcus aureus общих фенотипических тестов может быть недостаточно; некоторые изоляты будут неправильно идентифицированы как Staphylococcus aureus или CoNS.

Комбинация MSA и ДНКазы улучшает пробирный тест на коагулазу

Затем мы оценили чувствительность и специфичность тестовых комбинаций (например, MSA / DNase / TCT) при обнаружении Staphylococcus aureus с целью повышения эффективности TCT.Мы достигли абсолютной специфичности (100%) при обнаружении Staphylococcus aureus с помощью тестовых комбинаций, за исключением комбинации ДНКаза / MSA (специфичность 92%). И наоборот, чувствительность тестовых комбинаций варьировалась, причем MSA / ДНКаза / TCT (человеческая плазма) была наиболее чувствительной (чувствительность 75%), в то время как MSA / DNase / TCT (овечья плазма) была наименее чувствительной (чувствительность 25%). Таблица 3.

Комбинация MSA / ДНКаза привела к специфичности и чувствительности 92% и 96% соответственно, и эта комбинация была бы предпочтительной для идентификации Staphylococcus aureus .Однако, поскольку оба теста не специфичны для Staphylococcus aureus и могут обнаруживать другие бактериальные изоляты, двойную комбинацию можно использовать только для улучшения TCT. Хотя другие комбинации тестов — MSA / ДНКаза / TCT (человеческая плазма) и MSA / TCT (человеческая плазма) имели специфичность 100%, они имели различную чувствительность (75% и 33% соответственно). В этой строке комбинация MSA / DNase / TCT (человеческая плазма) лучше при идентификации Staphylococcus aureus (100% специфичность, 75% чувствительность), чем комбинация MSA / TCT (человеческая плазма) (100% специфичность, 33%). чувствительность).Аналогичным образом, комбинации ДНКаза / ТСТ (овечья плазма) и MSA / TCT (овечья плазма) и MSA / ДНКаза / ТСТ (овечья плазма) имели абсолютную специфичность (100%), но с различной чувствительностью (50%, 25% и 67%). , соответственно).

Таким образом, эффективность коагулазы трубки может быть улучшена путем одновременного тестирования, которое включает как ДНКазу, так и MSA. Для более высокой чувствительности и специфичности идентификация последствий Staphylococcus aureus может начинаться с MSA, ДНКазы, а затем с TCT. Примечательно, что улучшенная специфичность ТСТ существенно не изменила первоначально наблюдаемую высокую чувствительность.Настоятельно рекомендуется использование MSA перед TCT / ДНКазой из-за отрицательного фактора слипания и положительного стафилококка на коагулазную пробирку, которые все чаще восстанавливаются от инфекций человека. Эти изоляты также продуцируют термостойкую ДНКазу и могут быть ошибочно идентифицированы как Staphylococcus aureus . Однако эти штаммы можно отличить от Staphylococcus aureus по их неспособности производить кислоту из мальтозы, лактозы и маннита. Более того, редкие штаммы Staphylococcus aureus могут быть коагулазонегативными [9], но изоляты животных ( S.intermidius, S. hyicus, S. delphini и S. schleiferi subsp. coagulans ) может быть положительным по пробирке на коагулазу [9, 33, 34]; их дифференциация также требует роста MSA.

Прогностические значения

Рост на MSA имел самую высокую отрицательную прогностическую ценность (NPV), за которой следовала ДНКаза, в то время как пробирочная коагулаза имела самое низкое NPV (что не соответствовало изначально наблюдаемой высокой чувствительности, см. Таблицу 3). И наоборот, комбинации тестов дали абсолютные NPV (100%), за исключением ДНКазы / MSA (NPV 92%), таблица 3.Высокие значения NPV тестовых комбинаций, особенно тех, которые включают TCT, показывают, что тестовые комбинации могут быть надежно использованы при рутинной идентификации Staphylococcus aureus . ДНКаза имела самую высокую положительную прогностическую ценность (PPV), за ней следовали MSA (96% и 83% соответственно). Напротив, коагулаза в пробирке сама по себе приводила к средним значениям PPV (54% и 50%), см. Таблицу 3. Интересно, что комбинации тестов приводили к высоким значениям PPV, причем те, которые включали ДНКазу, имели самые высокие значения PPV (95%), см. Таблицу 3.Таким образом, что касается NPV, специфичность TCT может быть улучшена путем одновременной идентификации изолятов с помощью ДНКазы и MSA.

Таким образом, для идеальной идентификации клинических изолятов Staphylococcus aureus требуется серия тестов. Staphylococcus aureus чаще встречаются, чем инфекции, вызванные другими бактериями, особенно в условиях высокой распространенности ВИЧ / СПИДа [35–37]. Это гарантирует правильную идентификацию изолятов для достижения лучших результатов лечения.Поскольку представлены варианты повышения чувствительности и специфичности, эти данные улучшат идентификацию Staphylococcal aureus в клинических образцах.

Рекомендации

Для рутинной идентификации Staphylococcus aureus из клинических образцов мы рекомендуем одновременное использование всех трех тестов (начиная с анализа роста на MSA, ДНКазе и пробирке коагулазы) в условиях, когда плазма кролика или лошади недоступна. Рекомендуется скрининг плазмы других видов (например, кролика, козы, свиньи и крупного рогатого скота), который может быть дешевле и безопаснее и, как сообщается, более эффективен, чем человеческая плазма с ТСТ.Кроме того, рекомендуется генотипирование клинических изолятов стафилококков для определения изолятов CoNS и определения распространенности редких Staphylococcus aureus и животных изолятов в образцах от человека в Уганде.

Оценка четырех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus по культурам крови

J Clin Microbiol. 1998 Apr; 36 (4): 1032–1034.

Центр инфекционных заболеваний и лабораторные службы микробиологии, Институт клинической патологии и медицинских исследований, Больница Вестмид, Вестмид, Новый Южный Уэльс, 2145, Австралия

Получено 1 октября 1997 г .; Изменения запрошены 12 ноября 1997 г .; Принята к печати 5 декабря 1997 г.

Copyright © 1998, Американское общество микробиологов. Эта статья цитируется в других статьях PMC.

Abstract

Идентификация Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови имеет клиническое значение, но требует быстрого и надежного теста. Ранее биохимические, иммунологические, пробирочные методы коагулазы и термостабильных эндонуклеаз показали переменную чувствительность и специфичность. Тестирование непосредственно из бульона культуры крови не описано для латексного набора Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.), а модифицированные стандартные тесты не использовались с новыми системами культивирования крови с постоянным контролем. Кроме того, коммерческий набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) использовался для обнаружения S. aureus непосредственно из системы культивирования крови Vital (bioMerieux, Marcy l’Etoile, Франция), но его эффективность не оценивалась. с другими постоянно контролируемыми системами. Всего было проведено 201 клинический посев крови (система культивирования BACTEC 9240; Johnston Laboratories, Inc.), в которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, похожие на стафилококки, оценивались проспективно. Сравнивались набор Staphaurex Plus, пробирочный тест на коагулазу, тест на термостабильную эндонуклеазу и набор для стафилококка RAPIDEC. Чувствительность составила 23, 92, 85 и 98%, а специфичность — 99, 100, 93 и 100% соответственно. Набор стафилококка RAPIDEC был самым надежным тестом с диагностической точностью, сопоставимой с лучшими опубликованными результатами любого из быстрых тестов. Однако это был самый дорогой из испытаний и относительно трудоемкий.Пробирный тест на коагулазу также оказался чувствительным, самым простым в исполнении и недорогим.

Существующая в настоящее время доступность постоянно контролируемых систем культивирования крови сократила время до обнаружения положительных культур крови. Использование экспресс-тестов для микробиологической идентификации в сочетании с постоянно контролируемыми инструментами может значительно сократить общее время от сбора образцов до окончательной идентификации. Сообщалось о ряде экспресс-тестов для идентификации Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови.Метод диффузии в агаре для обнаружения термостабильных эндонуклеаз (ТЕ) оказался точным тестом с чувствительностью от 96 до 100% и 100% специфичностью (1, 11). Однако другие исследователи сочли его менее надежным: Davis et al. (3) сообщили о чувствительности 68% и специфичности 93%. Последующие отчеты показали, что точность теста зависит от компонентов системы культивирования крови и используемой среды ДНКазы (2, 4).

Традиционный метод дифференцирования S.aureus от коагулазонегативных стафилококков (ЦНС) в лабораторных условиях был проведен пробирочный тест на коагулазу (ТСТ). Этот тест был модифицирован для прямого обнаружения микроорганизмов в культурах крови через 2 часа с использованием бульона для культур крови. Davis et al. (3) обнаружили, что тест чувствителен (97%) и специфичен (100%), но совсем недавно Макдональд и Чапин (7) сообщили о более низкой чувствительности — 79,5%.

Иммунологические тесты для быстрой идентификации S. aureus из посевов крови стали поступать чаще.Тест Staphaurex оценивался в нескольких исследованиях (3, 7, 10, 12) и показал, что в целом он имеет низкую чувствительность (от 12 до 80%). Совсем недавно в продажу поступил тест Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.); этот набор распознает соматический и капсульный антиген, в дополнение к фактору слипания и стафилококковому белку А, как обнаружено исходным набором Staphaurex.

Биохимические тесты также использовались для прямого обнаружения S. aureus в культурах крови. Грамположительная идентификационная карта системы AutoMicrobic (Vitek Systems, Inc., Hazelwood, Mo.) оказался нечувствительным (6), но набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) оказался гораздо более надежным. Последний набор был специально разработан для обнаружения S. aureus в культурах крови Vital system (9). Набор идентифицировал 27 из 28 изолятов S. aureus из 28 в клинических культурах крови со 100% специфичностью с системами BACTEC NR-660 и Oxoid SIGNAL (8) и все 35 изолятов S. aureus с 98,8% специфичностью по системе Vital. (9).

Насколько нам известно, ни один из экспресс-тестов не применялся к системе непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Кроме того, тест Staphaurex Plus и набор для стафилококка RAPIDEC не подвергались проспективному сравнению с ранее описанными тестами. Используя систему культивирования крови BACTEC 9240 (Becton Dickinson Diagnostic Instrument Systems, Sparks, Md.), Было проведено прямое проспективное сравнение TCT, теста TE, набора Staphaurex Plus и набора для стафилококка RAPIDEC.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Обработка положительных посевов крови.

Кровь для посева была собрана в соответствии с клиническими критериями. Кровь, собранную у пациентов, инокулировали в аэробные и анаэробные флаконы BACTEC 9240 у постели больного, а затем инкубировали при 37 ° C в течение 5 дней. Бутылки с положительным индексом роста удаляли и проводили окрашивание по Граму. Бульоны, для которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие Staphylococcus spp. были включены в исследование. Staphylococcus spp. выделенные из плотных культур крови были идентифицированы стандартными лабораторными методами, которые были «золотым стандартом», с которым сравнивали чувствительность и специфичность экспресс-тестов.

Экспресс-тесты.

Было использовано несколько методов для быстрой (2-часовой) идентификации S. aureus . Для TCT 100 мкл хорошо перемешанного бульона инокулировали в 0,5 мл кроличьей плазмы (BBL Microbiology Systems) и смесь инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов.Тест считался положительным, если образовывался сгусток. Пробирки с отрицательным результатом инкубировали в течение ночи и считывали снова на следующий день.

Для теста ТЕ метод диффузии в агар был адаптирован из метода Берга и Меланда (1). Аликвоту культурального бульона объемом 2 мл кипятили 15 мин, а затем охлаждали до комнатной температуры. Шестимиллиметровые лунки вырезали в метиловом зеленом ДНКазном агаре (GIBCO Laboratories), и 60-мкл объемы жидкой фазы бульона переносили в лунки. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 2 ч, а затем активность ТЕ определяли по наличию прозрачной зоны с более темной зеленой линией, окружающей лунку.Культуры S. aureus и S. epidermidis были включены в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Для иммунологической идентификации S. aureus тест Staphaurex Plus был модифицирован для использования с бактериальным осадком. Осадок получали центрифугированием 4 мл бульона при 150 × g в течение 10 мин для осаждения эритроцитов. Затем супернатант центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для концентрирования бактерий, и латексный тест был проведен на бактериальном осадке в соответствии с инструкциями производителя.

Тест на стафилококк RAPIDEC был проведен в соответствии с инструкциями производителя с дополнительным этапом удаления эритроцитов. Вкратце, 3 мл бульона центрифугировали (150 × g в течение 10 минут) для осаждения эритроцитов, а затем 2 мл супернатанта смешивали с 2 мл дистиллированной воды и центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для получения бактериальный осадок. Затем осадок ресуспендировали в дистиллированной воде, чтобы обеспечить эквивалент мутности 4 по Макфарланду, и 50 мкл добавляли к купулам 0 и 1 (контроль и тест «ауреазы», ​​соответственно).Затем полоску инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов, и флуоресцентную реакцию исследовали в УФ-свете (365 нм). Тест считался положительным, если тестовая лунка была более флуоресцентной, чем контрольная.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего 201 посев крови, в которых прямая окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие стафилококки, были исследованы с помощью коммерческих иммунологических и биохимических тестов и быстрых модификаций обычных тестов (таблица). Эти культуры крови были получены в течение 5-месячного периода с апреля по август 1997 г. в лабораториях клинической микробиологии Института клинической патологии и медицинских исследований, Вестмид, Австралия.Из изолятов культур крови 70% относились к ЦНС и 30% были S. aureus ; 28% изолятов S. aureus были устойчивыми к метициллину. Две культуры крови содержали как S. aureus , так и ЦНС.

ТАБЛИЦА 1

Грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках, выделенных из 201 образца культуры крови

S. aureus 58 (29) 902 902

Организм (ы)	Количество изолятов (%)
Смешанный ( S.aureus и ЦНС)	2 (1)
Метициллин-чувствительный S. aureus	43 (72)
Метициллин-устойчивый S. aureus	CNS	141 (70)
Всего	201 (100)

Результаты представлены в таблице. Все тесты были выполнены проспективно, без знания окончательной микробиологической идентификации.Результаты для метициллин-устойчивого S. aureus существенно не отличались от результатов для метициллин-чувствительного S. aureus . Staphaurex Plus оказался наименее чувствительным из всех тестов, обнаружив только 23% изолятов S. aureus . Тест TE был умеренно чувствительным (85%), но продемонстрировал самую низкую специфичность (93%). TCT был чувствительным (92%) и специфичным (100%), но тест на стафилококк RAPIDEC был наиболее чувствительным (98%), высокоспецифичным (100%) и, следовательно, самым надежным тестом в целом.Все TCT, которые были ложноотрицательными через 2 часа, были положительными после инкубации в течение ночи. Тесты TCT, TE и RAPIDEC staph были положительными для 48 (80%) изолятов S. aureus . Тест TE был положительным для трех из пяти ложноотрицательных TCT, а TCT был положительным для семи из девяти ложноотрицательных тестов TE. Тест на стафилококк RAPIDEC всегда был положительным, когда ТСТ был положительным. Одна культура крови, содержащая как ЦНС, так и S. aureus , дала отрицательные результаты во всех тестах.Прогностическая ценность положительного результата TCT и теста на стафилококк RAPIDEC составила 100%, и эти тесты имели наивысшую прогностическую ценность отрицательного результата, 97 и 99%, соответственно.

