Что означает SOI? -определения SOI
Вы ищете значения SOI? На следующем изображении вы можете увидеть основные определения SOI. При желании вы также можете загрузить файл изображения для печати или поделиться им со своим другом через Facebook, Twitter, Pinterest, Google и т. Д. Чтобы увидеть все значения SOI, пожалуйста, прокрутите вниз. Полный список определений приведен в таблице ниже в алфавитном порядке.
Основные значения SOI
На следующем изображении представлены наиболее часто используемые значения SOI. Вы можете записать файл изображения в формате PNG для автономного использования или отправить его своим друзьям по электронной почте.Если вы являетесь веб-мастером некоммерческого веб-сайта, пожалуйста, не стесняйтесь публиковать изображение определений SOI на вашем веб-сайте.Все определения SOI
Как упомянуто выше, вы увидите все значения SOI в следующей таблице. Пожалуйста, знайте, что все определения перечислены в алфавитном порядке.
Что означает SOI в тексте
В общем, SOI является аббревиатурой или аббревиатурой, которая определяется простым языком. Эта страница иллюстрирует, как SOI используется в обмена сообщениями и чат-форумах, в дополнение к социальным сетям, таким как VK, Instagram, Whatsapp и Snapchat. Из приведенной выше таблицы, вы можете просмотреть все значения SOI: некоторые из них образовательные термины, другие медицинские термины, и даже компьютерные термины. Если вы знаете другое определение SOI, пожалуйста, свяжитесь с нами. Мы включим его во время следующего обновления нашей базы данных. Пожалуйста, имейте в информации, что некоторые из наших сокращений и их определения создаются нашими посетителями. Поэтому ваше предложение о новых аббревиатур приветствуется! В качестве возврата мы перевели аббревиатуру SOI на испанский, французский, китайский, португальский, русский и т.
д. Далее можно прокрутить вниз и щелкнуть в меню языка, чтобы найти значения SOI на других 42 языках.
Как сейчас оплачивается содержание общего имущества многоквартирного дома?
КРСОИ рассчитывается в соответствии с порядком, установленным Постановлением правительства РФ № 354. Поскольку КРСОИ относится к услуге по содержанию общего имущества, то зависит от площади помещения.
Соответственно, владелец однокомнатной квартиры платит меньше, чем владелец трехкомнатной.
Разъяснение о порядке определения размера расходов электрической энергии, потребляемых при содержании общего имущества в многоквартирном доме, дано в письме Минстроя России от 14.02.2017 N 4275-АЧ/04.
В соответствии с частью 10 статьи 12 Федерального закона N 176-ФЗ при первоначальном включении в плату за содержание жилого помещения расходов на оплату холодной воды, горячей воды, электрической энергии, тепловой энергии, а также отведения сточных вод 
По мнению Минстроя России (исходя из буквального толкования данной нормы), размер расходов на оплату КРСОИ может быть менее размера норматива потребления коммунальных услуг на общедомовые нужды, установленного субъектом Российской Федерации по состоянию на 1 ноября 2016 года.
В частности, подобная ситуация может иметь место, когда расчет размера расходов КРСОИ осуществляется по показаниям коллективного (общедомового) прибора учета.
Соответственно, в том случае, когда многоквартирный дом оснащен коллективным (общедомовым) прибором учета, включение указанных расходов в состав платы за содержание жилого помещения может быть осуществлено в размере ниже норматива потребления коммунальных услуг на общедомовые нужды, исходя из фактического объема потребления коммунальных услуг.
В свою очередь фактический объем потребления коммунальных услуг на общедомовые нужды рассчитывается как разница между показаниями коллективного (общедомового) прибора учета и суммой показаний индивидуальных приборов учета и (или) нормативов потребления коммунальных услуг.
Полученный фактический объем потребления коммунальных услуг на общедомовые нужды распределяется между всеми собственниками помещений в многоквартирном доме пропорционально их доле в праве общей долевой собственности на общее имущество в многоквартирном доме.
Для включения указанных расходов в состав платы за содержание жилого помещения в размере ниже норматива потребления коммунальных услуг на общедомовые нужды принятия решения общего собрания собственников помещений в многоквартирном доме не требуется, поскольку такое включение является первоначальным.
Что на самом деле означают названия популярных брендов?
Название Pepsi происходит от медицинского термина, обозначающего несварение желудка
Фото: Pepsi
Создатель Pepsi Калеб Дэвис Брэдхем изначально хотел стать доктором, но из-за проблем в семье ему пришлось бросить медицинский университет и начать работать фармацевтом.
Его оригинальный напиток представлял собой смесь сахара, воды, карамели, лимонного сока и мускатного ореха.
Изначально он назывался Brad’s Drink («Напиток Брэда»). Брэдхем верил, что его напиток помогал справляться с несварением желудка или диспепсией, поэтому три года спустя переименовал свое изобретение в “Pepsi-Cola”.
Название Google появилось из-за опечатки
Фото: Reuters/Mark Blinch
Это название возникло во время мозгового штурма в Стэндфордском университете. Один из основателей компании Ларри Пейдж и другие выпускники пытались придумать имя для своей поисковой системы.
Одним из вариантов было слово «гуголплекс», которое обозначает одно из самых крупных чисел. Название Google получилось из-за того, что кто-то из студентов написал его с ошибкой. В итоге Пейдж зарегистрировал свою компанию под таким именем.
Компания McDonald’s названа в честь двух братьев, которые управляли закусочной
Фото: Flickr/_skynet
Реймонд Крок, основатель McDonald’s, работал продавцом миксеров для молочных коктейлей.
Однажды он познакомился с братьями Диком и Маком Макдональдами, которым принадлежала закусочная в Сан-Бернардино в Калифорнии.
Братья Макдональды купили несколько мультимиксеров Крока. Того, в свою очередь, так впечатлил ресторан братьев, что он решил стать их агентом и развивать франшизу в США. Через несколько лет Крок приобрел права на название McDonald’s.
Adidas вовсе не расшифровывается как All Day I Dream About Soccer
Фото: Adidas
Бытует мнение, что название бренда Adidas это акроним, образованный из фразы All Day I Dream About Soccer («Весь день я мечтаю о футболе» — прим. ред). Но это не так. Основатель компании Адольф Дасслер начал заниматься производством обуви после того, как он вернулся с Первой мировой войны. Название его компании — это комбинация его прозвища Ади и первых трех букв его фамилии.
Zara образовалось от старого названия компании Zorba
Фото: Reuters/Albert Gea
Изначально основатель Zara Амансио Ортега назвал свою компанию в честь фильма 1964 года «Грек Зорба».
Но в итоге название пришлось поменять.
В 1975 году Ортега собирался открыть свой первый магазин в Ла-Корунье. Так получилось, что он находился в двух кварталах от бара под названием Zorba. Ортега уже сделал буквы для вывески, как вдруг пришел владелец бара и сказал, что два заведения с одним названием могут сбить с толку жителей.
В итоге Ортега решил поменять буквы местами — так и получилось название Zara.
ASOS — это сокращенная фраза AsSeenOnScreen
Фото: Thomson Reuters
В 1999 году этот британский интернет-магазин одежды открылся под названием AsSeenOnScreen («Как на экране» — прим. ред). Его сайт располагался по адресу asseenonscreen.com. В итоге в компании прижилась аббревиатура ASOS, и адрес сайта сократили до asos.com.
IKEA ничего не значит на шведском
Фото: Hollis Johnson
Многие думают, что IKEA — это просто какое-то непонятное шведское слово, но это вовсе не так.
На самом деле название IKEA образовано из инициалов основателя компании Ингвара Кампрада и первых букв названий Ельмтарюд и Агуннарюд — фермы и деревни на юге Швеции, где он вырос.
Кофейни Starbucks названы в честь персонажа книги «Моби Дик»
Фото: Thomson Reuters
Сооснователь Starbucks Гордон Боукер рассказал, что когда он с коллегами выбирал название для бренда, в первую очередь, они просматривали список слов, начинающихся со st. Основателям сети кофеен казалось, что такое сочетание букв обладает каким-то особенным влиянием.
«И тут кто-то достал старую карту рудников в Каскадных горах. На ней был городок шахтеров под названием Старбо, — сказал Боукер. — Как только я увидел это название, я сразу же вспомнил Старбака, первого помощника из романа Германа Мелвилла “Моби Дик”».
Soylent — название порошка из научно-фантастического романа
Фото: Dylan Love
Soylent — порошкообразный заменитель пищи, из которого изготавливают популярный в Кремниевой долине напиток.
Впервые это название было использовано в научно-фантастическом романе Гарри Гаррисона «Подвиньтесь! Подвиньтесь!», где рассказывается о том, как из-за перенаселения в мире закончились природные ресурсы. В книге сойлентом называли смесь из сои и чечевицы.
Название Gap намекает на пропасть между поколениями
Фото: Thomson Reuters
Компания Nike названа в честь греческой богини…
Фото: Thomson Reuters
Ника — древнегреческая богиня победы. Именно ее имя носит этот популярный спортивный бренд. Название придумал первый сотрудник компании Джефф Джонсон.
…а Amazon — в честь крупнейшей в мире реки
Фото: Thomson Reuters
Когда Джефф Безос запускал свою компанию в 1995 году, он хотел дать ей имя Cadabra, которое звучало как часть заклинания.
Но первый юрист Amazon Тодд Тарберт заявил, что такое название слишком похоже на слово cadaver, которое переводится с английского как «труп».
Безосу также нравилось название Relentless. Кстати, если зайти на сайт Relentless.com, вас перенаправит на главную страницу Amazon.
Наконец, Безос выбрал название Amazon — ему понравилась идея назвать компанию в честь крупнейшей реки мира. Именно ее можно заметить на оригинальном логотипе Amazon.
Первый логотип Amazon
Источник.
Материалы по теме:
Квиз: правильно ли вы произносите названия известных брендов?
Как назвать единорога
20 сервисов для генерации идей и нейминга
Cамые популярные домены для стартапов
Перечень аббревиатур{ Сокращения приведены на английском языке; дана их расшифровка на русском языке, при этом аббревиатуры на русском языке приводятся частично, так как для некоторых терминов не существует принятых сокращений.
Все министерства, органы власти и т. п. без указания страны относятся к АВМ — противоракета
ACAS — Служба консультирования, примирения и арбитража
ANC — АНК, Африканский национальный конгресс
AUEW — Объединенный профсоюз машиностроителей
BL – BL, «Бритиш Лейланд» (впоследствии «Роувер Груп»)
BMD — ПРО, противоракетная оборона
BR – BR, «Бритиш Рейл»
BSC – BSC, корпорация «Бритиш стил»
САР — единая сельскохозяйственная политика
CBI — Конфедерация британской промышленности
CEGB — Центральное энергетическое управление
CFCs — ХФУ, хлорфторуглероды
CFE — ОВСЕ, обычные вооруженные силы в Европе
CHOGM — Совещание глав правительств стран содружества
CND — организация «Движение за ядерное разоружение»
CPRS — Центральный секретариат по выработке политики
CPS — центр политических исследований
CSCE — Совещание по безопасности и сотрудничеству в Европе
DES — министерство образования и науки
DHA — районный отдел здравоохранения
DHSS — министерство здравоохранения и социального обеспечения (разделено в 1988 году)
DoE — министерство по вопросам окружающей среды
DTI — министерство торговли и промышленности
DUP — Демократическая юнионистская партия
Е — Комитет по вопросам экономики Кабинета министров
EBRD — ЕБРР, Европейский банк реконструкции и развития
ЕС — ЕС, Европейское сообщество
ЕСJ — Европейский суд
ECST — Европейская конвенция о пресечении терроризма
Ecu — ЭКЮ, европейская валютная единица
EFL — предел внешнего финансирования
EFTA — ЕАСТ, Европейская ассоциация свободной торговли
EMS — ЕВС, Европейская валютная система
EMU — Экономический и финансовый союз
EPG — Группа видных деятелей (направленных в Южную Африку)
ERM — механизм валютных курсов (действующий в ЕВС)
FCO — министерство иностранных дел и по делам содружества
FSBR — финансовая ведомость и отчет об исполнении бюджета («красная книга»)
G7 — страны «Большой семерки» (Группа семи)
GATT — ГАТТ, Генеральное соглашение по тарифам и торговле
GDP — ВВП, валовой внутренний продукт
GLC — Совет Большого Лондона
GM – GM, «Дженерал моторс»
GM school — школа на государственном обеспечении
GNP — ВНП, валовой национальный продукт
Н — Комитет по вопросам внутренних дел кабинета министров
HAT — трест жилищного строительства
HMI — Инспекция ее величества (в сфере школьного образования)
IDU — Международный демократический союз
IEA — Институт экономических проблем
IGC — межправительственная конференция
ILEA — Управление народного образования центрального Лондона
IMF — МВФ, Международный валютный фонд
INF — ЯССД, ядерные средства средней дальности
INLA — ИНОА, Ирландская национальная освободительная армия
IRA — ИРА, Ирландская республиканская армия
ISTC — Конфедерация профсоюзов черной металлургии
LEA — местные органы народного образования
MCAs — суммы валютной компенсации
MEZ — морская запретная зона
MIRVs — РГЧИН, разделяющаяся головная часть с боеголовками индивидуального наведения
MLR — минимальная ссудная ставка
MNF — многонациональные силы
MoD — министерство обороны
MSC — комиссия по трудоустройству
MTFS — среднесрочная финансовая стратегия
МО — МО, денежная база в Великобритании
?МЗ — фунт стерлингов МЗ, агрегат (показатель) денежной массы в обращении
NACODS — Национальная ассоциация шахтных бригадиров, депутатов и взрывников
NADs — Национальные директора по вооружениям
NATO — НАТО, Организация Североатлантического договора
NCB — Национальное управление угольной промышленности
(впоследствии «Бритиш коул»)
NDLS — Национальный трудовой кодекс портов
NEB — Национальное управление по предпринимательству
NEDC — Совет национального экономического развития («Недди»)
NGA — профсоюз типографских рабочих
NHS — государственная служба здравоохранения
N10 — министерство по делам Северной Ирландии
NUM — Национальный союз шахтеров
OAS — ОАГ, Организация американских государств
OD — Комитет кабинета по иностранным делам и обороне
OD(SA) – подкомитет OD, возглавлявший военные действия во время Фолклендской войны
OECS — ОВКГ, Организация восточнокарибских государств
OPEC — ОПЕК, Организация стран – экспортеров нефти
OUP — Официальная юнионистская партия (партия ольстерских юнионистов)
PLO — ООП, Организация освобождения Палестины
PPS — парламентский секретарь премьер-министра
PSBR — потребность государственного сектора в заемных средствах
PSDR — выплата долга государственного сектора
RPI — ИРЦ, индекс розничных цен
RUC — королевские констебли Ольстера
SALT — ОСВ-ИИ, Договор об ограничении стратегических наступательных вооружений
SAS — Специальный военно-воздушный полк
SDLP — СДЛП, социал-демократическая лейбористская партия
SDP — СДП, социал-демократическая партия
SDI — СОИ, Стратегическая оборонная инициатива
SLCM — крылатая ракета морского базирования
SNF — ЯСМД, ядерные средства меньшей дальности
SSA — стандартное исчисление затрат
START — СНВ, Договоры о сокращении и ограничении стратегических наступательных вооружений
TASM — тактическая ракета класса «воздух – земля»
TEZ — ОЗП, общая запретная зона
TGWU — Союз транспортных и неквалифицированных рабочих
TUC — БКТ, Британский конгресс тред-юнионов
UDR — полк обороны Ольстера
UNSCR — резолюция Совета Безопасности Организации Объединенных Наций
VAT — НДС, налог на добавленную стоимость
WEU — ЗЕС, Западноевропейский союз
Аббревиатуры, используемые в рецептах — Dimpled Kitchen
Если вы здесь впервые, вы можете подписаться на мою RSS-ленту, обновления по электронной почте или на любую из моих социальных сетей!
