Хобл что за болезнь: Хроническая обструктивная болезнь лёгких.

Проблема ХОБЛ отражена в Глобальном плане действий ВОЗ по профилактике неинфекционных заболеваний (НИЗ) и борьбе с ними и в Повестке дня Организации Объединенных Наций в области устойчивого развития на период до 2030 г.

ВОЗ предпринимает ряд мер для расширения диагностики и лечения ХОБЛ.

Для помощи в борьбе с НИЗ на уровне первичной медико-санитарной помощи в условиях ограниченных ресурсов ВОЗ разработала комплекс основных мер борьбы с неинфекционными заболеваниями. Этот комплекс включает в себя протоколы для оценки, диагностики и ведения хронических респираторных заболеваний (астмы и хронической обструктивной болезни легких), а также модули, касающиеся консультирования по вопросам здорового образа жизни, включая отказ от курения и самопомощь.

«Реабилитация 2030» – это новый стратегический подход, призванный способствовать приоритетному развитию и укреплению реабилитационных услуг в рамках систем здравоохранения. В настоящее время в рамках этой инициативы ВОЗ разрабатывает комплекс мероприятий по реабилитации, который кроме прочего включает в себя легочную реабилитацию при ХОБЛ.

Снижение воздействия табачного дыма крайне важно как для первичной профилактики ХОБЛ, так и в контексте ведения больных. Прогрессу в этой области способствует Рамочная конвенция по борьбе против табака, а также такие инициативы ВОЗ, как MPOWER и mTobacco Cessation.

К числу других действий в сфере профилактики относится разработка Набора инструментов для обеспечения чистой энергии в быту (CHEST), который направлен на продвижение чистых и безопасных бытовых энергетических технологий и содействие разработке политики, способствующей внедрению чистых источников энергии в быту на местном, программном и национальном уровнях.

Глобальный альянс по борьбе с хроническими респираторными болезнями (GARD) содействует работе ВОЗ по профилактике и контролю хронических респираторных заболеваний. GARD представляет собой широкий добровольный альянс национальных и международных организаций и учреждений, работающих над достижением общей цели по уменьшению глобального бремени хронических респираторных болезней.  

Полезно знать о ХОБЛ (kols)

Факты о хронической обструктивной болезни лёгких (ХОБЛ) (kols)

По подсчётам около 370 000 человек в Норвегии страдает от ХОБЛ. Предполагается, что целых 280 000 из них не знают о своей болезни. ХОБЛ это болезнь, которая стремительно прогрессирует во всём мире и к 2020 ожидается, что именно эта болезнь будет третьей в списке причин смертности в мире.

Что такое ХОБЛ?

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) характеризуется прогрессирующим ухудшением функции легких. Это ведёт к вынужденному усилению дыхательных движений и ощущению одышки. Наблюдается хроническое сужение дыхательных путей и дыхание становится тяжёлым. Кроме того, типичными симптомами болезни являются свист в груди, кашель и отхаркивание мокроты. Симптомы ухудшаются при физической активности. При серьёзной степени заболевания становится тяжело дышать даже в спокойной обстановке.

Кто может заболеть ХОБЛ?

Курение табака является основной причиной ХОБЛ, и ею объясняется два из трёх случаев болезни в Норвегии. От шести до восьми процентов больных никогда не курили и не менее 15 процентов случаев никогда бы не возникли, если бы не воздействие раздражителей на дыхательные пути в условиях труда. Отдельную роль также играет наследственность.

Мировая статистика показывает, что 95% больных хронической обструктивной болезнью лёгких являются курильщиками, часто с более чем 20-летним стажем ежедневного курения.

Современные исследования также показывают, что вероятность приобретения ХОБЛ во взрослом возрасте увеличивается в три раза среди людей, которые болели астмой в детстве, чем среди людей, которые курили ежедневно, но не страдали от астмы.

По данной ссылке можно прочитать результаты проведённых исследований.

Диагностика ХОБЛ

ХОБЛ развивается постепенно, и может пройти 30-40 лет до появления первых симптомов. Воспаление дыхательных путей приводит к их сужению и образованию в них рубцов, что невозможно обнаружить с помощью обычной рентгенографии. Наличие ХОБЛ можно легко определить путём исследования функции лёгких, проводимого врачом. Симптомы ХОБЛ похожи на симптомы астмы, что может затруднить постановку диагноза.

Интенсивность симптомов ХОБЛ может варьироваться. У кого-то болезнь может протекать легко, без особых неудобств в повседневной жизни, тогда, как другие могут быть инвалидизированы и зависимы от постоянного кислородного питания. В некоторых случаях больные могут страдать и ХОБЛ и астмой.

Распространённость

Предполагается, что свыше 370000 норвежцев старше 18 лет страдают ХОБЛ, и каждый год число новых случаев составляет 20 000. Менее половины больных был поставлен диагноз. Количество больных существенно увеличивается с возрастом. В мировом масштабе темпы роста заболеваемости ХОБЛ являются самыми быстрыми. Всемирная организация здравоохранения поставила ХОБЛ на четвёртое место среди причин смертности в мире. По рассчётам ожидается, что к 2020 именно эта болезнь будет третьей в списке причин смертности в мире.

Что происходит в дыхательных путях?

• Увеличивается количество слизи в бронхах.
• Воспалительные изменения (инфламация) в слизистой оболочке.
• Спазмы (сокращение) мышечных тканей вокруг бронхов.
• Разрушение эластических волокон тканей малых и больших дыхательных путей.        При ХОБЛ наблюдается повреждение и постепенное разрушение эластических тканей вокруг бронхов. Это приводит к тенденции коллапса дыхательных путей при выдохе.

На данном рисунке проиллюстрирована дыхательная трубка в лёгких. Верхний рисунок показывает нормальный вариант. Нижний рисунок показывает утолщённую ткань, которая приводит к сужению трубки, что является типичным симптомом ХОБЛ. Кроме того, элементы, задачей которых является поддержание дыхательных путей открытыми, потеряли свою жёсткость, что приводит к тенденции коллапса при выдохе.

На данном рисунке Вы видите иллюстрацию нормальной дыхательной трубки сверха справа. Внизу показана дыхательная трубка с ХОБЛ – утолщённая ткань, которая сужает трубку, ослабленные элементы, что является обычным при ХОБЛ. Кроме того, вырабатывается большое количество слизи. Слизь ещё более сужает пути, содействует развитию кашля, что, в свою очередь, приводит к ещё более затруднительному дыханию.

Различие между астмой и ХОБЛ

При астме симптомы возникают в виде приступов, часто с изменениями функций лёгких на протяжении суток. При ХОБЛ симптомы развиваются постепенно и с меньшими вариациями, чем при астме. Между приступами лёгкие астматика работают нормально. Функции легких больного ХОБЛ постепенно ухудшаются от года к году.

Обучение и просвещение

Обучение является важным моментом для увеличения количества знаний о ХОБЛ, необходимых для улучшения состояния больных. Данный вид обучения предоставляется в школах ХОБЛ или во время прохождения реабилитации. Центры обучения, расположенные по всей стране, проводят такие курсы. В некоторых центрах также проводятся курсы для родственников людей, страдающих от ХОБЛ. Такие центры часто расположены при больницах. Единого реестра центров нет, следует обратиться в больницу по месту проживания.