ТАБЛИЦА 2

Результаты и стоимость экспресс-тестов для прямой идентификации S. aureus из посевов крови

Прямой тест	Кол-во положительных культур / нет. содержащий S. aureus a (% чувствительности)	Кол-во отрицательных культур / нет.содержащих ЦНС (% специфичности)	Прогностическая ценность положительного результата (%)	Прогнозирующая ценность отрицательного результата (%)	Стоимость / тест (долл. США)
Staphaurex Plus	14/60 (23)	139 / 141 (99)	87	75	6,63
TE	51/60 (85)	131/141 (93)	84	94	7,77
55/60 (92)	141/141 (100)	100	97	4.37
RAPIDEC staph	59/60 (98)	141/141 (100)	100	99	9,91

Суммарные затраты на материалы и рабочую силу для испытаний также показаны в Стол ; TCT был наименьшим, а набор для стафилококка RAPIDEC был самым дорогим.

ОБСУЖДЕНИЕ

Было показано, что использование быстрых прямых тестов с посевами крови имеет клиническое значение, побуждая к началу антибиотикотерапии или переходу на более подходящую антибактериальную терапию (13).Результаты нашего исследования показывают, что быстрые прямые тесты на культурах крови могут идентифицировать S. aureus со степенью точности, которая позволяет принимать такие клинические решения.

Как было показано ранее для других иммунологических латексных наборов, используемых с другими системами культивирования крови, мы обнаружили, что набор Staphaurex Plus не является ни чувствительным, ни специфичным при использовании с системой BACTEC 9240. Несколько методов подготовки посевного материала для быстрой идентификации с помощью латексных наборов были опробованы ранее, но с плохими результатами (3, 7, 10).Мы думали, что новый набор Staphaurex Plus с дополнительной возможностью обнаружения соматических и капсульных антигенов может дать лучшие результаты. К сожалению, наши результаты подтвердили ранее опубликованные, предполагая, что иммунологические латексные тесты, такие как набор Staphaurex Plus, не играют никакой роли в быстром обнаружении S. aureus из посевов крови.

Двухчасовая ТСТ оказалась лучше иммунологических тестов Davis et al. (3), сообщая о чувствительности 97% и специфичности 100%, когда ТСТ проводилась непосредственно с бульоном для посева крови, но аналогичное, более недавнее исследование (7) показало только умеренную чувствительность (79.5%). Было высказано предположение, что более низкая чувствительность могла быть связана либо с различиями в интерпретации слабоположительных результатов, либо с вариациями партий кроличьей плазмы от разных поставщиков. Мы обнаружили, что TCT является чувствительным и специфичным, простым в исполнении и относительно недорогим.

Некоторые исследователи сообщили, что ТЕ-тест подходит для быстрой идентификации S. aureus (1, 12) с превосходной чувствительностью и специфичностью в течение 2 часов, но другие не смогли воспроизвести эти результаты.Davis et al. (3) использовали тест с бактериальными гранулами и непосредственно на бульоне с культурой крови с чувствительностью 68 и 100% и специфичностью 93 и 89% соответственно. Мы также нашли тест менее надежным. Было показано, что тест чрезвычайно зависит от среды, при этом особенно важен источник ДНКазного агара (4). Сообщалось также о ложноположительных результатах с другими видами Staphylococcus (2). Кроме того, тест требует стадии кипячения, что делает его более сложным, чем TCT.

Самым чувствительным из тестов оказался стафилококковый тест RAPIDEC с 98% чувствительностью и 100% специфичностью. Когда изоляты из твердых сред (5) и культур крови (8) были протестированы с другими системами культивирования, была обнаружена 100% специфичность; однако для системы Vital был зарегистрирован один ложноположительный результат (9). Считалось, что это связано с чрезмерным гемолизом, проблемой, которая, как известно, приводит к ложноположительным результатам (11). Мы обнаружили один ложноотрицательный результат для 60 изолята S. aureus . Этот изолят, который дал отрицательные результаты во всех экспресс-тестах, был получен из одной из двух культур крови, в которых смешанный рост составил S.aureus и ЦНС. Это привело бы к получению посевного материала S. aureus меньше рекомендованного в контрольной лунке набора для стафилококка RAPIDEC. Когда на следующий день был повторен тест на стафилококк RAPIDEC с культуральным бульоном, результат был положительным, что позволяет предположить, что первоначального посевного материала было недостаточно. В другом исследовании, в котором тестировали бульоны для культур крови, один ложноотрицательный результат был обнаружен среди 28 изолятов S. aureus ; другие исследователи сообщили о 100% чувствительности (9).Тест был относительно трудоемким, требовал двух этапов центрифугирования и был самым дорогим.

Соответствие между TCT и тестом на стафилококк RAPIDEC было ожидаемым, поскольку оба теста выявляют коагулазу; стафилококк RAPIDEC был более чувствительным через 2 часа. Напротив, ТЕ-тест и ТСТ, которые обнаруживают разные ферменты, не показали одинаковой ассоциации. Тест Staphaurex Plus оказался слишком нечувствительным, чтобы его можно было сравнивать с другими экспресс-тестами.

Таким образом, мы сравнили модифицированные стандартные тесты и коммерческие тесты, которые ранее не оценивались на предмет их способности непосредственно обнаруживать S.aureus из системы непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Тест на стафилококк RAPIDEC был самым чувствительным, но и самым дорогим. TCT кроличьей плазмы также был чувствителен, уступая только набору стафилококка RAPIDEC; самые простые в исполнении; и самый дешевый. ТСТ и тест на стафилококк RAPIDEC имели положительную прогностическую ценность 100%; таким образом, при положительном тесте значимость изолята может быть подтверждена в течение нескольких часов после положительного посева крови, что позволяет избежать задержек в антимикробной терапии для S.aureus бактериемия. Однако, поскольку ни один из этих тестов не имел 100% отрицательной прогностической ценности, отрицательный тест потребовал бы лечения на основании клинических данных до дальнейшей идентификации изолята. После этого исследования TCT, проводимая с бульоном для посева крови, была принята в качестве стандартного теста в нашей лаборатории. Положительные результаты немедленно сообщаются как S. aureus , тогда как отрицательные результаты сообщаются как «грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках» до тех пор, пока на следующий день не будет проведена обычная идентификация и определение TCT.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Берг К., Мейленд Дж. А. Подтверждение бактериемии Staphylococcus aureus в тот же день термонуклеазным тестом. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand Sect B. 1986; 94: 291–292. [PubMed] [Google Scholar] 2. Бракстад О. Г., Меланд Дж. А. Прямая идентификация Staphylococcus aureus в культурах крови путем обнаружения гена, кодирующего термостабильную нуклеазу или продукт гена. APMIS. 1995; 103: 209–218. [PubMed] [Google Scholar] 3. Дэвис Т. Э., Фуллер Д. Д., Эшлеман Э. К.Быстрая прямая идентификация Staphylococcus aureus и Streptococcus pneumoniae в культурах крови с использованием коммерческих иммунологических наборов и модифицированных обычных тестов. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1992; 15: 295–300. [PubMed] [Google Scholar] 4. Фаруки Х., Мюррей П. Зависимость от среды для быстрого определения активности термонуклеаз в бульонах культур крови. J Clin Microbiol. 1986; 24: 482–483. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Гири С., Стивенс М. Экспресс-тест для обнаружения наиболее клинически значимых видов стафилококков .Med Lab Sci. 1991; 48: 99–105. [PubMed] [Google Scholar] 6. Хамуди, А. К., М. Дж. Маркон и Х. Дж. Кэннон. 1984. Оценка быстрой идентификации грамположительных кокков в положительных культурах крови с использованием грамположительной идентификационной карты Automicrobic System. 20: 171–174. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 7. Макдональд С. Л., Чапин К. Быстрая идентификация Staphylococcus aureus из бутылочек для культур крови с помощью классического двухчасового пробирного теста на коагулазу. J Clin Microbiol.1995; 33: 50–52. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Митчелл С. Дж, Гири С., Стивенс М. Обнаружение Staphylococcus aureus в культурах крови: оценка двухчасового метода. Med Lab Sci. 1991; 48: 106–109. [PubMed] [Google Scholar] 9. Neyret C, Lelievre H, Lina G, Vandenesch F, Etienne J. Оценка коммерческого тестового набора для быстрого обнаружения Staphylococcus aureus в культурах крови. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1997. 16: 165–166. [PubMed] [Google Scholar] 10.Раппапорт Т., Сойер К. П., Начамкин И. Оценка нескольких коммерческих биохимических и иммунологических методов быстрой идентификации грамположительных кокков непосредственно из посевов крови. J Clin Microbiol. 1988; 26: 1335–1338. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Ратнер Х. Б., Стрэттон С. В. Термонуклеазный тест для идентификации Staphylococcus aureus в тот же день в культурах крови. J Clin Microbiol. 1985; 21: 995–996. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Скульник М., Симор А. Е., Патель М. П., Симпсон Х. Э., О’Куинн К. Дж., Лоу Д. Е., Филлипс А. М., Смолл Г. У.Оценка трех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus в культурах крови. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1994; 19: 5–8. [PubMed] [Google Scholar] 13. Тренхольм Г. М., Каплан Р. Л., Каракусис П. Х., Стайн Т., Фюрер Дж., Ландау В., Левин С. Клиническое влияние быстрой идентификации и тестирования чувствительности изолятов бактериальных культур крови. J Clin Microbiol. 1989; 27: 1342–1345. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Оценка четырех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus по культурам крови

J Clin Microbiol.1998 Apr; 36 (4): 1032–1034.

Центр инфекционных заболеваний и лабораторные службы микробиологии, Институт клинической патологии и медицинских исследований, Больница Вестмид, Вестмид, Новый Южный Уэльс, 2145, Австралия

Получено 1 октября 1997 г .; Изменения запрошены 12 ноября 1997 г .; Принято 5 декабря 1997 г.

Copyright © 1998, Американское общество микробиологов

Abstract

Идентификация Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови имеет клиническое значение, но требует быстрого и надежного теста.Ранее биохимические, иммунологические, пробирочные методы коагулазы и термостабильных эндонуклеаз показали переменную чувствительность и специфичность. Тестирование непосредственно из бульона для культур крови не описано для латексного набора Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.), а модифицированные стандартные тесты не использовались с новыми системами культивирования крови с постоянным контролем. Кроме того, коммерческий набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) использовался для обнаружения S. aureus непосредственно из системы культивирования крови Vital (bioMerieux, Marcy l’Etoile, Франция), но его эффективность не оценивалась. с другими постоянно контролируемыми системами.Проспективно оценивали в общей сложности 201 клиническую культуру крови (система культивирования BACTEC 9240; Johnston Laboratories, Inc.), в которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие стафилококки. Сравнивались набор Staphaurex Plus, пробирочный тест на коагулазу, тест на термостабильную эндонуклеазу и набор для стафилококка RAPIDEC. Чувствительность составила 23, 92, 85 и 98%, а специфичность — 99, 100, 93 и 100% соответственно. Набор стафилококка RAPIDEC был самым надежным тестом с диагностической точностью, сопоставимой с лучшими опубликованными результатами любого из быстрых тестов.Однако это был самый дорогой из испытаний и относительно трудоемкий. Пробирный тест на коагулазу также оказался чувствительным, самым простым в исполнении и недорогим.

Существующая в настоящее время доступность постоянно контролируемых систем культивирования крови сократила время до обнаружения положительных культур крови. Использование экспресс-тестов для микробиологической идентификации в сочетании с постоянно контролируемыми инструментами может значительно сократить общее время от сбора образцов до окончательной идентификации.Сообщалось о ряде экспресс-тестов для идентификации Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови. Метод диффузии в агаре для обнаружения термостабильных эндонуклеаз (ТЕ) оказался точным тестом с чувствительностью от 96 до 100% и 100% специфичностью (1, 11). Однако другие исследователи сочли его менее надежным: Davis et al. (3) сообщили о чувствительности 68% и специфичности 93%. Последующие отчеты показали, что точность теста зависит от компонентов системы культивирования крови и используемой среды ДНКазы (2, 4).

Традиционным методом дифференциации S. aureus от коагулазонегативных стафилококков (ЦНС) в лаборатории был пробирочный тест на коагулазу (ТСТ). Этот тест был модифицирован для прямого обнаружения микроорганизмов в культурах крови через 2 часа с использованием бульона для культур крови. Davis et al. (3) обнаружили, что тест чувствителен (97%) и специфичен (100%), но совсем недавно Макдональд и Чапин (7) сообщили о более низкой чувствительности — 79,5%.

Иммунологические тесты для быстрой идентификации S.aureus из посевов крови были зарегистрированы чаще. Тест Staphaurex был оценен в нескольких исследованиях (3, 7, 10, 12) и показал, что в целом он имеет низкую чувствительность (от 12 до 80%). Совсем недавно в продажу поступил тест Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.); этот набор распознает соматический и капсульный антиген, в дополнение к фактору слипания и стафилококковому белку А, как обнаружено исходным набором Staphaurex.

Биохимические тесты также использовались для прямого обнаружения S.aureus из посевов крови. Грамположительная идентификационная карта системы AutoMicrobic (Vitek Systems, Inc., Хейзелвуд, Миссури) оказалась нечувствительной (6), но набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) оказался гораздо более надежным. Последний набор был специально разработан для обнаружения S. aureus в культурах крови Vital system (9). Набор идентифицировал 27 из 28 изолята S. aureus в клинических культурах крови со 100% специфичностью с системами BACTEC NR-660 и Oxoid SIGNAL (8) и все 35 S.aureus со специфичностью 98,8% по системе Vital (9).

Насколько нам известно, ни один из экспресс-тестов не применялся к системе непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Кроме того, тест Staphaurex Plus и набор для стафилококка RAPIDEC не подвергались проспективному сравнению с ранее описанными тестами. Используя систему культивирования крови BACTEC 9240 (Becton Dickinson Diagnostic Instrument Systems, Sparks, Md.), Было проведено прямое проспективное сравнение TCT, теста TE, набора Staphaurex Plus и набора для стафилококка RAPIDEC.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Обработка положительных посевов крови.

Кровь для посева была собрана в соответствии с клиническими критериями. Кровь, собранную у пациентов, инокулировали в аэробные и анаэробные флаконы BACTEC 9240 у постели больного, а затем инкубировали при 37 ° C в течение 5 дней. Бутылки с положительным индексом роста удаляли и проводили окрашивание по Граму. Бульоны, для которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие Staphylococcus spp. были включены в исследование. Staphylococcus spp. выделенные из плотных культур крови были идентифицированы стандартными лабораторными методами, которые были «золотым стандартом», с которым сравнивали чувствительность и специфичность экспресс-тестов.

Экспресс-тесты.

Было использовано несколько методов для быстрой (2-часовой) идентификации S. aureus . Для TCT 100 мкл хорошо перемешанного бульона инокулировали в 0,5 мл кроличьей плазмы (BBL Microbiology Systems) и смесь инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов.Тест считался положительным, если образовывался сгусток. Пробирки с отрицательным результатом инкубировали в течение ночи и считывали снова на следующий день.

Для теста ТЕ метод диффузии в агар был адаптирован из метода Берга и Меланда (1). Аликвоту культурального бульона объемом 2 мл кипятили 15 мин, а затем охлаждали до комнатной температуры. Шестимиллиметровые лунки вырезали в метиловом зеленом ДНКазном агаре (GIBCO Laboratories), и 60-мкл объемы жидкой фазы бульона переносили в лунки. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 2 ч, а затем активность ТЕ определяли по наличию прозрачной зоны с более темной зеленой линией, окружающей лунку.Культуры S. aureus и S. epidermidis были включены в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Для иммунологической идентификации S. aureus тест Staphaurex Plus был модифицирован для использования с бактериальным осадком. Осадок получали центрифугированием 4 мл бульона при 150 × g в течение 10 мин для осаждения эритроцитов. Затем супернатант центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для концентрирования бактерий, и латексный тест был проведен на бактериальном осадке в соответствии с инструкциями производителя.

