Содержание

ВИЧ

Ви́рус иммунодефици́та челове́ка — ретровирус из рода лентивирусов, вызывающий медленно прогрессирующее[3] заболевание — ВИЧ-инфекцию[4][5].

Вирус поражает клетки иммунной системы, имеющие на своей поверхности рецепторы CD4: Т-хелперы, моноциты, макрофаги, клетки Лангерганса[6], дендритные клетки, клетки микроглии[7]. В результате работа иммунной системы угнетается и развивается синдром приобретённого иммунного дефицита (СПИД), организм больного теряет возможность защищаться от инфекций и опухолей, возникают вторичные оппортунистические заболевания, которые не характерны для людей с нормальным иммунным статусом[8][9][10][11][12][13]. Без врачебного вмешательства оппортунистические заболевания вызывают смерть пациента в среднем через 9—11 лет после заражения (в зависимости от подтипа вируса)[10]. При проведении антиретровирусной терапии продолжительность жизни пациента может быть продлена до 70—80 лет

[14][15][16].

Вакцина против ВИЧ неизвестна[17].

Открытие ВИЧ


Изображение, сделанное растровым электронным микроскопом. В центре кадра находится заражённый T-лимфоцит. Многочисленные светлые круглые выпуклости на его поверхности — места сборки и отпочковывания вирионов вируса иммунодефицита человека[18]


Изображение вирионов, полученное при помощи просвечивающего электронного микроскопа. Видно строение вирионов, внутри которых находится конусообразное ядро[19]

В 1981 году появились первые три научные статьи о необычных случаях развития пневмоцистной пневмонии и саркомы Капоши у гомосексуальных мужчин[20][21]. До этого оба заболевания встречались редко и были характерны для совершенно разных групп пациентов: саркомой Капоши в основном болели пожилые мужчины средиземноморского происхождения, а пневмоцистной пневмонией — пациенты с лейкозом после интенсивной химиотерапии. Появление этих заболеваний, свидетельствующих о тяжёлом иммунодефицитном состоянии, у молодых людей, не входящих в соответствующие группы риска, наблюдалось впервые[21]. Затем обнаружили такие же симптомы среди наркопотребителей, больных гемофилией A[22] и гаитян[23][24]. Наиболее значимым было обнаружение снижения соотношения CD4+/CD8+-клеток в результате относительного и/или абсолютного уменьшения количества CD4+-лимфоцитов в сочетании с увеличением количества CD8+-лимфоцитов[21][25][26].

В июле 1982 года для обозначения этого состояния был предложен термин синдром приобретённого иммунного дефицита (СПИД, AIDS)[27]. В сентябре 1982 года СПИДу было дано полноценное определение как нозологической форме на основании наблюдения ряда оппортунистических инфекций у четырёх групп пациентов, указанных выше[21][28].

В период с 1981 по 1984 год вышло несколько работ, связывающих вероятность развития СПИДа с анальным сексом или с влиянием наркотиков[29][30][31][32][33][34]. Параллельно велись работы над гипотезой о возможной инфекционной природе СПИДа.

Вирус иммунодефицита человека независимо открыли в 1983 году в двух лабораториях: Институте Пастера во Франции под руководством Люка Монтанье и Национальном институте рака в США под руководством Роберта Галло. Результаты исследований, в которых из тканей пациентов с симптомами СПИДа впервые удалось выделить новый ретровирус, были опубликованы 20 мая 1983 года в журнале Science[35][36]. В этих же работах выделенный из больных СПИДом вирус был впервые успешно размножен в культивируемых Т-лимфоцитах. Французская группа исследователей показала, что серологически этот вирус отличается от HTLV-I, и назвала его LAV («вирус, ассоциированный с лимфаденопатией»), а американская группа назвала его HTLV-III, ошибочно отнеся к группе HTLV-вирусов. Исследователи выдвинули предположение, что вирус может вызывать синдром приобретённого иммунного дефицита[21].

В 1986 году было обнаружено, что вирусы, открытые в 1983 французскими и американскими исследователями, генетически идентичны. Первоначальные названия вирусов были упразднены и предложено одно общее название — вирус иммунодефицита человека[37]. В 2008 году Люк Монтанье и Франсуаза Барр-Синусси были удостоены Нобелевской премии в области физиологии или медицины «за открытие вируса иммунодефицита человека»[38].

ВИЧ-инфекция

Инфицирование

Основная статья: Инфицирование вирусом иммунодефицита человека

Вирус может передаваться через прямой контакт повреждённой слизистой оболочки или повреждённой кожи здорового человека с биологическими жидкостями заражённого человека: кровью, предсеменной жидкостью (выделяющейся на протяжении всего полового акта), спермой, секретом влагалища и грудным молоком. Передача вируса может происходить при незащищённом анальном, вагинальном или оральном сексе[39][40].

Интактная, неповреждённая кожа — является эффективным барьером для инфекции, так как в коже отсутствуют клетки, которые могут быть заражены ВИЧ. Для успешной инфекции требуется прямой контакт с кровеносной системой или с мембранами клеток слизистых оболочек. Слизистые оболочки половых органов и прямой кишки часто получают незначительные повреждения при половом акте, через которые вирус может проникать в кровь. Такие повреждения чаще возникают при наличии заболеваний, передающихся половых путём, например, в случае герпеса. С другой стороны, заражение возможно и в случае неповреждённой слизистой оболочки, так как последние содержат значительное количество дендритных клеток (в том числе, клеток Лангерганса), которые могут играть роль «переносчиков» вирусных частиц в лимфатические узлы. Поэтому особенно опасной формой полового акта для принимающего партнёра является незащищённый анальный секс, так как при этой форме возникает наибольшее число мелких и крупных повреждений[41][42].

Передача вируса происходит с большей вероятностью при использовании заражённых игл и шприцев (особенно потребителями инъекционных наркотиков), а также при переливании крови (в случае нарушения медицинским персоналом установленных процедур проверки донорской крови)[43]. Также передача вируса может произойти между матерью и ребёнком во время беременности, родов (заражение через кровь матери)[44][45] и при грудном вскармливании (причём как от заражённой матери к здоровому ребёнку через грудное молоко, так и от заражённого ребёнка к здоровой матери через покусывание груди во время кормления)[46].

Вирус не передаётся воздушно-капельным путём, бытовым путём, при соприкосновении с неповреждённой кожей, через укусы насекомых[47], слёзы[48] и слюну (из-за того, что концентрация вирионов ВИЧ в этих жидкостях ниже инфицирующей дозы, а также из-за того, что слюна — агрессивная среда, разрушающая своими ферментами вирионы ВИЧ)[48].

Болезнь

Основная статья: ВИЧ-инфекция

Динамика количества CD4+-лимфоцитов и копий РНК вируса за период от момента инфицирования до терминальной стадии[49]                     количество CD4+лимфоцитов в 1 мкл крови
                     количество копий РНК вируса в 1 мл плазмы крови

В течении болезни выделяют три стадии: острую инфекцию, латентный период и терминальную стадию (СПИД) (см. иллюстрацию). В ходе развития ВИЧ-инфекции у одного и того же человека в результате мутаций возникают новые штаммы вируса, которые различаются по скорости воспроизведения и способности инфицировать[8][9]. Размножившись, вирусные частицы высвобождаются из поражённых клеток и внедряются в новые — цикл развития повторяется. Инфицированные вирусом Т-хелперы постепенно гибнут из-за разрушения вирусом, апоптоза или уничтожения Т-киллерами. В процессе развития ВИЧ-инфекции количество Т-хелперов (CD4+-клеток) снижается настолько, что организм уже не может противостоять возбудителям оппортунистических инфекций, которые неопасны или мало опасны для здоровых людей с нормально функционирующей иммунной системой. На терминальной стадии (СПИД), ослабленный организм поражают бактериальные, грибковые, вирусные и протозойные инфекции, а также опухоли[11][12][13]. В отсутствие антиретровирусной терапии смерть пациента наступает не в результате размножения вируса в CD4+-клетках, а по причине развития оппортунистических заболеваний (вторичных по отношению к ВИЧ-инфекции).

Эпидемиология

Основная статья: Эпидемиология ВИЧ-инфекции

По данным на 2011 год, в мире за всё время ВИЧ-инфекцией заболели 60 миллионов человек, из них: 25 миллионов умерли, а 35 миллионов живут с ВИЧ-инфекцией[50]. Более двух третей из них проживают в Африке к югу от пустыни Сахара[51]. Эпидемия началась здесь в конце 1970-х — начале 1980-х. Затем эпидемия перекинулась в США, Западную Европу и страны Южной Африки. Сегодня, за исключением стран Африки, быстрее всего вирус распространяется в Центральной Азии и Восточной Европе (в том числе в России). Эпидемическая ситуация в этих регионах сдерживалась до конца 1990-х, затем с 1999 по 2002 годы количество инфицированных почти утроилось — в основном за счёт инъекционных наркоманов. Значительно ниже среднего ВИЧ-инфекция распространена в Восточной Азии, Северной Африке и на Ближнем Востоке. В масштабе планеты эпидемическая ситуация стабилизировалась, количество новых случаев ВИЧ-инфекции снизилось с 3,5 миллионов в 1997 году до 2,7 миллионов в 2007 году[51]. По данным на конец 2015 года, в России 804 тысячи человек живут с ВИЧ-инфекцией, за период с 1986 по 2016 год умерло от разных причин 220 тысяч ВИЧ-инфицированных граждан России[52] (подробнее см. Статистика заболеваемости и смертности по России).

Диагностика

Основная статья: Тест на ВИЧ

Анализ крови позволяет обнаружить антитела к белкам вируса (ИФА), реакцию антител на белки вируса (вестерн-блот), РНК вируса (ОТ-ПЦР)[53]. Определение вирусной нагрузки (подсчёт количества копий РНК вируса в миллилитре плазмы крови) позволяет судить о стадии заболевания и эффективности лечения[54][55].