Спасибо за визит!
Приготовление может быть сложным.
Все различные аббревиатуры могут заставить вас почувствовать, что это другой язык или взгляд на военную сводку.
Расшифровка различных кулинарных аббревиатур и соответствующих им единиц измерения поможет вам убедиться, что ваше блюдо получается именно таким, как вы его представляете.Часто в разных книгах используются разные сокращения, что может вызвать путаницу при составлении блюда.
| Аббревиатура | Измерение |
| шт., шт. | Сумма |
| прибл., прибл. | Приблизительно |
| бч, бч., бн, бн. | Связка |
| блк, блк. | Черный |
| БП, Б.P | Разрыхлитель |
| btl, btl. | Флакон |
| бу, бу., куст, куст. | Бушель |
| К, К., к, к. | Чашка |
| ц/л | Сантилитр |
| Сп, Сп. | Банка |
ctn, ctn. | Картон |
| у.е., у.е. | Кубический |
| da/l, di/l | Децилитр |
| db, d.b | Двойной бройлер |
| град, град. | Градусы |
| ДФ | Безмолочные |
| доза, доза. | Дюжина |
| дп, дп. | Капля |
| дс, дс. | Тире |
| шт., шт. | Каждый |
| EF | Без яиц |
| окр., окр. | Конверт |
| фг, ф.г | Несколько зерен |
| фл, фл. | Жидкость |
| жидких унций, жидких унция | Унция жидкости |
| галлон | галлон |
| г, г. гм, гм., гр, гр. | Грамм |
| Грамм, гм. | Грамм |
| Гал, гал., гал, гал. | Галлон |
Галлоны, Галлоны, Галлоны, Галлоны. | Галлоны |
| GF | Без глютена |
| г/л | Гектолитр |
| Час | |
| к, к., кг, кг. | Килограмм |
| кг, кг. | Килограммы |
| К/л | Килолитры |
| Л, л, л, л. | Литр |
| lb, # | Фунт |
| lbs | Фунт |
| ge, lge, lg, lg. | Большой |
| жидк., жидк. | Жидкость |
| мед, мед., мкр, мкр. | Среда |
| мг, мг. | Миллиграмм |
| мл, мл, мл., м/л | Миллилитр |
| мин, мин. | Минута |
| мод, мод. | Умеренная |
| Доп, Доп, Доп, Доп. | Дополнительно |
| Унц., унц., унц. | Унция |
унции, унции. | Унции |
| уп, уп. | Пек |
| уп, уп. | Упаковка |
| шт., шт. | Пакет |
| шт., шт. | Зажим |
| точка, точка. | Пинта |
| кварта, кварта. | Кварта |
| кварта, кварта. | Кварты |
| сек, сек. | Второй |
| см, см. | Маленький |
| SoF | Без сои |
| Уп. | Спек |
| кв, кв. | Квадрат |
| СуФ | Без сахара |
| Т, Т, Тб, Тб, Тбл, Тбл, Тблсп, Тблпс. ., стол, стол. | Столовая ложка |
| т, т, т, т. ч. л., ч. л. | Чайная ложка |
| овощи, овощи. | Овощи |
| VG | Вегетарианские |
| VN | Веганские |
vol, vol. | Объем |
| WF | Без пшеницы |
«1 стакан просеянной муки» — это не то же самое, что «1 стакан просеянной муки.«При просеивании вы меняете объем ингредиентов. «1 чашка просеянной муки» означает просеивание муки после ее измерения. «1 чашка просеянной муки» означает добавление одной чашки муки, которая была измерена из уже просеянной муки. То же самое верно и для измерения нарезанных ингредиентов (1 чашка орехов, измельченные означает измельчение орехов после измерения).
При взвешивании ингредиентов на водной основе (на водной основе, т. Вес сухих ингредиентов непостоянен из-за объема воздуха в ингредиентах.
PS: Если вы нашли этот пост полезным, поддержите мою работу над этим сайтом. Это так просто — и ничего вам не стоит: в следующий раз, когда вы захотите что-то купить на Amazon, просто перейдите на сайт Amazon по одной из моих ссылок или рекламных баннеров. Что бы вы ни купили, я получу небольшую комиссию с вашей покупки, даже если это не тот товар, который я рекламирую.
Опять же, это ничего не добавляет к вашим затратам. Так что отправляйтесь на Amazon через одну из объявлений или партнерских ссылок здесь (или просто нажмите здесь) и начните делать покупки! Большое спасибо за ваше внимание.
Попробуйте и эти!
Как заказать кофе в Австралии
поделиться этой статьей
После приземления в Мельбурне мне потребовалось три дня, чтобы заказать кофе. Мой обычный стиль употребления кофеина очень американский: кофеин средней обжарки, черный и, если возможно, прямо в вены. В городе, известном своей проницательной культурой кафе, попросить опытного бариста объяснить, что такое флэт уайт, было более унизительно, чем поддаться смене часовых поясов и задремать посреди ресторана, бара или беседы.
На четвертый день я встретился со старыми австралийскими друзьями на бранче в Ричмонде, восточном пригороде, изобилующем ресторанами, украшенными суккулентами, и модными кафе. Пока мы рассаживались за наш столик, взволнованный официант попросил заказать кофе.
Дерьмо. Я возился с меню и пытался расшифровать такие термины, как «длинный черный», «короткий черный» и просто «белый», в то время как остальная часть стола небрежно спрашивала об очень модных узких кепках.
Слишком рано подошла моя очередь. «Э-э… я не знаю, что все это значит.Поражение, признал.
«Как насчет флэт уайт?» — быстро предложил один из моих обедающих товарищей. «Это австралийская классика». Я кивнул, он кивнул, официант кивнул, и все. Мой первый опыт заказа кофе, настолько неловкий, насколько я себе представлял.
По крайней мере, у меня так было. Мои спутники поспешили успокоить. Они сказали, что капельный кофе, который течет из изолированных графинов так же свободно, как вода в большинстве американских ресторанов, редко можно найти в Поднебесной. Вместо этого кофе в Австралии в основном готовится на основе эспрессо и делается на заказ .И хотя независимые кофейни, как правило, доминируют, даже в меню местных сетей основное внимание уделяется эспрессо и предлагается возможность пить из настоящей кружки.
Когда я потягивал сливочный кофе за 4,50 доллара, жар отливал от моих щек, и я начал понимать, что разница была не только в цене и названии, но и в культуре. Мы заказали еще один раунд, затем еще один и провели несколько часов в чате, потягивая напитки и ковыряясь в завтраках, украшенных авокадо.
Спустя больше месяца я, наконец, обрел уверенность и разобрался со своим заказом (узкая кепка, дополнительная порция).Преодоление смены часовых поясов помогло (немного), но также помогло стоять в очереди в шумных кафе и просто слушать. Тем не менее, вот несколько вещей, которые я хотел бы знать о заказе кофе в Австралии до того первого неуклюже заказанного флэт уайт.
Общие советы по заказу кофе в Австралии
Не проси кофе. Начните с того, что укажите, предназначен ли напиток на вынос, затем укажите его размер и стиль. Ключевым моментом является специфичность: красота австралийских эспрессо-напитков заключается не только в их тщательном приготовлении, но и в их адаптируемости.
Местные жители не боятся просить об индивидуальной настройке: крепкая или слабая, ложка пены, подслащенная и заправленная молоком — все это общие запросы.
Популярны альтернативные виды молока, и в большинстве кафе есть соевое или миндальное молоко для тех, кто не пьет молочные продукты. Заказывая что-то «тощее», как и в большинстве мест, вы получаете обезжиренное молоко вместо жирного.
После завершения заказа приготовьтесь пообщаться несколько минут. Бариста должны отмерять и наливать эспрессо, пар и вспененное молоко, а также создавать фирменные завихрения для вас, а также для полдюжины или около того других нетерпеливых кофеманов.Не волнуйтесь; хороший плоский белый, кепка или длинный черный стоят ожидания и чеканки.
Белый матовый
Хотя происхождение флэт уайта может быть источником некоторой международной напряженности (и австралийцы, и новозеландцы претендуют на его изобретение), нет сомнений в его популярности. Стандартный флэт уайт включает в себя одну порцию эспрессо, щедрую порцию шелковистого вспененного молока и тонкий слой микропены, который подается в керамической кружке.
Длинный черный
Если вы ищете американо, попросите длинный черный.Эта двойная порция, налитая в горячую воду, почти так же близка к капельному кофе, как и получается, если только вы не окажетесь в кафе, которое специализируется на разливном кофе.
Короткий черный
Это просто: одна порция эспрессо.
Короткое макиато
Короткий маккиато — это универсальная порция эспрессо с каплей молочной пены — маккиато в переводе с итальянского означает «пятно» или «пятно».
Длинный макиато
Просьба о длинном маккиато — это немного сложнее.Некоторые бариста считают, что это означает двойной шот с пеной, в то время как другие добавляют немного горячей воды, делая напиток более похожим на длинный черный. Чаще всего спрашивают клиентов об их предпочтениях.
Капучино
Это просто. Как и стандартный колпачок, для этого напитка требуется одна порция эспрессо, вспененное молоко и плотный слой пены. Австралийские кафе присыпают свои капучино порошком какао, хотя многие заведения, специализирующиеся на обжарке, считают, что это отвлекает от естественного аромата зерен.
Ристретто
Ристретто — это порция, остановленная через 15 секунд после начала приготовления, а не через 30 секунд, как обычно для стандартного эспрессо. Обычно его подают вдвое из-за меньшего содержания жидкости и более гладкого, менее кислого послевкусия, а также с меньшим содержанием кофеина.
Магия
Здесь ристретто становится австралийским. Изобретенное в Мельбурне (хотя сиднейцы утверждают, что это их собственное) волшебство — это вспененное молоко, налитое на двойное ристретто, которое подается в чашке на 6 унций.Как правило, с этим термином знакомы только мельбурнские бариста.
>>Далее: Как правильно заказать кофе в Европе (и получить то, что вы на самом деле хотите)
Условия Starbucks, которые вы должны знать, чтобы заказывать как профессионал
Получите инсайдерское приложение
Персонализированная лента, режим сводки и отсутствие рекламы.
- Некоторые популярные условия заказа, коды чашек и варианты напитков в Starbucks могут быть сложными для понимания, поэтому я использовал свои знания в качестве бывшего бариста сети, чтобы объяснить их.
- Эспрессо ристретто получается крепким и гладким, но длинные эспрессо слабее из-за того, как они завариваются.
- Буква «B» на вашей чашке означает половину и половину, а «Lte» означает свет.
- Вы можете заказать любой напиток на основе эспрессо «пол-кофе», если хотите уменьшить в нем количество кофеина.
- Посетите домашнюю страницу Insider, чтобы узнать больше.
До того, как я работал баристой в Starbucks, я был совершенно незнаком с модными заказами и персонализацией напитков.
Но «венти перевернутый капучино половинка кофе бреве» на самом деле не так сложен, как кажется, и при правильном использовании некоторые из этих терминов и ключевых слов могут помочь вам заказать следующий напиток, как профессионалу.
Вот значения общих жаргонов напитков и кофе, которые вы можете услышать в Starbucks.
Включения встречаются во фруктовых освежающих напитках
Этот термин не относится к кофе, предлагаемому в Starbucks, — он относится к фруктовым освежающим напиткам. Включения относятся к шарикам клубники, ежевики или ягод дракона, которые входят в состав этих напитков со льдом
.Если вы забыли, какой сорт фруктов содержится в освежающем напитке, вы можете просто попросить больше, меньше или вообще не добавлять, и ваш бариста поймет.
Включения в розовом напитке – клубника.
Дженн А./Визг
Если вы попросите перевернутый
напиток , то шаги в вашем заказе будут обратными.Этот термин особенно популярен в знаменитом карамельном макиато, который начинается с ванильного сиропа и заканчивается карамелью.
Если напиток заказан в перевернутом виде, это означает, что рецепт для него перевернут. Таким образом, для перевернутого карамельного макиато шаги по его приготовлению будут начинаться с карамели и заканчиваться ванильным сиропом.
Теоретически, вы можете заказать любой напиток в перевернутом виде, хотя это не сильно изменит ваш фраппучино, разве что взбитые сливки на дне чашки.
Если вы заказываете напиток «
тощий », бариста будет использовать сироп без сахара и обезжиренное молоко.