Тест на стафилококк RAPIDEC был проведен в соответствии с инструкциями производителя с дополнительным этапом удаления эритроцитов. Вкратце, 3 мл бульона центрифугировали (150 × g в течение 10 минут) для осаждения эритроцитов, а затем 2 мл супернатанта смешивали с 2 мл дистиллированной воды и центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для получения бактериальный осадок. Затем осадок ресуспендировали в дистиллированной воде, чтобы обеспечить эквивалент мутности 4 по Макфарланду, и 50 мкл добавляли к купулам 0 и 1 (контроль и тест «ауреазы», ​​соответственно).Затем полоску инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов, и флуоресцентную реакцию исследовали в УФ-свете (365 нм). Тест считался положительным, если тестовая лунка была более флуоресцентной, чем контрольная.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего 201 посев крови, в которых прямая окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие стафилококки, были исследованы с помощью коммерческих иммунологических и биохимических тестов и быстрых модификаций обычных тестов (таблица). Эти культуры крови были получены в течение 5-месячного периода с апреля по август 1997 г. в лабораториях клинической микробиологии Института клинической патологии и медицинских исследований, Вестмид, Австралия.Из изолятов культур крови 70% относились к ЦНС и 30% были S. aureus ; 28% изолятов S. aureus были устойчивыми к метициллину. Две культуры крови содержали как S. aureus , так и ЦНС.

ТАБЛИЦА 1

Грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках, выделенных из 201 образца культуры крови

S. aureus 58 (29) 902 902

Организм (ы)	Количество изолятов (%)
Смешанный ( S.aureus и ЦНС)	2 (1)
Метициллин-чувствительный S. aureus	43 (72)
Метициллин-устойчивый S. aureus	CNS	141 (70)
Всего	201 (100)

Результаты представлены в таблице. Все тесты были выполнены проспективно, без знания окончательной микробиологической идентификации.Результаты для метициллин-устойчивого S. aureus существенно не отличались от результатов для метициллин-чувствительного S. aureus . Staphaurex Plus оказался наименее чувствительным из всех тестов, обнаружив только 23% изолятов S. aureus . Тест TE был умеренно чувствительным (85%), но продемонстрировал самую низкую специфичность (93%). TCT был чувствительным (92%) и специфичным (100%), но тест на стафилококк RAPIDEC был наиболее чувствительным (98%), высокоспецифичным (100%) и, следовательно, самым надежным тестом в целом.Все TCT, которые были ложноотрицательными через 2 часа, были положительными после инкубации в течение ночи. Тесты TCT, TE и RAPIDEC staph были положительными для 48 (80%) изолятов S. aureus . Тест TE был положительным для трех из пяти ложноотрицательных TCT, а TCT был положительным для семи из девяти ложноотрицательных тестов TE. Тест на стафилококк RAPIDEC всегда был положительным, когда ТСТ был положительным. Одна культура крови, содержащая как ЦНС, так и S. aureus , дала отрицательные результаты во всех тестах.Прогностическая ценность положительного результата TCT и теста на стафилококк RAPIDEC составила 100%, и эти тесты имели наивысшую прогностическую ценность отрицательного результата, 97 и 99%, соответственно.

ТАБЛИЦА 2

Результаты и стоимость экспресс-тестов для прямой идентификации S. aureus из посевов крови

Прямой тест	Кол-во положительных культур / нет. содержащий S. aureus a (% чувствительности)	Кол-во отрицательных культур / нет.содержащих ЦНС (% специфичности)	Прогностическая ценность положительного результата (%)	Прогнозирующая ценность отрицательного результата (%)	Стоимость / тест (долл. США)
Staphaurex Plus	14/60 (23)	139 / 141 (99)	87	75	6,63
TE	51/60 (85)	131/141 (93)	84	94	7,77
55/60 (92)	141/141 (100)	100	97	4.37
RAPIDEC staph	59/60 (98)	141/141 (100)	100	99	9,91

Суммарные затраты на материалы и рабочую силу для испытаний также показаны в Стол ; TCT был наименьшим, а набор для стафилококка RAPIDEC был самым дорогим.

ОБСУЖДЕНИЕ

Было показано, что использование быстрых прямых тестов с посевами крови имеет клиническое значение, побуждая к началу антибиотикотерапии или переходу на более подходящую антибактериальную терапию (13).Результаты нашего исследования показывают, что быстрые прямые тесты на культурах крови могут идентифицировать S. aureus со степенью точности, которая позволяет принимать такие клинические решения.

Как было показано ранее для других иммунологических латексных наборов, используемых с другими системами культивирования крови, мы обнаружили, что набор Staphaurex Plus не является ни чувствительным, ни специфичным при использовании с системой BACTEC 9240. Несколько методов подготовки посевного материала для быстрой идентификации с помощью латексных наборов были опробованы ранее, но с плохими результатами (3, 7, 10).Мы думали, что новый набор Staphaurex Plus с дополнительной возможностью обнаружения соматических и капсульных антигенов может дать лучшие результаты. К сожалению, наши результаты подтвердили ранее опубликованные, предполагая, что иммунологические латексные тесты, такие как набор Staphaurex Plus, не играют никакой роли в быстром обнаружении S. aureus из посевов крови.

Двухчасовая ТСТ оказалась лучше иммунологических тестов Davis et al. (3), сообщая о чувствительности 97% и специфичности 100%, когда ТСТ проводилась непосредственно с бульоном для посева крови, но аналогичное, более недавнее исследование (7) показало только умеренную чувствительность (79.5%). Было высказано предположение, что более низкая чувствительность могла быть связана либо с различиями в интерпретации слабоположительных результатов, либо с вариациями партий кроличьей плазмы от разных поставщиков. Мы обнаружили, что TCT является чувствительным и специфичным, простым в исполнении и относительно недорогим.

Некоторые исследователи сообщили, что ТЕ-тест подходит для быстрой идентификации S. aureus (1, 12) с превосходной чувствительностью и специфичностью в течение 2 часов, но другие не смогли воспроизвести эти результаты.Davis et al. (3) использовали тест с бактериальными гранулами и непосредственно на бульоне с культурой крови с чувствительностью 68 и 100% и специфичностью 93 и 89% соответственно. Мы также нашли тест менее надежным. Было показано, что тест чрезвычайно зависит от среды, при этом особенно важен источник ДНКазного агара (4). Сообщалось также о ложноположительных результатах с другими видами Staphylococcus (2). Кроме того, тест требует стадии кипячения, что делает его более сложным, чем TCT.

Самым чувствительным из тестов оказался стафилококковый тест RAPIDEC с 98% чувствительностью и 100% специфичностью. Когда изоляты из твердых сред (5) и культур крови (8) были протестированы с другими системами культивирования, была обнаружена 100% специфичность; однако для системы Vital был зарегистрирован один ложноположительный результат (9). Считалось, что это связано с чрезмерным гемолизом, проблемой, которая, как известно, приводит к ложноположительным результатам (11). Мы обнаружили один ложноотрицательный результат для 60 изолята S. aureus . Этот изолят, который дал отрицательные результаты во всех экспресс-тестах, был получен из одной из двух культур крови, в которых смешанный рост составил S.aureus и ЦНС. Это привело бы к получению посевного материала S. aureus меньше рекомендованного в контрольной лунке набора для стафилококка RAPIDEC. Когда на следующий день был повторен тест на стафилококк RAPIDEC с культуральным бульоном, результат был положительным, что позволяет предположить, что первоначального посевного материала было недостаточно. В другом исследовании, в котором тестировали бульоны для культур крови, один ложноотрицательный результат был обнаружен среди 28 изолятов S. aureus ; другие исследователи сообщили о 100% чувствительности (9).Тест был относительно трудоемким, требовал двух этапов центрифугирования и был самым дорогим.

Соответствие между TCT и тестом на стафилококк RAPIDEC было ожидаемым, поскольку оба теста выявляют коагулазу; стафилококк RAPIDEC был более чувствительным через 2 часа. Напротив, ТЕ-тест и ТСТ, которые обнаруживают разные ферменты, не показали одинаковой ассоциации. Тест Staphaurex Plus оказался слишком нечувствительным, чтобы его можно было сравнивать с другими экспресс-тестами.

Таким образом, мы сравнили модифицированные стандартные тесты и коммерческие тесты, которые ранее не оценивались на предмет их способности непосредственно обнаруживать S.aureus из системы непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Тест на стафилококк RAPIDEC был самым чувствительным, но и самым дорогим. TCT кроличьей плазмы также был чувствителен, уступая только набору стафилококка RAPIDEC; самые простые в исполнении; и самый дешевый. ТСТ и тест на стафилококк RAPIDEC имели положительную прогностическую ценность 100%; таким образом, при положительном тесте значимость изолята может быть подтверждена в течение нескольких часов после положительного посева крови, что позволяет избежать задержек в антимикробной терапии для S.aureus бактериемия. Однако, поскольку ни один из этих тестов не имел 100% отрицательной прогностической ценности, отрицательный тест потребовал бы лечения на основании клинических данных до дальнейшей идентификации изолята. После этого исследования TCT, проводимая с бульоном для посева крови, была принята в качестве стандартного теста в нашей лаборатории. Положительные результаты немедленно сообщаются как S. aureus , тогда как отрицательные результаты сообщаются как «грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках» до тех пор, пока на следующий день не будет проведена обычная идентификация и определение TCT.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Берг К., Мейленд Дж. А. Подтверждение бактериемии Staphylococcus aureus в тот же день термонуклеазным тестом. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand Sect B. 1986; 94: 291–292. [PubMed] [Google Scholar] 2. Бракстад О. Г., Меланд Дж. А. Прямая идентификация Staphylococcus aureus в культурах крови путем обнаружения гена, кодирующего термостабильную нуклеазу или продукт гена. APMIS. 1995; 103: 209–218. [PubMed] [Google Scholar] 3. Дэвис Т. Э., Фуллер Д. Д., Эшлеман Э. К.Быстрая прямая идентификация Staphylococcus aureus и Streptococcus pneumoniae в культурах крови с использованием коммерческих иммунологических наборов и модифицированных обычных тестов. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1992; 15: 295–300. [PubMed] [Google Scholar] 4. Фаруки Х., Мюррей П. Зависимость от среды для быстрого определения активности термонуклеаз в бульонах культур крови. J Clin Microbiol. 1986; 24: 482–483. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Гири С., Стивенс М. Экспресс-тест для обнаружения наиболее клинически значимых видов стафилококков .Med Lab Sci. 1991; 48: 99–105. [PubMed] [Google Scholar] 6. Хамуди, А. К., М. Дж. Маркон и Х. Дж. Кэннон. 1984. Оценка быстрой идентификации грамположительных кокков в положительных культурах крови с использованием грамположительной идентификационной карты Automicrobic System. 20: 171–174. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 7. Макдональд С. Л., Чапин К. Быстрая идентификация Staphylococcus aureus из бутылочек для культур крови с помощью классического двухчасового пробирного теста на коагулазу. J Clin Microbiol.1995; 33: 50–52. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Митчелл С. Дж, Гири С., Стивенс М. Обнаружение Staphylococcus aureus в культурах крови: оценка двухчасового метода. Med Lab Sci. 1991; 48: 106–109. [PubMed] [Google Scholar] 9. Neyret C, Lelievre H, Lina G, Vandenesch F, Etienne J. Оценка коммерческого тестового набора для быстрого обнаружения Staphylococcus aureus в культурах крови. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1997. 16: 165–166. [PubMed] [Google Scholar] 10.Раппапорт Т., Сойер К. П., Начамкин И. Оценка нескольких коммерческих биохимических и иммунологических методов быстрой идентификации грамположительных кокков непосредственно из посевов крови. J Clin Microbiol. 1988; 26: 1335–1338. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Ратнер Х. Б., Стрэттон С. В. Термонуклеазный тест для идентификации Staphylococcus aureus в тот же день в культурах крови. J Clin Microbiol. 1985; 21: 995–996. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Скульник М., Симор А. Е., Патель М. П., Симпсон Х. Э., О’Куинн К. Дж., Лоу Д. Е., Филлипс А. М., Смолл Г. У.Оценка трех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus в культурах крови. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1994; 19: 5–8. [PubMed] [Google Scholar] 13. Тренхольм Г. М., Каплан Р. Л., Каракусис П. Х., Стайн Т., Фюрер Дж., Ландау В., Левин С. Клиническое влияние быстрой идентификации и тестирования чувствительности изолятов бактериальных культур крови. J Clin Microbiol. 1989; 27: 1342–1345. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Оценка четырех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus по культурам крови

J Clin Microbiol.1998 Apr; 36 (4): 1032–1034.

Центр инфекционных заболеваний и лабораторные службы микробиологии, Институт клинической патологии и медицинских исследований, Больница Вестмид, Вестмид, Новый Южный Уэльс, 2145, Австралия

Получено 1 октября 1997 г .; Изменения запрошены 12 ноября 1997 г .; Принято 5 декабря 1997 г.

Copyright © 1998, Американское общество микробиологов

Abstract

Идентификация Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови имеет клиническое значение, но требует быстрого и надежного теста.Ранее биохимические, иммунологические, пробирочные методы коагулазы и термостабильных эндонуклеаз показали переменную чувствительность и специфичность. Тестирование непосредственно из бульона для культур крови не описано для латексного набора Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.), а модифицированные стандартные тесты не использовались с новыми системами культивирования крови с постоянным контролем. Кроме того, коммерческий набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) использовался для обнаружения S. aureus непосредственно из системы культивирования крови Vital (bioMerieux, Marcy l’Etoile, Франция), но его эффективность не оценивалась. с другими постоянно контролируемыми системами.Проспективно оценивали в общей сложности 201 клиническую культуру крови (система культивирования BACTEC 9240; Johnston Laboratories, Inc.), в которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие стафилококки. Сравнивались набор Staphaurex Plus, пробирочный тест на коагулазу, тест на термостабильную эндонуклеазу и набор для стафилококка RAPIDEC. Чувствительность составила 23, 92, 85 и 98%, а специфичность — 99, 100, 93 и 100% соответственно. Набор стафилококка RAPIDEC был самым надежным тестом с диагностической точностью, сопоставимой с лучшими опубликованными результатами любого из быстрых тестов.Однако это был самый дорогой из испытаний и относительно трудоемкий. Пробирный тест на коагулазу также оказался чувствительным, самым простым в исполнении и недорогим.

Существующая в настоящее время доступность постоянно контролируемых систем культивирования крови сократила время до обнаружения положительных культур крови. Использование экспресс-тестов для микробиологической идентификации в сочетании с постоянно контролируемыми инструментами может значительно сократить общее время от сбора образцов до окончательной идентификации.Сообщалось о ряде экспресс-тестов для идентификации Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови. Метод диффузии в агаре для обнаружения термостабильных эндонуклеаз (ТЕ) оказался точным тестом с чувствительностью от 96 до 100% и 100% специфичностью (1, 11). Однако другие исследователи сочли его менее надежным: Davis et al. (3) сообщили о чувствительности 68% и специфичности 93%. Последующие отчеты показали, что точность теста зависит от компонентов системы культивирования крови и используемой среды ДНКазы (2, 4).