Обязательная проверка донорской крови в развитых странах в значительной степени сократила возможность передачи вируса при её использовании. Тестирование на ВИЧ беременных женщин позволяет своевременно начать приём лекарств и родить здорового ребёнка.

Существует мнение, что принудительное тестирование населения бесперспективно с точки зрения сдерживания эпидемии[56] и нарушает права человека[57]. В России проведение теста без согласия человека является незаконным[58], однако существуют ситуации, в которых предоставление результатов тестирования на ВИЧ является обязательным, но не насильственным (донорство, трудоустройство медицинских работников, для иностранных граждан, получающих разрешение на пребывание в РФ, в местах лишения свободы при наличии клинических показаний)[59].

Лечение

Основная статья: Высокоактивная антиретровирусная терапия

Из 35 миллионов человек, живущих с ВИЧ-инфекцией, часть остаётся в живых благодаря антиретровирусной терапии. В случае отсутствия антиретровирусной терапии ВИЧ-инфекции, смерть наступает в среднем через 9—11 лет после заражения[8][60]. При проведении антиретровирусной терапии продолжительность жизни пациента составляет 70—80 лет[14][15][16]. Антиретровирусные препараты мешают ВИЧ размножаться в клетках иммунной системы человека, блокируя внедрение вирионов в клетки и нарушая на разных этапах процесс сборки новых вирионов. Своевременно начатое лечение антиретровирусными препаратами в сотни раз снижает риск развития СПИДа и последующей смерти[61][62][63]. Антиретровирусные препараты у части пациентов вызывают побочные эффекты, в некоторых случаях даже требующие сменить схему лечения (набор принимаемых лекарств).

Терапию назначают при снижении иммунитета и/или высокой вирусной нагрузке. В случае, если число CD4+-лимфоцитов велико и вирусная нагрузка низкая, терапию не назначают. После назначения терапии лекарства нужно принимать ежедневно в одно и то же время и пожизненно, что создаёт неудобства для пациентов. Также следует учитывать высокую стоимость месячного курса лекарств. В 2014 году необходимые лекарства получали менее половины из 9,5 млн человек, нуждающихся в противовирусной терапии[64].

Также все беременные женщины с острой фазой ВИЧ-инфекции, должны начинать незамедлительную ВААРТ для предотвращения передачи ВИЧ плоду[65].

Согласно рекомендациям ВОЗ, ВААРТ следует незамедлительно начинать всем ВИЧ-инфицированным детям до полутора лет[66]. Начало терапии у детей, получивших ВИЧ от матери, в течение 3 месяцев после родов, снижает смертность на 75 %[67]. В отсутствие лечения, треть ВИЧ-инфицированных детей умирает в течение первого года жизни и 50 % в течение второго года. В случае, когда диагностика ВИЧ невозможна, лечение следует начинать в возрасте 9 месяцев, либо ранее, в случае появления симптомов[68].

По состоянию на февраль 2016 года было объявлено, что группе немецких учёных удалось полностью удалить тип ВИЧ-1 из живых клеток. Испытания проводились на клетках человека, вживлённых подопытным мышам. Испытания на людях должны проводиться в ближайшее время[69][70][71].

Классификация

Основная статья: Лентивирусы

Вирус иммунодефицита человека относят к семейству ретровирусов (Retroviridae), роду лентивирусов (Lentivirus). Название Lentivirus происходит от латинского слова lente — медленный. Такое название отражает одну из особенностей вирусов этой группы, а именно — медленную и неодинаковую скорость развития инфекционного процесса в макроорганизме. Для лентивирусов также характерен длительный инкубационный период[72].

Для вируса иммунодефицита человека характерна высокая частота генетических изменений, возникающих в процессе самовоспроизведения. Частота возникновения ошибок у ВИЧ составляет 10−3 — 10−4 ошибок на геном на цикл репликации, что на несколько порядков больше аналогичной величины у эукариот. Размер генома ВИЧ составляет примерно 104 нуклеотидов. Из этого следует, что практически каждый дочерний геном хотя бы на один нуклеотид отличается от своего предшественника. В современной классификации различают два основных вида ВИЧ — ВИЧ-1 и ВИЧ-2. Эти вирусы предположительно возникли в результате независимой передачи людям SIV (вируса иммунодефицита обезьян) шимпанзе и мангабеев соответственно[73].

И ВИЧ-1, и ВИЧ-2 способны вызывать серьёзный иммунодефицит, однако клиническое течение болезни несколько различается. Известно, что ВИЧ-2 менее патогенен и передаётся с меньшей вероятностью, чем ВИЧ-1. Вероятно, это связано с тем, что ВИЧ-2-инфекция характеризуется более низким числом вирусных частиц на миллилитр крови. Отмечено, что инфекция ВИЧ-2 обеспечивает носителю небольшую защиту от заражения ВИЧ-1. Однако описаны случаи двойной инфекции, причём заражение может происходить в любом порядке. Инфекция ВИЧ-2 реже заканчивается развитием СПИДа. Есть сведения о несколько большей частоте развития саркомы Капоши, кандидоза ротовой полости и хронической лихорадки при ВИЧ-1/СПИДе. При ВИЧ-2/СПИДе чаще развивается энцефалит, хроническая или бактериальная диарея, серьёзные цитомегаловирусные инфекции и холангит[73]. К роду Lentivirus также относят виды, вызывающие схожие заболевания у обезьян, кошек, лошадей, овец и т. д.[8][74][75].

ВИЧ-1

ВИЧ-1 описан в 1983 году и является наиболее распространённым и патогенным видом ВИЧ[76]. Глобальная эпидемия ВИЧ-инфекции главным образом обусловлена распространением ВИЧ-1. В подавляющем большинстве случаев, если не оговорено иначе, под ВИЧ подразумевают ВИЧ-1[77].

Вид ВИЧ-1 классифицируют на главную группу М и несколько побочных групп. Считается, что группы M, N, O, P образовались в результате независимых случаев передачи SIV от обезьяны к человеку, и последующей мутации вируса до ВИЧ[78].

  • Вирусы группы М (англ. Main — основная) являются причиной более 90 % случаев ВИЧ-инфекции. Группу М классифицируют на несколько клад, называемых подтипами, также обозначаемых буквами:
    • Подтип A широко распространён, например, в Западной Африке и России[79];
    • Подтип B доминирует в Европе, Северной Америке, Южной Америке, Японии, Таиланде, Австралии[80];
    • Подтип C преобладает в Южной и Восточной Африке, Индии, Непале, некоторых частях Китая[80];
    • Подтип D обнаружен только в Восточной и Центральной Африке[80];
    • Подтип E не был выявлен в нерекомбинантном виде, лишь совместно с подтипом А как CRF01_AE в Юго-Восточной Азии[80];
    • Подтип F выявлен в Центральной Африке, Южной Америке и Восточной Европе[81];
    • Подтип G и рекомбинантная форма CRF02_AG выявлены в Африке и Центральной Европе[81];
    • Подтип H обнаружен только в Центральной Африке[81];
    • Подтип I был предложен для описания штамма-продукта множественной рекомбинации CRF04_cpx нескольких подтипов[82];
    • Подтип J распространён в Северной, Центральной и Западной Африке и странах Карибского бассейна[83];
    • Подтип K обнаружен только в Конго и Камеруне[81].
  • Группа O (англ. Outlier — непохожий) обнаружена в Центральной Африке и Западной Африке. Наиболее распространена в Камеруне, где в 1997 году более 2 % пациентов были заражены вирусом группы О[84] (около 100 000 человек, по данным на 2013 год)[85]. Вирусы этой группы не определялись ранними версиями тест-систем на ВИЧ-1, современные тесты определяют вирусы и группы О, и группы N[86].
  • Группа N (англ. Non-M, non-O — ни M, ни O) обозначает штаммы не М и не О, описана в 1998 году и обнаружена только в Камеруне. С 2006 года выявлены лишь 10 заражений вирусами группы N[87].
  • Группа P — в 2009 году была определена нуклеотидная последовательность РНК ВИЧ, значительно сходная с вирусом иммунодефицита обезьян, описанным у горилл (SIVgor), но не с SIV, характерным для шимпанзе (SIVcpz). Вирус был выделен из образцов, полученных от женщины камерунского происхождения, проживающей во Франции[88][89][90].

ВИЧ-2

ВИЧ-2 идентифицирован в 1986 году[91], генетически очень близок к T-лимфотропному вирусу SIVsmm мангабеев, и в меньшей степени к вирусу ВИЧ-1. Геномы ВИЧ-1 и ВИЧ-2 имеют гомологию консервативных генов gag и pol около 60 %, и до 45 % генов белков оболочки[92]. По состоянию на 2010 год, описано 8 групп ВИЧ-2, лишь группы A и B являются эпидемическими. Вирусы группы А распространены в Западной Африке, Анголе, Мозамбик, Бразилии, Индии и мало распространены в США и Европе[93][94]. Вирусы группы В распространены в Западной Африке[95][96].

Строение вириона


Строение вируса иммунодефицита человека

Вирионы ВИЧ имеют вид сферических частиц, диаметр которых составляет около 100—120 нанометров[97]. Это приблизительно в 60 раз меньше диаметра эритроцита[98]. В состав зрелых вирионов входит несколько тысяч белковых молекул различных типов.

Капсид зрелого вириона, состоящий из примерно 2000 молекул белка р24, имеет форму усечённого конуса[99].

Внутри капсида находится белково-нуклеиновый комплекс: две нити вирусной РНК, прочно связанные с белком нуклеокапсида p7, ферменты (обратная транскриптаза, протеаза, интеграза)[99]. С капсидом также ассоциированы белки Nef и Vif (7—20 молекул Vif на вирион). Внутри вириона (и, вероятнее всего, за пределами капсида) обнаружен белок Vpr[39]:8-11. Кроме того, с капсидом ВИЧ-1 (но не ВИЧ-2) связаны около 200 копий клеточного фермента пептидилпролилизомеразы A[en] (циклофилин А), необходимого для сборки вириона[100].