лечение и диагностика причин, симптомов в Москве

Лечение хронической обструктивной болезни легких

Это серьезное, угрожающее жизни заболевание, при котором дыхательные пути неуклонно сужаются на фоне хронического воспаления бронхов или эмфиземы (разрушения тканей легких, затрудняющие газообмен). Обструкция — это буквально прекращение, препятствие в нормальном функционировании легких, доступе кислорода в организм и выведении углекислого газа.

Причины

• курение (активное и пассивное вдыхание табачного дыма),
• регулярное вдыхание пыли, продуктов сгорания (вредные производства)

К сожалению, данное заболевание неизлечимо, именно поэтому Всемирная организация здравоохранения активно призывает страны бороться с курением табака, проводить профилактические и просветительские программы для населения. Ведь предотвратить угрозу возникновения ХОБЛ можно, бросив курить.

И даже если заболевание неизлечимо можно справиться с его проявлениями и перевести его течении в контролируемое русло, главное не заниматься самолечением и вовремя обратиться к квалифицированным специалистам.

Не стоит забывать, что практически все случаи ХОБЛ предотвратимы. И обезопасить себя можно, отказавшись от вредной привычки курения табака. Ввиду того, что ранее мужчины курили много больше женщин, то и заболевание считалось по большей части мужским, но с широким распространением этой вредной привычки среди женщин, увеличилось и число выявленных случаев ХОБЛ среди них. Поэтому в наше время гендерное разделение не прослеживается так четко. В зоне риска курящие люди 40-50 лет и старше.

Симптомы хронической обструктивной болезни легких

• одышкакоторая медленно нарастает с прогрессированием заболевания,
• постоянный кашель,
• отделение мокроты при кашле.

Диагностика

Диагностика ХОБЛ является одной из самых актуальных тем для врача-пульмонолога: заболевание широко распространено, при несвоевременном диагностировании есть высокий риск перетекания заболевания в тяжелую форму с высокой смертностью. Основной метод диагностики, применяемый повсеместно, — спирометрия — врач замеряет объем и скорость потока воздуха, выдыхаемого при максимальном усилии. Но в пульмонологическом отделении ФНКЦ ФМБА России помимо спирометрии специалисты проводят и другие обследования функциональности легких, которые позволяют уточнить диагноз и впоследствии подобрать эффективное лечение: бодиплетизмография, измерение диффузионной способности легких, кардиореспираторные нагрузочные тесты, исследование дыхания во время сна, определение оксида азота в выдыхаемом воздухе и др. Также может потребоваться и лабораторная диагностика — анализы крови и выделяемой мокроты для уточнения стадии заболевания.

Лечение хронической обструктивной болезни легких

Общепринятые схемы лечения ХОБЛ направлены на облегчение симптомов и недопущение прогрессирования заболевания.

Пульмонологическое отделение ФНКЦ ФМБА России по праву считается одним из ведущих в стране, благодаря современному лечебно-диагностическому оснащению и составу команды специалистов: наши врачи разрабатывают уникальные программы лечения и реабилитации, проводят обучение коллег из других лечебных учреждений, публикуют результаты своих исследований в ведущих международных изданиях.

В отделении доступны все возможные средства диагностики и лечения заболеваний легких: как современные, так и проверенные временем. Более того, в нашем центре, единственном в России, проводятся клинические испытания, и именно нашими специалистами подтверждается эффективность новой диагностической и лечебной аппаратуры, проходящей регистрацию для использования в дальнейшем во всех пульмонологических отделениях страны. Это большое доверие квалификации центра, которое мы оправдываем из года в год в первую очередь перед нашими пациентами.

Записаться на консультацию вы можете через специальную форму на сайте или по телефону.

ХОБЛ — xроническая обструктивная болезнь легких

2019.12.17

Хроническая обструктивная болезнь легких является прогрессирующим и смертельным заболеванием

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) представляет собой заболевание, характеризующееся прогрессирующей неполной обструкцией дыхательных путей (сужение воздушного потока в легких, что приводит к недостаточной оксигенации всех тканей и органов), связанной с аномальной воспалительной реакцией легких на вдыхаемые вредные частицы или газы. в частности курение табака. Наиболее важным фактором риска ХОБЛ является длительное курение. На возникновение заболевания также влияют загрязнение окружающей среды и работа в загрязненной (пыльной или дымной) среде, частые респираторные инфекции в анамнезе и, в очень редких случаях, дефицит определенного белка (альфа-1-антитрипсина).

Данные различных исследований показывают, что заболеваемость и смертность от ХОБЛ увеличивается с каждым годом. В Европе заболеваемость этим заболеванием составляет от 5% до 10%, особенно среди пожилых людей. ХОБЛ в настоящее время занимает четвертое место по уровню смертности, но согласно прогнозам ВОЗ на 2030 год. она станет третьей по значимости причиной смерти в мире (сердечно-сосудистые заболевания останутся на первом месте, а онкология — на втором). ХОБЛ является прогрессирующим заболеванием, которое означает, что если его не лечить, оно ухудшится и изменения будут необратимыми. ХОБЛ часто усугубляет течение сопутствующих заболеваний и операций, и его частыми «сопровождающими» являются депрессия, сердечные заболевания, атрофия скелетных мышц, снижение выносливости, истощение, хроническое заболевание сердца, вторичная полицитемия (увеличение количества клеток крови) и рак легких.

Симптомы, характерные для ХОБЛ

• Одышка и нехватка воздуха. Первоначально это происходит во время повышенной физической нагрузки, например, торопиться в автобус или подниматься по лестнице, а затем, во время простых ежедневных действий (уборка дома, одеваться), и, наконец, сидеть или лежать в постели;
• Кашель разных видов, кашель, особенно по утрам. Курильщик обычно связывает кашель с курением, привыкает кашлять по утрам, поэтому он часто не замечает, что кашель изменился, стал постоянным и появилась мокрота;
• Регенерация мокроты. Мокрота имеет тенденцию быть слизистой и удлиненной, с обострением заболевания и вовлечением гнойной инфекции;
• Увеличение усталости, общая слабость;
• Общие респираторные инфекции;
• Потеря веса и др.

Диагностика и лечение ХОБЛ

Хроническая обструктивная болезнь легких диагностируется пульмонологом (пульмонологом), который оценивает жалобы пациента, имеет историю болезни, клиническое обследование и спирометрическое исследование. Объем легких и скорость воздушного потока во время выдоха измеряются с помощью спирометрии. Пациенты с ХОБЛ имеют пониженную скорость выдоха, что приводит к тому, что не весь воздух удаляется из легких, и в конечном итоге развивается эмфизема легких (другими словами, «выпуклость»), и грудная клетка напоминает бочку.

После постановки диагноза ХОБЛ проводится лечение. К сожалению, до сих пор нет лекарства от хронической обструктивной болезни легких, но следование рекомендациям врача может замедлить его прогрессирование и улучшить качество жизни, снизить риск смерти и предотвратить обострения.