Традиционным методом дифференциации S. aureus от коагулазонегативных стафилококков (ЦНС) в лаборатории был пробирочный тест на коагулазу (ТСТ). Этот тест был модифицирован для прямого обнаружения микроорганизмов в культурах крови через 2 часа с использованием бульона для культур крови. Davis et al. (3) обнаружили, что тест чувствителен (97%) и специфичен (100%), но совсем недавно Макдональд и Чапин (7) сообщили о более низкой чувствительности — 79,5%.

Иммунологические тесты для быстрой идентификации S.aureus из посевов крови были зарегистрированы чаще. Тест Staphaurex оценивался в нескольких исследованиях (3, 7, 10, 12) и показал, что в целом он имеет низкую чувствительность (от 12 до 80%). Совсем недавно в продажу поступил тест Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.); этот набор распознает соматический и капсульный антиген, в дополнение к фактору слипания и стафилококковому белку А, как обнаружено исходным набором Staphaurex.

Биохимические тесты также использовались для прямого обнаружения S.aureus из посевов крови. Грамположительная идентификационная карта системы AutoMicrobic (Vitek Systems, Inc., Хейзелвуд, Миссури) оказалась нечувствительной (6), но набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) оказался гораздо более надежным. Последний набор был специально разработан для обнаружения S. aureus в культурах крови Vital system (9). Набор идентифицировал 27 из 28 изолята S. aureus в клинических культурах крови со 100% специфичностью с системами BACTEC NR-660 и Oxoid SIGNAL (8) и все 35 S.aureus со специфичностью 98,8% по системе Vital (9).

Насколько нам известно, ни один из экспресс-тестов не применялся к системе непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Кроме того, тест Staphaurex Plus и набор для стафилококка RAPIDEC не подвергались проспективному сравнению с ранее описанными тестами. Используя систему культивирования крови BACTEC 9240 (Becton Dickinson Diagnostic Instrument Systems, Sparks, Md.), Было проведено прямое проспективное сравнение TCT, теста TE, набора Staphaurex Plus и набора для стафилококка RAPIDEC.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Обработка положительных посевов крови.

Кровь для посева была собрана в соответствии с клиническими критериями. Кровь, собранную у пациентов, инокулировали в аэробные и анаэробные флаконы BACTEC 9240 у постели больного, а затем инкубировали при 37 ° C в течение 5 дней. Бутылки с положительным индексом роста удаляли и проводили окрашивание по Граму. Бульоны, для которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие Staphylococcus spp. были включены в исследование. Staphylococcus spp. выделенные из плотных культур крови были идентифицированы стандартными лабораторными методами, которые были «золотым стандартом», с которым сравнивали чувствительность и специфичность экспресс-тестов.

Экспресс-тесты.

Было использовано несколько методов для быстрой (2-часовой) идентификации S. aureus . Для TCT 100 мкл хорошо перемешанного бульона инокулировали в 0,5 мл кроличьей плазмы (BBL Microbiology Systems) и смесь инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов.Тест считался положительным, если образовывался сгусток. Пробирки с отрицательным результатом инкубировали в течение ночи и считывали снова на следующий день.

Для теста ТЕ метод диффузии в агар был адаптирован из метода Берга и Меланда (1). Аликвоту культурального бульона объемом 2 мл кипятили 15 мин, а затем охлаждали до комнатной температуры. Шестимиллиметровые лунки вырезали в метиловом зеленом ДНКазном агаре (GIBCO Laboratories), и 60-мкл объемы жидкой фазы бульона переносили в лунки. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 2 ч, а затем активность ТЕ определяли по наличию прозрачной зоны с более темной зеленой линией, окружающей лунку.Культуры S. aureus и S. epidermidis были включены в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Для иммунологической идентификации S. aureus тест Staphaurex Plus был модифицирован для использования с бактериальным осадком. Осадок получали центрифугированием 4 мл бульона при 150 × g в течение 10 мин для осаждения эритроцитов. Затем супернатант центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для концентрирования бактерий, и латексный тест был проведен на бактериальном осадке в соответствии с инструкциями производителя.

Тест на стафилококк RAPIDEC был проведен в соответствии с инструкциями производителя с дополнительным этапом удаления эритроцитов. Вкратце, 3 мл бульона центрифугировали (150 × g в течение 10 минут) для осаждения эритроцитов, а затем 2 мл супернатанта смешивали с 2 мл дистиллированной воды и центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для получения бактериальный осадок. Затем осадок ресуспендировали в дистиллированной воде, чтобы обеспечить эквивалент мутности 4 по Макфарланду, и 50 мкл добавляли к купулам 0 и 1 (контроль и тест «ауреазы», ​​соответственно).Затем полоску инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов, и флуоресцентную реакцию исследовали в УФ-свете (365 нм). Тест считался положительным, если тестовая лунка была более флуоресцентной, чем контрольная.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего 201 посев крови, в которых прямая окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие стафилококки, были исследованы с помощью коммерческих иммунологических и биохимических тестов и быстрых модификаций обычных тестов (таблица). Эти культуры крови были получены в течение 5-месячного периода с апреля по август 1997 г. в лабораториях клинической микробиологии Института клинической патологии и медицинских исследований, Вестмид, Австралия.Из изолятов культур крови 70% относились к ЦНС и 30% были S. aureus ; 28% изолятов S. aureus были устойчивыми к метициллину. Две культуры крови содержали как S. aureus , так и ЦНС.

ТАБЛИЦА 1

Грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках, выделенных из 201 образца культуры крови

S. aureus 58 (29) 902 902

Организм (ы)	Количество изолятов (%)
Смешанный ( S.aureus и ЦНС)	2 (1)
Метициллин-чувствительный S. aureus	43 (72)
Метициллин-устойчивый S. aureus	CNS	141 (70)
Всего	201 (100)

Результаты представлены в таблице. Все тесты были выполнены проспективно, без знания окончательной микробиологической идентификации.Результаты для метициллин-устойчивого S. aureus существенно не отличались от результатов для метициллин-чувствительного S. aureus . Staphaurex Plus оказался наименее чувствительным из всех тестов, обнаружив только 23% изолятов S. aureus . Тест TE был умеренно чувствительным (85%), но продемонстрировал самую низкую специфичность (93%). TCT был чувствительным (92%) и специфичным (100%), но тест на стафилококк RAPIDEC был наиболее чувствительным (98%), высокоспецифичным (100%) и, следовательно, самым надежным тестом в целом.Все TCT, которые были ложноотрицательными через 2 часа, были положительными после инкубации в течение ночи. Тесты TCT, TE и RAPIDEC staph были положительными для 48 (80%) изолятов S. aureus . Тест TE был положительным для трех из пяти ложноотрицательных TCT, а TCT был положительным для семи из девяти ложноотрицательных тестов TE. Тест на стафилококк RAPIDEC всегда был положительным, когда ТСТ был положительным. Одна культура крови, содержащая как ЦНС, так и S. aureus , дала отрицательные результаты во всех тестах.Прогностическая ценность положительного результата TCT и теста на стафилококк RAPIDEC составила 100%, и эти тесты имели наивысшую прогностическую ценность отрицательного результата, 97 и 99%, соответственно.

ТАБЛИЦА 2

Результаты и стоимость экспресс-тестов для прямой идентификации S. aureus из посевов крови

Прямой тест	Кол-во положительных культур / нет. содержащий S. aureus a (% чувствительности)	Кол-во отрицательных культур / нет.содержащих ЦНС (% специфичности)	Прогностическая ценность положительного результата (%)	Прогнозирующая ценность отрицательного результата (%)	Стоимость / тест (долл. США)
Staphaurex Plus	14/60 (23)	139 / 141 (99)	87	75	6,63
TE	51/60 (85)	131/141 (93)	84	94	7,77
55/60 (92)	141/141 (100)	100	97	4.37
RAPIDEC staph	59/60 (98)	141/141 (100)	100	99	9,91

Суммарные затраты на материалы и рабочую силу для испытаний также показаны в Стол ; TCT был наименьшим, а набор для стафилококка RAPIDEC был самым дорогим.

ОБСУЖДЕНИЕ

Было показано, что использование быстрых прямых тестов с посевами крови имеет клиническое значение, побуждая к началу антибиотикотерапии или переходу на более подходящую антибактериальную терапию (13).Результаты нашего исследования показывают, что быстрые прямые тесты на культурах крови могут идентифицировать S. aureus со степенью точности, которая позволяет принимать такие клинические решения.

Как было показано ранее для других иммунологических латексных наборов, используемых с другими системами культивирования крови, мы обнаружили, что набор Staphaurex Plus не является ни чувствительным, ни специфичным при использовании с системой BACTEC 9240. Несколько методов подготовки посевного материала для быстрой идентификации с помощью латексных наборов были опробованы ранее, но с плохими результатами (3, 7, 10).Мы думали, что новый набор Staphaurex Plus с дополнительной возможностью обнаружения соматических и капсульных антигенов может дать лучшие результаты. К сожалению, наши результаты подтвердили ранее опубликованные, предполагая, что иммунологические латексные тесты, такие как набор Staphaurex Plus, не играют никакой роли в быстром обнаружении S. aureus из посевов крови.

Двухчасовая ТСТ оказалась лучше иммунологических тестов Davis et al. (3), сообщая о чувствительности 97% и специфичности 100%, когда ТСТ проводилась непосредственно с бульоном для посева крови, но аналогичное, более недавнее исследование (7) показало только умеренную чувствительность (79.5%). Было высказано предположение, что более низкая чувствительность могла быть связана либо с различиями в интерпретации слабоположительных результатов, либо с вариациями партий кроличьей плазмы от разных поставщиков. Мы обнаружили, что TCT является чувствительным и специфичным, простым в исполнении и относительно недорогим.

Некоторые исследователи сообщили, что ТЕ-тест подходит для быстрой идентификации S. aureus (1, 12) с превосходной чувствительностью и специфичностью в течение 2 часов, но другие не смогли воспроизвести эти результаты.Davis et al. (3) использовали тест с бактериальными гранулами и непосредственно на бульоне с культурой крови с чувствительностью 68 и 100% и специфичностью 93 и 89% соответственно. Мы также нашли тест менее надежным. Было показано, что тест чрезвычайно зависит от среды, при этом особенно важен источник ДНКазного агара (4). Сообщалось также о ложноположительных результатах с другими видами Staphylococcus (2). Кроме того, тест требует стадии кипячения, что делает его более сложным, чем TCT.

Самым чувствительным из тестов оказался стафилококковый тест RAPIDEC с 98% чувствительностью и 100% специфичностью. Когда изоляты из твердых сред (5) и культур крови (8) были протестированы с другими системами культивирования, была обнаружена 100% специфичность; однако для системы Vital был зарегистрирован один ложноположительный результат (9). Считалось, что это связано с чрезмерным гемолизом, проблемой, которая, как известно, приводит к ложноположительным результатам (11). Мы обнаружили один ложноотрицательный результат для 60 изолята S. aureus . Этот изолят, который дал отрицательные результаты во всех экспресс-тестах, был получен из одной из двух культур крови, в которых смешанный рост составил S.aureus и ЦНС. Это привело бы к получению посевного материала S. aureus меньше рекомендованного в контрольной лунке набора для стафилококка RAPIDEC. Когда на следующий день был повторен тест на стафилококк RAPIDEC с культуральным бульоном, результат был положительным, что позволяет предположить, что первоначального посевного материала было недостаточно. В другом исследовании, в котором тестировали бульоны для культур крови, один ложноотрицательный результат был обнаружен среди 28 изолятов S. aureus ; другие исследователи сообщили о 100% чувствительности (9).Тест был относительно трудоемким, требовал двух этапов центрифугирования и был самым дорогим.

Соответствие между TCT и тестом на стафилококк RAPIDEC было ожидаемым, поскольку оба теста выявляют коагулазу; стафилококк RAPIDEC был более чувствительным через 2 часа. Напротив, ТЕ-тест и ТСТ, которые обнаруживают разные ферменты, не показали одинаковой ассоциации. Тест Staphaurex Plus оказался слишком нечувствительным, чтобы его можно было сравнивать с другими экспресс-тестами.

Таким образом, мы сравнили модифицированные стандартные тесты и коммерческие тесты, которые ранее не оценивались на предмет их способности непосредственно обнаруживать S.aureus из системы непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Тест на стафилококк RAPIDEC был самым чувствительным, но и самым дорогим. TCT кроличьей плазмы также был чувствителен, уступая только набору стафилококка RAPIDEC; самые простые в исполнении; и самый дешевый. ТСТ и тест на стафилококк RAPIDEC имели положительную прогностическую ценность 100%; таким образом, при положительном тесте значимость изолята может быть подтверждена в течение нескольких часов после положительного посева крови, что позволяет избежать задержек в антимикробной терапии для S.aureus бактериемия. Однако, поскольку ни один из этих тестов не имел 100% отрицательной прогностической ценности, отрицательный тест потребовал бы лечения на основании клинических данных до дальнейшей идентификации изолята. После этого исследования TCT, проводимая с бульоном для посева крови, была принята в качестве стандартного теста в нашей лаборатории. Положительные результаты немедленно сообщаются как S. aureus , тогда как отрицательные результаты сообщаются как «грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках» до тех пор, пока на следующий день не будет проведена обычная идентификация и определение TCT.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Берг К., Мейленд Дж. А. Подтверждение бактериемии Staphylococcus aureus в тот же день термонуклеазным тестом. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand Sect B. 1986; 94: 291–292. [PubMed] [Google Scholar] 2. Бракстад О. Г., Меланд Дж. А. Прямая идентификация Staphylococcus aureus в культурах крови путем обнаружения гена, кодирующего термостабильную нуклеазу или продукт гена. APMIS. 1995; 103: 209–218. [PubMed] [Google Scholar] 3. Дэвис Т. Э., Фуллер Д. Д., Эшлеман Э. К.Быстрая прямая идентификация Staphylococcus aureus и Streptococcus pneumoniae в культурах крови с использованием коммерческих иммунологических наборов и модифицированных обычных тестов. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1992; 15: 295–300. [PubMed] [Google Scholar] 4. Фаруки Х., Мюррей П. Зависимость от среды для быстрого определения активности термонуклеаз в бульонах культур крови. J Clin Microbiol. 1986; 24: 482–483. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Гири С., Стивенс М. Экспресс-тест для обнаружения наиболее клинически значимых видов стафилококков .Med Lab Sci. 1991; 48: 99–105. [PubMed] [Google Scholar] 6. Хамуди, А. К., М. Дж. Маркон и Х. Дж. Кэннон. 1984. Оценка быстрой идентификации грамположительных кокков в положительных культурах крови с использованием грамположительной идентификационной карты Automicrobic System. 20: 171–174. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 7. Макдональд С. Л., Чапин К. Быстрая идентификация Staphylococcus aureus из бутылочек для культур крови с помощью классического двухчасового пробирного теста на коагулазу. J Clin Microbiol.1995; 33: 50–52. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Митчелл С. Дж, Гири С., Стивенс М. Обнаружение Staphylococcus aureus в культурах крови: оценка двухчасового метода. Med Lab Sci. 1991; 48: 106–109. [PubMed] [Google Scholar] 9. Neyret C, Lelievre H, Lina G, Vandenesch F, Etienne J. Оценка коммерческого тестового набора для быстрого обнаружения Staphylococcus aureus в культурах крови. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1997. 16: 165–166. [PubMed] [Google Scholar] 10.Раппапорт Т., Сойер К. П., Начамкин И. Оценка нескольких коммерческих биохимических и иммунологических методов быстрой идентификации грамположительных кокков непосредственно из посевов крови. J Clin Microbiol. 1988; 26: 1335–1338. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Ратнер Х. Б., Стрэттон С. В. Термонуклеазный тест для идентификации Staphylococcus aureus в тот же день в культурах крови. J Clin Microbiol. 1985; 21: 995–996. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Скульник М., Симор А. Е., Патель М. П., Симпсон Х. Э., О’Куинн К. Дж., Лоу Д. Е., Филлипс А. М., Смолл Г. У.Оценка трех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus в культурах крови. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1994; 19: 5–8. [PubMed] [Google Scholar] 13. Тренхольм Г. М., Каплан Р. Л., Каракусис П. Х., Стайн Т., Фюрер Дж., Ландау В., Левин С. Клиническое влияние быстрой идентификации и тестирования чувствительности изолятов бактериальных культур крови. J Clin Microbiol. 1989; 27: 1342–1345. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Оценка четырех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus по культурам крови

J Clin Microbiol.1998 Apr; 36 (4): 1032–1034.