Капсид окружён оболочкой, образованной примерно 2000 молекул матриксного белка p17[99]. Матриксная оболочка в свою очередь окружена двуслойной липидной мембраной, являющейся наружной оболочкой вируса. Она образована молекулами фосфолипидов, захваченными вирусом во время его отпочковывания от клетки, в которой он сформировался[101]. В липидную мембрану встроены 72 гликопротеиновых комплекса Env, каждый из которых образован тремя молекулами трансмембранного гликопротеина gp41 (TM), служащего «якорем» комплекса, и тремя молекулами поверхностного гликопротеина gp120 (SU)[100]. С помощью белка gp120 вирус присоединяется к рецептору CD4 и корецептору, находящимся на поверхности Т-лимфоцитов человека. Стехиометрическое соотношение p24:gp120 в вирионе составляет 60—100:1[39]:11. При формировании наружной оболочки вируса также происходит захват некоторого количества мембранных белков клетки, в том числе человеческих лейкоцитарных антигенов (HLA) классов I и II и молекул адгезии[99][102].

Белки вириона интенсивно изучаются, поскольку являются мишенями разрабатываемых лекарств и вакцины против ВИЧ.

Функции важных структурных белков ВИЧ-1[99][102]

СокращениеОписаниеФункции
gp41 (TM, transmembrane)Трансмембранный гликопротеин массой 41 кДаРасполагается во внешнем слое липидной мембраны, играет роль «якоря», удерживающего молекулы белка gp120
gp120 (SU, surface)Гликопротеин массой 120 кДаНаружный белок вириона. Нековалентно связан с трансмембранным белком gp41. С одной молекулой gp41 связаны 3—5 молекул gp120. Способен связывать рецептор CD4. Играет важную роль в процессе проникновения вируса в клетку.
p24 (CA, capsid)Белок массой 24 кДаОбразует капсид вируса
p17 (MA, matrix)Матриксный белок массой 17 кДаОколо двух тысяч молекул этого белка образуют слой толщиной 5—7 нм, располагающийся между внешней оболочкой и капсидом вируса.
p7 (NC, nucleocapsid)Нуклеокапсидный белок массой 7 кДаВходит в состав капсида вируса. Образует комплекс с вирусной РНК.

Геном и кодируемые белки


Геном ВИЧ-1[99]

Генетический материал ВИЧ представлен двумя копиями положительно-смысловой (+)РНК[100]. Геном ВИЧ-1 имеет длину 9000 нуклеотидов. Концы генома представлены длинными концевыми повторами (англ. long terminal repeat, LTR), которые управляют продукцией новых вирусов и могут активироваться и белками вируса, и белками инфицированной клетки.

9 генов ВИЧ-1 кодируют, по крайней мере, 15 белков[103]. Ген pol кодирует ферменты: обратную транскриптазу (RT), интегразу (IN) и протеазу (PR). Ген gag кодирует полипротеин Gag/p55, расщепляемый вирусной протеазой до структурных белков p6, p7, p17, p24. Ген env кодирует белок gp160, расщепляемый клеточной эндопротеазой фурином на структурные белки gp41 и gp120[39]:8-12. Другие шесть генов — tat, rev, nef, vif, vpr, vpu (vpx у ВИЧ-2) — кодируют белки, отвечающие за способность ВИЧ-1 инфицировать клетки и производить новые копии вируса. Репликация ВИЧ-1 in vitro возможна без генов nef, vif, vpr, vpu, однако их продукты необходимы для полноценной инфекции in vivo[104][105][106].

Gag

Полипротеин-предшественник Gag/p55 синтезируется с полноразмерной геномной РНК (которая в данном случае служит в качестве мРНК) в процессе стандартной кэп-зависимой трансляции, но возможна и IRES-зависимая трансляция. Предшественники функциональных белков располагаются в составе полипротеина Gag/p55 в следующем порядке: p17…p24…p2…p7…p1…p6[39]:8 (р1 и р2 — соединительные пептиды; другие продукты расщепления Gag/p55 описаны выше). Нерасщеплённый протеазой Gag/p55 содержит три основных домена: домен мембранной локализации (М, membrane targeting), домен взаимодействия (I, interaction) и «поздний» домен (L, late). Домен М, расположенный внутри области p17/МА, миристилируется (присоединяются остатки миристиновой кислоты) и направляет Gag/p55 к плазматической мембране. Домен I, находящийся внутри области p7NC (NC, nucleocapsid), отвечает за межмолекулярные взаимодействия отдельных мономеров Gag/p55. Домен L, также локализованный в области p7NC, опосредует отпочковывание вирионов от плазматической мембраны; в этом процессе участвует также р6 область полипротеина Gag/p55[39]:8[107].

Vpu

Двумя важными функциями белка Vpu являются: 1) разрушение клеточного рецептора CD4 в эндоплазматическом ретикулуме путём привлечения убиквитинлигазных комплексов и 2) стимуляция выделения дочерних вирионов из клетки, путём инактивации интерферон-индуцируемого трансмембранного белка CD317/BST-2, получившего также название «tetherin» за его способность подавлять выделение вновь образовавшихся дочерних вирионов посредством их удержания на поверхности клетки[104][105][108][109][110][111].

Vpr

Белок Vpr необходим для репликации вируса в неделящихся клетках, в том числе макрофагах. Этот белок, наряду с другими клеточными и вирусными белками, активирует транскрипцию с использованием длинных концевых повторов генома ВИЧ в качестве промоторов. Белок Vpr играет важную роль в переносе вирусной ДНК в ядро и вызывает задержку деления клетки в периоде G2[112].

Vif

Белок Vif играет важную роль в поддержке репликации вируса. Vif индуцирует убиквитинилирование и деградацию клеточного антивирусного белка APOBEC3G, который вызывает деаминирование ДНК, приводящее к мутационным заменам G на A в вирусной ДНК, синтезируемой в ходе обратной транскрипции. Штаммы, лишённые Vif, не реплицируются в CD4+-лимфоцитах, некоторых линиях T-лимфоцитов и макрофагах. Эти штаммы способны проникать в клетки-мишени и начинать обратную транскрипцию, однако синтез вирусной ДНК остаётся незавершённым[112].

Nef

Белок Nef выполняет несколько функций. Он подавляет экспрессию молекул CD4 и HLA классов I и II на поверхности инфицированных клеток, и тем самым позволяет вирусу ускользать от атаки цитотоксических T-лимфоцитов и от распознавания CD4+-лимфоцитами. Белок Nef может также угнетать активацию T-лимфоцитов, связывая различные белки-компоненты систем внутриклеточной передачи сигнала[112].

У инфицированных вирусом иммунодефицита макак-резусов активная репликация вируса и прогрессирование болезни возможны только при интактном гене nef. Делеции гена nef были обнаружены в штаммах ВИЧ, выделенных у группы австралийцев с длительным непрогрессирующим течением инфекции[113]. Однако у части из них со временем появились признаки прогрессирования инфекции, в том числе снижение числа CD4+-лимфоцитов. Таким образом, хотя делеции гена nef и могут замедлять репликацию вируса, это не гарантирует полной невозможности прогрессирования заболевания[114].

Tat и Rev

Регуляторные белки Tat (транс-активатор) и Rev накапливаются в ядре клетки и связывают определённые участки вирусной РНК. Белок Tat имеет молекулярную массу около 14-15 кДа, связывает вторичную структуру геномной РНК вблизи 5′-нетранслируемой области[112][115]., активирует обратную транскрипцию геномной РНК ВИЧ, синтез вирусных мРНК, необходим для репликации вируса почти во всех культурах клеток, регулирует выход вирионов из заражённых клеток[112][115], нуждается в клеточном кофакторе — циклине T1. Белок Rev регулирует экспрессию белков вириона, связывает мРНК гена env в области RRE (англ. Rev response element) интрона, разделающего экзоны генов Tat и Rev[112][115]

Белки Tat и Rev стимулируют транскрипцию провирусной ДНК и транспорт РНК из ядра в цитоплазму, а также необходимы для трансляции. Белок Rev обеспечивает также транспорт компонентов вируса из ядра и переключение синтеза регуляторных белков вируса на синтез структурных[112].

Жизненный цикл

До проникновения в клетку-мишень

После попадания вирионов ВИЧ на поверхность и внутрь организма, вирусные частицы оказываются в различных по своей агрессивности биологических жидкостях.  Слюна и желудочный сок содержат ферменты, которые в бо́льшей степени разрушают вирионы ВИЧ, чем другие биологические жидкости (это не относится к младенцам первых месяцев жизни, у которых ещё не вырабатываются соответствующие ферменты пищеварения, из-за чего младенцы могут быть заражены через грудное молоко). Вирионы ВИЧ проникают в кровеносную и лимфатическую систему организма и перемещаются по организму в потоке крови и лимфы. Оказавшись рядом с CD4-клеткой, вирионы ВИЧ связывают рецептор CD4 на её плазматической мембране[116].

Проникновение в клетку и обратная транскрипция

Механизм слияния вириона ВИЧ
и плазматической мембраны
Т-лимфоцита человека

1. Взаимодействие вирусного белка gp120 с клеточным рецептором CD4 (указано красной стрелкой)


2. Конформационные изменения вирусного белка gp120 обеспечивают связывание с клеточным рецептором CCR5 (указано красной стрелкой)


3. Концевые участки вирусного белка gp41 проникают в плазматическую мембрану клетки (указано красной стрелкой)


4. Вирусный белок gp41 подвергается значительным конформационным изменениям (указано красной стрелкой), что приводит к сближению и слиянию мембран вириона и клетки

Вирусный гликопротеин gp120 прочно связывает рецептор CD4. В результате такого взаимодействия gp120 претерпевает конформационные изменения, которые позволяют ему также связать молекулу корецептораCXCR4 или CCR5 (экспрессируемых на поверхности Т-лимфоцитов, макрофагов, дендритных клеток и микроглии)[117][118]. В зависимости от способности связывать эти корецепторы, ВИЧ классифицируют на R5-тропные (связывают только корецептор CCR5), X4-тропные (связывают только корецептор CXCR4) и R5X4-тропные (могут взаимодействовать с обоими корецепторами) варианты[117]. При заражении, в основном, передаются R5-тропные и R5X4-тропные варианты[119]. Препараты, блокирующие корецепторы, могут быть эффективны против ВИЧ[120].