Чем раньше диагностируется заболевание, тем легче прогрессировать и тем проще лечение. При диагностике ХОБЛ легкой стадии достаточно следовать рекомендациям врача и использовать быстродействующие бронходилататоры при одышке. Однако для лечения хронической обструктивной болезни легких вдыхаемые бронхолитические препараты подбираются пульмонологом индивидуально для каждого пациента. В дополнение к правильному использованию ингаляционных лекарств (ингаляторов) следует соблюдать рекомендации другого врача.

Рекомендации врача для больных

• Не курите, потому что курение продолжает ухудшать функцию легких, а лекарства менее эффективны.
• Еда здоровая и балансированная: Ешьте 3-4 раза в день, употребляйте много свежих продуктов, фруктов и овощей, ограничьте потребление алкоголя.
• Поддерживайте физическую активность и улучшайте физическую форму: от 20 до 30 минут аэробных упражнений не менее 2-3 раз в неделю — особенно нордическая ходьба, подъем по лестнице. Для тех, кто не любит активные виды спорта, прогулки на природе с домашним животным, игры с детьми или внуками могут стать приятной физической нагрузкой. Быстродействующий бронходилататор можно вдыхать перед физической подготовкой.
• Избыточный вес рекомендуется для тех, кто имеет избыточный вес, так как потеря веса значительно повысит физическую работоспособность и уменьшит одышку.
• Избегайте простудных заболеваний, всегда носите соответствующую одежду для сезона и поддерживайте температуру ниже 19 градусов
• Предотвращение заражения вирусными респираторными инфекциями от больных близких, поскольку любая респираторная инфекция может затруднить дыхание и еще больше повредить ткани легких, а вирусные и бактериальные респираторные инфекции являются наиболее частой причиной обострения ХОБЛ. 
• Если в вашем доме насморк или холод, рекомендуется использовать одноразовые маски и часто мыть руки.
• Грипп и пневмония могут быть защищены прививками, которые бесплатны для пациентов с болезнью и должны проводиться ежегодно, как только начинается осенний сезон.
• Правильное использование лекарств (ингаляторов) очень важно при заболеваниях дыхательных путей, иначе они не попадут в нижние дыхательные пути и окажутся неэффективными. После ингаляционного лечения ваш пульмонолог научит вас правильно их использовать и даст вам подробные инструкции по использованию вашего ингалятора. Если вы не чувствуете какого-либо улучшения или чувствуете, что ваши лекарства не действуют, внимательно прочитайте инструкцию или обратитесь за советом к фармацевту.

Когда вызывать пульмонолога?

Посещение пульмонолога по поводу хронической обструктивной болезни легких рекомендуется не реже одного раза в год, для пациентов с тяжелой ХОБЛ — 3 раза в год. Во время визита оценивается легочная функция и ее изменения во время лечения и разъясняется техника использования ингаляторов. Запись на консультацию пульмонолога также рекомендуется, если назначенное лечение не улучшается. Во время консультации врач выберет наиболее подходящее лекарство и ингалятор.

Если вам за 40, жалуйтесь на одышку с легкой или умеренной физической нагрузкой, одышку, сопровождающуюся утренним кашлем, мокротой, «одышкой», изменениями в характере дыхания, чувством одышки, усилением дыхания и пульса, особенно если вы курите Посетите своего пульмонолога для проверки спирометрии, чтобы видеть, есть ли у Вас обструктивное заболевание легких.

Сотрудничество между пациентом и врачом имеет важное значение для успеха лечения ХОБЛ

Следование рекомендациям врача и регулярное использование препарата могут помочь остановить прогрессирование заболевания, сохранить способность работать дольше, продолжать полноценную социальную жизнь. Однако, собственное отношение и усилия пациента здесь очень важны. Несоблюдение режима и лечения ухудшит состояние и вызовет необратимые изменения. На более тяжелых стадиях ХОБЛ физическая активность значительно снижается, и даже такие, казалось бы, легкие действия, как одевание или стирка, ставятся под сомнение. Такие пациенты могут получать непрерывную кислородную терапию, как определено пульмонологом, который выполнил пульсоксиметрию и мониторинг газов артериальной крови.

Лекарственная терапия депрессии у пациентов с хронической обструктивной болезнью легких

Хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ) — это термин, который в основном описывает два состояния легких: хронический бронхит и эмфизему. Основные симптомы ХОБЛ — одышка, персистирующий кашель, шумное/хриплое дыхание и/или частые инфекции дыхательных путей. Невозможно вылечить ХОБЛ, но терапия способна замедлить прогрессирование болезни и облегчить симптомы заболевания. Депрессия распространена среди пациентов с ХОБЛ, но её часто не лечат. Исследования показывают, что депрессия без специфического лечения у пациентов с ХОБЛ может снижать качество жизни, увеличивает частоту обострений ХОБЛ и госпитализаций, а также приводит к усложнению плана лечения ХОБЛ. Лечение депрессии может включать антидепрессанты, психотерапию или то и другое вместе. Однако, в настоящее время отсутствуют основанные на доказательствах рекомендации для терапии пациентов с ХОБЛ антидепрессантами.

Почему этот обзор важен?

До сих пор нет четкого обзора существующих доказательств, показывающих, могут ли антидепрессанты эффективно и безопасно уменьшать симптомы депрессии у пациентов с ХОБЛ, поэтому важно оценить существующие экспериментальные исследования.

Кто может быть заинтересован в этом обзоре?

Работники здравоохранения, люди с ХОБЛ и депрессией, исследователи, политики будут заинтересованы в результатах этого обзора.

На какие вопросы стремится ответить этот обзор

Нашей главной целью было оценить, может ли фармакологическое лечение (например, антидепрессантами) эффективно и безопасно лечить депрессию, связанную с ХОБЛ.

Какие исследования были включены в этот обзор?

Этот обзор включал экспериментальные исследования, а именно рандомизированные контролируемые испытания (исследования, в которых участников в случайном порядке распределяют в группы лечения), в которых сравнивали эффективность фармакологических вмешательств (антидепрессантов) с плацебо (неактивное лечение в той же самой форме, что и активное лечение, например таблетка). Среди участников исследований были взрослые пациенты с диагностированной ХОБЛ и депрессией.

О чём говорят нам доказательства из этого обзора?

Мы обнаружили только четыре исследования, соответствующих критериям включения нашего обзора. Это говорит об ограниченности доказательств, поддерживающих использование антидепрессантов для лечения депрессии у пациентов с ХОБЛ. Только в одном исследовании оценивали эффективность трициклического антидепрессанта нортриптилина. Было установлено, что это лекарство уменьшает симптомы депрессии в сравнении с плацебо. В трех исследованиях оценивали эффективность более нового класса антидепрессантов, называемых селективными ингибиторами обратного захвата серотонина (СИОЗС). Не было обнаружено доказательств их эффективности в уменьшении симптомов депрессии. В связи с ограниченными доказательствами, мы не можем сделать определенные выводы об эффективности или безопасности применения антидепрессантов при лечении пациентов с депрессией, связанной с ХОБЛ. Однако, СИОЗС могут улучшать способность переносить физическую нагрузку у пациентов с ХОБЛ.