Центр инфекционных заболеваний и лабораторные службы микробиологии, Институт клинической патологии и медицинских исследований, Больница Вестмид, Вестмид, Новый Южный Уэльс, 2145, Австралия

Получено 1 октября 1997 г .; Изменения запрошены 12 ноября 1997 г .; Принято 5 декабря 1997 г.

Copyright © 1998, Американское общество микробиологов

Abstract

Идентификация Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови имеет клиническое значение, но требует быстрого и надежного теста.Ранее биохимические, иммунологические, пробирочные методы коагулазы и термостабильных эндонуклеаз показали переменную чувствительность и специфичность. Тестирование непосредственно из бульона для культур крови не описано для латексного набора Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.), а модифицированные стандартные тесты не использовались с новыми системами культивирования крови с постоянным контролем. Кроме того, коммерческий набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) использовался для обнаружения S. aureus непосредственно из системы культивирования крови Vital (bioMerieux, Marcy l’Etoile, Франция), но его эффективность не оценивалась. с другими постоянно контролируемыми системами.Проспективно оценивали в общей сложности 201 клиническую культуру крови (система культивирования BACTEC 9240; Johnston Laboratories, Inc.), в которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие стафилококки. Сравнивались набор Staphaurex Plus, пробирочный тест на коагулазу, тест на термостабильную эндонуклеазу и набор для стафилококка RAPIDEC. Чувствительность составила 23, 92, 85 и 98%, а специфичность — 99, 100, 93 и 100% соответственно. Набор стафилококка RAPIDEC был самым надежным тестом с диагностической точностью, сопоставимой с лучшими опубликованными результатами любого из быстрых тестов.Однако это был самый дорогой из испытаний и относительно трудоемкий. Пробирный тест на коагулазу также оказался чувствительным, самым простым в исполнении и недорогим.

Существующая в настоящее время доступность постоянно контролируемых систем культивирования крови сократила время до обнаружения положительных культур крови. Использование экспресс-тестов для микробиологической идентификации в сочетании с постоянно контролируемыми инструментами может значительно сократить общее время от сбора образцов до окончательной идентификации.Сообщалось о ряде экспресс-тестов для идентификации Staphylococcus aureus непосредственно из посевов крови. Метод диффузии в агаре для обнаружения термостабильных эндонуклеаз (ТЕ) оказался точным тестом с чувствительностью от 96 до 100% и 100% специфичностью (1, 11). Однако другие исследователи сочли его менее надежным: Davis et al. (3) сообщили о чувствительности 68% и специфичности 93%. Последующие отчеты показали, что точность теста зависит от компонентов системы культивирования крови и используемой среды ДНКазы (2, 4).

Традиционным методом дифференциации S. aureus от коагулазонегативных стафилококков (ЦНС) в лаборатории был пробирочный тест на коагулазу (ТСТ). Этот тест был модифицирован для прямого обнаружения микроорганизмов в культурах крови через 2 часа с использованием бульона для культур крови. Davis et al. (3) обнаружили, что тест чувствителен (97%) и специфичен (100%), но совсем недавно Макдональд и Чапин (7) сообщили о более низкой чувствительности — 79,5%.

Иммунологические тесты для быстрой идентификации S.aureus из посевов крови были зарегистрированы чаще. Тест Staphaurex оценивался в нескольких исследованиях (3, 7, 10, 12) и показал, что в целом он имеет низкую чувствительность (от 12 до 80%). Совсем недавно в продажу поступил тест Staphaurex Plus (Murex Diagnostics Ltd.); этот набор распознает соматический и капсульный антиген, в дополнение к фактору слипания и стафилококковому белку А, как обнаружено исходным набором Staphaurex.

Биохимические тесты также использовались для прямого обнаружения S.aureus из посевов крови. Грамположительная идентификационная карта системы AutoMicrobic (Vitek Systems, Inc., Хейзелвуд, Миссури) оказалась нечувствительной (6), но набор для стафилококка RAPIDEC (bioMerieux Vitek, Inc.) оказался гораздо более надежным. Последний набор был специально разработан для обнаружения S. aureus в культурах крови Vital system (9). Набор идентифицировал 27 из 28 изолята S. aureus в клинических культурах крови со 100% специфичностью с системами BACTEC NR-660 и Oxoid SIGNAL (8) и все 35 S.aureus со специфичностью 98,8% по системе Vital (9).

Насколько нам известно, ни один из экспресс-тестов не применялся к системе непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Кроме того, тест Staphaurex Plus и набор для стафилококка RAPIDEC не подвергались проспективному сравнению с ранее описанными тестами. Используя систему культивирования крови BACTEC 9240 (Becton Dickinson Diagnostic Instrument Systems, Sparks, Md.), Было проведено прямое проспективное сравнение TCT, теста TE, набора Staphaurex Plus и набора для стафилококка RAPIDEC.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Обработка положительных посевов крови.

Кровь для посева была собрана в соответствии с клиническими критериями. Кровь, собранную у пациентов, инокулировали в аэробные и анаэробные флаконы BACTEC 9240 у постели больного, а затем инкубировали при 37 ° C в течение 5 дней. Бутылки с положительным индексом роста удаляли и проводили окрашивание по Граму. Бульоны, для которых окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие Staphylococcus spp. были включены в исследование. Staphylococcus spp. выделенные из плотных культур крови были идентифицированы стандартными лабораторными методами, которые были «золотым стандартом», с которым сравнивали чувствительность и специфичность экспресс-тестов.

Экспресс-тесты.

Было использовано несколько методов для быстрой (2-часовой) идентификации S. aureus . Для TCT 100 мкл хорошо перемешанного бульона инокулировали в 0,5 мл кроличьей плазмы (BBL Microbiology Systems) и смесь инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов.Тест считался положительным, если образовывался сгусток. Пробирки с отрицательным результатом инкубировали в течение ночи и считывали снова на следующий день.

Для теста ТЕ метод диффузии в агар был адаптирован из метода Берга и Меланда (1). Аликвоту культурального бульона объемом 2 мл кипятили 15 мин, а затем охлаждали до комнатной температуры. Шестимиллиметровые лунки вырезали в метиловом зеленом ДНКазном агаре (GIBCO Laboratories), и 60-мкл объемы жидкой фазы бульона переносили в лунки. Планшеты инкубировали при 37 ° C в течение 2 ч, а затем активность ТЕ определяли по наличию прозрачной зоны с более темной зеленой линией, окружающей лунку.Культуры S. aureus и S. epidermidis были включены в качестве положительного и отрицательного контролей соответственно.

Для иммунологической идентификации S. aureus тест Staphaurex Plus был модифицирован для использования с бактериальным осадком. Осадок получали центрифугированием 4 мл бульона при 150 × g в течение 10 мин для осаждения эритроцитов. Затем супернатант центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для концентрирования бактерий, и латексный тест был проведен на бактериальном осадке в соответствии с инструкциями производителя.

Тест на стафилококк RAPIDEC был проведен в соответствии с инструкциями производителя с дополнительным этапом удаления эритроцитов. Вкратце, 3 мл бульона центрифугировали (150 × g в течение 10 минут) для осаждения эритроцитов, а затем 2 мл супернатанта смешивали с 2 мл дистиллированной воды и центрифугировали при 1000 × g в течение 10 минут для получения бактериальный осадок. Затем осадок ресуспендировали в дистиллированной воде, чтобы обеспечить эквивалент мутности 4 по Макфарланду, и 50 мкл добавляли к купулам 0 и 1 (контроль и тест «ауреазы», ​​соответственно).Затем полоску инкубировали при 37 ° C в течение 2 часов, и флуоресцентную реакцию исследовали в УФ-свете (365 нм). Тест считался положительным, если тестовая лунка была более флуоресцентной, чем контрольная.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Всего 201 посев крови, в которых прямая окраска по Граму показала грамположительные кокки, напоминающие стафилококки, были исследованы с помощью коммерческих иммунологических и биохимических тестов и быстрых модификаций обычных тестов (таблица). Эти культуры крови были получены в течение 5-месячного периода с апреля по август 1997 г. в лабораториях клинической микробиологии Института клинической патологии и медицинских исследований, Вестмид, Австралия.Из изолятов культур крови 70% относились к ЦНС и 30% были S. aureus ; 28% изолятов S. aureus были устойчивыми к метициллину. Две культуры крови содержали как S. aureus , так и ЦНС.

ТАБЛИЦА 1

Грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках, выделенных из 201 образца культуры крови

S. aureus 58 (29) 902 902

Организм (ы)	Количество изолятов (%)
Смешанный ( S.aureus и ЦНС)	2 (1)
Метициллин-чувствительный S. aureus	43 (72)
Метициллин-устойчивый S. aureus	CNS	141 (70)
Всего	201 (100)

Результаты представлены в таблице. Все тесты были выполнены проспективно, без знания окончательной микробиологической идентификации.Результаты для метициллин-устойчивого S. aureus существенно не отличались от результатов для метициллин-чувствительного S. aureus . Staphaurex Plus оказался наименее чувствительным из всех тестов, обнаружив только 23% изолятов S. aureus . Тест TE был умеренно чувствительным (85%), но продемонстрировал самую низкую специфичность (93%). TCT был чувствительным (92%) и специфичным (100%), но тест на стафилококк RAPIDEC был наиболее чувствительным (98%), высокоспецифичным (100%) и, следовательно, самым надежным тестом в целом.Все TCT, которые были ложноотрицательными через 2 часа, были положительными после инкубации в течение ночи. Тесты TCT, TE и RAPIDEC staph были положительными для 48 (80%) изолятов S. aureus . Тест TE был положительным для трех из пяти ложноотрицательных TCT, а TCT был положительным для семи из девяти ложноотрицательных тестов TE. Тест на стафилококк RAPIDEC всегда был положительным, когда ТСТ был положительным. Одна культура крови, содержащая как ЦНС, так и S. aureus , дала отрицательные результаты во всех тестах.Прогностическая ценность положительного результата TCT и теста на стафилококк RAPIDEC составила 100%, и эти тесты имели наивысшую прогностическую ценность отрицательного результата, 97 и 99%, соответственно.

ТАБЛИЦА 2

Результаты и стоимость экспресс-тестов для прямой идентификации S. aureus из посевов крови

Прямой тест	Кол-во положительных культур / нет. содержащий S. aureus a (% чувствительности)	Кол-во отрицательных культур / нет.содержащих ЦНС (% специфичности)	Прогностическая ценность положительного результата (%)	Прогнозирующая ценность отрицательного результата (%)	Стоимость / тест (долл. США)
Staphaurex Plus	14/60 (23)	139 / 141 (99)	87	75	6,63
TE	51/60 (85)	131/141 (93)	84	94	7,77
55/60 (92)	141/141 (100)	100	97	4.37
RAPIDEC staph	59/60 (98)	141/141 (100)	100	99	9,91

Суммарные затраты на материалы и рабочую силу для испытаний также показаны в Стол ; TCT был наименьшим, а набор для стафилококка RAPIDEC был самым дорогим.

ОБСУЖДЕНИЕ

Было показано, что использование быстрых прямых тестов с посевами крови имеет клиническое значение, побуждая к началу антибиотикотерапии или переходу на более подходящую антибактериальную терапию (13).Результаты нашего исследования показывают, что быстрые прямые тесты на культурах крови могут идентифицировать S. aureus со степенью точности, которая позволяет принимать такие клинические решения.

Как было показано ранее для других иммунологических латексных наборов, используемых с другими системами культивирования крови, мы обнаружили, что набор Staphaurex Plus не является ни чувствительным, ни специфичным при использовании с системой BACTEC 9240. Несколько методов подготовки посевного материала для быстрой идентификации с помощью латексных наборов были опробованы ранее, но с плохими результатами (3, 7, 10).Мы думали, что новый набор Staphaurex Plus с дополнительной возможностью обнаружения соматических и капсульных антигенов может дать лучшие результаты. К сожалению, наши результаты подтвердили ранее опубликованные, предполагая, что иммунологические латексные тесты, такие как набор Staphaurex Plus, не играют никакой роли в быстром обнаружении S. aureus из посевов крови.

Двухчасовая ТСТ оказалась лучше иммунологических тестов Davis et al. (3), сообщая о чувствительности 97% и специфичности 100%, когда ТСТ проводилась непосредственно с бульоном для посева крови, но аналогичное, более недавнее исследование (7) показало только умеренную чувствительность (79.5%). Было высказано предположение, что более низкая чувствительность могла быть связана либо с различиями в интерпретации слабоположительных результатов, либо с вариациями партий кроличьей плазмы от разных поставщиков. Мы обнаружили, что TCT является чувствительным и специфичным, простым в исполнении и относительно недорогим.

Некоторые исследователи сообщили, что ТЕ-тест подходит для быстрой идентификации S. aureus (1, 12) с превосходной чувствительностью и специфичностью в течение 2 часов, но другие не смогли воспроизвести эти результаты.Davis et al. (3) использовали тест с бактериальными гранулами и непосредственно на бульоне с культурой крови с чувствительностью 68 и 100% и специфичностью 93 и 89% соответственно. Мы также нашли тест менее надежным. Было показано, что тест чрезвычайно зависит от среды, при этом особенно важен источник ДНКазного агара (4). Сообщалось также о ложноположительных результатах с другими видами Staphylococcus (2). Кроме того, тест требует стадии кипячения, что делает его более сложным, чем TCT.

Самым чувствительным из тестов оказался стафилококковый тест RAPIDEC с 98% чувствительностью и 100% специфичностью. Когда изоляты из твердых сред (5) и культур крови (8) были протестированы с другими системами культивирования, была обнаружена 100% специфичность; однако для системы Vital был зарегистрирован один ложноположительный результат (9). Считалось, что это связано с чрезмерным гемолизом, проблемой, которая, как известно, приводит к ложноположительным результатам (11). Мы обнаружили один ложноотрицательный результат для 60 изолята S. aureus . Этот изолят, который дал отрицательные результаты во всех экспресс-тестах, был получен из одной из двух культур крови, в которых смешанный рост составил S.aureus и ЦНС. Это привело бы к получению посевного материала S. aureus меньше рекомендованного в контрольной лунке набора для стафилококка RAPIDEC. Когда на следующий день был повторен тест на стафилококк RAPIDEC с культуральным бульоном, результат был положительным, что позволяет предположить, что первоначального посевного материала было недостаточно. В другом исследовании, в котором тестировали бульоны для культур крови, один ложноотрицательный результат был обнаружен среди 28 изолятов S. aureus ; другие исследователи сообщили о 100% чувствительности (9).Тест был относительно трудоемким, требовал двух этапов центрифугирования и был самым дорогим.