, соответственно.Это популярный прием для уменьшения количества калорий в заказе. Это может быть полностью применимо только к напиткам с сиропами, не содержащими сахара, такими как ванильный, карамельный и мокко. Другие напитки без альтернативных вариантов сиропа будут просто сделаны из обезжиренного молока.
Надпись «
Lte » на вашей чашке может относиться ко льду, сиропу и другим добавкам.«Lte», написанная на вашей чашке Starbucks, относится к слову «легкий». Это означает, что после него написано немного меньше, чем обычно.
Например, «Lte ice» означает, что вы попросили добавить в напиток меньше льда.
Этот термин может относиться к любому дополнению к напитку, такому как лед, сироп, пена или взбитые сливки.
Вы можете заказать напиток Starbucks со льдом, легкой пеной или взбитыми сливками.
Чира Джанджан/Shutterstock
Во многих кофейнях подают
маккиато , а в Starbucks его можно сочетать с латтеПопулярный кофейный напиток, маккиато состоит из порций эспрессо, залитых небольшим количеством вспененного молока.
Одним из самых популярных макиато в Starbucks является карамельный, но вы можете превратить простой латте в макиато, просто заказав «латте макиато».»
При приготовлении латте макиато эспрессо находится ближе к верхушке напитка, что может придать напитку более насыщенный вкус.
Ристретто и длинная порция – два разных типа порций эспрессо
Как и во многих кофейнях, в Starbucks есть несколько видов порций эспрессо.
Для приготовления ристретто, что в переводе с итальянского означает «ограниченный доступ», при приготовлении эспрессо используется меньше горячей воды, чтобы получить более концентрированный вкус.
Это приводит к более сильному и плавному удару.
При приготовлении эспрессо с большой дозой используется больше горячей воды, чем обычно. В результате получается эспрессо с более мягким вкусом.
Латте со льдом можно заказать с различными порциями эспрессо.Чжан Пэн / LightRocket через Getty ImagesВ Starbucks вы можете заказать
аффогато ФраппучиноТрадиционно аффогато — это итальянское лакомство, состоящее из порции горячего эспрессо, которую подают с холодным джелато или мороженым.
В Starbucks вы можете заказать фраппучино в стиле аффогато, что означает, что вы получите порцию эспрессо, налитую на ваш Frapp.
Это стоит немного больше и может быть сделано практически с любым фраппучино, но уточните у своего бариста, так как эта возможность персонализации может быть доступна не во всех заведениях.
«красные глаза» — это чашка кофе с одной порцией эспрессо, а «красные глаза» — чашка кофе с двумя
«красные глаза» — это термин, используемый для обозначения порции эспрессо в чашке кофе. Это популярный выбор среди утренней толпы, которая хочет получить дополнительную порцию кофеина, чтобы получить заряд бодрости в течение дня.
Если добавить в кофе еще одну порцию эспрессо, будет черный глаз.
Хотя в нашей системе ваш напиток не будет помечен как «красный глаз» или «черный глаз», большинство из нас, бариста, поймут, что вы имеете в виду, если вы используете этот жаргон для заказа.
Напитки, приготовленные из эспрессо, можно заказать
Half-Caf Это может показаться немного очевидным, но это часто используемый в Starbucks термин, который уменьшает количество кофеина в вашем заказе.
Это полезно, если вы хотите уменьшить потребление кофеина, но при этом сохранить вкус своего любимого напитка с эспрессо.
Например, гранде латте обычно содержит две порции эспрессо. Если вы закажете полукофе, ваш бариста заменит одну из двух порций эспрессо смесью без кофеина.
Любой напиток с эспрессо можно заказать наполовину — даже если это ледяной эспрессо с тремя порциями, ваш бариста может убедиться, что он приготовлен только с половиной обычного эспрессо.
Вы можете заказать пол-кофе латте, если хотите сократить потребление кофеина, не слишком меняя порядок напитков. Джерианна Г.
/Визг
Doppio — еще один способ заказать двойную порцию эспрессо
Этот причудливо звучащий термин довольно распространен во многих кофейнях. Doppio в переводе с итальянского означает «двойной», и это всего лишь двойная порция эспрессо. Но это не так весело говорить, не так ли?
Если вы замените молоко половинным и половинным, вы можете увидеть букву
‘B’ , написанную на вашей чашкеВ молочном квадрате на вашей чашке вы можете заметить букву «B» для breve, что означает половину и половина.
Если вы заказываете горячий эспрессо или кофейный напиток с половинками, бариста использует его и пропарит вместо молока и напишет на вашей чашке букву «В».
Если вы любите сладкий кофеин, закажите эспрессо
‘con Panna’ Эспрессо con Panna — это порция эспрессо со взбитыми сливками сверху.
Сливочная, сладкая взбитая начинка прекрасно нейтрализует сильный резкий вкус эспрессо.
Подробнее:
Я был бариста Starbucks в течение 2 лет, вот 12 самых важных вещей, которые я узнал
Лучшие и худшие завтраки, которые вы можете получить в Starbucks, рейтинг
Бывшие сотрудники рассказывают о лучших и худших вещах, которые можно получить в Starbucks
Внутри самого большого в мире Starbucks, волшебного пятиэтажного кофейного тематического парка
Я попробовал черный кофе со льдом из 4 сетей кофеен, и я любят покупать снова
Сотрудники и завсегдатаи Starbucks рассказывают о своих 40 любимых блюдах и напитках из сети
Расшифровка функциональной метаболомики с помощью докозагексаеноилэтаноламида (DHEA) идентифицирует новые биоактивные сигналы
Abstract
Нейровоспаление и черепно-мозговая травма включают активацию воспалительных клеток и выработку местных провоспалительных медиаторов, которые могут усиливать повреждение тканей.
Используя липидомику на основе LC-UV-MS-MS в тандеме с функциональным скринингом на уровне отдельных клеток в микрофлюидных камерах, мы идентифицировали ряд новых биоактивных продуктов, производных оксигенированного докозагексаноилэтаноламида (DHEA), которые регулируют подвижность лейкоцитов. К ним относятся 10,17-дигидроксидокозагексаеноилэтаноламид (10,17-диГДГЭА) и 15-гидрокси-16(17)-эпоксидокозапентаеноилэтаноламид (15-HEDPEA), каждый из которых является агонистом рекомбинантных рецепторов CB2 с EC 50 . 3,9 × 10 −10 и 1.0 × 10 −10 м. В цельной крови человека 10,17-диГДГЭА и 15-ЭДФЭА в таких низких концентрациях, как 10 мкМ каждый, предотвращали образование агрегатов тромбоцитов-лейкоцитов, включающих либо тромбоциты-моноциты, либо тромбоциты-полиморфноядерные лейкоциты. In vivo , 15-HEDPEA оказывает органопротекторное действие при реперфузионном повреждении второго органа у мышей. Вместе эти результаты показывают, что в результате окислительного метаболизма ДГЭА образуются новые мощные молекулы с противовоспалительными и органозащитными свойствами.
Ключевые слова: Хемотаксис, жирные кислоты, воспаление, лейкоциты, нейтрофилы, каннабиноиды, новые биологически активные продукты, повреждение тканей ).В обоих случаях лечение докозагексаеновой кислотой (ДГК) 2 уменьшает воспаление и местное повреждение тканей. Например, DHA снижает повреждение от ударно-акселерационной травмы и снижает уровень предшественника β-амилоида, маркера аксонального повреждения in vivo , имеющего значение при черепно-мозговой травме (2). Кроме того, DHA уменьшает риск ишемического инсульта у крыс за счет выработки нейропротектина D1, который действует на лейкоциты и уменьшает лейкоцитарную инфильтрацию и опосредованное лейкоцитами повреждение тканей, а также регулирует NF-κB (3).Нейропротектин D1 стимулирует дифференцировку нейрональных стволовых клеток (4) и обладает мощным противовоспалительным и проразрешающим действием в нескольких моделях заболеваний in vivo (5–7). Резолвины серии D биосинтезируются из ДГК в тканях головного мозга и растворяют воспалительные экссудаты (7, 8).
Резолвин D1 и резолвин D2 проявляют мощное стереоселективное действие, которое является противовоспалительным и проразрешающим, уменьшают болевые сигналы и действуют в диапазоне от пико до наномолярного in vivo , в диапазоне доз, где сама ДГК не проявляет заметного действия (9–11). ).Следовательно, метаболом и метаболическая судьба ДГК представляет интерес для разрешения боли, воспаления и повреждения тканей.
Другая метаболическая судьба ДГК в головном мозге заключается в превращении в докозагексаеноилэтаноламид (ДГЭА), который, как считается, вырабатывается тем же путем, что и N -ацил-арахидоноил-этаноламид (АЭА, анандамид) (12). DHEA напрямую связан с потреблением DHA с пищей и обогащен в тканях головного мозга на уровнях, сравнимых с AEA (13). AEA — это эндоканнабиноид, который регулирует нейрофункции и иммунную систему через каннабиноидные (CB) 1 и 2 рецепторы (14–17).Поскольку AEA подвергается окислительному метаболизму с образованием биоактивных молекул (16, 18), мы рассмотрели вопрос о том, можно ли частично регулировать благотворное действие лечения DHA, например защиту от повреждения головного мозга (2), путем преобразования DHEA в биологически активные продукты.
Здесь мы сообщаем о метаболоме ДГЭА с идентификацией новых сильнодействующих биоактивных молекул, которые защищают органы in vivo . Эти новые биологически активные продукты из DHEA были идентифицированы с использованием липидомики на основе LC-MS-MS в сочетании с функциональным скринингом отдельных клеток в недавно спроектированных микрофлюидных камерах и системах in vivo .Эти новые биологически активные продукты из DHEA могут лежать в основе некоторых полезных эффектов введения DHA.
РЕЗУЛЬТАТЫ
Функциональная метаболомика
ЖХ-УФ-МС-МС Идентификация 17-ГДГЭА в головном мозге
Для исследования потенциального эндогенного образования биоактивных продуктов, полученных из ДГЭА, мозг мыши был собран и подвергнут твердофазной экстракции (19 ), и полученные фракции метилформиата были взяты для метаболомики на основе ЖХ-УФ-МС-МС. Фрагментация тандемной массы и онлайновый УФ-спектр с характеристикой λ max при 237 нм согласуются с предложенной структурой, как показано в B , , вставка .
Из-за отсутствия подходящих функциональных групп для прямой эффективной ионизации и анализа 17-гидрокси-4Z,7Z,10Z,13Z,15E,19Z-докозагексаеноилэтаноламида (17-ГДГЭА) его ацетатный аддукт m / z 446 = [M+CH 3 COOH-H] был выбран для анализа. Главные тандемные массы ионов были распределены следующим образом: m / z 386 = [M-H], 368 = [M-H-H 2 O], 281 = [299-H 2 O]. m / z 288 соответствует фрагментации в позиции 17 (см. нумерацию) ( B ).Из-за ограниченного количества эндогенного 17-ГДГЭА, продуцируемого в ткани головного мозга, дальнейшие анализы и ферментативный препарат in vitro проводили путем инкубации ДГЭА с 15-LOX с последующим восстановлением NaBH 4 (см. «Экспериментальные процедуры»). Эндогенный 17-ГДГЭА и ферментативно полученное соединение in vitro давали по существу одинаковые времена удерживания LC и тандемные массовые фрагментации с использованием LC-MS-MS (см.
дополнительную рис. 1). Чтобы оценить их выработку тканями человека и мыши, DHEA также инкубировали с изолированным человеческим PMN или целым мозгом мыши, поскольку DHEA обогащен в этой ткани.Целевая липидомика на основе ЖХ-МС-МС показала производство новой серии оксигенированных ДГЭА (16).
Идентификация гидроксидокозагексаеноилэтаноламида и функциональный скрининг метаболома головного мозга ДГЭА. A , онлайн УФ. B , тандемный масс-спектр 17-ГДГЭА. Врезка показывает отнесение фрагментов для масс-спектра HDHEA. а.е.м. , атомные единицы массы. C , репрезентативное среднее значение скорости направленной миграции PMN в градиенте IL-8 0–10 нм (мкм/мин) до и после введения смесей метаболитов в камеру.Смеси выделяли из гомогената мозга мыши, инкубированного с 5 мкг ДГЭА. Планки погрешностей представляют расстояние миграции ± стандартное отклонение. для среднего значения 26 одиночных PMN ( n = 3 отдельных донора).
*, p <0,01 для IL-8 по сравнению с экстрактами мозга .
Таблица 1 ВЭЖХ-выделенных метаболитов ДГЭА, полученных из мозга мышей, проводили с использованием микрожидкостной камеры (
С ).После введения ИЛ-8 (градиент 0–10 нм) в основной канал микрожидкостного устройства связанные с Р-селектином лейкоциты быстро мигрировали по хемотаксическому градиенту ИЛ-8 со средней скоростью 2,3 мкм/мин. Через 15 мин смесь метаболитов вводили в основной микрожидкостный канал, поддерживая градиент IL-8 (0–10 нм) ( C , , левая панель ). Хемотаксис ПЯЛ человека резко снижался ( p <0,01) при добавлении смеси метаболитов головного мозга, в результате чего средняя скорость хемотаксиса ПЯЛ человека снизилась с 2.3 до ~0,7 мкм/мин ( C , , средняя панель ). Это снижение скорости хемотаксиса сохранялось даже после того, как градиент был переключен обратно на IL-8. Эти результаты показали, что метаболиты головного мозга содержали биологически активные компоненты, которые останавливали хемотаксис ПМЯЛ.
ЖХ-УФ-МС-МС и ГХ-МС на основе Метаболомика ДГЭА
Результаты этого скрининга показали, что среди смеси метаболитов ДГЭА присутствует по крайней мере один биологически активный продукт; таким образом, мы исследовали метаболические судьбы DHEA и 17-HpDHEA/17-HDHEA, идентифицированные в мозге мыши ( B ), используя липидомику на основе LC/UV/MS/MS.Как и в случае с 17-ГДГЭА, ацетатные аддукты потенциальных метаболитов, производных ДГЭА [M+CH 3 COOH-H], были предназначены для тандемного масс-анализа (). Эти результаты продемонстрировали присутствие и производство новых продуктов в метаболоме ДГЭА.