Учитывая, что полученные результаты основываются только на четырех небольших исследованиях с очень низким качеством доказательств, важно интерпретировать эти результаты с осторожностью.

Что должно произойти дальше?

Недостаточные доказательства не дают возможности нам сделать четкие рекомендации для врачей, других работников здравоохранения, исследователей или политиков. Необходимо больше исследований с улучшенным методологическим качеством и большим числом участников.

Что необходимо знать про ХОБЛ ?

Так что же такое ХОБЛ?
ХОБЛ (хроническая обструктивная болезнь легких) — заболевание, при котором сочетаются два недуга: 1. Бронхит хронического течения, при котором воспалены пути попадания воздуха в легкие. Сопровождается это большим количеством слизи. Бронхиальные стенки становятся более толстыми, при этом сужается их просвет. Это называется обструкцией. Отсюда и соответствующий термин в названии болезни.
2. Эмфизема легких. Этот недуг (в отличие от бронхита) характерен тем, что при нём повреждаются альвеолы легких. Теряя эластичность, они способствуют уменьшению площади легких. В итоге нарушается газообмен между вдыхаемым человеком воздухом и его кровью. У больного появляется одышка.

Таким образом, заболевание характеризуют следующие симптомы:
1. длительный (хронический) кашель;
2. слизь (мокрота), которая появляется при кашле;
3. одышка , усиливающаяся при нагрузках.

ХОБЛ развивается в результате взаимодействия генетических факторов и факторов окружающей среды. Почти всегда болезнь провоцирует курение, потому что вдыхание табачного дыма раздражает дыхательные пути и разрушает эластические волокна в легких. В то же время к ХОБЛ может приводить длительное вдыхание химикатов ( пары и дымы), производственной пыли, а так же «пассивное» курение.

«Коварство» ХОБЛ заключается в том, что она начинается незаметно и, пока человек только кашляет по утрам (и обычно ещё не лечится), успевает привести к значительному поражению бронхов и легких. Появление одышки говорит о выраженном сужении бронхов , которое полностью вылечить уже невозможно. Впоследствии присоединяются и обострения болезни , чаще на фоне респираторных инфекций или других неблагоприятных воздействий. Обострения ХОБЛ ещё более усугубляют собой нарушения дыхания. Именно прогрессирующий и малообратимый характер поражения дыхательной системы составляет столь неприятный «портрет» ХОБЛ.

Чтобы уточнить, болен или нет человек таким недугом, как хроническая обструктивная болезнь легких, следует обратиться к специалисту, занимающемуся проблемами легких, к пульмонологу.

Врач на первом приёме осмотрит пациента, прослушает легкие, уточнит, курит ли человек, как часто соприкасается с различными химическими соединениями, способными негативно воздействовать на лёгкие.

Затем назначается спирометрия ( исследование функции внешнего дыхания) – необходимая диагностическая процедура, позволяющая установить диагноз и оценить степень тяжести болезни. Для этой группы пациентов обязательным обследованием является рентгенография органов грудной клетки, а в отдельных случаях и компьютерная томография. Эти виды исследований позволяют оценить степень выраженности эмфиземы лёгких, наличие булл, бронхоэктазов, а так же онкопатологии бронхолегочной системы. Последняя нередко осложняет течение ХОБЛ.

Важно знать, что ХОБЛ – заболевание, которое можно предотвратить и лечить.

Своевременное обращение к врачу при появлении первых симптомов заболевания значительно улучшает его прогноз и эффективность лечения.

ВАМ УСТАНОВЛЕН ДИАГНОЗ ХОБЛ.ЧТО ДАЛЬШЕ?

ХОБЛ – заболевание , которое можно предотвратить и лечить.

Основным способом замедлить развитие ХОБЛ является устранение причин , которые вызвали этот недуг. В первую очередь это отказ от курения – полный и навсегда. Не имеет значение , как долго человек курил и насколько повреждены его лёгкие. Прекращение курения в любом случае поможет замедлить прогрессирование заболевания. Немаловажное значение имеет так же применение индивидуальных средств защиты дыхательной системы, снижение по возможности количества вредных факторов в рабочей зоне, рациональное трудоустройство.

Для контроля заболевания пациент должен принимать активное участие в лечении. Необходимо регулярно обращаться к специалисту, ежегодно 1-2 раза проходить спирометрическое и рентгенологическое обследование. Оптимальным способом самоконтроля является ведение дневника , которое позволит отследить динамику симптомов и предупредить развитие тяжёлых обострений заболевания. Игнорирование признаков обострения может привести к госпитализации и ускорить потерю функции лёгких.

Целью назначения лекарственных препаратов при ХОБЛ является снижение частоты обострений, выраженности симптомов , предупреждение развития осложнений. По мере развития болезни объём лечения только возрастает. Большинство препаратов являются ингаляционными ( вдыхаемыми).

Важно знать, что все препараты должен назначать только врач! Если пациент получает ингаляции, обязательно следовать правилам проведения процедуры. Во время очередного визита к врачу после назначения впервые или нового вида ингалятора необходимо взять его с собой на прием. Врач проверит правильность техники выполнения ингаляции и укажет на вероятные ошибки. По данным исследований процент ошибок при применении различных видов ингаляционных устройств составляет от 30 до 80 процентов. Следовательно эти пациенты фактически не получают назначенную терапию.

В лечении ХОБЛ основную группу препаратов составляют бронхолитики. Это вещества, которые расслабляют мышцы бронхов, расширяют дыхательные пути и улучшают выведение воздуха из легких. При этом уменьшается одышка, кашель, облегчается отхождение мокроты.

Пациенты с ХОБЛ относятся к группе риска по развитию тяжелых осложнений в эпидемию гриппа. Поэтому вакцинация против гриппа обязательно должна быть включена в программу лечения этих больных.

Что ещё, кроме лекарств, может улучшить состояние больных ХОБЛ?

Необходимо избегать того, что может вызвать раздражение лёгких – дыма, холодного или сухого воздуха. В домашних условиях это использование кондиционеров, увлажнителей воздуха.

Основным компонентом реабилитации служат физические упражнения. Естественно, если у человека проблемы с дыханием , то упражнения могут быть последним, что ему захочется делать… Но специальные упражнения при ХОБЛ могут существенно помочь дыханию, что позволит пациенту оставаться максимально активным, насколько это возможно, и значительно улучшит качество жизни. Особенно важен комплексный подход к их проведению, сочетающий в себе упражнения на силу и выносливость: ходьбу, тренировки мышц верхних и нижних конечностей с помощью эспандеров, гантелей, степ-тренажеров. Прежде чем начать заниматься, больной должен обсудить программу упражнений с врачом.

Пациент с ХОБЛ должен следить за своим весом. Избыточная масса тела усиливает одышку. Но часто прогрессирование заболевания приводит к резкой потере веса. В этом случае необходим рацион с повышенным содержанием белка и витаминов. Если нет противопоказаний по сопутствующим заболеваниям рекомендовано ежедневно выпивать 1,2-1,6 л тех или иных напитков без кофеина. Это предупреждает сгущение мокроты и облегчает её отхождение при кашле.