Соответствие между TCT и тестом на стафилококк RAPIDEC было ожидаемым, поскольку оба теста выявляют коагулазу; стафилококк RAPIDEC был более чувствительным через 2 часа. Напротив, ТЕ-тест и ТСТ, которые обнаруживают разные ферменты, не показали одинаковой ассоциации. Тест Staphaurex Plus оказался слишком нечувствительным, чтобы его можно было сравнивать с другими экспресс-тестами.

Таким образом, мы сравнили модифицированные стандартные тесты и коммерческие тесты, которые ранее не оценивались на предмет их способности непосредственно обнаруживать S.aureus из системы непрерывного мониторинга культуры крови BACTEC 9240. Тест на стафилококк RAPIDEC был самым чувствительным, но и самым дорогим. TCT кроличьей плазмы также был чувствителен, уступая только набору стафилококка RAPIDEC; самые простые в исполнении; и самый дешевый. ТСТ и тест на стафилококк RAPIDEC имели положительную прогностическую ценность 100%; таким образом, при положительном тесте значимость изолята может быть подтверждена в течение нескольких часов после положительного посева крови, что позволяет избежать задержек в антимикробной терапии для S.aureus бактериемия. Однако, поскольку ни один из этих тестов не имел 100% отрицательной прогностической ценности, отрицательный тест потребовал бы лечения на основании клинических данных до дальнейшей идентификации изолята. После этого исследования TCT, проводимая с бульоном для посева крови, была принята в качестве стандартного теста в нашей лаборатории. Положительные результаты немедленно сообщаются как S. aureus , тогда как отрицательные результаты сообщаются как «грамположительные кокки, свидетельствующие о стафилококках» до тех пор, пока на следующий день не будет проведена обычная идентификация и определение TCT.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Берг К., Мейленд Дж. А. Подтверждение бактериемии Staphylococcus aureus в тот же день термонуклеазным тестом. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand Sect B. 1986; 94: 291–292. [PubMed] [Google Scholar] 2. Бракстад О. Г., Меланд Дж. А. Прямая идентификация Staphylococcus aureus в культурах крови путем обнаружения гена, кодирующего термостабильную нуклеазу или продукт гена. APMIS. 1995; 103: 209–218. [PubMed] [Google Scholar] 3. Дэвис Т. Э., Фуллер Д. Д., Эшлеман Э. К.Быстрая прямая идентификация Staphylococcus aureus и Streptococcus pneumoniae в культурах крови с использованием коммерческих иммунологических наборов и модифицированных обычных тестов. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1992; 15: 295–300. [PubMed] [Google Scholar] 4. Фаруки Х., Мюррей П. Зависимость от среды для быстрого определения активности термонуклеаз в бульонах культур крови. J Clin Microbiol. 1986; 24: 482–483. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Гири С., Стивенс М. Экспресс-тест для обнаружения наиболее клинически значимых видов стафилококков .Med Lab Sci. 1991; 48: 99–105. [PubMed] [Google Scholar] 6. Хамуди, А. К., М. Дж. Маркон и Х. Дж. Кэннон. 1984. Оценка быстрой идентификации грамположительных кокков в положительных культурах крови с использованием грамположительной идентификационной карты Automicrobic System. 20: 171–174. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] 7. Макдональд С. Л., Чапин К. Быстрая идентификация Staphylococcus aureus из бутылочек для культур крови с помощью классического двухчасового пробирного теста на коагулазу. J Clin Microbiol.1995; 33: 50–52. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Митчелл С. Дж, Гири С., Стивенс М. Обнаружение Staphylococcus aureus в культурах крови: оценка двухчасового метода. Med Lab Sci. 1991; 48: 106–109. [PubMed] [Google Scholar] 9. Neyret C, Lelievre H, Lina G, Vandenesch F, Etienne J. Оценка коммерческого тестового набора для быстрого обнаружения Staphylococcus aureus в культурах крови. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 1997. 16: 165–166. [PubMed] [Google Scholar] 10.Раппапорт Т., Сойер К. П., Начамкин И. Оценка нескольких коммерческих биохимических и иммунологических методов быстрой идентификации грамположительных кокков непосредственно из посевов крови. J Clin Microbiol. 1988; 26: 1335–1338. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Ратнер Х. Б., Стрэттон С. В. Термонуклеазный тест для идентификации Staphylococcus aureus в тот же день в культурах крови. J Clin Microbiol. 1985; 21: 995–996. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 12. Скульник М., Симор А. Е., Патель М. П., Симпсон Х. Э., О’Куинн К. Дж., Лоу Д. Е., Филлипс А. М., Смолл Г. У.Оценка трех методов быстрой идентификации Staphylococcus aureus в культурах крови. Диагностика Microbiol Infect Dis. 1994; 19: 5–8. [PubMed] [Google Scholar] 13. Тренхольм Г. М., Каплан Р. Л., Каракусис П. Х., Стайн Т., Фюрер Дж., Ландау В., Левин С. Клиническое влияние быстрой идентификации и тестирования чувствительности изолятов бактериальных культур крови. J Clin Microbiol. 1989; 27: 1342–1345. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

22A: Идентификация видов стафилококков

Объективы

• Ознакомиться с видообразованием рода Staphylococcus .
• Выращивайте и идентифицируйте различные виды стафилококков с использованием селективного и дифференциального агара
• Идентифицируйте 3 гемолитических типа на кровяном агаре.

Staphylococcus — это род Gram +, непористые кокки, принадлежащие к семейству Micrococcaceae , которые часто встречаются как нормальная микробиота кожи и носовой полости человека. В качестве потенциальных патогенов для человека в этом роде можно рассматривать пять организмов: S.aureus , S. epidermidis , S. saprophiticus , S. haemolyticus и S. hominis , но первые три изоляты являются наиболее распространенными. S.aureus часто считается наиболее проблематичным из трех патогенов и отличается от двух других тем, что является единственным, способным коагулировать плазму. S. aureusis способен вызывать многие поверхностные гнойные (гнойные) инфекции дермы и подлежащих тканей, а также серьезные системные инфекции.Он может производить ряд токсинов, включая энтеротоксины (пищевое отравление), цитотоксины (общие системные токсины) и суперантигены токсического шока. Другие коагулазонегативные стафилококки ( S. epidermidis и S. saprophiticus ) гораздо реже встречаются в качестве патогенов, но иногда связаны с эндокардитом, инфекциями протезных суставов и инфекциями ран. назвать несколько.

Это упражнение дает вам возможность использовать селективную среду , в данном случае основанную на высоком содержании хлорида натрия (MSA и SM1 10 являются селективными средами для выделения Staphylococci -7.5% NaCl). Селективная среда содержит ингибитор, который способствует росту одних бактерий, подавляя другие. MSA содержит дополнительный индикатор для мониторинга ферментации маннита, который также делает его дифференциальной средой . Из бактерий, которые могут расти в присутствии высокого содержания NaCl, некоторые являются галофильными (для роста требуется определенная концентрация соли), а другие — галодурическими (не используют соль, но могут ее переносить). Стафилококк не галофильный, а скорее галодурический, в том смысле, что он может жить или выдерживать высокие концентрации NaCl.Высокое содержание соли в SM1 10 и MSA подавляет другие распространенные кожные микроорганизмы. Другие среды, используемые в этом упражнении, предназначены для дифференциации патогенных Staphylococcus от непатогенных и для идентификации видов.

Не только солеустойчивый, Стафилококк всегда факультативно анаэробен. При окрашивании он будет виден небольшими скоплениями (стафило = скопление). Staphylococcus обычно является либо бета-гемолитическим, либо совсем не гемолитическим (так называемый гамма-гемолиз).Патогенные Стафилококки могут продуцировать различные факторы вирулентности, включая токсины, коагулазу, лейкоцидины и гидролитические ферменты, которые могут повреждать ткани хозяина.

Кровяной агар (БАП) состоит из 5% овечьей крови. Это обычная среда, используемая для культивирования бактерий, потому что:

1. Это отличная среда для обогащения привередливых бактерий.
2. Гемолиз клеток крови может быть очень полезным в качестве идентификационного теста.

CNA-агар — это кровяной агар.Единственная разница в том, что CNA содержит антибиотик , наладиксиновую кислоту , которая подавляет грамотрицательные бактерии.

Гемолиз — это распад красных кровяных телец. Гемолизины — это ферменты, вырабатываемые некоторыми бактериями и выделяемые в среду вокруг бактериальной колонии. Это может быть полный распад клеток с высвобождением гемоглобина и очисткой от красного цвета окружающей среды вокруг колонии. Или гемолиз может быть частичным, в результате чего вокруг колонии образуется зеленоватая или желто-зеленая зона.

НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ: по таблице

• Стерильные тампоны
• Стерильный физиологический раствор
• 1 чашки с маннитоловым солевым агаром (MSA)
• Емкости со спиртом + пинцет
• 1 чашка с колумбийским агаром для крови 1 среда для стафилококка 110 (SM110) агар
• 1 пластина с ДНКазным агаром
• Новобиоцин (5 мкг) диски с антибиотиком
• Метрические линейки
• Плазма кролика (замороженная) для теста на коагулазу
• Другие среды для идентификации:
  • аргинин декарбоксилазный бульон
  • мочевинный бульон
  • ONPG
  • сахароза, трегалоза, мальтоза
  • VP-бульон
  • нитратный бульон
  • тиогликолятный бульон (для анаэробного роста)

СХЕМА ПРОЦЕДУРЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ

1 ^{-й сеанс}  ⇒ 2 ^{-й сеанс}  ⇒ 3 ^{-й сеанс}  ⇒ 4 ^{-й сеанс}

CNA MS000000 Coagulase

Каталазооксидаза

Грамм Феноловая красная лактоза

Пятновой бульон

ПРОЦЕДУРЫ

Примечание

Не забудьте сохранить список из всех результатов тестов для ваших изолятов.

1

^st Сессия

1. На каждом столе будет указан вид стафилококка, растущий на чашке с aNA или TSA.
2. Используя метод полос изоляции , инокулируйте колумбийскую наладиксиновую кислоту (CNA) и поместите диск с новобиоцином в секцию 1.
3. Чувствительность к новобиоцину является ключевой отличительной чертой среди некоторых видов стафилококков . Поместите щипцы в спирт и затем простерилизуйте щипцы, быстро пропуская их через пламя.Спирт загорится, и когда он испарится из щипцов, они станут стерильными. Теперь вы можете взять диск с новобиоцином из держателя и разместить его на планшете CNA — в секции FIRST полосы (где будет сливной рост бактерии).
4. Для других чашек с агаром — чашки SM 110, чашки с агаром с маннитоловой солью (MSA), чашки с агаром с ДНКазой — линия посева по центру чашки подходит для результатов роста.
5. Инкубируйте среду при 37 ° C.
6. Проведите тесты на оксидазу и каталазу на культуре на чашках.
7. Изолят окрашивают по Граму для придания формы и расположения, а также реакции по Граму.
8. Мы будем проводить тестирование ONPG в следующем сеансе. Этот тест требует включения набора генов, lac-оперона. Чтобы вызвать эту активность, бактерия должна контактировать с лактозой. Вот почему вы также сделаете прививку в пробирку с бульоном из фенолового красного лактозы.

2

^nd Сессия

1. Пройдите отдельные лабораторные упражнения для интерпретации теста на соль маннита и ДНКазу (требуется HCl).
2. На пластине CNA вы проверяете 2 реакции — чувствительность к новобиоциновому антибиотику И гемолиз крови.
   1. Чувствительность к новобиоцину — зона 17 мм указывает на чувствительность
   2. Гемолитические реакции:
      • альфа (α) гемолиз — зеленая зона вокруг колонии, вызванная утечкой гемоглобина, преобразованного в биливердин, называемая частичным гемолизом
      • бета (β) гемолизом– полная очистка вокруг колонии, вызванная расщеплением эритроцитов ферментами стрептолизина
      • гамма (γ) гемолиз — без гемолизинов, без зоны
        • Виды стафилококков являются либо бета-гемолитическими, либо гамма (не гемолитическими). Staph aureus продуцирует альфа-токсин, который обычно вызывает широкие зоны бета (полного) гемолиза.
3. Проверьте SM 110 на рост и пигмент. Питательные вещества и витамины в этой среде усиливают пигментацию патогенного стафилококка , и эти колонии становятся желто-оранжевыми колониями.
4. Запустите тест на коагулазу: для этого теста есть связанное упражнение. Есть только несколько видов Staphylococcus , которые положительны для теста на коагулазу (см. Таблицу ниже), и S.aureus является наиболее распространенным. Поскольку существует 2 типа фермента коагулазы — связанный и свободный — для идентификации этих ферментов можно использовать 2 различных теста. Метод TUBE — это окончательный тест из двух, самый надежный. Эти две версии четко описаны в упражнении по тесту на коагулазу в руководстве по лаборатории.
5. Будет запущен тест ONPG . Поищите в лабораторных упражнениях этот тест, чтобы узнать, как его проводить. Так как жидкости в пробирке очень мало, вам нужно прикрыть верх пробирки парафильмом, а затем надеть на нее верхнюю часть пробирки.Это уменьшает обезвоживание.

3

^rd Сессия

1. Основной тестовой реакцией для использования при идентификации Staphylococcus является тестовая реакция на коагулазу, которая делит род Staphylococcus на 2 группы — коагулазо-отрицательные виды и коагулазоположительные виды. Тестовый носитель, который вы будете запускать для идентификации, зависит от того, к какой категории относится ваш организм. Возможно, вы захотите провести некоторые из следующих тестов.

• Доступные среды :
  • аргинин и орнитин
  • бульоны декарбоксилазы
  • бульон мочевины
  • ONPG
  • сахароза, трегалоза, мальтозные сахара
  • 914 бульон
  914 нитрат 914
  2. Если у вас есть коагулазо-положительный Staph , на ваш выбор доступно только несколько видов: ниже представлена ​​таблица с этими видами.
  3. Если у ваших организмов коагулазо-отрицательный , проверьте приведенную ниже блок-схему, а также Руководство Берджи или другие справочники по идентификации.
  4. Выполните необходимые тесты для идентификации. ВЫ ОПРЕДЕЛЯЕТЕ, КАКИЕ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ ПРОВОДИТЬ ДЛЯ ЧЕТКОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ.

  4

  ^th Сессия
  1. Прочтите все тесты из последнего сеанса (информацию об интерпретации тестов см. В лабораторных упражнениях.
  2. Напишите отчет для определения вида Staphylococcus , если ваш инструктор попросит вас сделать это.
  2hyicus

  Таблица 1: Дифференциация коагулазоположительных стафилококков

  	Пробирка коагулазы	Кислота из трегалозы	Тест VPP
  902 901 902 917G 917G4	+	+	+	—
  S. Intermedius	+	+	—	+
  переменная	+	—	—
  S. schleiferi	+	—	+	?