Инкубация изолированных PMN человека с DHEA или 17-HpDHEA привела к образованию 17-HDHEA, 4,17-diHDHEA, 10,17-diHDHEA и 15-HEDPEA. Человеческий гемоглобин, который может высвобождаться при повреждении тканей (25), инкубировали с 17-HpDHEA и давали 13-HEDPEA и 15-HEDPEA в качестве заметных продуктов, а также 17-HDHEA (17).Гомогенаты головного мозга мыши с DHEA также продуцировали 17-HDHEA и 4,17-diHDHEA в качестве основных продуктов с меньшими количествами 7,17-diHDHEA, 10,17-diHDHEA и 15-HEDPEA.
Онлайн-УФ и тандемные масс-спектры для 4,17-диГДГЭА показаны на , A и B . Исходный ион аддукта, исходный ион аналита и ионы, образующиеся в результате нейтральной потери, составляют m / z 462 = [M+CH 3 COOH-H], 402 = [MH], 384 = [MHH 2 O] и 366 = [MH-2H 2 O], которые являются общими сигнатурными ионами для всех дигидроксисодержащих продуктов DHEA.Ионы m / z 333, 315 = [333-H 2 O], 304 и 286 = [304-H 2 O] были отнесены в качестве диагностических ионов для фрагментации в положении 17. Фрагментации в Позиция 4 может привести к m / z 144, 257 и 239 = [257-H 2 O]. Его УФ-спектр показал характерное максимальное поглощение при 238 нм, что согласуется с присутствием в этом соединении двух отдельных структур сопряженного диена. Как показано в , C и D , диагностические ионы m / z 304, 286 = [304-H 2 O]; 184 и 156 соответствуют фрагментациям в положениях 7 и 17 7,17-диГДГЭА соответственно (см.
нумерацию).УФ-спектр соединения показал максимальное поглощение, λ max , при 246 нм (26), что согласуется с присутствием двух диеновых структур, разделенных метиленовой группой. Для 10,17-диГДГЭА m / z 333, 315 = [333-H 2 O], 304, 286 = [304-H 2 O], и 196 произошло от фрагментации в позициях 10. и 17, как показано в , E и F . Наличие сопряженной триеновой структуры в 10,17-диГДГЭА подтверждается характеристическим УФ-спектром с λ max при 270 нм.Тандемный масс-спектр 13-HEDPEA показан на дополнительном рис. 2 A с характерными ионами фрагментации m / z 320, 304, 286 = [304-H 2 O] и 236. ГХ/МС также использовали для дополнительного структурного анализа с 13-HEDPEA и 15-HEDPEA, который подтвердил исходные тандемные отнесения MS, показанные на дополнительной фиг. 2, C и D . Значение C для 13-HEDPEA было определено как 32,1 ± 0,2 (дополнительная рис.
2 E ), а для 15-HEDPEA оно было определено как 33.7 ± 0,2 (дополнительный рис. 2 F ).
Метаболом ДГЭА с помощью липидомики на основе ЖХ-УФ-МС-МС. AF , онлайн УФ, отнесение фрагментов показано на вставке , и тандемные масс-спектры 4,17-диГДГЭА, 7,17-диГДГЭА и 10,17-диГДГЭА. а.е.м. , атомные единицы массы.
Для определения концентраций, а также для дальнейшего подтверждения структуры выделенные ВЭЖХ 13-HEDPEA и 15-HEDPEA были охарактеризованы с помощью протонного ЯМР ( 1 H ЯМР). Присвоения химических сдвигов показаны в дополнительной таблице 2, a и b соответственно.Для 15-HEDPEA протон в положении 15 (H-15) показал два различных химических сдвига, которые будут обсуждаться позже. Из-за ограниченного количества материалов и отсутствия информативных УФ-хромофоров, присутствующих в этих соединениях, ЯМР-спектроскопия также использовалась для количественного определения с использованием 17-гидроксидокозагексаеновой кислоты (17-ГДГК) в качестве внутреннего стандарта с известными концентрациями.
Соединения, полученные количественно с помощью ЯМР, затем использовали в качестве стандартов для количественного ВЭЖХ-мониторинга УФ-хроматограммы при 210 нм или тандемного масс-профилирования ЖХ (дополнительную информацию см. в разделе «Экспериментальные процедуры»).
Функциональный хемотаксический скрининг одиночных клеток PMN человека
ВЭЖХ-выделенные диоксигенированные продукты DHEA подвергали индивидуальному скринингу на прямое действие PMN с использованием микрожидкостных камер. Вливание выделенного 15-HEDPEA на длине волны 10 нм в основной канал стимулировало изменения морфологии и хемотаксиса PMN в градиенте IL-8 и останавливало дальнейшую миграцию PMN через ~4 мин ( A ). Для прямого сравнения скорость хемотаксиса PMN не менялась со временем с градиентом IL-8 (дополнительная фиг.3 А ). При 10 нм 4,17-диГДГЭА ( B ), 7,17-диГДГЭА или 10,17-диГДГЭА существенно не регулировали хемотаксис (дополнительный рис. 3, B и C ), тогда как при более высоких концентрации, например 10 мкМ, 10,17-диГДГЭА быстро останавливал хемотаксис PMN ( C ).
Эти результаты показывают, что 15-HEDPEA является наиболее эффективным из этой серии в регуляции изменения формы и подвижности ПЯЛ человека.
Скрининг хемотаксиса ПЯЛ человека с помощью продуктов, полученных из ДГЭА, в микрофлюидной камере. A–C , репрезентативное среднее смещение направленной миграции PMN против градиента IL-8 0–10 нм от исходных положений (в мкм) до и после того, как продукты, полученные из ДГЭА, выделенные с помощью ВЭЖХ, индивидуально инфузировали в камеры. Врезки в A показывают морфологию PMN до ( слева ) и после ( справа ) воздействия 10-нм 15-HEDPEA (в среднем 23–30 PMN на каждой панели). Столбики ошибок представляют расстояние миграции ± ю.ш.D. для среднего значения 26 одиночных PMN ( n = 3 отдельных донора).
Активация каннабиноидных рецепторов
Поскольку АЭА оказывает широкий спектр биологических действий посредством активации каннабиноидных рецепторов (14, 27), мы затем проверили, активируют ли ДГЭА, 10,17-диГДГЭА или 15-ЭДФЭА также рецепторы CB.
С этой целью мы использовали рекомбинантные рецепторы CB человека, сверхэкспрессированные в системе β-аррестина, как описано в разделе «Экспериментальные процедуры». АЕА использовали для прямого сравнения в качестве известного агониста.показывает дозозависимую реакцию CB1 и CB2 для каждого соединения. Активация CB2 с помощью AEA дала EC 50 ~1,1 × 10 -10 м, а активация с помощью DHEA дала EC 50 9,8 × 10 -9 м ( B ). Для сравнения, значения EC 50 для метаболически оксигенированных продуктов, 10,17-диГГЭА и 15-ЭДФЭА, составляли 3,9 × 10 -10 и 1,0 × 10 -10 м соответственно (, C и D ). Эти результаты показывают, что продукты ферментативного окисления ДГЭА являются активаторами рецепторов CB2 и что 10,17-диГДГЭА и 15-ЭДФЭА также активируют рецепторы CB1, но требуют гораздо более высоких концентраций (—).Для сравнения, этаноламид 15( S )-HETE, насыщенный кислородом продукт AEA, не стимулировал рецепторы CB2 в этом диапазоне доз ( B ).
Взаимодействия рецептор-лиганд CB2 были подтверждены дозозависимой реакцией CB2-специфического антагониста AM630. При инкубации с клетками, сверхэкспрессированными GPCR CB2, AM630 ингибировал активацию, стимулированную 15-HEDPEA (10 нМ) и AEA (10 нМ), используемую здесь для известного положительного и прямого сравнения ( E и F ). AM630 также ингибировал взаимодействие GPCR CB2 с 10,17-диГДГЭА при более высокой концентрации ( n = 3, данные не показаны).
GPCR CB1 и CB2 активируются продуктами, производными DHEA. клетки НЕК со сверхэкспрессией CB1 или CB2 в системе β-аррестина инкубировали с указанными концентрациями соединений в течение 1 ч в бессывороточной среде DMEM при 37 °C. Взаимодействие лиганда с рецептором определяли по усилению хемилюминесценции, возникающей при взаимодействии β-аррестина, меченного ферментным акцептором, с рецептором, меченным Pro-Link (см. «Экспериментальные процедуры»). A–D , активация доза-реакция GPCR CB1 ( A ) и GPCR CB2 ( B–D ) указанными соединениями.
RLU , относительные единицы люминесценции; 15( S )-HAEA, 15( S )-HETE этаноламид. E и F , взаимодействия рецептор-лиганд CB2 были подтверждены дозозависимой реакцией CB2-специфического ингибитора AM630, совместно инкубированного с GPCR. Активация сверхэкспрессированных клеток CB2 стимулировалась 15-HEDPEA (10 нМ) ( E ) и AEA (10 нм) ( F ) в качестве положительного контроля. Подробности смотрите в разделе «Результаты». Результаты являются средними ± стандартная ошибка. ( n = 3–5).
Продукты ДГЭА Снижение образования тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов в цельной крови человека
Взаимодействия тромбоцитов и лейкоцитов играют важную роль в гемостазе, тромбозе и воспалении (недавний обзор см. в ссылке 28 и ссылках в ней). При таких низких концентрациях, как 10 мкМ, 10,17-диГДГЭА или 15-ЭДФЭА снижали стимулированное PAF-(100 нм) образование агрегатов тромбоцитов-моноцитов в цельной крови человека примерно на 30% (, A и B ).
Ингибирующее действие 10,17-диГГЭА проявляло колоколообразную дозозависимую реакцию и достигало максимального снижения примерно на 40% при 100 ч.Образование агрегатов PMN-тромбоцитов с PAF (100 нМ) также ингибировалось 10,17-диГДЭА при таких низких концентрациях, как 10 мкМ, как и поверхностная экспрессия P-селектина на тромбоцитах цельной крови ( D ). Для сравнения, предшественник DHEA (неокисленный) не был активен в этом диапазоне доз ( A и B ).
В цельной крови человека 10,17 S -diHDHEA и 15-HEDPEA блокируют стимулированное PAF образование агрегатов тромбоцитов и лейкоцитов. Цельную кровь человека, стимулированную PAF (100 нм), инкубировали с 10,17-diHDHEA, 15-HEDPEA или DHEA в течение 30 минут при 37 °C.Инкубацию останавливали с помощью охлажденного льдом буфера для лизиса эритроцитов. Большинство эритроцитов удаляли, а оставшиеся клетки метили. Образование агрегатов тромбоцитов-лейкоцитов или мобилизацию P-селектина анализировали с помощью FACS (см.
«Экспериментальные процедуры»). A–D , дозозависимое ингибирование образования агрегатов тромбоцитов-моноцитов ( A ), репрезентативный точечный график агрегатов тромбоцитов-моноцитов ( B ), образование агрегатов тромбоцитов-PMN ( C ) и тромбоцит P мобилизация селектина ( D ), с указанными продуктами ( ромбы , 10,17-диГДГЭА; треугольники , 15-HEDPEA; квадраты , ДГЭА). РЕ , фикоэритрин. Результаты являются средними ± стандартная ошибка. из n = 5–6 доноров. *, p <0,05 по сравнению с обработкой носителем.
Защита органов при ишемии/реперфузионном повреждении
Поскольку 15-HEDPEA проявлял сильное биологическое действие с PMN человека на уровне отдельных клеток () и в цельной крови человека (), мы затем поставили под сомнение его защитные действия in vivo in ишемия задней конечности мыши (1 час) и реперфузия второго органа (2 часа) повреждение (24).Действительно, после реперфузии 15-HEDPEA значительно уменьшал накопление PMN в легких у мышей и связанное с этим повреждение легких при дозе 1 мкг/мышь (дополнительная рис.
4) (примерно 50% снижение по сравнению с носителем; p <0,05).
ОБСУЖДЕНИЕ
Хотя АЭА действует как агонист каннабиноидных рецепторов и его метаболизм хорошо известен (12, 14–16, 27), роль ДГЭА и его метаболома представляет интерес, поскольку лечение ДГК уменьшает черепно-мозговую травму (2) и является предшественником мощных прорезольвенных медиаторов, включая резолвины и протектины (1, 7, 8).В настоящем исследовании мы идентифицировали HDHEA в мозге мыши, что послужило основой для дальнейшего изучения метаболических судеб 17-HDHEA и 17-HpDHEA и потенциального биологического воздействия метаболизма DHEA. Учитывая отсутствие функциональных групп для эффективной ионизации с помощью ионизации электрораспылением, прямой анализ/обнаружение ДГЭА или его оксигенированных метаболитов с помощью ЖХ-МС-МС был затруднен из-за низкой чувствительности. С этой целью их ацетатные аддукты [M+CH 3 COOH-H] были выбраны для анализа, который оказался полезной альтернативной стратегией, используемой в настоящем исследовании.
С точки зрения как пределов обнаружения, так и паттернов тандемной массовой фрагментации эти оксигенированные аддукты ацетата ДГЭА были сравнимы с таковыми соответствующих продуктов, полученных из свободных кислот.
Поскольку AEA является субстратом для мышиных лейкоцитов типа 12/15-LOX, ретикулоцитов типа 15-LOX и соевого 15-LOX для образования 15-гидропероксиарахидоноилэтаноламида (18), мы рационализировали 17-HDHEA как восстановленную гидроксильную группу, содержащую продукт 15-липоксигеназоподобного фермента с ДГЭА. Эта гипотеза согласуется с масс-анализом LC-MS-MS восстановленного продукта, полученного в результате инкубации DHEA с соевым 15-LOX, который по существу показал такое же время удерживания LC, тандемные картины фрагментации массы, а также онлайн-УФ-спектр с эндогенным 17. -HDHEA().
Чтобы определить метаболические судьбы 17-HpDHEA/17-HDHEA, липидомное исследование на основе LC-MS-MS привело к идентификации ряда новых оксигенированных продуктов, перечисленных в .