Только в сотрудничестве с пациентом врач в лечении ХОБЛ может добиться положительных результатов, а пациент свести к минимуму симптомы болезни и сделать свою жизнь комфортной.

Хроническая обструтивная болезнь легких (ХОБЛ)

Общие сведения

Хронический бронхит — это заболевание, которое характеризуется следующими признаками: кашлем с мокротой на протяжении по крайней мере трех месяцев в году в течение двух лет подряд в сочетании с нарушениями по данным спирометрии (исследования функции внешнего дыхания).

Таким образом, основная жалоба при хроническом бронхите — это кашель с мокротой.

Вместе с эмфиземой легких хронический бронхит относится к так называемым хроническим обструктивным болезням (заболеваниям) легких, сокращенно — ХОБЛ (или ХОЗЛ). Эмфизема легких характеризуется их «перерастяжением», увеличением воздушных пространств.  

Главная жалобы при эмфиземе легких — одышка (чувство нехватки воздуха).

Хронический бронхит и эмфизема легких редко встречаются в чистом виде: у большинства больных в той или иной степени сочетаются оба заболевания. В зависимости от преобладающих симптомов различают два типа ХОБЛ: бронхитический и эмфизематозный.

Основная причина ХОБЛ — курение. У некоторых курильщиков ХОБЛ протекают с приступами удушья. Эту форму заболевания необходимо дифференцировать с бронхиальной астмой, при которой тоже возникают приступы удушья, но между приступами, в отличие от ХОБЛ, проходимость дыхательных путей полностью восстанавливается. Эта форма ХОБЛ получила название хронического астматического бронхита.

В развитых странах ХОБЛ — четвертая по частоте причина смерти. Распространенность ХОБЛ увеличивается с возрастом. Среди больных преобладают мужчины, что закономерно, ведь раньше курение было в основном мужской привычкой. По мере приобщения к ней женщин растет их доля среди больных ХОБЛ.

Главный фактор риска ХОБЛ — курение. Вероятность заболевания увеличивается пропорционально стажу курения и числу выкуриваемых сигарет. У курящих сигары или трубки риск тоже повышен, но в значительно меньшей степени, чем у курящих сигареты. Решающую роль в развитии ХОБЛ, по-видимому, играет индивидуальная восприимчивость к действию табачного дыма, поскольку ХОБЛ развиваются только у 15% курящих. 

Больные с недостаточностью альфа1-антитрипсина чрезвычайно предрасположены к эмфиземе легких, правда, на их долю приходится менее 2% случаев этого заболевания. Причиной хронического бронхита могут быть профессиональные вредности, прежде всего контакт с неорганической пылью (цементной, угольной), зерновой пылью и парами серной кислоты. У некурящих развитию ХОБЛ могут способствовать общее загрязнение атмосферы, загрязнение воздуха в помещениях и рецидивирующие инфекции дыхательных путей в детстве, но роль этих факторов не ясна.

Диагностика

Болеют в основном люди старше 50 лет, курящие или курившие ранее (стаж курения — более 20 пачко-лет). Заподозрить ХОБЛ можно при сборе анамнеза, но для подтверждения диагноза необходима спирометрия (исследование функции внешнего дыхания). Основной симптом — прогрессирующая одышка. Обычно ей сопутствуют кашель с мокротой и приступы удушья. Кашель, как правило, либо предшествует одышке, либо появляется одновременно с ней. Мокрота имеет бледно-серый цвет и выделяется по утрам, но может откашливаться и в течение дня.

Многолетний кашель с мокротой и слабо выраженная одышка характерны для бронхитического типа ХОБЛ. При эмфизематозном типе ХОБЛ, напротив, беспокоят редкий кашель со скудной мокротой и выраженная одышка. Изменение характера мокроты со слизистого (бледно-серый цвет) на гнойный свидетельствует о присоединении инфекции — остром бактериальном бронхите. Свистящее дыхание и приступы удушья — результат спазма бронхов или сужения дыхательных путей за счет воспаления. ХОБЛ у близких родственников означает, что причиной заболевания может быть недостаточность альфа1-антитрипсина, особенно если первые симптомы появились до 50 лет. Кровохарканье обычно обусловлено острой бактериальной инфекцией (бронхитом или пневмонией), однако надо исключить рак легкого. Если заболевание началось с прогрессирующей одышки на фоне бронхиальной астмы, особенно у некурящего, вероятен хронический астматический бронхит. 

При бронхитическом типе ХОБЛ жалоб в покое обычно нет. Со временем неизбежно развивается гипоксемия (снижение уровня кислорода в крови), которая ведет к изменениям в сердце (легочное сердце) и к сердечной недостаточности (которая проявляется, в частности, отеками). 

При ХОБЛ, особенно тяжелых, возможны жалобы, не связанные напрямую с поражением органов дыхания: быстрая утомляемость, похудание, снижение аппетита. Возможны также нарушения сна и психические расстройства: депрессия, нарушения концентрации внимания и памяти. 

Лабораторные и инструментальные исследования

Единственный достоверный критерий ХОБЛ — нарушения, выявленные при спирометрии (исследовании функции внешнего дыхания). Любые изменения спирометрических показателей, как в лучшую, так и в худшую сторону, однако, ни о чем не говорят, пока не подтверждены повторными исследованиями. При бронхиальной астме, в отличие от ХОБЛ, обструктивные нарушения обратимы.

Функциональный резерв легких оценивают с помощью нагрузочных проб с исследованием функции внешнего дыхания и газообмена. Кроме того, нагрузочные пробы позволяют установить, чем обусловлена плохая переносимость физической нагрузки: нарушением газообмена или вентиляции либо сердечно-сосудистой патологией. У больных ХОБЛ ограничивающим фактором часто оказывается сердечно-сосудистая патология. 

Если выявлены обструктивные нарушения, спирометрию обычно дополняют определением чувствительности к бронходилататорам: для этого дают пациенту сделать несколько вдохов через ингалятор и повторяют исследование. Однако реакция на однократное применение бронходилататоров не всегда отражает их эффективность, и низкая чувствительность к бронходилататорам при спирометрии еще не означает, что длительное их применение не улучшит состояние больного. Следовательно, независимо от реакции, выявленной при спирометрии, не стоит отказываться от пробного лечения бронходилататорами. 

Рентгенография грудной клетки может помочь в диагностике эмфиземы легких. Наиболее важный ее признак — перераздувание легких. Можно обнаружить буллы в верхних долях и очаговое повышение прозрачности легочных полей. Рентгенография лишь приблизительно характеризует тяжесть эмфиземы легких и наиболее информативна при тяжелых формах заболевания. В выявлении таких изменений, как мелкие буллы, гораздо большей чувствительностью обладает компьютерная томография (КТ). Однако ни рентгенография, ни КТ не заменяют ключевого метода диагностики — спирометрии.