  Обычные коагулазо-отрицательные Стафилококковые виды

  % соли (соль маннита)

  Таблица 2: Дифференциация S. aureus от других обычных стафилококков человека нормальной флоры

  917 S.aureus	S. epidermidis	S. saprophiticus
  Альфа-токсин (ß-гемолиз)	+ (большинство штаммов)	—
  Кислота из маннита	+	—	+ (большинство штаммов)
  Коэф.	—
  Производство пигментов (SM110)	Обычно золотое	Обычно белое	Обычно белое
  Производство ДНКазы	+ (обычно)	+ (обычно)	Чувствительность к новобиоцину	чувствительна	чувствительна	устойчивый

  * Чувствительность к новобиоцину => размер зоны 17 мм

  ВОПРОСЫ

  1. Какой тип гемолиза часто ассоциируется с патогенностью?
  2. Каковы отличительные признаки стафилококков рода ?
  3. Можете дать тестовую реакцию С.aureus для каждого из основных тестов — MSA, SM110, коагулазы, каталазы, оксидазы и ДНКазы?
  4. Что происходит с эритроцитами при бета- и альфа-гемолизе?

  Авторы и авторство

  Лаборатория 15: Выделение и идентификация стафилококков

  ОБСУЖДЕНИЕ

  Стафилококки (см. Рис. 6) часто обнаруживаются в носовой полости человека (и на других слизистых оболочках), а также на коже. Это грамположительных кокков 0.5–1,0 мкм в диаметре и встречаются поодиночке, парами, короткими цепочками и чаще всего в виде неправильных гроздей, похожих на виноград . Стафилококки сильно каталазоположительны и обычно переносят относительно высокие концентрации хлорида натрия (7,5-10%). Эта способность часто используется при приготовлении селективных сред для стафилококков.

  Стафилококковые капсулы играют важную роль в способности бактерий прикрепляться к биоматериалам и колонизировать их .

  Существует пять видов стафилококков , обычно связанных с клиническими инфекциями: Staphylococcus aureus, S.epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis и S. saprophyticus .

  A. Staphylococcus aureus (коагулазо-положительные стафилококки)

  Золотистый стафилококк является наиболее патогенным видом и вызывает множество инфекций. S. aureus с некоторой частотой обнаруживается как нормальная человеческая флора в передних носовых ходах (ноздрях). Он также может быть обнаружен в горле, подмышечных впадинах, паховой и промежностной областях.Примерно 30% взрослых и большинство детей являются здоровыми периодическими носителями носоглотки из S. aureus . Около 15% здоровых взрослых являются стойкими носоглоточными носителями. Уровень колонизации среди медицинских работников, пациентов на диализе и людей с диабетом выше, чем среди населения в целом.

  В большинстве случаев инфекции S. aureus источником организма является либо:

  • здоровый носовой носитель (), или
  • контакт с абсцессом инфицированного человека.

  Портал входа обычно представляет собой скин . S. aureus вызывает воспалительные поражения, заполненные гноем, известные как абсцессов . В зависимости от локализации и степени поражения тканей абсцесс может называться:

  .

  1. Пустула
  Пустула — это инфицированный волосяной фолликул , где основание волосяного фолликула кажется красным и приподнятым из-за скопления гноя прямо под эпидермисом.Инфицированные волосяные фолликулы также обозначаются как фолликулит .

  2. фурункул или фурункул
  Фурункулы выглядят как большие, приподнятые, заполненные гноем, болезненные узелки с скоплением мертвой некротической ткани в основании. Бактерии распространяются из волосяного фолликула в прилегающую подкожную ткань .

  3. карбункул
  Карбункулы возникают, когда фурункулов сливаются и распространяются на окружающую подкожную и более глубокую соединительную ткань . Поверхностная кожа перфорируется, отслаивается и выделяет гной .

  S. aureus также вызывает импетиго , поверхностную инфекцию, напоминающую пузыри кожи , обычно возникающую на лице и конечностях и наблюдаемую в основном у маленьких детей. S. aureus может также вызывать целлюлит , диффузное воспаление соединительной ткани с тяжелым воспалением дермального и подкожного слоев кожи. S. aureus также является частой причиной случайных ран и инфекций послеоперационных ран .

  Реже, S. aureus может вырваться из локального поражения и распространиться через кровь в другие области тела, вызывая различные системных инфекций , которые могут поражать все системы и органы. К таким системным инфекциям относятся сепсис, септический артрит, эндокардит, менингит и остеомиелит , а также абсцессов в легких, селезенке, печени и почках. S. aureus пневмония также может быть вторичным респираторным осложнением вирусных инфекций, таких как корь и грипп, и является частой причиной нозокомиальной пневмонии у ослабленных пациентов.Наконец, S. aureus часто попадает в пищу через абсцессы или носовую полость людей, которые работают с пищевыми продуктами. Если ему позволить расти и вырабатывать энтеротоксин , он может вызвать стафилококкового пищевого отравления .

  В ходе национального обследования нозокомиальных инфекций 1990–1992 годов CDC обнаружил, что S. aureus является наиболее частой причиной нозокомиальной пневмонии и инфекций операционных ран , а также второй по частоте причиной инфекций нозокомиального кровотока .Устойчивый к антибиотикам S. aureus — обычная проблема. Например, исследование, проведенное CDC, показало, что доля устойчивых к метициллину изолятов S. aureus (MRSA) с чувствительностью только к ванкомицину увеличилась с 22,8% в 1987 г. до 56,2% в 1997 г.

  Факторы вирулентности для S. aureus включает экзотоксины, такие как лейкоцидин (убивает лейкоциты), альфа- и дельта-токсины (повреждают тканевые мембраны), микрокапсулы (сопротивляются поглощению и разрушению фагоцитами), коагулазу и протеин A (оба помогают сопротивляться поглощению фагоцитами).Некоторые штаммы также продуцируют TSST-1 (токсин-1 синдрома токсического шока) и вызывают синдром токсического шока, обычно связаны с ранами. Примерно 25% всех штаммов S. aureus являются токсигенными, и около 6000 газов, вызывающих синдром токсического шока, возникают каждый год в США. Некоторые штаммы также продуцируют эксфолиатин , экзотоксин, вызывающий синдром ожога кожи , инфекцию, обычно наблюдаемую при младенцы и маленькие дети.

  Для получения дополнительной информации о факторах вирулентности, связанных с S.aureus , см. следующие учебные объекты в своем руководстве по лекциям:

  Поскольку большинство штаммов S. aureus продуцируют фермент коагулазу (см. Тест на коагулазу, описанный ниже), их часто называют коагулазо-положительными стафилококками .

  B. Коагулазонегативные стафилококки

  Клинически распространенные виды стафилококков, кроме S. aureus , часто называют коагулазонегативными стафилококками .Эти стафилококки представляют собой нормальную флору кожи и, как таковые, часто действуют как условно-патогенных микроорганизмов , особенно у пораженного хозяина. S. saprophyticus является относительно частой причиной инфекций мочевыводящих путей , особенно у здоровых молодых женщин, но редко выделяется из других источников. Подавляющее большинство инфекций , вызванных другими коагулазонегативными стафилококками , в том числе S. epidermidis, S. haemolyticus и S. hominis, , связаны с внутрисосудистыми устройствами (протезы сердечных клапанов и внутриартериальные или внутривенные линии) и шунты .Также довольно часто встречаются инфекций протезных суставов, раневые инфекции, остеомиелит, связанный с инородными телами, и эндокардит .

  Хотя некоторые реакции могут варьироваться от штамма к штамму, серия биохимических тестов обычно позволяет дифференцировать наиболее часто встречающиеся в клинических условиях виды стафилококков. Сегодня мы будем использовать ряд тестов, чтобы определить, является ли неизвестным S. aureus, S. epidermidis, или S. saprophyticus .

  ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТАФИЛОКОКЦИЙ

  1. Кровяной агар с диском новобиоцина (NB)

  Для выделения стафилококков клинические образцы обычно выращивают на кровяном агаре (описано в Лаборатории 14). Стафилококки образуют круглые выпуклые непрозрачные колонии диаметром 1-2 мм. Диск новобиоцина используется для определения чувствительности или устойчивости к антибиотику новобиоцину.

  (*) описание гемолиза см. В лаборатории 14
  (1) некоторые штаммы не обнаруживают гемолиза и / или пигмента
  (2) некоторые штаммы обнаруживают гемолиз и / или пигмент
  чувствительный = зона ингибирования вокруг диска
  устойчивый = нет зона торможения вокруг диска

  2. Окрашивание по Граму

  Все стафилококки проявляются как грамположительные кокки, обычно нерегулярными, часто похожими на виноград, гроздьями (см. Рис. 6).

  3. Ферментация маннита на солевом агаре с маннитом (MSA)

  Стафилококки способны переносить высокую концентрацию соли, обнаруженную в агаре с солями маннитола, и поэтому легко растут. Если маннит ферментируется, образующаяся кислота превращает фенольный красный индикатор pH с красного (щелочной) на желтый (кислота).

  положительный результат = кислотные конечные продукты изменяют цвет индикатора pH фенолового красного с красного на желтый
  отрицательный = красный пренол остается красным

  4. Производство дезоксирибонуклеазы (ДНКазы) на ДНКазном агаре

  ДНКазный агар содержит 0,2% ДНК. Чтобы определить продукцию ДНКазы, планшет инокулируют и инкубируют. После выращивания пластину заливают 1 н. Соляной кислотой (HCl). ДНК-положительные культуры показывают отчетливую прозрачную зону вокруг полосы (см. Рис. 1), где ДНК в агаре была разрушена бактериальной ДНКазой. Отрицательные по ДНКазе культуры выглядят мутными вокруг нароста, где кислота вызвала выпадение ДНК в агаре из раствора.

  положительный результат = прозрачная зона вокруг роста после добавления 1 н. HCl (в агаре не осталось ДНК)
  отрицательный результат = мутность вокруг роста после добавления 1 н. HCl (ДНК остается в агаре, образуя осадок)

  5. Производство коагулазы

  Стафилококковый фермент коагулаза заставляет инокулированную цитратную плазму кролика превращаться в гель или коагулировать. Коагулаза превращает растворимый фибриноген в плазме в нерастворимый фибрин.

  положительный результат = плазма образует гель или коагулирует
  отрицательный результат = плазма не образует гель

  6. Латексный тест Staphyloslide® на коагулазу, связанную с клетками (фактор слипания) и / или белок A

  Латексный тест Staphyloslide® — это тест на агглютинацию, который определяет коагулазу, связанную с клетками (фактор слипания) и / или белок A . Приблизительно 97% человеческих штаммов S. aureus обладают как связанной коагулазой, так и внеклеточной коагулазой. Примерно 95% человеческих штаммов S. aureus имеют белок А на своей клеточной поверхности (см. Рис. 7). В этом тесте используются синие латексные частицы, покрытые человеческим фибриногеном и человеческим антителом IgG.Смешивание латексного реагента с колониями подозреваемого S. aureus , имеющими коагулазу и / или белок А, связанные с их поверхностью, вызывает агглютинацию латексных частиц.

  положительный = слипание латексных частиц
  отрицательное = без слипания латексных частиц

  Для получения дополнительной информации о коагулазе и белке А, связанных с S. aureus , см. Следующие учебные объекты в вашем Руководстве по лекциям:

  Стафилококки также идентифицируются с помощью хемилюминесцентно меченных ДНК-зондов, комплементарных видоспецифичной бактериальной рибосомной РНК (рРНК) последовательностей, а также другими методами прямой ДНК.

  СЦЕНАРИЙ ДЛЯ СЕГОДНЯШНЕЙ ЛАБОРАТОРИИ

  Выберите либо unknown # 1, либо unknown # 2 в качестве неизвестного для этого тематического исследования.

  Женщина 57 лет, страдающая диабетом, курильщица, 30 дней назад перенесшая операцию по замене тазобедренного сустава, жалуется на боль и признаки воспаления в месте операции. Обследование показало, что у нее температура 101 ° F и повышенное количество лейкоцитов со сдвигом влево. При рентгенологическом обследовании обнаружена глубокая тазовая абсцесс. Была взята культура из ложа имплантата.

  Предположим, что неизвестная вам культура — это культура от этого пациента.

  1 пластина с кровяным агаром, 1 диск с новобиоцином (NB), 1 пластина с агаром с маннитоловой солью, 1 пластина с агаром с ДНКазой, 1 пробирка с цитратной кроличьей плазмой (коагулазный тест), материалы для окрашивания по Граму, инокуляционная петля

  ПРОЦЕДУРА (выполняется группами по 3 человека)
  [Имейте в виду, что в реальной клинической ситуации также будут выполнены другие лабораторные тесты и посевы на бактерии, кроме тех, на которых основана эта лаборатория.]

  ВНИМАНИЕ: ЛЕЧИТЬ КАЖДЫЙ НЕИЗВЕСТНЫЙ ВОЗБУДИТЕЛЬ !. Сообщите своему инструктору о любых утечках или несчастных случаях. Вымойте и продезинфицируйте руки перед тем, как покинуть лабораторию.

  1. Выполните окрашивание по по Граму неизвестного (см. Лабораторную работу 6). Убедитесь, что вы ознакомились с инструкциями, прежде чем выполнять окрашивание по Граму .

  2. Используя петлю, нанесите штриховкой неизвестный для выделения на чашке с Кровяной агар , как описано ниже.

  а. Используя стерильную инокуляционную петлю, нанесите полоски неизвестного для выделения на чашку с кровяным агаром, чтобы получить одиночных изолированных колоний (рис. 2, этап 1, рис. 2, этап 2 и рис. 2, этап 3). Перед тем, как нанести штриховку на чашку , нарисуйте крестик на дне чашки с кровяным агаром, чтобы указать, где вы начинаете штриховку .

  г. Используя вашу петлю для посева, проткните агар несколько раз в каждую из зон роста, чтобы обнаружить чувствительный к кислороду гемолизин (рис.2, шаг 4).

  г. Поместите диск с антибиотиком новобиоцина , , в центр той области планшета, которую вы заштриховали первой (область, где вы нарисовали крестик) , где вы ожидаете увидеть самый сильный рост (рис. 2, шаг 5).

  г. Инкубируйте в перевернутом виде и уложите стопкой в ​​держатель для чашек Петри на полке инкубатора 37 ° C, соответствующего вашей лабораторной секции , до следующего лабораторного периода.

  3. Нанесите штриховку неизвестного образца для выделения на чашке с агаром с маннитоловой солью (MSA) , как показано на рис.3. Инкубируйте в перевернутом виде и уложите стопкой в ​​держатель для чашек Петри на полке инкубатора 37 ° C, соответствующего вашей лабораторной секции , до следующего лабораторного периода. 4 ° C инкубатор, соответствующий вашей лабораторной секции до следующего лабораторного периода.

  5. Засейте пробирку цитратной кроличьей плазмы вашим неизвестным и инкубируйте штатив для пробирок при 37 ° C .

  РЕЗУЛЬТАТЫ

  Отчет лабораторного исследования конкретного случая для лаборатории 15:
  Стафилококки

  Концепция, лежащая в основе тематических исследований, представленных в Лаборатории 15, использованных для иллюстрации стафилококков рода , предназначена для вас и ваших партнеров по лаборатории в качестве группа в:

  1. Придумайте действительный диагноз типа инфекционного заболевания, наблюдаемого в вашем тематическом исследовании, и определите бактерии, вызывающие эту инфекцию .

  2. Поддержите диагностику вашей группы на основе:

  а. Любые относящиеся к делу факты из истории болезни пациента . (Для подтверждения этого будет использоваться надежный источник в сети.)
  b. У пациента признаков и симптомов. (Для поддержки этого будет использован надежный источник в сети.)
  c. Каждый из индивидуальных лабораторных тестов , приведенных в вашем тематическом исследовании.
  г. Всего микробиологических лабораторных тестов вы выполнили в рамках проекта.