Инкубация либо 17-HpDHEA, либо DHEA с человеческим PMN или мозгом мыши также дала новую серию диоксигенированных продуктов, таких как 4,17-diHDHEA, 7,17-diHDHEA, 10,17-diHDHEA, а также 15-HEDPEA. ). Из ДГК некоторые из этих продуктов биосинтезируются в воспалительном экссудате, а именно резолвин D5 (7,17-дигидроксидокозагексаеновая кислота; 7,17-диГДГК) и резолвин D6 (4,17-дигидроксидокозагексаеновая кислота; 4,17-диГДГК) (8). , а также продукт двойного диоксигенирования 10,17-дигидроксидокозагексаеновая кислота (10,17-диГДГК), изомер нейропротектина D1 (6).Следовательно, в настоящем исследовании были идентифицированы их этаноламидные аналоги. Кроме того, инкубация 17-HpDHEA с гемоглобином привела к образованию двух основных гепоксилин-подобных структур (29): 13-HEDPEA и 15-HEDPEA. Учитывая, что смеси диастереомеров гепоксилина образуются из гемоглобина или гемина (29), представляло интерес, относится ли это к соединениям, производным 17-HpDHEA. С этой целью химический сдвиг ЯМР H-18 выделенного 13-HEDPEA показал два различимых пика при 4,23 и 4,45 м.
д., а химический сдвиг H-13 выделенного 13-HEDPEA показал широкие пики ~3.9 частей на миллион (дополнительная таблица 2, a и b ), что убедительно свидетельствует о наличии диастереомеров. Для выяснения биосинтетического механизма образования 13-ЭДФЭА и 15-ЭДФЭА из гемоглобина и 17-ГпДГЭА также проводили инкубации в 18 О воды. Тандемный масс-анализ этих продуктов инкубации показал, что 18 O не был включен в эти продукты (данные не показаны), что позволяет предположить, что источником кислорода гидроксильной группы может быть атмосферный O 2 .
Объединяя результаты наших липидомных анализов и механизмы, предложенные для биосинтеза фитооксилипина и гепоксилина (30), пути новых оксигенированных продуктов ДГЭА предложены в . В этой схеме DHEA сначала превращается в 17-HpDHEA при посредничестве 15-LOX. Затем 17-HpDHEA частично восстанавливается до оксидного радикала () гемоглобином, который реагирует с вицинальной двойной связью в положении 16 с образованием 16(17)-эпоксидного радикала.
Нестереоспецифическое или слабостереоспецифичное присоединение кислорода к промежуточному продукту приводит к образованию двух типов пероксидных радикальных диастереомеров.Дальнейшее восстановление может генерировать 13-HEDPEA и 15-HEDPEA. Альтернативно, 17-HpDHEA может подвергаться восстановлению с образованием 17-HDHEA. Интересно, что взаимодействия гемоглобина с 17-HpDHEA дают примерно равные количества 13-HEDPEA и 15-HEDPEA; для сравнения, инкубация PMN с DHEA или HpDHEA генерировала преимущественно 15-HEDPEA (и дополнительную таблицу 1), что свидетельствует о наличии отдельной синтазы 15-HEDPEA в PMN человека.
Предлагаемый метаболом ДГЭА и биологически активные продукты. Подробнее см. в разделе «Обсуждение». И/Р , ишемия/реперфузия.
Ввиду потребности в разработке методологии функционального скрининга, чтобы не отставать от быстрого распространения современной метаболомики, микрожидкостные камеры были соединены в тандеме для скрининга хемотаксической активности человеческих ПЯЛ с новыми продуктами, полученными из ДГЭА.
Учитывая объем аналитической камеры ~ 1 мкл, для этих анализов требовалось лишь небольшое количество материалов. Результаты скрининга, о которых сообщалось в, показали, что 15-HEDPEA (10 нМ) эффективно останавливал хемотаксис PMN, стимулированный градиентом IL-8.Скрининг хемотаксиса ПЯЛ человека с помощью микрожидкостной камеры имеет несколько преимуществ, в том числе: ( a ) небольшие количества, необходимые в камере ∼1 мкл 3 , ( b ) захват лейкоцитов человека менее чем за 5 минут при по сравнению с несколькими часами (2–3) изоляции с использованием градиента плотности и ( c ) видеодокументацией одиночных ответов PMN (9). Следовательно, настоящие результаты дополнительно демонстрируют функциональный скрининг на основе микрофлюидной камеры как новый эффективный подход к расшифровке редких и временных функциональных метаболитов.
AEA выполняет широкий спектр функций посредством связывания с рецепторами CB (14–17). Однако его метаболит DHA DHEA проявляет лишь умеренное сродство к рецептору CB1 ( K i значение 324 нм по сравнению с 40 нм для AEA) (31).
Чтобы исследовать биологические последствия метаболического окисления DHEA с точки зрения активации рецепторов CB, мы оценили два основных продукта PMN, 10,17-diHDHEA и 15-HEDPEA, с использованием систем лигандов CB2-β-arrestin. Номер EC 50 для новых продуктов, полученных из ДГЭА, 10,17-диГДГЭА и 15-ЭДФЭА, был равен 3.9 × 10 −10 и 1,0 × 10 −10 м соответственно, аналогично AEA (). Для сравнения, ЕС 50 для ДГЭА составил 9,8 × 10 -9 м, что примерно на 2 порядка выше. 10,17-diHDHEA и 15-HEDPEA также активировали CB1, как показано в A . Взаимодействия лиганд-CB2 были подтверждены с использованием специфического антагониста CB2 AM630 ( E и F ). Дополнительными молекулярными мишенями AEA являются ваниллоидные рецепторы (TRPV1) в дополнение к каннабиноидным рецепторам, для активности которых требуется микромолярный диапазон (32).Наши результаты показали, что метаболическая оксигенация ДГЭА приводит к образованию новых агонистов CB с повышенной эффективностью, которая находится в наномолярном диапазоне.
Поскольку производство определенного N -ацилэтаноламида усиливается во время инсульта (33), было интересно исследовать биологические функции ДГЭА и его метаболитов в формировании тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов в цельной крови человека. Образование тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов является компонентом многих сосудистых заболеваний, инсульта, диабета и гипертонии (28).В частности, повышенные тромбоцитарно-лейкоцитарные агрегаты были предложены в качестве раннего маркера острого инфаркта миокарда и все чаще рассматриваются как сердечно-сосудистый фактор риска (34). Кроме того, пациенты с повышенным уровнем циркулирующих агрегатов тромбоцитов-моноцитов могут отражать проатерогенный фенотип (35). Наличие тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов стимулирует выработку провоспалительных цитокинов, таких как IL-1β, IL-8, MCP-1, MIP-1b, PAF и матриксной металлопротеиназы, а также прокоагулянтных тканевых факторов (в недавнем обзоре, см. ссылку28). По этим причинам образование тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов является целью терапевтического вмешательства (обзоры см.
в ссылках 28 и 36). Наше липидомное исследование показало, что 10,17-диГДГЭА и 15-ЭДФЭА были двумя основными продуктами, производными ДГЭА, продуцируемыми изолированными ПЯН человека. Таким образом, действия этих соединений оценивали в стимулированном PAF образовании агрегатов тромбоцитов-лейкоцитов. Как 10,17-диГДГЭА, так и 15-ЭДФЭА были мощными сигналами, и при концентрациях всего 10 мкМ каждый из них снижал 100-нм PAF-стимулированное образование агрегатов тромбоцитов-моноцитов примерно на 30% в цельной крови человека ( A ).10,17-диГДГЭА также уменьшал PAF-стимулированные агрегаты тромбоцитов-PMN на 25–35% ( B ). Для сравнения, предшественник ДГЭА не ингибировал значительно образование тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов в этом диапазоне доз ( А и В ).
Образование тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов в основном зависит от активации тромбоцитов (37). В соответствии с этим 10,17-диГДГЭА (от 10 мкм до 100 нм) блокировал поверхностную экспрессию P-селектина PAF-стимулированных тромбоцитов ( C ), что свидетельствует о том, что действия 10,17-диГДГЭА были, по крайней мере, частично достигнуты за счет снижения P мобилизация селектина и активация тромбоцитов, связанная с появлением поверхности.
Наши результаты показывают, что метаболическая оксигенация ДГЭА генерировала мощные молекулы, которые снижают активацию тромбоцитов и образование тромбоцитарно-лейкоцитарных агрегатов в цельной крови человека.
Ишемия/реперфузия или рефлюксное повреждение являются основной причиной повреждения органов после инфаркта миокарда, инсульта, хирургического вмешательства и травмы при трансплантации органов и включают активацию тромбоцитов и ПЯЛ (24). В этих условиях нейтрофилы играют решающую роль в инициировании реперфузии или повреждения рефлоу и в последующем повреждении тканей.Следовательно, предотвращение активации или накопления PMN в ишемизированном органе уменьшает повреждение тканей после реперфузии (24, 38). Настоящие результаты, полученные при скрининге хемотаксиса, могут служить полезными ориентирами для поиска/выбора потенциальных защитных медиаторов при ишемическом/реперфузионном повреждении. В связи с этим 15-HEDPEA, который эффективно останавливал хемотаксическую миграцию PMN, затем оценивали при ишемическом/реперфузионном повреждении второго органа у мышей, инициированном окклюзией задних конечностей.
Действительно, 15-HEDPEA в дозе 1 мкг/мышь обладал органозащитным действием, уменьшая инфильтрацию ПЯЛ в легких примерно на 50%.Примечательно, что аберрантная и чрезмерная лейкоцитарная инфильтрация также связана с другими заболеваниями, включая артрит и псориаз (39, 40). Интересно, что Kim et al. (41) недавно сообщили, что ДГЭА способствует развитию нейронов гиппокампа.
Таким образом, липидомное исследование функционального метаболома ДГЭА выявило ряд новых оксигенированных продуктов, которые 1) являются мощными агонистами CB2, 2) регулируют хемотаксические ответы одиночных клеток PMN, 3) модулируют взаимодействие тромбоцитов и лейкоцитов в цельной крови и 4) являются органозащитными.Ввиду роли липидных медиаторов в воспалении и его разрешении, а также в гемостазе (7), настоящий новый метаболом ДГЭА, задокументированный здесь, может служить контррегуляторной системой в нервных тканях и тканях, богатых ДГЭА, а также при введении DHA (42) для регулирования повреждения тканей, опосредованного лейкоцитами.
|
|
ячеек | Бесплатный полнотекстовый | Связь микробиома с эстрогеном и риск рака молочной железы
1.Предыстория
Люди — это не просто индивидуумы, а сложная экосистема, в которой обитают триллионы микробных клеток. Хотя микробы населяют несколько участков тела, большая часть микробной биомассы находится в желудочно-кишечном тракте.
100 триллионов микробов, обитающих в желудочно-кишечном тракте, несут коллективный геном, называемый метагеномом, который в 150 раз больше, чем геном человека [1]. Когда-то считавшийся инертным, теперь известно, что динамический микробиом выполняет множество важных функций для человеческого организма. Микробиом, несомненно, является вторым геномом человеческого тела, и было накоплено достаточно доказательств, подчеркивающих его разнообразную роль как в здоровье, так и в болезнях.Несмотря на признание биологического воздействия микробиома, прогресс трансляции был ограничен, отчасти из-за того, что большинство комменсалов традиционно не культивируются, а отчасти из-за обширности микробиома, на который приходится более 3,3 миллиона генов [2], функции которых не изучены. полностью понял. Кроме того, микробы обитают в виде консорциумов в разных частях тела, и большинство известных физиологических функций микробного дисбактериоза являются скорее общими, чем эффектами отдельных микробов.С другой стороны, теперь у нас есть методы глубокого секвенирования, такие как секвенирование дробовика, и множество инструментов для выполнения генных и функциональных аннотаций, позволяющих лучше понять загадку геном-метагеном.
Результаты проекта микробиома человека продолжают раскрывать сложные метаболические взаимодействия микробиома с геномом, и неудивительно, что дисбиоз может индуцировать и способствовать множеству специфических для органов рака, включая колоректальный рак, рак желудка, аногенитальный, печеночный, поджелудочный, предстательный и рак. рак молочной железы.Микробиом способствует канцерогенезу, (i) стимулируя пролиферацию клеток-хозяев или влияя на запрограммированную гибель клеток, (ii) инициируя и регулируя иммунный ответ и (iii) изменяя метаболизм неперевариваемых пищевых компонентов, ксенобиотиков и фармацевтических препаратов [3,4]. Этиология рака молочной железы сложна, и для различных подтипов рака молочной железы описано множество факторов риска. Интересно, что на генетику приходится менее 10% случаев рака молочной железы, а до 70% случаев рака молочной железы возникают у женщин с кажущимся средним риском [1].Хотя биологические причины остаются плохо изученными, примерно 70% всех случаев рака молочной железы относятся к подтипу, положительному по рецептору эстрогена.
Большинство из этих ER-позитивных раков молочной железы обнаруживаются у женщин в постменопаузе, у которых системные уровни эстрогена уже снизились, а эстроген вырабатывается в основном жировой тканью и посредством ароматизации предшественников андрогенов [5]. Следует отметить, что одной из жизненно важных функций микробиома является регулирование уровня стероидных гормонов в организме и, что наиболее важно, эстрогена.Регуляция метаболизма эстрогенов кишечными микробами известна уже более десяти лет, и все же наше понимание в этом отношении ограничено из-за сложности микробиома, который может варьироваться в зависимости от диеты, ИМТ, этнической принадлежности, расы, возраста, профессии, болезни. состояние и применение антибиотиков. Это привело к противоречивым результатам эпидемиологических исследований. В этом обзоре мы обсуждаем регуляцию метаболизма эстрогенов комменсалами и ее потенциальную роль в развитии рака молочной железы. 2. Нарушение регуляции кишечного микробиома наблюдается у женщин с раком молочной железы
Связь между измененным кишечным микробиомом и раком молочной железы была отмечена еще в 1990 году в исследовании, сравнивающем кишечный микробиом 7 здоровых женщин и 11 женщин с раком молочной железы.