После описанных событий вирусный белок gp41 проникает в мембрану клетки и подвергается значительным конформационным изменениям, вследствие которых мембрана клетки и мембрана вириона ВИЧ сближаются друг с другом и затем сливаются. Вирусный белок gp41 очень важен для слияния мембран, поэтому его рассматривают в качестве мишени для разработки противовирусных препаратов.

После слияния мембран содержимое вириона проникает внутрь клетки. Внутри клетки вирусная РНК высвобождается из капсида. Затем под действием обратной транскриптазы происходит обратная транскрипция — процесс синтеза ДНК на основании информации в одноцепочечной геномной РНК вируса[121]. Большая часть лекарственных препаратов, одобренных для применения при ВИЧ-инфекции, направлена на нарушение работы обратной транскриптазы[8].

Транспорт вирусной ДНК в ядро и интеграция в геном

После завершения обратной транскрипции в CD4+-лимфоците вирусный геном представлен невстроенной ДНК. Для встраивания вирусной ДНК в геном клетки-хозяина и для образования новых вирусов необходимаактивация T-лимфоцитов. Активация CD4+-лимфоцитов происходит при их контакте с антигенпредставляющими клетками в лимфоидной ткани. Наличие вирусов на поверхности фолликулярных дендритных клеток и присутствие провоспалительных цитокинов (ИЛ-1, ИЛ-6 и ФНОα) способствуют размножению ВИЧ в инфицированных клетках. Именно поэтому лимфоидная ткань служит самой благоприятной средой для репликации ВИЧ[122].

Синтезированная вирусная ДНК транспортируется внутрь ядра клетки в составе пре-интеграционного комплекса, в который также входят белки ВИЧ p17/MA, Nef и интеграза[123]. Далее вирусная ДНК встраивается в хромосому активированного T-лимфоцита под действием интегразы. Несколько препаратов, ингибирующих интегразу, широко используются в современной комплексной антиретровирусной терапии. Вирусная ДНК, встроившаяся в хромосому клетки, называется провирусом[8].

Транскрипция, сплайсинг, транспорт РНК из ядра в цитоплазму и трансляция

В ядре клеточная РНК-полимераза синтезирует предшественник вирусных информационных РНК (мРНК), длина которого равна длине геномной РНК ВИЧ-1. Этот предшественник мРНК подвергается 5′-концевому кэпированию и 3′-концевому полиаденилированию. Кроме того, предшественник мРНК подвергается сплайсингу, в результате которого образуются более 40 разных мРНК, которые можно разделить на 3 класса[124]:

  1. несплайсированная РНК длиной около 9.3 kb — далее используется в качестве мРНК для синтеза белков Gag и Gag-Pol, а также в качестве геномной РНК;
  2. неполностью сплайсированные РНК размером около 4 kb — используются как мРНК для синтеза белков Vif, Vpr, Tat, Vpu и Env;
  3. полностью сплайсированные РНК размером около 2 kb — используются как мРНК для синтеза белков Vpr, Tat, Rev и Nef.

На ранней стадии экспрессии генов, в отсутствие белка Rev, несплайсированная и неполностью сплайсированные РНК ВИЧ-1 нестабильны и быстро разрушаются в ядре. В то же время, полностью сплайсированные мРНК ВИЧ-1 являются стабильными и транспортируются из ядра в цитоплазму[124]. В цитоплазме с помощью рибосом происходит процесс трансляции — биосинтез белка из аминокислот по заданной матрице на основе генетической информации, содержащейся в мРНК. Синтезированный в цитоплазме белок Rev транспортируется в ядро, где связывается с областью RRE несплайсированной и неполностью сплайсированных РНК, что стабилизирует эти РНК. Кроме того, Rev взаимодействует с клеточным белком CRM1 (экспортин 1), и это взаимодействие стимулирует транспорт несплайсированной и неполностью сплайсированных РНК из ядра в цитоплазму, где происходит синтез закодированных в них белков[124].

Сборка и отпочковывание вирионов

Геномная РНК вируса, а также вирусные белки транспортируются к местам сборки вирионов — к мембране. Вирионы первоначально формируются из полипротеинов-предшественников структурных белков и ферментов и на этой стадии не являются инфекционными. В ходе созревания вирусной частицы вирусная протеаза расщепляет белки-предшественники до функциональных компонентов[8]. Несколько одобренных противовирусных препаратов ингибируют работу протеазы и препятствуют формированию зрелых вирионов[8].

Новые вирусные частицы отпочковываются от поверхности клетки, захватывая часть её мембраны, и выходят в кровяное русло, а клетка хозяина, несущая рецептор CD4, погибает[125][126]. Недавние исследования показали, что процесс отпочковывания вирионов может быть более сложным, чем считалось ранее. Так было обнаружено, что благодаря взаимодействию белка Gag с компонентами клетки вирионы накапливаются в особых внутриклеточных мультивезикулярных тельцах, которые обычно служат для экспорта белков. Таким образом вирусные частицы высвобождаются из клетки, эксплуатируя её собственную систему транспорта макромолекул[8].

Распространение по организму

Только что выделившийся из зараженного лимфоцита вирион ВИЧ в плазме крови живёт в среднем около 8 часов[116]. Продолжительность полужизни (время, за которое погибает 50 % вирионов ВИЧ) в плазме крови составляет примерно 6 часов[116]. В остальных средах продолжительность полужизни вирионов ВИЧ на порядки меньше[127].

В период острой фазы ВИЧ-инфекции отсутствие специфического иммунного ответа позволяет вирусу активно реплицироваться и достигать высоких концентраций в крови. Вирус заселяет органы лимфатической системы, CD4+-лимфоциты, макрофаги, а также другие клетки: альвеолярные макрофаги лёгких, клетки Лангерганса, фолликулярные дендритные клетки лимфатических узлов, клетки олигодендроглии и астроциты мозга и эпителиальные клетки кишки[128][129]. В лимфоидной ткани ВИЧ размножается на протяжении всего заболевания, поражая макрофаги, активированные и покоящиеся CD4+-лимфоциты и фолликулярные дендритные клетки[130][131]. Количество клеток, содержащих провирусную ДНК, в лимфоидной ткани в 5—10 раз выше, чем среди клеток крови, а репликация ВИЧ в лимфоидной ткани на 1—2 порядка выше, чем в крови. Основным клеточным резервуаром ВИЧ являются CD4+-Т-лимфоциты иммунологической памяти[132].

Для активации CD8+-лимфоцитов и образования антиген-специфических цитотоксических T-лимфоцитов необходима презентация пептидного антигена в комплексе с человеческим лейкоцитарным антигеном класса I. Дендритные клетки, необходимые для начала первичных антиген-специфичных реакций, захватывают антигены, перерабатывают и переносят их на свою поверхность, где эти антигены в комплексе с дополнительными стимулирующими молекулами активируют T-лимфоциты. Заражённые клетки часто не выделяют дополнительных стимулирующих молекул и поэтому не способны вызвать активацию достаточного числа B- и T-лимфоцитов, функция которых зависит от дендритных клеток[122].

На 2015 год ВИЧ-инфекция остаётся неизлечимым заболеванием, так как геном вируса интегрируется в хромосомы клеток и может реактивироваться даже после курса антиретровирусной терапии. В настоящее время идёт поиск безопасных способов редактирования генома человека и исключения из него провирусной ДНК[133][134]. В 2014 году был предложен метод удаления генома ВИЧ-1 из заражённых клеток при помощи системы CRISPR/Cas9. С помощью этого метода исследователям удалось вырезать фрагмент провирусной ДНК, заключённый между 5′- и 3′-концевыми LTR-областями из хромосом заражённых клеток в культуре. Кроме того, этот метод оказался также эффективным для профилактики заражения неинфицированных клеток. Описанный подход может привести к разработке способа полного избавления от ВИЧ-инфекции[135][136].

Происхождение


Филогенетическое дерево вирусов:
HIV — вирус иммунодефицита человека
SIV — вирус иммунодефицита обезьян

Методом молекулярной филогении показано, что вирус иммунодефицита человека образовался в конце XIX или в начале XX века[137][138][139][140][141], скорее всего в 1920-х гг[142].

Оба типа вируса иммунодефицита человека ВИЧ-1 и ВИЧ-2 возникли в Западной и Центральной Африке южнее Сахары и передались от обезьян к людям в результате зоонозиса. ВИЧ-1 возник на юге Камеруна в результате эволюции эндемичного вируса иммунодефицита обезьян SIV-cpz, который заражает черномордых шимпанзе (Pan troglodytes troglodytes)[143][144]. ВИЧ-1, как полагают, перешёл видовой барьер по крайней мере трижды и породил три группы вирусов: M, N и О[145].

ВИЧ-2 возник на территории Западной Африки (от южного Сенегала до запада Берега Слоновой Кости) в результате эволюции вируса иммунодефицита обезьян SIV-smm, который заражает тёмно-коричневых мангабеев (Cercocebus atys) и узконосых обезьян[146].

Существует доказательство того, что охотники на диких животных (обезьян) или поставщики мяса в Западной и Центральной Африке подвергаются заражению вирусом иммунодефицита обезьян, причём вероятность заражения коррелирует с частотой взаимодействия с обезьянами и их мясом[147]. Однако вирус иммунодефицита обезьян — слабый вирус, и, как правило, подавляется иммунной системой человека в течение недели после заражения. Считается, что необходимо несколько передач вируса от человека к человеку в быстрой последовательности, чтобы вирусу хватило времени мутировать в ВИЧ[148]. Хотя передача вируса иммунодефицита обезьян от человека к человеку происходит редко, определённые социальные факторы могут существенно влиять на частоту заражений. Предполагают, что условия для распространения вируса были неблагоприятны в Африке до XX века. Сопоставление периодов ускоренной эволюции ВИЧ с социо-экономическими изменениями позволяет делать предположения о природе факторов, ускоривших распространение ВИО и ВИЧ.