При первичном обследовании целесообразны также микроскопия мокроты, общий анализ крови с определением лейкоцитарной формулы, электрокардиография (ЭКГ) и часто — эхокардиография (ультразвуковое исследование сердца). Кроме того, при подозрении на недостаточность альфа1-антитрипсина определяют его уровень в сыворотке, а при подозрении на хронический астматический бронхит проводят кожные пробы с аллергенами и определяют уровень IgE в сыворотке.

Лечение

Отказ от курения

Большинство больных ХОБЛ (85%) курят или курили ранее. Отказ от курения не только замедляет скорость снижения показателей внешнего дыхания (она становится такой же, как у некурящего), но и благоприятно сказывается на состоянии сердечно-сосудистой системы и снижает риск рака легкого. С включением в комплексные программы борьбы с курением препаратов никотина (жевательной резинки с никотином, пластыря с никотином, аэрозоля с никотином для интраназального введения, ингалятора с никотином) частота стойкого воздержания от курения достигла 50%. С помощью жевательной резинки в плазме и тканях поддерживается примерно такой же уровень никотина, как при выкуривании пачки сигарет в день. Отменять лечение можно как постепенно, так и резко. Из недостатков следует отметить горький вкус жевательной резинки, что может привести к несоблюдению предписаний врача, и недостаточное поступление никотина в организм при низкой эффективности жевания. 

Курению способствуют многие факторы: привычка, влияние окружающих, зависимость. Следовательно, для достижения хороших отдаленных результатов, помимо препаратов никотина в программе борьбы с курением должны быть учтены и эти стороны. Важную роль играют помощь и участие врача.

Профилактика обострений

Обострение ХОБЛ, прежде всего хронического астматического бронхита, нередко вызывают загрязнители воздуха на рабочем месте или в быту. Выявив и устранив их, можно снизить частоту и тяжесть обострений. Обострение ХОБЛ может вызвать сильный смог.

Физиотерапия

Удаление мокроты из дыхательных путей может заметно улучшить самочувствие больного, особенно при бронхитическом типе ХОБЛ. Существует множество способов очищения дыхательных путей от мокроты и предотвращения ее накопления. Кашель у больных ХОБЛ, как правило, не обеспечивает удаление мокроты и лишь изматывает. Таким больным можно посоветовать простой и эффективный способ откашливания мокроты, которым, к сожалению, часто пренебрегают. Суть его заключается в следующем: после пары медленных глубоких вдохов надо задержать дыхание на 5—10 с для повышения внутригрудного давления и затем, на выдохе, откашляться с открытой голосовой щелью.

Постуральный дренаж, вибрационный и перкуссионный массаж облегчают выведение мокроты из нижних отделов легких благодаря действию силы тяжести и колебательным движениям грудной клетки, сообщаемым ей при перкуссии или с помощью вибратора. По завершении процедуры больной должен хорошо откашляться, как описано выше. 

Все описанные методы тем или иным образом облегчают удаление мокроты, но переместить мокроту в трахею и крупные бронхи, откуда она может быть удалена при кашле или с помощью аспирации, по-прежнему может только кашель с открытой голосовой щелью.

Реабилитация

ХОБЛ существенно ухудшают качество жизни. В комплексные программы реабилитации входят обучение больных, физические упражнения и восстановление тренированности, надлежащее питание, психотерапия и социальная адаптация для устранения тревожности и других эмоциональных расстройств, вызванных ХОБЛ.

Медикаментозное лечение

Медикаментозное лечение эмфиземы легких и хронического бронхита направлено на ослабление симптомов заболевания и улучшение показателей функции легких. Предпочтение отдается ингаляционным препаратам в виде дозированных аэрозолей, поскольку при введении препарата непосредственно в дыхательные пути риск системных побочных эффектов меньше. Для введения ингаляционных препаратов необходима буферная насадка (спейсер). Она играет роль резервуара для аэрозоля и избавляет от необходимости согласовывать по времени вдох и нажатие на ингалятор-дозатор. Буферная насадка позволяет глубже ввести препарат в дыхательные пути, препятствует его оседанию в ротоглотке.

Основные группы лекарственных средств, используемых при ХОБЛ — это M-холиноблокаторы (ипратропия бромид). Ипратропия бромид обладает более сильным, чем  бета-адреностимуляторы или теофиллин, расширяющим действием на бронхи, а также более продолжительным действием. Все это ставит его во главу угла лечения ХОБЛ. Если в обычной дозе (по 2 вдоха 4 раза в сутки) ипратропия бромид недостаточно эффективен, дозу можно безбоязненно увеличить до 3—6 вдохов 4 раза в сутки. 

Бета-адреностимуляторы улучшают проходимость дыхательных путей, облегчают отхождение мокроты и ослабляют одышку. Для усиления бронходилатирующего эффекта можно увеличить дозу с 2 вдохов 4 раза в сутки до 2—6 вдохов 4—6 раз в сутки, не опасаясь осложнений. Однако под влиянием сообщений о гибели больных бронхиальной астмой в связи с передозировкой бета-адреностимуляторов специалисты не приветствуют повышение дозы. 

Роль глюкокортикоидов для приема внутрь в лечении ХОБЛ остается неопределенной отчасти из-за отсутствия доводов в пользу их применения и тяжелых побочных эффектов. Глюкокортикоиды для приема внутрь показаны амбулаторным больным при недостаточной эффективности бета-адреностимуляторов, ипратропия бромида и, возможно, теофиллина. При длительном применении глюкокортикоиды для приема внутрь оказывают тяжелые побочные действия. Среди них надпочечниковая недостаточность, остеопороз, артериальная гипертония, катаракта, миопатия, сахарный диабет. 

Несмотря на то что обоснований для применения ингаляционных глюкокортикоидов при ХОБЛ недостаточно, эти препараты применяют часто. Они содержат меньшие дозы, чем препараты для приема внутрь, почти не всасываются и поэтому вызывают лишь легкие осложнения. 

Польза от муколитических и отхаркивающих средств при хроническом бронхите пока под вопросом. Считается, что муколитические средства, например йодированный глицерин и ацетилцистеин, уменьшают вязкость мокроты. Отхаркивающие препараты разжижают мокроту и способствуют ее выведению.

Инфекции провоцируют обострения ХОБЛ, поэтому антибактериальные препараты назначают часто — как с профилактической, так и с лечебной целью. Во время инфекционных обострений (на них указывают усиление одышки и кашля и появление гнойной мокроты) функция легких ухудшается (не исключено, что необратимо). При частых обострениях (4 и более в год) сократить их число может ежемесячная профилактическая антибактериальная терапия в течение недели со сменой препаратов.

Профилактика гриппа и пневмококковой пневмонии

Поскольку легочная инфекция у больных ХОБЛ встречается часто и грозит ухудшением функции легких и дыхательной недостаточностью, больным, не страдающим аллергией на яичный белок, рекомендуется ежегодная вакцинация против гриппа. Эффективность ее достигает 60—80%. Невакцинированным больным с высоким риском гриппа A и на ранней его стадии назначают амантадин. Больным старше 50 лет, кроме того, рекомендуется однократная иммунизация пневмококковой вакциной. Ревакцинацию сейчас проводят по прошествии пяти и более лет, если на момент вакцинации возраст больного не превышал 65 лет.