Это исследование показало, что Clostridia, Enterobacterium, Lactobacilli, Bacteroides и Escherichia coli были обогащены у пациентов с раком молочной железы [6]. Недавно микробное разнообразие кишечника было исследовано у 18 контрольных женщин в пременопаузе, 25 женщин в пременопаузе с раком молочной железы, 44 контрольных женщин в постменопаузе и 46 женщин в постменопаузе с раком молочной железы [7]. В этом исследовании использовался метагеномный анализ дробовика, позволяющий провести подробную таксономическую классификацию и функциональный анализ, в отличие от более ранних исследований, которые основывались на секвенировании 16srRNA и биохимической характеристике.Женщины с раком молочной железы демонстрировали более разнообразный микробиом кишечника по сравнению с контрольной группой. Различия между пременопаузальными случаями и контрольной группой были незначительными, тогда как у женщин в постменопаузе как видовое богатство, так и видовое разнообразие были выше у женщин с раком молочной железы; р = 0,003 и табл.
1). Используя классификатор случайного леса, они сообщили о 14 потенциальных микробных маркерах для женщин в постменопаузе с раком молочной железы, включая Fusobacterium varium, Shigella_sp_D9, Desulfovibrio piger, Escherichia_sp_1_1_43, Shigella sonnei, Eubacterium eligens, Escherichia_sp_3_2_53FAA, Vibrio cholerae, Acinetobacter baumannii, Proteus mirabilis, Fuso concisus, Escherichia coli и Porphyromonas uenonis с замечательной чувствительностью и специфичностью.Генная аннотация показала более высокое содержание генов взаимодействия патоген-хозяин (p = 0,021), а также факторов вирулентности (p = 0,016) у женщин в постменопаузе с раком молочной железы по сравнению с контрольной группой. Кодируемыми факторами вирулентности были LOS-гликозилтрансфераза, перитрихиальные жгутики и фимбрии I типа. Была изучена ассоциация кишечных микробов с клиническими показателями, и Acinetobacter radioresistens и Vibrio cholerae коррелировали положительно, но слабо, в то время как Yersinia enterocolitica отрицательно коррелировала с уровнями C4.
Acinetobacter radioresistens и Enterococcus gallinarum показали слабую положительную корреляцию с экспрессией высокочувствительного С-реактивного белка, в то время как Shewanella putrefaciens и Erwinia amylovora показали слабую положительную связь с уровнями эстрадиола. Porphyromonas uenonis показал слабую положительную корреляцию, а Enterococcus gallinarum показал слабую отрицательную корреляцию с CD19. Актиномицеты зр. HPA0247 был отрицательно пропорционален количеству CD3 + CD8 + Т-клеток, хотя корреляция была слабой.Метагеном женщин в постменопаузе с раком молочной железы показал обогащение биосинтеза липополисахаридов, системы транспорта комплекса железа, системы транспорта витамина B12, системы PTS, системы секреции и генов бета-окисления. Синтез бутирата был снижен у женщин в постменопаузе с раком молочной железы. В эпителиальных клетках кишечника бутират ингибирует активацию NF-κB, предотвращая воспаление, а также известно, что он вызывает активацию иммунных клеток [8].
Как и в некоторых более ранних исследованиях, было обнаружено, что дисбактериоз связан с постменопаузальным, но не с пременопаузальным раком молочной железы [7].Также было показано, что кишечная инфекция H. hepaticus увеличивает частоту опухолей молочной железы у мышей с дефицитом C57BL / 6 ApcMin Rag2, хотя используемая модель не считается подходящей [9]. В целом, в микробиоме кишечника женщин с раком молочной железы наблюдалось несколько ключевых изменений, что свидетельствует о тесной связи между микробным дисбиозом и раком молочной железы. 3. Связь кишечного микробиома, эстроболома и рака молочной железы
Эндогенный эстроген, несомненно, играет важную роль в развитии рака молочной железы, особенно после менопаузы, поскольку 70% случаев рака молочной железы относятся к подтипу, положительному по рецептору эстрогена.Перед менопаузой основным местом синтеза эстрогенов являются яичники, а циркулирующий эстроген действует на несколько целевых участков, включая кости, головной мозг и иммунную систему, эндокринным образом [10].
Однако у женщин в постменопаузе продукция эстрогенов является внегонадной, в основном в жировой ткани, костях и головном мозге, функционируя паракринным или интракринным образом [10]. Локальные уровни эстрогенов регулируются тканеспецифичной экспрессией CYP19 [10]. У пациентов с раком молочной железы экспрессия CYP19 и ароматазы повышена в жировой ткани молочной железы до 20 раз больше, чем уровни в циркулирующей крови [10].Стимулом для усиленного биосинтеза эстрогена являются факторы, производные опухоли, такие как простагландины, секретируемые фибробластами, инфильтрирующими лимфоцитами или даже эпителиальными клетками [10]. Эстрогены представляют собой стероидные гормоны С-18, полученные путем многоступенчатого снижения уровня холестерина (С27). Эндогенные эстрогены существуют в трех биологически активных формах: эстрадиол (Е2) (пременопаузальный), эстрон (Е1) (постменопаузальный) и эстриол (Е3) (у беременных) [11,12]. Эстрогены могут циркулировать в кровотоке в виде свободных фрагментов или в форме, связанной с белками, и различаться по своей активности и биологической значимости [12].
В печени исходные эстрогены E2 и E1 необратимо гидроксилируются в положениях C2, C4 или C16 стероидного кольца [12]. Соответствующие метаболиты указаны на рисунке 1. Эти метаболиты эстрогена обладают различной гормональной активностью, биодоступностью и периодом полураспада [12]. Они конъюгированы путем глюкуронирования и сульфирования и подготовлены для экскреции с желчью [11,12,13]. У экспериментальных животных, которым вводили радиоактивно меченые гормоны, в желчь восстанавливалось 65% Е2, 48% Е1 и 23% Е3 [12]; От 10% до 15% экскретировались в конъюгированной форме с калом, а оставшееся количество эстрогенов реабсорбировалось в кровоток [12].Важно отметить, что регуляция уровня эстрогенов в организме в значительной степени зависит от микробиома [11,12,13,14,15]. Сумма бактериальных генов в желудочно-кишечном тракте, способных метаболизировать эстрогены, была определена как « эстроболом» Плоттеля и Блазера [11]. Считается, что активный эстроболом модулирует метаболизм эндогенных эстрогенов через кишечно-печеночную циркуляцию благодаря активности ферментов бактериальных β-глюкуронидаз и β-глюкозидаз, тем самым влияя на уровни циркулирующих и экскреторных эстрогенов [14].
Энтерогепатическая циркуляция эстрогенов, их конъюгация и деконъюгация кишечными микробами и реабсорбция в кровоток схематически представлены на рисунке 1. Большинство кишечных бактерий проявляют ферментативную активность β-глюкуронидазы, которая позволяет им деконъюгировать конъюгированные эстрогены, что приводит к их реабсорбции в кровоток. 14,16,17]. В желудочно-кишечном тракте человека наиболее важными генами, кодирующими β-глюкуронидазу, являются гены GUS. UDP-глюкозилтрансферазы млекопитающих связывают фрагмент глюкуроновой кислоты с комплексными соединениями, включающими стероидные гормоны, маркирующие его для экскреции [14].Кишечные микробы, обладающие генами GUS, кодирующими ферментативную активность β-глюкуронидазы, могут удалять глюкуроновую кислоту для использования в качестве источника углерода. Соответствующие агликоны либо высвобождаются в желудочно-кишечном тракте для экскреции, либо высвобождаются обратно в кровоток [14]. Энтерогепатическая циркуляция аналогичным образом метаболизирует ряд сложных молекул, включая нейротрансмиттеры, противораковые агенты, нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) и канцерогены окружающей среды, и помечает их для экскреции, но выводятся ли они из организма или рециркулируются обратно в кровоток, в значительной степени определяется кишечными бактериями [2,17].
Недавно был охарактеризован атлас β-глюкорунидаз микробов желудочно-кишечного тракта человека. Приблизительно 112 новых GUS были идентифицированы и сгруппированы в 6 классов, экспрессируемых в 4 бактериальных типах, а именно Bacteroidetes, Firmicutes, Verrucomicrobia и Proteobacteria [17]. Среди них тип Bacteroidetes представляет наибольшее количество и разнообразие ферментов GUS [17]. Интересно, что активность β-глюкуронидазы модулируется в зависимости от диеты и бактериального контекста [11, 12, 14, 16]. Филогенетически 80% микробиома человека состоит из Firmicutes и Bacteroidetes, за которыми следуют второстепенные типы, включая Proteobacteria, Actinobacteria, Verrucomicrobia, Cyanobacteria и Tenericutes.Более низкое соотношение Firmicutes к Bacteroidetes обычно связано со здоровым состоянием. Было обнаружено, что диета, богатая жирами или белками, связана с более высокой активностью фекальной β-глюкуронидазы, тогда как потребление клетчатки снижает ее активность [12]. Кроме того, известно, что активность β-глюкуронидазы культивируемых Escherichia coli регулируется плотностью популяции, что предполагает участие чувства кворума в контроле ферментативной активности [12,18].
В дополнение к сложности, путь печеночной сульфатазы превращает неактивные стероиды в кровотоке в активные эстрогены [11,12].Сульфатазоположительные кишечные бактерии гидролизуют молекулы эстрогена, выделяемые в желудочно-кишечный тракт после сульфатирования печени. Влияют ли бактериальные β-глюкуронидаза и β-глюкозидаза на риск рака молочной железы, еще предстоит определить; накопление доказательств, как обсуждалось в этом разделе, предполагает потенциальную роль. Гидроксистероиддегидрогеназы — еще один фермент, кодируемый некоторыми классами кишечных бактерий [19,20]. Гидроксистероиддегидрогеназы в основном представляют собой алкогольоксидоредуктазы [12], которые частично катализируют биосинтез эстрогенов из холестерина [19,20].Обогащение гидроксистероиддегидрогеназой может модулировать соотношение конъюгированных эстрогенов, а также метаболизм андрогенов, формируя гормональную среду хозяина. 4. Активный эстроболом регулирует уровень эстрогена
На протяжении десятилетий многие исследования поддерживали гипотезу эстроболома (рис.
2) [12,13,14,15,16,19,21,22,23,24,25,26, 27,28,29,30,31,32,33,34]. Безмикробные крысы выделяют не поддающееся количественному определению количество гормонов, тогда как обычные крысы в тех же условиях выделяют значительное количество свободных стероидных гормонов, определяемое с помощью газовой хроматографии и масс-спектрометрии [33].Введение бактерий нормализует эстральный цикл бесплодных безмикробных самок мышей и увеличивает количество сперматозоидов у самцов мышей, восстанавливающих фертильность [33]. Фурман и др. продемонстрировали значительную положительную корреляцию между отношением метаболитов эстрогенов к исходным эстрогенам и филогенетическим разнообразием кишечного микробиома [21]. Микрофлора кишечника зависит от расы, этнической принадлежности, диеты, ИМТ, воздействия антибиотиков и инфекций [26, 29, 35, 36, 37, 38] и играет важную роль в развитии гормонозависимого рака, катализируя деконъюгацию и реабсорбцию эстрогена [5, 23,24].Антибиотики возмущают микробные популяции кишечника, и ряд исследований показал снижение экскреции конъюгированных стероидных гормонов при введении обычных антибиотиков, таких как ампициллин и окситетрациклин, как у мужчин, так и у женщин [34,39,40].
Антибиотики снижают активность фекальной β-глюкуронидазы у крыс [12], что свидетельствует о кратковременном воздействии антибиотиков на уровень стероидных гормонов в крови; долгосрочные эффекты остаются неуловимыми. Некоторые эпидемиологические исследования предполагают положительную корреляцию между использованием антибиотиков и риском рака молочной железы [24,39].В североамериканском исследовании случай-контроль длительное лечение антибиотиками положительно ассоциировалось с повышенным риском рака молочной железы (отношение шансов 2,07) [23]. Риск рака молочной железы увеличивается независимо от класса антибиотиков, возраста, менструального статуса или семейного анамнеза [23]. Незначительное увеличение риска рака молочной железы при воздействии антибиотиков также наблюдалось в исследовании с участием 2,1 миллиона женщин, за которым наблюдали в течение девяти лет; отношение рисков 1,14 (95% ДИ ≥ 1,1 до 1,18), но при длительном применении антибиотиков наблюдался небольшой дозозависимый эффект; коэффициент опасности 1.
17 (95% ДИ ≥ 0,97–1,42) [39]. В популяционном исследовании, включавшем 3 112 624 женщин, риск развития рака молочной железы незначительно, но положительно увеличивался при длительном применении антибиотиков с поправкой на ИМТ, курение, диабет и заместительную гормональную терапию [41]. Хотя эти исследования показывают, что длительное использование антибиотиков лишь умеренно увеличивает риск рака молочной железы, фактическая величина может быть намного выше, поскольку большая часть антибиотиков остается неучтенной. 36,42].Микробный состав кишечника и метаболизм гормонов в значительной степени зависят от диеты. В популяционных исследованиях было обнаружено, что вегетарианцы выделяют больше конъюгированных эстрогенов по сравнению с их невегетарианцами, что, вероятно, приводит к более низким уровням эстрогенов в плазме. В американском исследовании с участием 10 женщин в пременопаузе вегетарианцы имели в 3 раза более высокие уровни конъюгированных эстрогенов в фекалиях, а уровни эстрогенов в плазме были на 15-20% ниже по сравнению с всеядными, как и фекальная бактериальная активность β-глюкуронидазы [12,43].
.У здоровых женщин в постменопаузе потребление алкоголя также коррелировало со значительно более высокими концентрациями Е1 в плазме и, в меньшей степени, Е2 [12]. Это может быть связано с тем фактом, что чрезмерный рост бактерий в тонком кишечнике (SIBO) может быть результатом более высокого потребления алкоголя, как это наблюдается на животных моделях алкогольной болезни печени [12], и может изменять микробные метаболические пути, хотя требуются дальнейшие исследования. У экспериментальных крыс хроническое потребление этанола изменило метаболизм жирных кислот, желчных кислот, аминокислот и 4-гидроксиэстрона [44].4-гидроксиэстрон — метаболит катехолового эстрогена, биологически активный эстроген; было показано, что он вызывает эстрогенный онкогенез на животных моделях [12,44]. Пероральное потребление Lactobacillus acidophilus вызывало снижение активности фекальных ферментов, включая β-глюкуронидазу [12]. Flores et al. В 2012 г. исследовали системные и фекальные уровни эстрогена и его 13 метаболитов и их связь с микрофлорой кишечника в группе из 25 мужчин, 7 женщин в постменопаузе и 19 женщин в пременопаузе (рис.