Генетические исследования показывают, что последний общий предок ВИЧ-1 группы М существовал около 1910 года[149]. Сторонники этой даты связывают распространение ВИЧ с развитием колониализма в Африке и ростом больших городов. Эти факторы привели к таким социальным изменениям в обществе, как увеличение частоты беспорядочных половых связей, распространение проституции и заболеваний, передающихся половым путём (ЗППП)[150]. ЗППП, такие как сифилис, могут сопровождаться генитальными язвами. Исследования показывают, что вероятность передачи ВИЧ во время вагинального полового акта, достаточно низкая при обычных условиях, может быть увеличена в десятки, если не в сотни раз, если один из партнёров страдает от генитальных язв. О степени распространённости ЗППП в колониальных городах в начале 1900-х можно судить по следующим цифрам: в 1928 году по меньшей мере 45 % жительниц восточного Леопольдвиля (ныне — Киншаса, ранний центр распространения ВИЧ группы М) были проститутками, а в 1933 году около 15 % всех жителей этого же города были заражены одной из форм сифилиса. Ретроспективный анализ показал, что начало эпидемии ВИЧ-инфекции в Киншасе совпало с пиком эпидемии генитальных язв в середине 1930-х годов[150].

Альтернативная точка зрения гласит, что основным фактором, способствовавшим адаптации ВИЧ к людям и его распространению, была небезопасная медицинская практика в Африке в годы после Второй мировой войны, такая как использование нестерильных многоразовых шприцов при массовых вакцинациях, инъекциях антибиотиков и противомалярийных средств[96][151][152].

В результате ретроанализа образцов крови взятых после Второй мировой войны зафиксирован самый ранний документальный случай наличия ВИЧ в организме человека, кровь у которого взяли в 1959 году[153]. Вирус, возможно, присутствовал в Соединённых Штатах уже в 1966 году[154], но подавляющее большинство случаев заражения ВИЧ, идентифицированных за пределами тропической Африки, можно проследить до одного неустановленного человека, который заразился ВИЧ на Гаити, а затем перенёс инфекцию в США около 1969 года[155].

Естественная устойчивость к ВИЧ

См. также: CCR5 § Мутация CCR5-Δ32

Описаны случаи устойчивости людей к ВИЧ. Проникновение вируса в клетку иммунной системы связано с его взаимодействием с поверхностным рецептором, белком CCR5. Делеция (утеря участка гена) CCR5-дельта32 приводит к невосприимчивости её носителя к ВИЧ. Предполагается, что эта мутация возникла примерно две с половиной тысячи лет назад и со временем распространилась в Европе. Сейчас к ВИЧ фактически устойчив в среднем 1 % жителей Европы, 10—15 % европейцев имеют частичную сопротивляемость к ВИЧ[156]. Учёные Ливерпульского университета объясняют распространение мутации гена CCR5 тем, что она усиливает сопротивляемость к бубонной чуме.

Эпидемия «чёрной смерти» 1347 года (а в Скандинавии ещё и 1711 года) способствовала увеличению частоты этого генотипа в Европе.

См. также: Нонпрогрессор

Мутация в гене CCR2 также уменьшает шанс проникновения ВИЧ в клетку и приводит к задержке развития СПИДа. Существует небольшой процент ВИЧ-положительных людей (около 10 %), у которых СПИД не развивается в течение долгого времени. Их называют нонпрогрессорами[157][158].

Важный клеточный компонент защиты против ВИЧ — антивирусный белок APOBEC3G, который вызывает деаминирование ДНК, приводящее к мутационным заменам G на A в вирусной ДНК, синтезируемой в ходе обратной транскрипции. APOBEC3G инактивируется белком Vif ВИЧ-1, который вызывает его убиквитинилирование и деградацию[159].

Обнаружено, что одним из главных элементов антивирусной защиты человека и других приматов является белок TRIM5a, способный распознавать капсид вирусных частиц и препятствовать размножению вируса в клетке. TRIM5a человека и шимпанзе несколько отличаются друг от друга и эффективны против разных вирусов: этот белок защищает шимпанзе от ВИЧ и родственных ему вирусов, а человека — от вируса PtERV1

[160]. Обезьяны Нового Света, за исключением мирикины, которая имеет химерный ген TRIM5-CypA, устойчивостью к ВИЧ не обладают[161].

Другой важный элемент антивирусной защиты — интерферон-индуцируемый трансмембранный белок CD317/BST-2 (англ. bone marrow stromal antigen 2)[108][109][162]. CD317 — трансмембранный белок 2го типа с необычной топологией: он имеет трансмембранный домен рядом с N-концом и гликозилфосфатидилинозитол (GPI) на С-конце, между которыми расположен внеклеточный домен[163]. Показано, что CD317 непосредственно взаимодействует со зрелыми дочерними вирионами, «привязывая» их к поверхности клетки

[164]. Для объяснения механизма такого «привязывания» предложено несколько альтернативных моделей, которые, тем не менее, сходятся в следующем. Молекулы CD317 формируют параллельный гомодимер; один или два гомодимера связываются одновременно с одним вирионом и клеточной мембраной. При этом с мембраной вириона взаимодействуют либо оба мембранных «якоря» (трансмембранный домен и GPI) одной из молекул CD317, либо один из них[164]. Спектр активности CD317 включает, по крайней мере, четыре семейства вирусов: ретровирусы, филовирусы, аренавирусы и герпесвирусы[162]. Активность данного клеточного фактора ингибируется белками Vpu ВИЧ-1, Env ВИЧ-2 и SIV, Nef SIV, гликопротеином оболочки вируса Эбола и белком К5 герпесвируса саркомы Капоши[104][105][110][111][162][165]
[166]
. Обнаружен кофактор белка CD317 — клеточный белок ВСА2 (Breast cancer-associated gene 2; Rabring7, ZNF364, RNF115) — Е3-убиквитинлигаза класса RING. BCA2 усиливает интернализацию вирионов ВИЧ-1, «привязанных» белком CD317 к поверхности клетки, в CD63+ внутриклеточные везикулы с их последующим разрушением в лизосомах[167].

Материал из Википедии — свободной энциклопедии


ПРЕЗЕРВАТИВ — Новоуральский технологический институт НИЯУ МИФИ

Любой незащищенный контакт с партнером, ВИЧ-статус которого неизвестен,  может привести к инфицированию ВИЧ:

– у партнера в прошлом могли быть  незащищенные сексуальные отношения или опыт употребления наркотиков;
– партнер может не знать о том, что он живет с ВИЧ – инфекцией, поскольку «годами заболевание протекает бессимптомно».
– у партнера могли быть случайные незащищенные сексуальные связи, о которых он предпочитает умалчивать.

Только обоюдное знание ВИЧ- статуса и   сохранение верности  может стать причиной отказа  от презерватива.
Бытует мнение, что презерватив не защищает от инфицирования не только ВИЧ, но и ИППП. Сторонники этой точки зрения утверждают, что «поры латекса гораздо больше, чем вирус, и поэтому вирус все равно попадает в организм человека». На самом деле они правы лишь в одном: размер вируса ничтожно мал, измеряется в микронах, и меньше, чем поры латекса.  

Но вирус является паразитом клетки и без клетки не существует в живой природе. У ВИЧ-инфицированных людей вирус находится в клетках биологических жидкостей организма (кровь, сперма, вагинальный секрет, грудное молоко), а для жидкости презерватив непроницаем. Латекс, из которого сделан презерватив, надежно защищает от попадания вышеперечисленных биологических жидкостей на слизистые половых органов партнеров, а стало быть, и от попадания вируса. Вот почему использование презерватива – способ для снижения риска передачи ВИЧ, а также других инфекций, передающихся половым путем. 

Презерватив предотвращает передачу ВИЧ в 98% случаев, оставшиеся 2 % вероятности передачи относятся к   неправильному использованию презервативов или использованию низкокачественных презервативов. Если бы латекс не создавал непроницаемый барьер для вирусов и бактерий, то медики бы инфицировались при оказании хирургической и иной помощи различными вирусными инфекциями, так как медицинские перчатки делаются также из латекса, с таким же размером пор, что и у презервативов. 

Вирусолог сравнил возможности лечить коронавирус и ВИЧ

Коронавирус не относится к сильно изменчивым вирусам, в отличие от гепатита С, вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и гриппа, рассказал газете ВЗГЛЯД завкафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии Сеченовского университета, академик РАН Виталий Зверев, подчеркнув, что COVID-19 не является серьезной проблемой для лечения и создания различных препаратов от него.

В беседе с газетой ВЗГЛЯД ведущий научный сотрудник Института клинической экспериментальной медицины, профессор вирусологии Александр Чепурнов рассказал, что в мире на данный момент существует лишь один удачный пример лекарства против вирусного заболевания – это препарат против гепатита С, отмечая, что сам вирус был очень сложен как для лечения, так и для создания терапевтического препарата. Тем не менее, против других вирусных заболеваний, в том числе от коронавирусной инфекции, нетоксичного лекарства пока нет.  

«Коронавирус не относится к сильно изменчивым вирусам, поэтому его даже сравнивать ни с гепатитом С, ни с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), ни с гриппом я бы не стал. Для этих вирусов даже ввели понятие «квазивиды» – псевдовиды: когда вирус попадает в организм, он один, а когда из него выходит – другой. Коронавирус примерно в 30 раз медленнее мутирует, чем тот же вирус гриппа», – объясняет Зверев.


Соответственно, поскольку коронавирус не мутирует с той же скоростью, что и грипп, он не является серьезной проблемой для лечения и создания различных препаратов.