  Срок сдачи этого отчета можно найти в календаре класса. Помните, что вы работает в группе, чтобы решить проблему . Ваша оценка за эту лабораторную работу основана на полноте вашего отчета и письменных свидетельствах процесса критического мышления, который использовался при постановке и подтверждении вашего диагноза , поэтому очень важно, чтобы все члены группы участвовали, подвергая сомнению любые сделанные выводы. группой и внесите свой вклад в отчет. Помните, вы пытаетесь убедить своего инструктора, что вы понимаете, как был поставлен диагноз с помощью , подтверждая этот диагноз данными .Ваша группа будет работать вместе, чтобы написать отчет, и представит одну бумажную копию этого отчета для вашей группы . Часть вашей оценки будет основываться на оценке вашей работы членами вашей команды.

  Обязательно обращайтесь со всеми бактериальными культурами, которые вы используете сегодня в лаборатории, как с патогенами! Не забудьте хорошо вымыть и продезинфицировать руки по завершении сегодняшней лаборатории.

  Также убедитесь, что вы наблюдаете за результатами кого-то в вашей лаборатории, у которого было неизвестное, отличное от вашего. Цели выполнения лабораторной работы 15 говорят вам, что вы должны уметь делать на практике.

  Каждый член группы должен:

  1. Распечатайте копию каждой из двух рубрик по ссылкам выше.

  2. Распечатайте и заполните копию Формы оценки члена команды по ссылке выше.

  3. Скрепите их вместе и передайте мне в день, когда должен быть предоставлен отчет лаборатории лабораторных исследований по лабораторной работе 15.

  Для получения дополнительной информации о написании лабораторного отчета см. «Оценка курса для лабораторной работы» (основные лабораторные работы, тематические исследования, лабораторные тесты) в разделе «Информация о курсе» в меню веб-сайта BIOL 230.

  Щелкните здесь, чтобы распечатать копию этого лабораторного отчета в формате PDF.

  Ваше имя:

  Другие участники вашей группы:

  Лабораторная секция:

  Дата:

  A. Пример из лаборатории 15: Неизвестно # 1

  Каждый член группы должен:

  1.Распечатайте копию каждой из двух рубрик по ссылкам выше.

  2. Распечатайте и заполните копию Формы оценки члена команды по ссылке выше.

  3. Скрепите их вместе и передайте мне в день, когда должен быть предоставлен отчет лаборатории лабораторных исследований по лабораторной работе 15.

  У 57-летней женщины, страдающей диабетом, курящей и которой 30 дней назад была операция по замене тазобедренного сустава, наблюдаются боль и признаки воспаления в месте операции.Обследование показало, что у нее температура 101 ° F и повышенное количество лейкоцитов со сдвигом влево. При рентгенологическом обследовании обнаружена глубокая тазовая абсцесс. Была взята культура из ложа имплантата.

  1. История болезни пациента и предрасполагающие факторы

  Прочтите тематическое исследование. Объясните, как какие-либо важные части истории пациента повлияли на ваш диагноз, в зависимости от типа наблюдаемого здесь инфекционного заболевания. Вам настоятельно рекомендуется использовать компьютеры в лаборатории для поиска надежных медицинских источников в Интернете, подтверждающих это.Надежными источниками, которые вы можете рассмотреть, являются Medscape (http://emedicine.medscape.com/infectious_diseases) и Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) на http://www.cdc.gov/. В конце раздела «История пациента» цитируйте любые источники, которые вы используете, в стиле APA (http://www.apastyle.org/).

  История пациента должна указывать на общий тип инфекционного заболевания , которое присутствует, например, инфекция мочевыводящих путей, раневая инфекция, гастроэнтерит, фарингит, пневмония, сепсис и т. Д. Не ищите бактерии, по которым вы в конечном итоге определили как причину этого инфекционного заболевания. На данный момент вы не знаете причинную бактерию. Вам необходимо определить общий тип инфекции, чтобы определить, какие микробиологические тесты следует выполнить для определения бактерии, вызывающей инфекцию. . Найдите хотя бы одну справочную статью, ориентированную на медицину, на надежном сайте, таком как Medscape и , используйте эту статью, чтобы подтвердить свой диагноз типа инфекционного заболевания, описанного здесь .Не забудьте указать любые источники, которые вы использовали в стиле APA, непосредственно в разделах «История пациента» и «Симптомы пациента» настоящего лабораторного отчета.

  2. Признаки и симптомы пациента

  Прочтите тематическое исследование. Объясните, как признаки и симптомы пациента повлияли на ваш диагноз, в зависимости от типа наблюдаемого здесь инфекционного заболевания. Вам настоятельно рекомендуется использовать компьютеры в лаборатории для поиска надежных медицинских источников в Интернете, подтверждающих это. Надежными источниками, которые вы можете рассмотреть, являются Medscape (http: // emedicine.medscape.com/infectious_diseases)
  и Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) на http://www.cdc.gov/. В конце раздела «Симптомы пациента» цитируйте любые источники, которые вы используете, в стиле APA (http://www.apastyle.org/).

  Признаки и симптомы пациента должны указывать на общий тип инфекционного заболевания , которое присутствует, например, инфекция мочевыводящих путей, раневая инфекция, гастроэнтерит, фарингит, пневмония, сепсис и т. Д. Не смотрите вверх бактерия, вы в конечном итоге идентифицируете как причину этого инфекционного заболевания.На данный момент вы не знаете причинную бактерию. Вам необходимо определить общий тип инфекции, чтобы определить, какие микробиологические тесты следует выполнить для определения бактерии, вызывающей инфекцию. . Найдите хотя бы одну справочную статью, ориентированную на медицину, на надежном сайте, таком как Medscape и , используйте эту статью, чтобы подтвердить свой диагноз типа инфекционного заболевания, описанного здесь . Не забудьте указать любые источники, которые вы использовали в стиле APA, непосредственно в разделах «История пациента» и «Симптомы пациента» настоящего лабораторного отчета.

  3. Результаты лабораторного теста, приведенного в тематическом исследовании.

  Перечислите каждый проведенный лабораторный тест и объясните, как результаты этого теста помогают в постановке вашего диагноза. Тест CBC описан в Приложении C к настоящему лабораторному руководству.

  4 . Микробиологические лабораторные тесты, которые вы выполнили в лаборатории 15

  а. Окрашивание по Граму

  Укажите реакцию по Граму (грамположительный или грамотрицательный и то, как вы пришли к такому выводу), а также форму и расположение неизвестного вам объекта. Укажите, как это повлияло на ваше решение о том, какие микробиологические тесты и / или среды использовать в следующий раз. . Окрашивание по Граму обсуждается в Лаборатории 6.

  b. Кровяной агар с диском новобиоцина (NB)

  Приведите результаты кровяного агара с диском Taxo NB, который вы выполнили на неизвестном вам месте, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. . Возможные результаты для кровяного агара и диска NB обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  г. Маннитол-солевой агар

  Приведите результаты агара с маннитол-солевым агаром, который вы выполнили в отношении неизвестных вам данных, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. . Возможные результаты для агара с маннитоловой солью обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  г. DNase agar

  Залейте поверхность чашки DNase agar 1N HCl .Опишите результаты агара с ДНКазой, который вы выполнили с неизвестным вам, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. . Возможные результаты для ДНКазного агара обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  e. Тест на коагулазу

  Приведите результаты теста на коагулазу, который вы выполнили на неизвестных вам данных, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. .Возможные результаты теста на коагулазу обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  Окончательный диагноз

  Род и вид неизвестны # 1 = ________________________________

  Инфекция: _______________________________

  B. Пример из Лаборатории 15: Неизвестно # 2

  Каждый член группы должен:

  1. Распечатайте копию каждой из двух рубрик по ссылкам выше.

  2. Распечатайте и заполните копию Формы оценки члена команды по ссылке выше.

  3. Скрепите их вместе и передайте мне в день, когда должен быть предоставлен отчет лаборатории лабораторных исследований по лабораторной работе 15.

  У 57-летней женщины, страдающей диабетом, курящей и которой 30 дней назад была операция по замене тазобедренного сустава, наблюдаются боль и признаки воспаления в месте операции. Обследование показало, что у нее температура 101 ° F и повышенное количество лейкоцитов со сдвигом влево.При рентгенологическом обследовании обнаружена глубокая тазовая абсцесс. Была взята культура из ложа имплантата.

  1. История болезни пациента и предрасполагающие факторы

  Прочтите тематическое исследование. Объясните, как какие-либо важные части истории пациента повлияли на ваш диагноз, в зависимости от типа наблюдаемого здесь инфекционного заболевания. Вам настоятельно рекомендуется использовать компьютеры в лаборатории для поиска надежных медицинских источников в Интернете, подтверждающих это. Надежными источниками, которые вы можете рассмотреть, являются Medscape (http: // emedicine.medscape.com/infectious_diseases) и Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) на http://www.cdc.gov/. В конце раздела «История пациента» цитируйте любые источники, которые вы используете, в стиле APA (http://www.apastyle.org/).

  История пациента должна указывать на общий тип инфекционного заболевания , которое присутствует, например, инфекция мочевыводящих путей, раневая инфекция, гастроэнтерит, фарингит, пневмония, сепсис и т. Д. Не ищите бактерию, которую вы в конечном итоге идентифицировать как причину этого инфекционного заболевания.На данный момент вы не знаете причинную бактерию. Вам необходимо определить общий тип инфекции, чтобы определить, какие микробиологические тесты следует выполнить для определения бактерии, вызывающей инфекцию. . Найдите хотя бы одну справочную статью, ориентированную на медицину, на надежном сайте, таком как Medscape и , используйте эту статью, чтобы подтвердить свой диагноз типа инфекционного заболевания, описанного здесь . Не забудьте указать любые источники, которые вы использовали в стиле APA, непосредственно в разделах «История пациента» и «Симптомы пациента» настоящего лабораторного отчета.

  2. Признаки и симптомы пациента

  Прочтите тематическое исследование. Объясните, как симптомы пациента повлияли на ваш диагноз, в зависимости от типа наблюдаемого инфекционного заболевания. Вам настоятельно рекомендуется использовать компьютеры в лаборатории для поиска надежных медицинских источников в Интернете, подтверждающих это. Надежными источниками, которые вы можете рассмотреть, являются Medscape (http://emedicine.medscape.com/infectious_diseases) и Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC) по адресу http: // www.cdc.gov/. В конце раздела «Симптомы пациента» цитируйте любые источники, которые вы используете, в стиле APA (http://www.apastyle.org/).

  Признаки и симптомы пациента должны указывать на общий тип инфекционного заболевания , которое присутствует, например, инфекция мочевыводящих путей, раневая инфекция, гастроэнтерит, фарингит, пневмония, сепсис и т. Д. Не смотрите вверх бактерия, вы в конечном итоге идентифицируете как причину этого инфекционного заболевания. На данный момент вы не знаете причинную бактерию. Вам необходимо определить общий тип инфекции, чтобы определить, какие микробиологические тесты следует выполнить для определения бактерии, вызывающей инфекцию. . Найдите хотя бы одну справочную статью, ориентированную на медицину, на надежном сайте, таком как Medscape и , используйте эту статью, чтобы подтвердить свой диагноз типа инфекционного заболевания, описанного здесь . Не забудьте указать любые источники, которые вы использовали в стиле APA, непосредственно в разделах «История пациента» и «Симптомы пациента» настоящего лабораторного отчета.

  3. Результаты лабораторного теста, приведенного в тематическом исследовании.

  Перечислите каждый проведенный лабораторный тест и объясните, как результаты этого теста помогают в постановке вашего диагноза. Тест CBC описан в Приложении C к настоящему лабораторному руководству.

  4. Микробиологические лабораторные тесты, которые вы выполнили в лаборатории 15

  а. Окрашивание по Граму

  Укажите реакцию по Граму (грамположительный или грамотрицательный и то, как вы пришли к такому выводу), а также форму и расположение неизвестного вам объекта. Укажите, как это повлияло на ваше решение о том, какие микробиологические тесты и / или среды использовать в следующий раз. . Окрашивание по Граму обсуждается в Лаборатории 6.

  b. Кровяной агар с диском новобиоцина (NB)

  Приведите результаты анализа Кровяного агара с диском Taxo NB, который вы выполнили на неизвестном вам месте, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. . Возможные результаты для кровяного агара и диска NB обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  Приведите результаты агара с маннитоловой солью, который вы выполнили с неизвестным, которое вам дали, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. . Возможные результаты для агара с маннитоловой солью обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  г. DNase agar

  Залейте поверхность чашки DNase agar 1N HCl . Опишите результаты агара с ДНКазой, который вы выполнили с неизвестным вам, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. . Возможные результаты для ДНКазного агара обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  e. Тест на коагулазу

  Приведите результаты теста на коагулазу, который вы выполнили на неизвестных вам данных, и как вы пришли к такому выводу. Укажите, как это повлияло на ваше решение относительно того, какая бактерия вызывает инфекцию. . Возможные результаты теста на коагулазу обсуждались на первых страницах этой лабораторной работы.

  Окончательный диагноз

  Род и вид неизвестного # 2 = ________________________________

  Инфекция: _________________________________

  ЦЕЛИ ВЫПОЛНЕНИЯ ЛАБОРАТОРИИ 15

  После завершения этой лабораторной работы студент сможет выполнять следующие задачи:

  ОБСУЖДЕНИЕ

  1. Назовите три общих клинически важных вида Staphylococcus и укажите, какой вид является наиболее патогенным.

  2. Укажите источники и портал входа для большинства Staphylococcus aureus инфекций.

  3. Назовите и опишите три типа абсцессов, вызываемых Staphylococcus aureus .

  4. Назовите четыре системных инфекции Staphylococcus aureus .

  5. Укажите значение энтеротоксина Staphylococcus aureus, , экзотоксина TSST-1 и экзотоксина эксфолиатина.

  6. Назовите инфекцию, обычно вызываемую Staphylococcus saprophyticus .

  7. Назовите типы инфекций, которые чаще всего вызываются коагулазонегативными стафилококками, кроме Staphylococcus saprophyticus .

  ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ СТАФИЛОКОККОВ

  1. Укажите реакцию по Граму и морфологию всех стафилококков.

  2. Опишите типичные реакции S. aureus, S. epidermidis, и S. saprophyticus на каждую из следующих сред:

  а. Кровяной агар (пигмент, гемолиз, устойчивость к новобиоцину)

  б.Маннитол Солевой агар (для ферментации маннита)

  c. ДНКазный агар (для фермента ДНКазы)

  d. коагулазный тест с цитратной кроличьей плазмой

  e. Staphyloslide® тест на связанную коагулазу и / или белок A

  РЕЗУЛЬТАТЫ

  1. Распознайте стафилококки в препарате для окрашивания по Граму.

  2. Распознайте организм как Staphylococcus aureus и укажите причины, по которым, увидев следующие результаты:

  а.a Пластина кровяного агара с диском новобиоцина

  b. Планшет с солевым агаром с маннитолом

  c. пластина с агаром с ДНКазой

  d. пробирка с цитратной кроличьей плазмой

  e. тест Staphyloslide®

  САМОИКТОРИНА

  Авторы и авторство

  .
  Как определить стафилококк: Инвитро. Стафилококковая инфекция, узнать цены на анализы и сдать в Москве