2А) [15].Ферментативную активность фекальной β-глюкуронидазы и β-глюкозидазы определяли количественно с помощью кинетики в реальном времени; микробное разнообразие оценивали с помощью пиросеквенирования 16 срРНК, а эстроген и его метаболиты в моче и фекалиях определяли с помощью жидкостной хроматографии/тандемной масс-спектрометрии (ЖХ/МС) [15]. Как у мужчин, так и у женщин в постменопаузе, у которых эстроген не является яичниковым, уровни общего эстрогена в моче и большинства метаболитов эстрогена показали сильную корреляцию с богатством и альфа-разнообразием фекальной микробиоты (R ≥ 0.5, р ≤ 0,003) (рис. 2С). Многофакторная корректировка ИМТ, возраста и пола оказала незначительное влияние на видовое богатство и альфа-разнообразие. Однако никакой корреляции ни в одной из групп не наблюдалось в отношении β-разнообразия. Они также наблюдали значительно сильную ассоциацию системных эстрогенов с фекальными таксонами Clostridia у Firmicutes и родов семейства Ruminococcaceae (β = 0,57–0,7, p = 0,03–0,002) [15].
Фекальная β-глюкуронидаза была пропорциональна концентрации эстрона в моче (R = 0,36, p = 0.04), но не к другим метаболитам эстрогена [15]. Напротив, он был отрицательно пропорционален общему количеству эстрогенов в фекалиях. У женщин в пременопаузе не наблюдалось никакой корреляции, возможно, потому, что все они находились в разных фазах менструального цикла. Это исследование предполагает, что фекальная β-глюкуронидаза отрицательно пропорциональна общему уровню эстрогена в кровотоке и положительно пропорциональна общему уровню эстрона в моче [15]. Обилие микробов в фекалиях было прямо и сильно связано с общим количеством системных эстрогенов, но не зависело от какого-либо филогенетического класса или кластера.Таксоны Clostridia типа Firmicutes показали значительные корреляции, и их функциональные и метаболические корреляции требуют дальнейшего изучения. Другое исследование, проведенное в 2014 г. Fuhrman et al. исследовали ассоциацию фекального микробиома с эстрогеном и его метаболитами в моче женщин в постменопаузе [21].
В группе из 60 здоровых женщин в постменопаузе, не проходивших заместительную гормональную терапию или антибиотикотерапию, они проверили стандартизованные по креатинину уровни эстрогенов и его метаболитов с помощью жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии.Филогенетический состав фекальной микробиоты оценивали с помощью пиросеквенирования 16 срРНК, и для выявления корреляции с уровнями конъюгированных и неконъюгированных эстрогенов использовались общие линейные модели (рис. 2А). Установлено, что отношение метаболитов эстрогенов к их предшественникам прямо пропорционально филогенетическому разнообразию всего дерева (R = 0,35, P = 0,01) [21]. Интересно, что, как наблюдалось в более раннем исследовании, отношение метаболитов к их предшественникам было пропорционально численности отряда Clostridiales (R = 0.32, р = 0,02) (рис. 2Б). Подобная корреляция также наблюдалась с численностью рода Bacteriodes (R = -0,3, p = 0,03) [21] (рис. 2B). Кроме того, ассоциации не зависели от возраста, ИМТ и факторов дизайна исследования, предполагая, что женщины с более разнообразной микробной экосистемой в кишечнике демонстрируют более высокое соотношение метаболитов эстрогена к их предшественникам в моче.
Исходные эстрогены образовывали 32% от общего количества эстрогенов, в то время как 2, 4 и 16 гидроксилированные метаболиты составляли 29%, 3% и 35% от общего количества метаболитов эстрогена [21].Общее количество метаболитов эстрогена варьировалось в зависимости от ИМТ; недостаточная/нормальная масса тела p = 0,11 [21]. Вопреки общепринятым представлениям о том, что микробные популяции модулируют системные уровни эстрогена путем деконъюгации метаболитов эстрогена, секретируемых в желчь, метаболиты эстрогена демонстрировали более сильную корреляцию с видовым разнообразием по сравнению с исходными эстрогенами, что позволяет предположить, что микробная популяция может по-разному влиять на компоненты общего количества метаболитов эстрогена. Одним из способов исследования связи может быть фармакологическое ингибирование активности бактериальной β-глюкуронидазы.Это исследование подтверждает, что в случайной группе женщин в постменопаузе микробное разнообразие кишечника положительно связано с соотношением метаболитов эстрогена и исходных эстрогенов.
Далее, в 2015 г., Goedert et al. исследовали различия в микробной популяции кишечника 48 женщин в постменопаузе с раком молочной железы и такого же количества здоровых женщин того же возраста [25] (рис. 2D). Удивительно, но общее количество эстрогенов в моче напрямую коррелировало с α-разнообразием в контрольной группе (Rho Спирмена = 0,37, p = 0,009), но не в случаях рака (Rho Спирмена = 0.04, р = 0,77) [25]. Случаи рака значительно изменили видовое разнообразие по сравнению с контролем (β-разнообразие, p = 0,006), а также более низкое α-разнообразие, p = 0,004. Все средние эстрогены были в 2 раза выше при раке по сравнению с контролем, но оставались статистически незначимыми, p ≥ 0,1 [25]. У контрольных женщин филогенетическое разнообразие фекального дерева коррелировало с общим количеством эстрогенов, но не у женщин с раком молочной железы. Отношение метаболита эстрогена к исходному эстрогену показало слабую положительную корреляцию с альфа-разнообразием в контроле (Rho Спирмена = 0.
26, p = 0,08), но не в случаях рака (Rho = -0,11, p = 0,45). В случаях рака наблюдалось более низкое альфа-разнообразие фекальной микробиоты (p ≤ 0,004), за исключением индекса Шеннона, p = 0,09 [25]. Состав микробиоты также варьировал для всех таксонов уровня рода. В частности, в отряде Clostridiales случаи рака имели более высокие уровни Ruminococcaceae, Clostridiacae и Faecalibacterium, но более низкие уровни Dorea и Lachnospiraceae [25]. В 2016 году Мур и соавт. проанализировали уровни эстрогена и его 13 метаболитов у 399 пациентов с инвазивным раком молочной железы в постменопаузе по сравнению с 399 контрольными группами того же возраста из Шанхая, Китай [13] (рис. 2А).Наблюдалась очень сильная корреляция уровня эстрогена в моче с риском рака молочной железы (ОШ = 1,94, 95% ДИ = от 1,21 до 3,12, тренд p = 0,28). Отношение метаболитов 2-пути к исходным эстрогенам, а также общее количество эстрогенов обратно коррелируют с риском рака молочной железы. Сравнивая уровни мочевых эстрогенов и метаболитов эстрогена, он был в три раза выше у азиатских американских женщин по сравнению с женщинами из Шанхая.
Было обнаружено, что концентрации метаболитов с 2 и 16 путями аналогичны исходным эстрогенам (31% и 36% против 29%) [13].Соотношения 2-го и 4-го путей сильно коррелировали друг с другом, но не с продуктами гидроксилирования 16-го пути [13]. Риск рака молочной железы был тесно связан с концентрацией в моче общих эстрогенов, исходных эстрогенов и продуктов 16-го пути гидроксилирования. Хотя риск рака молочной железы ниже по величине, он положительно коррелировал с метаболитами 2 и 4 путей [13]. Было обнаружено, что риск рака молочной железы обратно пропорционален соотношению метаболитов двух путей к общему количеству эстрогенов и исходным эстрогенам.При сравнении на основе популяции у американских женщин азиатского происхождения уровень циркулирующего эстрадиола был в три раза выше, уровень общих эстрогенов и метаболитов 4 метаболитов в два раза выше, и различия все еще были значительными с поправкой на ИМТ [13]. Эти различия согласуются с тем фактом, что в других исследованиях рака молочной железы уровни циркулирующего эстрадиола в крови у женщин из стран с высоким риском были примерно в 2,5 раза выше, чем в странах с низким уровнем риска, таких как Китай.
ИМТ считается основным фактором, определяющим уровень циркулирующего эстрогена.Однако в предыдущих исследованиях сообщается лишь о 15–16% вариации уровней эстрадиола, что можно объяснить ИМТ [45,46,47]. Поэтому мы предполагаем, что другие факторы могут быть ответственны за эти большие различия; одним атрибутивным фактором является микробиота. 5. Кишечные микробы и фитоэстрогены
Помимо метаболизма эстрогенов, кишечные микробы играют очень важную роль в синтезе эстрогеноподобных соединений или имитаторов эстрогена из пищевых источников [27,32,48,49,50,51,52]. Фитоэстрогены представляют собой группу растительных соединений, содержащих от одного до двух бензольных колец и две или три гидроксильные группы, сходные с 17β-эстрадиолом по структуре и молекулярной массе [53].Благодаря структурному сходству они способны связываться с эстрогеновыми рецепторами ERα и ERβ. Эти соединения включают изофлавоноиды, флавоноиды, лигнаны, куместаны, эллагитаннины, стильбены [53], генистеин, даидзеин и его метаболит S-эквол и куместрол [54].
Лишь немногие из них обладают реальной эстрогенной или антиэстрогенной активностью. S-эквол, один из самых мощных фитоэстрогенов, вырабатывается исключительно кишечной микрофлорой [55]. Сродство ER к фитоэстрогенам примерно в 4 раза ниже, чем у 17β-эстрадиола, но при потреблении предшественников с пищей, достигающем от 10 до 100 мг в день, циркулирующие концентрации могут достигать микромолярных уровней, следовательно, влияние может быть значительным [55].Интересно, что фитоэстрогены обладают гораздо более высоким сродством к ERβ по сравнению с ERα, что может иметь эволюционное значение, поскольку эстроген-зависимый рак молочной железы обычно опосредуется ERα, в то время как другие физиологические действия опосредуются ERβ. Следует отметить, что изофлавоны имеют в несколько раз большее сродство к ERβ, чем к ERα, поэтому можно ожидать некоторой избирательности физиологической активности среди фитоэстрогенов [56]. Однако некоторые тройные негативные опухоли молочной железы демонстрируют активный ERβ [57].
Некоторые фитоэстрогены нарушают биосинтез стероидных гормонов; например, дегидрогеназы 17β-гидроксистероидов, 3β-гидроксистероидов и ароматазы снижают выработку тестостерона и эстрадиола [55].Они также влияют на биодоступность, ингибируя сульфатазу и сульфотрансферазу [55]. Полифенолы, такие как изофлавоны и лигнаны, присутствуют в растительных источниках в виде гликозидов с метилированными гидроксильными группами [55]. Кишечные бактерии, такие как Eubacterium limosum, деметилируют гидроксильную группу, активируя эстрогенные соединения [55]. Биотрансформацию этих соединений в организме человека осуществляют Adlercreutzia equolifaciens, Eggerthella spp. и Slackia isoflavoniconvertens [55]. и ягоды [52].Эти лигнаны превращаются в такие соединения, как энтеродиол, энтеролактон, сезамин, матаирезинол и пинорезинол [27,32]. Энтеролактон образуется под действием Eggerthella [55]. Дебаты о влиянии этих соединений на риск ER-положительного рака молочной железы ведутся более десяти лет. Было высказано предположение, что фитоэстрогены могут модулировать метаболизм эстрогенов, ингибируя ароматазу, тем самым снижая уровень циркулирующих эстрогенов [32].
Также считается, что он конкурентно связывается с ER из-за его структурного сходства с эстрогеном, что снижает его биодоступность [32].Было проведено множество исследований для изучения уровней этих соединений в сыворотке крови у разных групп населения [27,32,51,52]. Большинство этих исследований были безрезультатными из-за огромных различий в уровнях этих соединений в сыворотке, а также заметных различий в пищевых привычках. Более того, фактический источник этих соединений и метагеномный состав индивидуумов никогда не учитывались. Комплексный метаанализ, сравнивающий эпидемиологические данные всех популяционных исследований, выявил небольшое снижение риска рака молочной железы у женщин в постменопаузе с высоким уровнем энтеролигнанов в сыворотке [52].Тем не менее, некоторые клеточные исследования с использованием ER-положительных клеточных линий предполагают эстрогенный эффект, который может привести к увеличению риска рака молочной железы. Мы проанализировали один такой набор данных микрочипов (GSE86565), доступный на NCBI-GEO, где клетки MCF7 обрабатывали энтеродиолом, энтеролактоном и их предшественниками сеамином, матаирезинолом и пинорезинолом [32].
Было исследовано изменение уровня экспрессии генов, чувствительных к эстрогену (рис. 3). Энтеролактон является наиболее распространенным фитоэстрогеном. Подобно эстрогену, энтеролактон, синтезируемый в кишечнике в результате метаболизма пищевых лигнанов микробами, может всасываться в кишечнике и попадать в энтерогепатическую циркуляцию [58].Было обнаружено, что антибиотики ингибируют синтез энтеролактона примерно на год, что позволяет предположить, что микробиом кишечника, измененный внешними агентами, может восстановиться в течение года или дольше [41]. Было проведено множество исследований для изучения роли энтеролигнанов в заболеваемости и прогрессировании рака. [58]. В то время как некоторые эпидемиологические исследования проецируют их как потенциальные антипролиферативные агенты при раке молочной железы [59], многие другие сообщения говорят об обратном. В недавнем метаанализе было обнаружено, что сывороточный энтеролактон защищает от рака молочной железы, преимущественно у женщин в постменопаузе [60].