«А лекарства подходящего все еще нет, потому что это очень долгий процесс. Сам препарат можно синтезировать очень быстро, но для того, чтобы проверить его, требуются годы, ведь его необходимо помимо всего прочего еще и проверять на хроническую токсичность. Это же не вакцина, которая один раз применяется. Лекарство используется постоянно, влияет на все органы. Поэтому его нужно долго исследовать», – говорит академик.

Он отмечает, что регулярно публикуются научные статьи на тему того, что появляются различные химические соединения, которые действуют на различные белки, репродукцию коронавируса. В массы пока все это не выносится только потому, что прошло крайне мало времени.

Ранее вирусолог, профессор НИЦ эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи Анатолий Альштейн предположил, что Россия приобретет коллективный иммунитет от коронавирусной инфекции с помощью вакцинации в течение следующего года.


Смотрите ещё больше видео на YouTube-канале ВЗГЛЯД


Ссылка на публикацию: vz. ru

Установлена природа многофункциональности белка ВИЧ — Наука

ТАСС, 24 января. Биологи выяснили, каким образом один из белков вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) выполняет сразу три разных функции. Это поможет понять механизмы развития вирусных инфекций и побочных болезней, некоторые из которых связаны с эффектами отдельных вирусных белков. Результаты работы опубликовал Journal of Virology, кратко об этом пишет пресс-служба МГУ им. Ломоносова.

Жизнедеятельность вирусов невозможна вне клеток живых организмов, что накладывает ограничения на размер их частиц, геномов и, соответственно, белков. Это приводит к тому, что отдельные участки белков — домены — выполняют сразу несколько разнообразных функций.

«Такой эргономичный и минималистичный дизайн, когда один домен совмещает сразу несколько функций, на самом деле, намного сложнее реализовать, чем сделать несколько доменов с разными функциями. Кроме того, возникает вопрос о том, как такие многофункциональные домены могли возникнуть в ходе эволюции. Эту проблему мы решили изучить на примере основного домена Tat белка вируса иммунодефицита человека», — рассказал один из авторов работы Евгений Шеваль.

Основной домен Tat белка длиной в 9 аминокислот участвует в реализации трех разных функций. Первая, наиболее важная для вируса, заключается в регуляции синтеза вирусных РНК. Вторая функция — сигнал ядерной локализации и третья, похожая, — сигнал ядрышковой локализации. Если смысл второй функции понятен — именно в ядре Tat белок исполняет свою главную задачу, — то смысл третьей на настоящее время не выяснен. Как этот белок концентрируется в ядре и в ядрышке изучено слабо.

В ходе исследования, в котором принимали участие сотрудники МГУ, Института биоорганической химии РАН, Института Густава Русси (Франция) и Европейской молекулярно-биологической лаборатории (European Molecular Biology Laboratory, Германия), ученые пришли к выводу, что, вероятно, в ходе эволюции возник крайне специализированный белковый домен, функция которого состоит в активации синтеза вирусной РНК.

«Но из-за обогащенности положительно заряженными аминокислотами этот домен неизбежно начал выполнять и еще две функции: накопления белка в ядре и ядрышке. Причем, первая функция вирусу оказалась выгодной. Полезна ли вторая из этих функций — остается загадкой. Как бы то ни было, интеграция нескольких функций могла помогать вирусу приобретать новые функции без увеличения размера белков, а значит, и размера вирусных частиц», — добавил Шеваль.

ВИЧ «пробуждается» в зависимости от размера клеток хозяина. Если клетки слишком маленькие, вирус впадает в спячку и ждет, когда они подрастут или перестанут размножаться — Наука

Несмотря на то что лечить симптомы ВИЧ-инфекции мы умеем, полностью искоренить вирус, заразивший человека, пока не удается. Проблема в том, что в некоторых клетках вирусы впадают в латентное, «спящее», состояние и никак себя не проявляют. В такой форме они неуязвимы для стандартных методов лечения, которые блокируют внедрение вирусов в клетки или сборку их новых частиц. Поэтому, когда лечение заканчивается, вирусы могут выйти из спячки и вызвать новую инфекцию.

Ученые из Иллинойса исследовали процесс реактивации, то есть выхода из спячки, вируса иммунодефицита человека. Они встроили в геном вируса ген зеленого флуоресцентного белка и следили за тем, какие клетки и в каких условиях начинают светиться, то есть в каких случаях вирус просыпается и начинает синтезировать свои белки.

Выяснилось, что вирусы размножаются только в крупных клетках, а в мелких, наоборот, засыпают.

Пока непонятно, как именно вирус «узнает» о том, какого размера его клетка, и на основании чего именно делает свой выбор, однако это позволило исследователям предсказать пробуждение вирусов в клеточной культуре.

Кроме того, стратегия вируса зависит от фазы клеточного цикла. В процессе деления в клетке особенно активны системы репарации (починки) ДНК, чтобы заделывать повреждения, возникающие при копировании. Поэтому в делящейся клетке вирусам размножаться неудобно: они предпочитают молодые клетки в начале цикла, далекие от деления. Ученые действовали на культуру клеток препаратами, которые останавливали клеточный цикл в разных фазах. И чем раньше по ходу цикла клетка останавливалась, тем выше была вероятность пробуждения в ней вируса. Возможно, терапия ВИЧ нового поколения должна включать не только средства борьбы с вирусами, но и способы разбудить их через жизнь клетки хозяина.

 Полина Лосева

Биологи установили природу многофункциональности белка ВИЧ

Международная группа исследователей выяснила, каким образом Tat белок вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) выполняет сразу три разных функции, и установили возможные эволюционные механизмы возникновения этой многофункциональности. Подобные исследования помогают понять механизмы развития вирусных инфекций и побочных болезней, некоторые из которых связаны с эффектами отдельных вирусных белков. Работа проходила при поддержке Российского научного фонда, её результаты опубликованы в Journal of Virology.

Жизнедеятельность вирусов невозможна вне клеток живых организмов, что накладывает ограничения на размер их частиц, геномов и, соответственно, белков. Это приводит к тому, что отдельные участки белков – домены – выполняют сразу несколько разнообразных функций. «Такой эргономичный и минималистичный дизайн, когда один домен совмещает сразу несколько функций, на самом деле, намного сложнее реализовать, чем сделать несколько доменов с разными функциями. Кроме того, возникает вопрос о том, как такие многофункциональные домены могли возникнуть в ходе эволюции, – отмечает автор-корреспондент исследования, заведующий лабораторией ультраструктуры клеточного ядра НИИ ФХБ имени А.Н. Белозерского МГУ, профессор биологического факультета МГУ Евгений Шеваль. – Эту проблему мы решили изучить на примере основного домена Tat белка вируса иммунодефицита человека».

Основной домен Tat белка длиной в 9 аминокислот участвует в реализации трех разных функций. Первая, наиболее важная для вируса, заключается в регуляции синтеза вирусных РНК. Когда в ядре клетки производится вирусная РНК, то без участия Tat белка, получаются только короткие фрагменты, недостаточные для производства белков и сборки полноценных вирусов. Если же Tat белок присоединится к началу синтезирующейся РНК, её синтез происходит правильным образом. Вторая функция этого белка – сигнал ядерной локализации и третья, похожая, – сигнал ядрышковой локализации. Если смысл второй функции понятен – именно в ядре Tat белок исполняет свою главную задачу, – то смысл третьей на настоящее время не выяснен. Однако как этот белок концентрируется в ядре и в ядрышке изучено слабо.

Были сведения относительно сигнала ядерной локализации: Tat белок способен связываться своим основным доменом со специальными клеточными белками, импортинами, которые постоянно мигрируют из ядра в цитоплазму и обратно, перенося на себе другие молекулы. Основное место работы Tat белка – ядро, и эта функция для вируса крайне полезна, так как повышает эффективность сборки вирусных частиц.

Но длина основного домена Tat белка вдвое больше таковой у других известных сигналов ядерной локализации: 9 аминокислот против обычных 4. С импортинами у основного домена связывается действительно лишь 4 аминокислоты, и австралийские учёные в 2017 году определили ту самую последовательность, которая участвует в этом взаимодействии. Однако учёные МГУ попробовали последовательно заменить эти 9 аминокислот на другие. Результат был противоречащий австралийскому: аминокислоты из разных частей основного домена влияли на накопление Tat белка в ядре. «Для разрешения этого противоречия Артур Залевский из Института биоорганической химии РАН предложил использовать методы вычислительной биологии. Проведенные им расчеты показали, что с импортином могут взаимодействовать самые разные участки основного домена, то есть любой участок имеет возможность связаться с рецептором, – поясняет Евгений Шеваль. – После этого удалось обнаружить признаки такого множественного связывания в опубликованной структуре комплекса импортина с основным доменом. Таким образом, кажется, что накопление белка в ядре определяется множественными связываниями основного домена с импортинами. По-видимому, не все из таких положений могут быть одинаково эффективны, но в сумме они позволяют эффективно накапливать белок внутри ядра. Это позволило предположить, что сигнал ядерной локализации возник следующим образом. Для эволюции белка важно было присутствие домена, который будет взаимодействовать с РНК, что привело к появлению домена, обогащенного положительно заряженными аминокислотами. Но этот участок мог связываться разными, пусть и не всегда оптимальными способами с импортинами, и как следствие, белок автоматически приобретал способность накапливаться в ядре, что для вируса выгодно. То есть эта функция возникла автоматически, она интегрирована в структуру основного домена».

По результатам исследования, аналогичная ситуация могла произойти и с возникновением третьей функции Tat белка – сигналом ядрышковой локализации. Учёные МГУ выяснили, что его перемещение в ядрышко обусловлено электростатическим взаимодействием аминокислот основного домена с компонентами ядрышка. «Таким образом, можно предположить, что в ходе эволюции возник крайне специализированный белковый домен, функция которого состоит в активации синтеза вирусной РНК. Но из-за обогащенности положительно заряженными аминокислотами этот домен неизбежно начал выполнять и еще две функции: накопления белка в ядре и ядрышке. Причем, первая функция вирусу оказалась выгодной. Полезна ли вторая из этих функций — остается загадкой. Как бы то ни было, интеграция нескольких функций могла помогать вирусу приобретать новые функции без увеличения размера белков, а значит, и размера вирусных частиц», – подытоживает Евгений Шеваль.