Длительная кислородотерапия

Польза постоянных ингаляций кислорода (длительной кислородотерапии) при ХОБЛ научно доказана. Кислородотерапия существенно снижает частоту осложнений и летальных исходов при тяжелых ХОБЛ, а также улучшает психические функции и переносимость физической нагрузки.

Короткоцепочечный полиглутамат метотрексата как параметр исхода у пациентов с ревматоидным артритом, получающих метотрексат

Цели: Метотрексат (МТ) — краеугольный камень в лечении ревматоидного артрита (РА). Хотя в целом метотрексат очень эффективен, основным недостатком является большая вариабельность клинического ответа у разных пациентов. Предполагается, что циркулирующие уровни полиглутаматов метотрексата (MTXPG) коррелируют с клинической эффективностью, поэтому они могут играть потенциальную роль в мониторинге лекарственных средств.Тем не менее, существует противоречивая дискуссия о важности полиглутаматов метотрексата в качестве исходных параметров терапии ревматоидного артрита. Целью настоящего исследования было изучить образование и фармакокинетику MTXPG и сопоставить их концентрацию с клиническим ответом у пациентов, ранее не получавших метотрексат.

Методы: Фармакокинетику МТХПГ в эритроцитах определяли в образцах девятнадцати пациентов, ранее не получавших метотрексат, с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (ВЭЖХ) с использованием постколоночного фотоокисления и флуориметрического обнаружения.Связь между концентрацией MTXPG в эритроцитах и ​​параметром первичного исхода DAS-28 оценивали с использованием коэффициента корреляции Спирмена.

Полученные результаты: Короткоцепочечный полиглутамат MTXPG2 оказался потенциальным маркером клинического исхода при ревматоидном артрите со статистически значимой положительной корреляцией между уровнями Cmax MTXPG2 и улучшением DAS-28 (+0.518, p = 0,023) в течение 16 недель. Кроме того, уровни Cmax MTXPG2 отрицательно коррелировали с базофилами (-0,478, p = 0,038) и эозинофилами (-0,531, p = 0,019), которые являются провоспалительными клетками, участвующими в заболевании.

Выводы: MTXPG2, по-видимому, является потенциальным индикатором клинического ответа и может служить маркером для мониторинга лекарств.

RibR, возможный регулятор оперона биосинтеза рибофлавина Bacillus subtilis, in vivo взаимодействует с 5′-нетранслируемым лидером мРНК rib | Письма о микробиологии FEMS

Абстрактные

RibR представляет собой минорную криптическую флавокиназу (EC 2.7.1.26) грамположительной бактерии Bacillus subtilis с неизвестной клеточной функцией. Активность флавокиназы, по-видимому, локализована в N-концевом домене белка. Используя дрожжевую трехгибридную систему, было показано, что RibR специфически взаимодействует in vivo и с нетранслируемым лидером дикого типа мРНК оперона биосинтеза рибофлавина. Это взаимодействие частично теряется при тестировании лидера, содержащего известные дерегулирующие мутации cis в так называемом элементе RFN .Элемент RFN представляет собой последовательность внутри мРНК лидера rib , которая, как сообщается, служит рецептором для FMN-зависимого «рибопереключателя». В самом RibR взаимодействие было локализовано в части белка с карбокси-концом, сегменте неизвестной функции, который не обнаруживает сходства с другими белками в общедоступных базах данных. Анализ штамма с дефектом ribR выявил умеренное нарушение регуляции биосинтеза флавинов (рибофлавин, FMN и FAD). Результаты показывают, что РНК-связывающий белок RibR может участвовать в регуляции генов rib .

Введение

Рибофлавин (витамин B ₂ ) является прямым предшественником флавинмононуклеотида (FMN) и флавинадениндинуклеотида (FAD). FMN и FAD служат коферментами флавопротеинов, ферментов, которые катализируют широкий спектр биологических реакций (Fischer & Bacher, 2005). Наиболее изученной системой биосинтеза рибофлавина является бактерия Bacillus subtilis (Perkins & Pero, 2001). В этом организме рибофлавин синтезируется в серии ферментативных реакций, начиная с GTP и рибулозо-5-фосфата.Соответствующие гены сгруппированы в оперон 4,3 т.п.н. ( ribGBAHT ). FMN образуется из рибофлавина с помощью флавокиназы (EC 2.7.1.26), а FAD образуется из FMN с помощью FAD-синтетазы (EC 2.7.7.2). В B. subtilis бифункциональный фермент RibC катализирует образование FMN и FAD (Mack et al. , 1998). Соответствующий ген ribC не связан с опероном rib . Регуляция генов rib и до конца не изучена (Perkins & Pero, 2001).Предполагается, что транскрипт эволюционно консервативной последовательности (140 нуклеотидов) в лидере rib будет укладываться на in vivo в раза в стабильную вторичную структуру, названную элементом RFN (Vitreschak et al. , 2002). Было показано, что FMN напрямую взаимодействует с образующимся RFN и после связывания прекращает транскрипцию генов rib («рибосвитч») (Миронов и др., , 2002; Винклер и др., , 2002). Модель рибопереключателя согласуется с выводом о том, что снижение продукции FMN в штаммах, дефицитных по флавокиназе / FAD-синтетазе (RibC), приводит к нарушению регуляции оперона rib (Mack et al., 1998). Кроме того, модель может объяснить, почему конкретные мутации в RFN ( ³⁹ G ⁴⁰ G ⁴¹ G до ³⁹ A ⁴⁰ A ⁴¹ A или ‘ RFN ^mutAAA ‘ , нумерация согласно Миронову и др. , 2002) приводит к перепроизводству рибофлавина (Kil et al. , 1992). Регулирующая система не может ограничиваться перечисленными выше элементами (Perkins & Pero, 2001). Ген ribR также описан как участвующий в регуляции генов rib .Однако его точная роль остается неясной (Соловьева, и др., , 1999). N-концевая половина RibR (аминокислоты 1–120) имеет большое сходство с флавокиназами. RibR обладает активностью флавокиназы in vitro . Сверхэкспрессия ribR подавляет сверхпродуцирующий рибофлавин фенотип с дефектом ribC . С-концевая половина RibR (аминокислоты 121–230) не обнаруживает сходства последовательностей с каким-либо другим известным белком и вызывает интерес к клеточной функции этого белка.Другие кластеры биосинтетических генов в B. subtilis , как сообщается, регулируются механизмами ослабления, включающими специфические метаболиты, связывающие мРНК-связывающие белки (Switzer et al. , 1999; Hobl & Mack, 2007). Такая роль для RibR предполагалась, и дрожжевую трехгибридную систему (Putz et al. , 1996; SenGupta et al. , 1996) использовали для анализа возможного взаимодействия in vivo RibR с область лидера ( RFN ) транскрипта rib .