Точно так же в экспериментах на животных синтез энтеролигнанов из пищевых лигнанов кишечными микробами оказывает защитное действие на рак молочной железы [61]. Но энтеролигнаны также могут активировать механизм транскрипции рецепторов эстрогена [62]. Поперечное маммографическое исследование показало, что уровень энтеролактона слегка положительно коррелирует с увеличением маммографической плотности (p62). Интересно, что уровень энтеролактона в сыворотке обратно пропорционален ожирению, еще одному фактору риска рака молочной железы [63].Таким образом, ожирение и высокий ИМТ отрицательно пропорциональны разнообразию микробиома желудочно-кишечного тракта, поэтому чем ниже ИМТ, тем выше скорость микробного метаболизма [38]. У женщин в постменопаузе процентное содержание жира в организме пропорционально уровням исходных эстрогенов и соотношению метаболитов 2-гидроксилирования [21], что свидетельствует о сниженной активности микробного брожения в кишечнике и, следовательно, о более низком микробном разнообразии.
Диета, богатая жирами, вызывает повышенную выработку желчи, что способствует ее перевариванию. Желчные кислоты метаболизируются кишечными микробами с образованием вторичных желчных кислот (ВЖК), которые считаются мощными сигнальными молекулами.SBA способствуют чрезмерному росту таких видов Proteobacteria, как E. coli, Klebsiella, Enterobacter и Citrobacter [9]. Известно, что все эти микробы кодируют бета-глюкуронидазы, способные деконъюгировать эстрогены, тем самым увеличивая эстрогенную нагрузку [9]. терапевтические мишени. Известно, что при ER-положительном раке молочной железы рецептор андрогена (AR) и андрогенные ферменты противодействуют ERα, подавляя прогрессирование карциномы.AR также может играть важную роль в подтипе люминального андрогенного рецептора (LAR) тройного негативного рака молочной железы. Считается, что эти стероиды способствуют активации стромы, необходимой для прогрессирования рака молочной железы [64]. Ни альтернативные стероиды, ни их связь с микробиомом подробно не изучались, однако, учитывая общую роль микробиома в метаболизме стероидов, это может иметь значение в контексте прогрессирования рака молочной железы [65].
6. Фитоэстрогены: быть или не быть эстрогенными
Структурное сходство между фитоэстрогенами и эстрогенами было обнаружено в 1980-х годах [66], и считалось, что конкурентное связывание этих структурно сходных соединений с рецепторами эстрогена отвечает за их эстрогенные/антиэстрогенные эффекты. который варьируется в зависимости от клеточных линий [66].Еще в 1987 г. Welshons et al. сообщили, что энтеролактон (ЭНЛ) индуцировал пролиферацию ERα-положительных клеточных линий рака молочной железы MCF7 и T47D в концентрации 1 мкМ [67]. В 1999 году Ван и соавт. показали, что 10 мкМ ЭНЛ усиливали синтез ДНК, индуцируемый эстрогеном, но ингибировали его при более высоких концентрациях, что указывает на дозозависимые эффекты в присутствии эстрогена [68]. Точно так же Мусави и соавт. продемонстрировали, что ENL индуцирует пролиферацию в клетках MCF7 при концентрациях в диапазоне от 0,5 мкмоль/л до 2 мкмоль/л, но ингибирующий эффект наблюдается при 10 мкмоль/л ENL.ЭНЛ-индуцированная пролиферация была обращена вспять в присутствии эстрогена [69].
Совсем недавно Potier и группа продемонстрировали дифференциальную трансактивацию ERα энтеродиолом (END) и энтеролактоном (ENL) в клетках рака молочной железы [70]. Они показали, что END индуцирует транскрипционную активность ERα посредством трансактивации AF-1 и AF-2, в то время как ENL функционирует в основном посредством трансактивации AF-2 и более эффективно активирует ERβ [70]. Эти результаты свидетельствуют о том, что эффект END на рак молочной железы аналогичен действию эстрогена в концентрациях, в 2-3 раза превышающих E2 [70].Однако такие высокие циркулирующие концентрации фитоэстрогенов легко достижимы с помощью диеты, богатой лигнаном, при нормальных физиологических условиях. В недавнем исследовании Zhu et al. сообщалось, что из всех энтеролигнанов и их предшественников только ENL индуцировал значительную пролиферацию клеток MCF7, сходную с эстрогеном, которая могла быть ингибирована ICI [32]. Используя ДНК-микрочип, они исследовали профили экспрессии генов в ответ на энтеролигнаны и их предшественники.
Сравнение уровней экспрессии гена, чувствительного к эстрогену, END и ENL показало высокий уровень сходства с эстрогеном [32].Они пришли к выводу, что хотя энтеролигнаны, а также их предшественники обладают эстрогенной активностью, только ЭНЛ функционально подобен эстрогену. Напротив, Briese и группа сообщили об ингибирующем действии лигнанов на ER-положительные (MCF7) и ER-отрицательные (BT20) клетки рака молочной железы [71], хотя концентрация используемых лигнанов была выше, чем в других исследованиях. Saberian и его коллеги сообщили, что при 100 мкМ как END, так и ENL снижают жизнеспособность клеток, в то время как ENL снижает активность теломеразы и ингибирует hTERT [72].Брукс и др. продемонстрировали, что как END, так и ENL ингибируют локальный биосинтез эстрогена в клетках MCF7. 10 мкМ END или ENL значительно уменьшали продукцию E1 (эстрона) посредством ароматизации, в то время как 50 мкМ ENL ингибировали превращение E1 в E2 посредством 17β-гидроксистероиддегидрогеназы [73]. В целом, различные исследования дали противоречивые результаты в отношении биологической активности фитоэстрогенов при раке молочной железы, что побудило нас вернуться к этому вопросу.
7. В поисках ответов: являются ли энтеродиол и энтеролактон эстрогенными?
Стремясь понять связь между микробиомом и эстрогеном и ее влияние на риск развития рака молочной железы, мы решили исследовать функциональное влияние энтеролигнанов на клетки рака молочной железы с положительной реакцией на эстрогеновые рецепторы.Современные знания о роли энтеролигнанов и других фитоэстрогенов в развитии рака молочной железы противоречивы, но мы должны понимать, что влияние энтеролигнанов может быть контекстно-зависимым и неоднородным. Мы предполагаем, что энтеролигнаны являются сильнодействующими эстрогенными соединениями, однако их циркулирующие уровни могут сильно различаться в зависимости от пищевых привычек, возраста, менструального статуса и, что наиболее важно, от состава микробиома кишечника. Кроме того, уровни энтеролигнанов меняются на протяжении всей жизни, и только длительное воздействие высоких уровней этих соединений может привести к значительным биологическим последствиям.
Тканевые специфические эффекты могут снова варьироваться в зависимости от общей биодоступности эстрогена и метаболической эффективности. Мы использовали подходы in silico для прогнозирования потенциальных мишеней энтеродиола (END) и энтеролактона (ENL) и их эффективности связывания с рецептором эстрогена (ER) с последующими функциональными анализами in vitro для оценки их воздействия на ER-положительные клетки рака молочной железы.
6A-C). Интересно, что стимулирующий рост эффект END и ENL был очевиден в отсутствие эстрогена (рис. 6A-C), тогда как умеренное ингибирование наблюдалось, когда END и ENL использовались в сочетании со 100 нМ E2 (рис. 6D, E), что позволяет предположить, что конкуренция за сайт связывания лиганда в присутствии Е2 сводит на нет их эстрогенную активность.Лечение END и ENL стимулировало клоногенность и образование колоний клеток рака молочной железы на мягком агаре (рис. 6F, G). Эти результаты показали, что клетки рака молочной железы, обработанные END и ENL, демонстрируют повышенную жизнеспособность клеток и клоногенный потенциал. Эстроген связывается с рецептором эстрогена, запуская каскад сигнальных событий, что приводит к увеличению экспрессии E2-чувствительных генов. Клетки рака молочной железы, обработанные END и ENL, демонстрировали ядерную транслокацию рецептора эстрогена в течение 15 минут после лечения, которая уменьшалась через 6 часов после лечения. (Рисунок 7А,Б).Экспрессия ER наблюдалась в ядерных, а также в цитоплазматических лизатах клеток рака молочной железы, обработанных END и ENL, в течение 15 минут после обработки, в то время как клетки, обработанные E2, демонстрировали пик экспрессии в более поздние моменты времени (рис.
7C). Мы задались вопросом, вызывает ли лечение END и ENL какие-либо изменения в экспрессии канонических E2-чувствительных генов [74,75,76,77]. Действительно, клетки рака молочной железы, обработанные END и ENL, демонстрировали повышенную экспрессию E2-чувствительных генов (рис. 7D, E). Чтобы проверить влияние END и ENL на миграционный потенциал клеток рака молочной железы, мы провели анализы заживления ран и миграции сфероидов. (Рисунок 8А-С).Миграция сфероидов MCF7, T47D и BT474 была значительно увеличена при обработке ENL, в то время как обработка END индуцировала только значительную миграцию клеток BT474 (рис. 8A, B). В то время как контрольные клетки MCF7 мигрировали со скоростью 0,52 пикселя/ч, END индуцировал миграцию 1,1875 пикселя/ч, тогда как ENL приводил к миграции 1,56 пикселя/ч. Клетки положительного контроля, обработанные E2, мигрировали со скоростью 1,45 пикселя/ч (фиг. 8B). Затем мы попытались выяснить, влияют ли END и / или ENL на опосредованное тамоксифеном ингибирование роста клеток рака молочной железы.
Лечение тамоксифеном ингибировало жизнеспособность клеток и клоногенный рост ER-положительных клеток рака молочной железы, но совместное лечение END и ENL снижало цитотоксичность тамоксифена в клеточных линиях MCF7 и T47D (рис. 8D, E). В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что END и ENL связываются с ER и модулируют ER-сигнальный каскад и увеличивают рост рака молочной железы. END и ENL также влияют на терапевтическую эффективность тамоксифена. Органические и неорганические продукты: что означают этикетки? | Kansas Farm Food Connection
У меня есть признание: я не всегда покупаю органические продукты.
В то время как я отдаю предпочтение высококачественной пище для своей семьи (я даже сам выращиваю некоторые продукты и мясо), органические не всегда бывают.
Иногда в моем бюджете на еду не хватает денег, чтобы купить экологически чистые продукты премиум-класса.
Иногда у меня нет времени покупать что-то, что содержит более сложные инструкции по приготовлению, чем приготовление блюд, готовых к употреблению (MRE).
Признание таких фактов вслух — хороший способ избежать отвержения в моем хипстерском сообществе в Канзас-Сити.Это все равно, что войти в палатку возрождения южных баптистов с книгой Дарвина «О происхождении видов».
Безответственный, лицемерный, нездоровый, враждебный земле — вот лишь некоторые из прилагательных, которыми можно приветствовать мое не всегда органичное признание.
Я устал чувствовать себя виноватым, когда беру пакет замороженных овощей со скидкой без пометки «органический», поэтому я решил расследовать дебаты об органических и неорганических продуктах и узнать факты о здоровой пище.
Что именно означает «органический»?
Опрос Gallup 2014 года показал, что 45 процентов американцев активно «ищут органические продукты», при этом более половины населения моложе 30 лет признают такое потребительское поведение.Но сколько из этих ориентированных на органику потребителей знают, что на самом деле означает o-этикетка?
Еще в 1990 году Конгресс принял Закон о производстве органических продуктов питания (OFPA), чтобы помочь стандартизировать и регулировать практику органического земледелия.
OFPA уполномочил Министерство сельского хозяйства США (USDA) реализовать Национальную органическую программу (NOP), которая стандартизировала методы органического земледелия. Чтобы не запутаться в аббревиатурах правительственных агентств, но под руководством Министерства сельского хозяйства США, NOP за границей все, что связано с органическими продуктами, от того, как производятся органические продукты питания, до того, что маркируется как «органическое».
Органические фермеры, сертифицированные Министерством сельского хозяйства США, проходят процесс сертификации, за которым следуют ежегодные проверки для обеспечения соблюдения всех применимых органических стандартов. Производственные стандарты для производителей органической продукции зависят от того, что они производят, т. е. существуют разные правила для сельскохозяйственных культур и скота. Общий смысл того, что требуется от сертифицированных органических производителей, включает в себя методы сохранения и запрещенное использование синтетических продуктов и ГМО (для получения полного списка органических методов вы можете загрузить информационный бюллетень по органической практике Министерства сельского хозяйства США).
Органические продукты питания полезнее?
Так является ли «органическая» пища более здоровой и/или более питательной, чем неорганическая?
Хороший вопрос.
В 2012 году исследователи из Стэнфордского университета сравнили пользу для здоровья органических и неорганических продуктов, и результаты оказались неожиданными.
Не было обнаружено убедительных доказательств того, что органические продукты более питательны, чем неорганические. Исследование также пришло к выводу, что не все неорганические пищевые продукты содержат остатки синтетических продуктов, и что органически выращенные продукты не являются окончательно «более здоровым» выбором.
Есть ли разница между органическими и неорганическими продуктами?
Да — есть разница в способах производства органических и неорганических продуктов питания (помните Информационный бюллетень по органической практике Министерства сельского хозяйства США?).
Есть ли разница в уровне питания или доказанной пользе для здоровья между органическими и неорганическими продуктами?
Нет, согласно большинству научных исследований, принятых современным научным сообществом.
Несмотря на то, что методы производства и уровни остатков различаются между органическими и неорганическими пищевыми продуктами, преимущества для здоровья одного по сравнению с другим еще предстоит определить.
Заключение
Независимо от того, к какому продуктовому лагерю вы относитесь, мы все можем согласиться с тем, что сегодняшним потребителям важно знать, что они покупают. Если вы покупаете органические продукты питания из-за этикетки, вы должны знать, что вы получаете. Если вы стремитесь к неорганическим продуктам питания, вы не должны чувствовать вину за то, что «не становитесь здоровыми», поскольку такие популярные предубеждения не подтверждаются ведущими исследованиями.
Я все равно вырасту свою органическую моркови и наслаждаюсь укусом травяной говядины, но я делаю смущение, когда длительная неделя приводит к переполнению моей продуктовой тележки, переполненной неорганическими, микроволновыми пищевыми продуктами.
Дополнительные советы для умных покупок
.