В исследовании принимали участие студенты, аспиранты и сотрудники нескольких подразделений МГУ имени М.В. Ломоносова – Института физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского, биологического факультета и факультета биоинженерии и биоинформатики, – а также сотрудники Института биоорганической химии РАН, Института Густава Русси (Institut Gustave Roussy, Франция) и Европейской молекулярно-биологической лаборатории (European Molecular Biology Laboratory, Германия).

Профилактика ВИЧ-инфекции — Молодежная политика — Главная — Официальный сайт Туринского городского округа

 ПРОФИЛАКТИКА ВИЧ

ЭТО ПОЛЕЗНО ЗНАТЬ:

У человечества есть шансы победить ВИЧ

Эпидемия ВИЧ-инфекции в Туринском городском округе «взрослеет» 

Всё что нужно знать о СПИДе — Предупрежден, значит вооружен




АКЦИИ:

2021 год

Пройди экспресс-тест — узнай свой ВИЧ-статус! 11 сентября любой желающий может АНОНИМНО, БЫСТРО и БЕСПЛАТНО пройти экспресс-тестирование на ВИЧ.  — 10.09.2021

В Туринске прошли мероприятия по профилактике распространения ВИЧ-инфекции — 01.03.2021

2020 год

Подведены итоги конкурсов, посвященных Дню борьбы со СПИДом — 23.12.2020

Конкурс профилактических мероприятий, посвященных Дню борьбы со СПИДом в самом разгаре! — 02.12.2020

Выставка по профилактике ВИЧ-инфекции «Помнить. Знать. Жить» — 27.02.2020

Знай свой статус: профилактическое мероприятие в техникуме — 20.02.2020




ВИДЕОРОЛИКИ:   




ЭПИДСИТУАЦИЯ

Население России составляет более 146 миллионов человек. Из них живут с ВИЧ около 900 000 человек. Каждый час в России заражается 9 человек.

К числу регионов с самым высоким уровнем заболеваемости относятся: Кемеровская область, Пермский край, Иркутская, Новосибирская, Свердловская, Тюменская, Ульяновская, Челябинская, Самарская области, Красноярский край, Оренбургская область.

В 2020 году в Свердловской области зарегистрировано еще 67 149 новых случаев ВИЧ-инфекции.

Туринский городской округ в Восточном управленческом округе Свердловской области уже который год подряд занимает лидирующую позицию по количеству вновь выявленных случаев ВИЧ-инфекции, а так же по пораженности населения ВИЧ-инфекцией.

В 2020 году в Туринском городском округе зарегистрировано 24 новых случая ВИЧ-инфекции. Всего на территории района ВИЧ зарегистрирован у 578 человек.

Эпидситуация в Туринском районе 

Как правило, раньше в группе риска находились: наркоманы, люди с нетрадиционной сексуальной ориентацией (в основном в этой категории мужчины), «секс-работники», а также пациенты, уже зараженные венерическими заболеваниями. Важно помнить и знать, что к группе риска относятся доноры, врачи и медсестры, которые работают с ВИЧ-инфицированными пациентами.

 Существуют определенные группы людей, подвергающие себя большему риску заражения. Однако это вовсе не означает, что у человека, который ведет правильный образ жизни, не может появиться вирус иммунодефицита человека. Около 75% новых случаев заражения приходятся на половой путь передачи вируса, что свидетельствует о наличии генерализованной эпидемии. Специалисты заявляют, что в настоящее время группой риска становится все население.




ИСТОРИЯ

42 года назад были зарегистрированы первые случаи неизвестного заболевания у нескольких жителей Америки и Швеции, Танзании и Гаити, которое характеризовалось ослаблением работы иммунной системы. 39 лет назад стало известно, что все больные страдали от пневмоцистной пневмонии, нехарактерной для людей с нормальным иммунитетом. Самым ужасающим был тот факт, что буквально через полгода количество заболевших возросло от 5 до 115 человек, а алгоритм лечения и этиология заболевания оставались неизвестными.

Странным было то, что большинство заболевших были мужчинами, испытывающими любовь к мужчинам. А еще через год появились больные с похожими симптомами среди наркоманов и людей, допускающих случайные половые связи. Из-за угнетенной иммунной системы все они страдали от воспаления легких, саркомы Капоши, кандидоза, цитомегаловирусной и гепретической инфекции. К этому времени уже более 100 человек погибли.

38 лет назад неизвестное заболевание, угнетающее иммунитет, назвали СПИДом – синдромом приобретенного иммунодефицита человека. Ученые начали работу по открытию нового вируса – виновника заболевания, передающегося через кровь и половым путем.

В 1983 году одновременно два ученых из разных стран открыли новый вирус:

— Люк Монтанье (Франция) выделил ретровирус из лимфоузла больного;

— Роберт Галло (США) обнаружил возбудителя в крови пациента.

В 1985 году в США от заболевания умерла первая знаменитость – актер Рок Хадсон, который завещал 250 тысяч долларов для создания фонда по изучению ВИЧ. Через год заболевание насчитывалось уже у 4 миллионов человек.

В 1987 году заболевание получило современное название ВИРУС ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА. В этом же году первый случай заболевания зарегистрирован у жителя СССР, который пытались скрыть от общественности, ведь считалось, что это болезнь развратного Запада, а воспитанный советский человек никак не может ею заболеть. Умер этот первый больной в 1991 году от саркомы Капоши.

После открытия вируса медикам было интересно узнать причину распространения нового заболевания и откуда все началось. К этому моменту случаи заболевания были зарегистрированы уже на всех континентах, а к 1987 году умерших от СПИДа насчитывалось уже более 10 миллионов человек.

Первым континентом, где появился ВИЧ считается Африка, где к 2005 году 70% населения было заражено. Иммунодефицит прозвали «болезнью 4хГ», так как новое заболевание чаще выявляли у Гомосексуалистов, больных Гемофилией, Героиновых наркоманов и жителей Гаити.

Происхождение СПИДа и вопрос возникновения ВИЧ до сих пор остаются только предположениями и гипотезами (СПИД существовал всегда, заражение произошло от обезьяны, мутация вируса обезьян).

На сегодняшний день известно, что:

— вирус передается лишь тремя путями, и весьма неустойчив к факторам внешней среды;

— с 1996 года существует лечение больных вирусом иммунодефицита человека, которое снижает вирусную нагрузку и позволяет жить полноценно;

— несмотря на высокий уровень информированности населения, количество заболевших увеличивается, продолжается дискриминация людей, живущих с ВИЧ;

 

— наиболее распространен половой путь передачи инфекции, заболевание теперь может коснуться каждого независимо от половой ориентации, финансового благополучия, социального статуса, возраста и пола. 




КАК УБЕРЕЧЬСЯ ОТ ЗАРАЖЕНИЯ ВИЧ-ИНФЕКЦИЕЙ И ЗАЧЕМ СДАВАТЬ ТЕСТ?

По итогам 2019 года в России ежедневно выявляли по 214 случаев заражения ВИЧ-инфекцией (а есть еще те, кто не знает своего ВИЧ-статуса, или скрывает его). Вирус иммунодефицита человека очень опасен, но заражения можно избежать, соблюдая простые правила:

  • пользоваться презервативами при половых контактах;
  • пользоваться стерильными медицинскими инструментами.

Вероятность рождения здоровых детей у ВИЧ-инфицированных матерей значительно возрастает, если во время беременности женщины проходят лечение.

Зачем мне нужно знать, есть ли у меня ВИЧ?

  • Чтобы снять тревогу после ситуации, опасной в плане заражения ВИЧ;
  •  Чтобы не заразить близких и любимых Вам людей;
  • Чтобы быть более внимательным к своему здоровью, так как любое заболевание на фоне ВИЧ-инфекции протекает тяжелее и требует специального лечения. Особенно это относится к инфекциям, передающимся половым путем, вирусным гепатитам, туберкулезу и другим заболеваниям;
  • Чтобы вовремя начать применять специальные препараты, останавливающие развитие болезни, и не допустить развитие СПИДа;
  • Раннее выявление ВИЧ-инфекции позволяет своевременно начать лечение и значительно улучшить прогноз жизни ВИЧ-инфицированного человека.

Учитывая статистические данные, ВИЧ-инфекция в наши дни передается преимущественно половым путем. Именно поэтому эпидемия ВИЧ приобрела статус «генерализованной», то есть теперь заразиться могут все (независимо от пола, возраста, социального статуса, благосостояния и т.д.).




ЭТО НУЖНО ЗНАТЬ ДЛЯ ТОГО, ЧТОБЫ ЖИТЬ

Сегодня трудно встретить человека, который бы не слышал о ВИЧ и СПИДе. Большинство, правда, уверены в том, что эта проблема их не касается и никогда не коснется. Чтобы такая уверенность была оправданной, чтобы иметь возможность надежно защитить себя и своих близких, необходимо знать, что представляет собой ВИЧ-инфекция сегодня, в ХХI веке.

Итак, знакомьтесь:

ВИЧ – вирус иммунодефицита человека, один из самых опасных для человека вирусов. Он поражает иммунную систему, основная задача которой — защищать наш организм от инфекций.

Через несколько недель после инфицирования развивается симптоматика болезни — повышается температура, увеличиваются лимфатические узлы, появляются симптомы ОРВИ, высыпания на коже. Непонятное недомогание быстро проходит, а иногда слабовыраженные признаки болезни и вовсе остаются незамеченными.

Несколько лет вирус ведет «тихую» жизнь, не «досаждая» человеку. Но все это время он неустанно разрушает иммунную систему, размножаясь за счет ее основных клеток — лимфоцитов. Внешне ВИЧ-инфекция может проявляться только увеличением лимфатических узлов, либо слабовыраженными высыпаниями на коже.