Материалы и методы

Условия выращивания, штаммы бактерий и анализ флавинов

Лурия – Бертани (LB) использовали для культивирования Escherichia coli . Минимальную среду Спизизена использовали для роста B. subtilis Marburg 168 ( trpC2 ) (Spizizen, 1958). Штамм с делецией B. subtilis 168 ribR (BFS69) был получен с использованием плазмиды pMutin (Kobayashi et al., 2003) и выращивали в присутствии 0,3 мкг эритромицина на мл ^-1 . Продукцию флавина (рибофлавина, FMN и FAD) штаммами B. subtilis контролировали с помощью флюоресцентной системы считывания микропланшетов: образцы отбирали из супернатантов трех независимых жидких культур (инокулированных с одинаковой OD _{, 600 нм,} ) и непосредственно анализировали. в микротитровальных планшетах (NUNC F96 MicroWell ™). Определения флуоресценции проводили с использованием флуоресцентного ридера для микропланшетов GENios Pro ™ (Tecan).Производство флавина контролировали с использованием полосы пропускания 485, 20 нм, фильтра возбуждения и фильтра излучения, шириной полосы 535, 25 нм.

Процедуры клонирования и другие манипуляции с ДНК

Конструирование плазмиды, трансформация / рост E. coli и секвенирование ДНК проводили в соответствии со стандартными протоколами (Sambrook et al. , 1989). Сайт-направленный мутагенез проводили с использованием набора QuikChange II XL от Stratagene (Ла-Хойя, США). Плазмиды были амплифицированы в E.coli Top 10F ′ (Invitrogen GmbH, Карлсруэ, Германия).

Дрожжевая трехгибридная система

Все использованные конструкции были основаны на плазмидах системы RNA-Protein Hybrid Hunter от Invitrogen. Плазмиды pRh4′-IRE и pYESTrp3-IRP (Invitrogen) служили в качестве положительного контроля. Плазмиду pYESTrp3 использовали для получения слияния B. subtilis RibR (и его вариантов) и N-концевого домена активации VP16 (VP16AD) в трансформантной дрожжевой клетке (таблица 1).Ген ribR из B. subtilis лигировали с pYESTrp3 в виде фрагмента EcoRI / XhoI. Ген ribR был получен с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием геномной ДНК из B. subtilis Marburg 168 (штамм дикого типа) и олигонуклеотидов ribR fw 5′-GCGCGAATTCTGTTGACGATCATTGCCGCCGGT-3 ‘и ribRTC rp 5’-CTGCCCC -3 ′. Соответственно, pYESTrp3 использовали для получения слияния B. subtilis RibC и VP16AD (ribC fw 5′-GCGCGAATTCGGTGAAGACGATACATATTACA-3 ‘и ribC rp 5′-GCGCCTCGAGTTATTTCCGCAAATTGCTGAA-3′).Усеченные слияния RibR и VP16AD (N-концевая часть VP16AD-RibR) были созданы с использованием олигонуклеотидных пар ribR fw (см. Выше) и ribR INT (5’-GCGCCTCGAGTTACCCAATCAGCTCAAAGC-3 ‘). С-концевую часть слияния VP16AD-RibR получали с использованием ribR rp (см. Выше) и ribR ICT (5’-GCGCGAATTCTGAGGTTTGATTCTTGGAGT-3 ‘). Гибридные РНК, подлежащие тестированию, были продуцированы как выше, так и ниже MS2-РНК с использованием плазмид pRH5 ‘и pRh4’: B. subtilis дикого типа rib -ведущая область ( RFN ) была получена с помощью ПЦР с использованием олигонуклеотидных пар rfn wt fw 5′-AGCTTTGTTTAAACATTGTATCTTCGGGGCAGGG-3 ‘и rfn wt rp 5′-TCCCCCCGGGGCATAGCGGCTCATCATCCTTCTCCC-3’.Продукт ПЦР обрабатывали PmeI / XmaI и лигировали с pRH5 ‘, расщепленной PmeI / XmaI, а также с pRh4’, обработанной PmeI / XmaI. Лидер дерегуляции RFN ^mutAAA (Kil et al. , 1992) был получен из полученных двух плазмид путем сайт-направленного мутагенеза с использованием мутагенных праймеров rfn mut fw 5′-AAACATTGTATCTTCGGGGCAAAATGGAAATCCCGACCG-3 rp 5′-CGCCGGTCGGGATTTCCATTTTGCCCCGAAGATACAATGTTT-3 ‘(три замены лидера нуклеотида rib были G> A в подчеркнутых положениях).

Дрожжевые трехгибридные конструкции

Дрожжевые трехгибридные конструкции на основе

Трехгибридный анализ дрожжей

Дрожжевой трехгибридный анализ проводили на штамме Saccharomyces cerevisiae L40- ura3 [ MAT α, ura3-52 , leu2-3112 , his3 Δ 200 , trp1 Δ 1 , ade2 , LYS2 : 🙁 LexA op ) ₄ −HIS3 , ura3 : 🙁 LexA-op ) ₈ −LacZ ] (Invitrogen), несущий pHybLexA / Zeo-MS2 (Zeocin ^R ).Конструкции экспрессии гибрид-РНК и конструкция, экспрессирующая слияние активационного домена VP16AD / RibR или только активационный домен, были совместно введены в клетки S. cerevisiae L40- ura3 , несущие pHybLexA / Zeo-MS2. Трансформанты выращивали на синтетической полной среде (YC) без урацила, триптофана и гистидина и содержащей Zeocin ™ (100 мкг / мл ^-1 ) для селекции маркерных генов URA3 , TRP1 и HIS3 .

Тестирование активации репортерного гена в дрожжевой трехгибридной системе

Растущие колонии были качественно проанализированы на предмет продукта репортерного гена β-галактозидазы (LacZ) с использованием оверлейного анализа с окрашиванием X-gal (Duttweiler, 1996).Для количественной оценки уровня экспрессии lacZ , активность β-галактозидазы измеряли в клетках S. cerevisiae L40- ura3 , несущих pHybLexA / Zeo-MS2, продуцирующих как слияние ADVP16 / RibR, так и гибридные РНК, которые необходимо тестировать. Измерения проводили с клетками, полученными из двух независимых трансформантов. Для каждого трансформанта проводили три независимых анализа. Активности LacZ, приведенные в таблицах 2–4, представляют собой средние значения, рассчитанные на основе полученных данных. Клеточный материал был взят из колонии недавно трансформированного штамма дрожжей и использован в качестве инокулята для 5 мл синтетической полной среды (YC), не содержащей урацила и триптофана и содержащей Zeocin ™ (100 мкг мл ^-1 ).Клетки выращивали в течение ночи при 30 ° C. Жидкие культуры (15 мл) инокулировали до OD _{600 нм} 0,15–0,2, используя ночные культуры, и выращивали при 30 ° C до OD _{600 нм} 0,5–0,8. Анализ β-галактозидазы проводили, как описано ранее (Schneider et al. , 1996).

Активность β-галактозидазы (LacZ) в трансформантах дрожжей

Активность β-галактозидазы (LacZ) в трансформантах дрожжей

Активность β-галактозидазы (LacZ) в трансформантах дрожжей