ВИЧ, как и любой вирус, может воспроизводиться (размножаться) только внутри клетки-хозяина. В качестве клетки-хозяина ВИЧ использует клетки иммунной системы — Т-лимфоциты, в функции которых входит давать «сигнал опасности» при обнаружении вируса. Попав внутрь Т-лимфоцита, ВИЧ использует его биологические процессы в свою пользу, заставляя клетку создавать свои копии. Этот процесс истощает клетку-хозяина, и с течением времени большинство зараженных Т-лимфоцитов погибает. А новые копии вируса иммунодефицита внедряются в новые Т-лимфоциты, убивают их, и цикл повторяется. Чем меньше становится Т-лимфоцитов, тем больше ослабевает иммунная система организма, а затем организм уже не может противостоять возбудителям инфекций, с которыми обычно справляется здоровая иммунная система. Впоследствии это приводит к развитию СПИДа – продвинутой стадии ВИЧ-инфекции.

Кто подвержен риску ВИЧ-инфицирования?

В обществе распространено мнение, что основные «поставщики» ВИЧ — это люди, практикующие рискованный образ жизни: мужчины с нетрадиционной сексуальной ориентацией, потребители инъекционных наркотиков, лица, ведущие беспорядочную половую жизнь.

Однако за последние годы «лицо» ВИЧ-эпидемии сильно изменилось. Во всем мире, в том числе и в России, преобладающим стал гетеросексуальный путь передачи ВИЧ.

Потребителей инъекционных наркотиков и людей с нетрадиционной сексуальной ориентацией среди инфицированных становится все меньше, а вот зараженных при гетеросексуальных контактах — все больше. Угрожающе быстро растет количество ВИЧ-инфицированных женщин. Как следствие — резкое увеличение числа детей, рожденных ВИЧ-инфицированными матерями.

Как передается ВИЧ-инфекция?

У ВИЧ-инфицированного человека концентрация вируса наиболее высока в крови, лимфе, сперме, вагинальном секрете и грудном молоке. 

В слезах, слюне, поте, моче, рвотных массах, выделениях из носа ВИЧ содержится в очень низкой, недостаточной для заражения концентрации.




СУЩЕСТВУЕТ ЛИ ЛЕКАРСТВО ОТ СПИДа?

Средняя продолжительность жизни ВИЧ-инфицированного, при отсутствии лечения, составляет 5-10 лет. И хотя «чудодейственная» вакцина против ВИЧ и СПИДа пока не найдена, исследования в этом направлении идут быстрыми темпами и достаточно успешно. Уже сейчас существуют лекарственные препараты, которые подавляют размножение вируса, не дают болезни прогрессировать и не допускают перехода ВИЧ-инфекции в стадию СПИДа. Многие больные, начавшие лечение 15 лет назад, когда были открыты эти препараты, и сегодня чувствуют себя вполне работоспособными. Лечащие врачи дают весьма оптимистичные прогнозы по поводу продолжительности их жизни.

Как вы уже поняли, полностью вылечиться от ВИЧ-инфекции невозможно, но ВИЧ – не приговор. Воздействие вируса на организм возможно контролировать с помощью антиретровирусной терапии (АРВТ). Лечение замедляет развитие ВИЧ–инфекции и её переход в стадию СПИДа, снижая концентрацию вируса в крови до неопределяемого уровня. Благодаря этому снижается риск передачи вируса, а также уменьшается риск развития оппортунистических заболеваний, а иммунитет восстанавливается в достаточной степени, чтобы организм самостоятельно боролся с большинством заболеваний. С помощью той же АРВТ у ВИЧ-инфицированных матерей рождаются здоровые дети. Но здесь есть один нюанс – лечение от ВИЧ-инфекции нужно начинать на ранней стадии заболевания.

 




ПРАВОВЫЕ АСПЕКТЫ ВИЧ

Основной документ, определяющий правовой статус ВИЧ-инфицированных, это Федеральный закон № 38‑ФЗ «О предупреждении распространения в Российской Федерации заболевания, вызываемого вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекции)», принятый в 1995 году. Этот закон регламентирует государственные гарантии по диагностике и лечению, защиту прав ВИЧ-инфицированных и финансовое обеспечение профилактических мероприятий. Несмотря на солидный возраст закона, он соответствует современным гуманистическим принципам и незначительно отличается от европейского законодательства на ту же ­тему.

Кроме того, тема ВИЧ-инфекции отражена и в Уголовном кодексе Российской Федерации и предусматривает наказание за распространение заболевания. А также за распространение информации о ВИЧ-инфицированном медицинский работник несет уголовную ответственность.

 

С брошюрой «Юридические аспекты» можно ознакомилься здесь >>>


 



 БЫСТРОЕ ТЕСТИРОВАНИЕ НА ВИЧ можно пройти в ТУРИНСКОЙ ЦРБ

Свердловской области эпидемия ВИЧ-инфекции!  Почему стоит сдать анализы на ВИЧ?
Если в Вашей жизни были:

– хотя бы ОДИН контакт без презерватива
– хотя бы ОДИН опыт употребления наркотиков
– вирусный гепатит
– переливание крови до 2004 года
– пирсинг или татуировки.
Хотя бы ОДИН ответ «ДА» — 100% повод сдать кровь на ВИЧ.

ТЕСТИРОВАНИЕ НА ВИЧ В КАЖДОМ ГОРОДЕ ОБЛАСТИ!

Анализ на ВИЧ может быть двух видов:
1. ИФА тест в лаборатории.
2. Быстрый тест на ВИЧ.

ЛАБОРАТОРНЫЙ ИФА ТЕСТ вы можете сдать в поликлинике по месту
жительства, в филиалах Центра СПИД или у нас в ГБУЗ СО «ОЦ СПИД». Кровь забирают из вены. Это бесплатно. Результат готовится 3-7 дней.

БЫСТРЫЙ ТЕСТ НА ВИЧ можно пройти в поликлинике ЦРБ г.Туринска каб.35,
инфекционное отделение ЦРБ, каб.33 с 8:30 до 15:00ч, перерыв с 12:00
до 13:00ч; отделение срочного социального обслуживания КЦСОН ул.
Ленина, 56-20 ПН-ЧТ с 8:00 до 17:00ч, ПТ с 08:00 до 16:00ч, перерыв с
12:30 до 13:18ч;
Кровь берется из пальца. Это бесплатно, не больно, анонимно. Результат готов через 15 минут.

Если тест положительный, есть бесплатное лечение! Оно сохранит жизнь и здоровье на долгие годы, позволит иметь здоровых детей и уберечь от ВИЧ-инфекции партнера.

Пройдите тест на ВИЧ. Сдайте анализ на вич, цена — бесплатно. Остановить эпидемию можно. Нужно начать с себя

Сайт Единого информационного портала профилактики и борьбы со СПИД http://livehiv.ru/

ГБУЗ СО Свердловский областной центр профилактики и борьбы со СПИД http://livehiv.ru/o-proekte/

Ближайший филиал областного центра расположен в г. Ирбит в инфекционной больнице №2. Адрес: ул. Мальгина, 26. Телефон (34355) 6-31-12, (34355) 6-21-14

Проезд: от автостанции: автобусы №№ 1, 2, 4 (144), 6 (166), 7, любое маршрутное такси, остановка «Мальгина»; от ж/д вокзала – автобусы №№ 2, 7, маршрутное такси № 7, остановка «Мальгина». 
e-mail: [email protected][email protected] 

Сдать анализ крови на ВИЧ-инфекцию можно в ГБУЗ СО «Туринская ЦРБ им. О.Д. Зубова»:

— кабинет № 33 на втором этаже инфекционного отдела (Ленина, 59). Фельдшер: Захарова Нина Аркадьевна, тел. 83434923805

Время приема: пн-пт с 8.00 до 14.00 часов

— В фельдшерско-акушерских пунктах;

— В кабинете № 35 на втором этаже Центральной районной больницы




ПРИМИ УЧАСТИЕ В ОПРОСЕ!!!

Уважаемые туринцы, мы предлагаем вам принять участие в опросе по изучению уровня информированности по вопросам заражения, передачи и лечения ВИЧ-инфекции. Для этого нужно заполнить эту анкету: Анкета по ВИЧ-инфекции для граждан от 15 до 49 лет и отправить её по адресу: [email protected] ведущему специалисту Управления культуры, физической культуры, спорта и молодежной политики Бирюк Ксении 





 

Детерминанты размера резервуара ВИЧ-1 и долгосрочной динамики во время супрессивной АРТ

  • Sterne, J. A. C. et al. Долгосрочная эффективность сильнодействующей антиретровирусной терапии в предотвращении СПИДа и смерти: проспективное когортное исследование. Ланцет 366 , 378–384 (2005).

    КАС Статья Google ученый

  • Трики А. и др. Выживаемость ВИЧ-позитивных пациентов, начавших антиретровирусную терапию в период с 1996 по 2013 год: совместный анализ когортных исследований. Ланцет ВИЧ 4 , e349–e356. (2017).

    Артикул Google ученый

  • Wong, J.K. et al. Восстановление репликативно-способного ВИЧ, несмотря на длительное подавление виремии в плазме. Наука 278 , 1291–1295 (1997).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Finzi, D. et al. Выявление резервуара ВИЧ-1 у пациентов, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию. Наука 278 , 1295–1300 (1997).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Чун Т.-В. и другие. Количественная оценка латентных тканевых резервуаров и общей вирусной нагрузки организма при ВИЧ-1-инфекции. Природа 387 , 183–188 (1997).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Chun, T.W. et al. In vivo судьба ВИЧ-1-инфицированных Т-клеток: количественный анализ перехода к стабильной латентности. Нац. Мед. 1 , 1284–1290 (1995).

    КАС Статья Google ученый

  • Бланксон, Дж. Н., Персо, Д.и Силициано, Р.Ф. Проблема вирусных резервуаров при инфекции ВИЧ-1. год. преподобный мед. 53 , 557–593 (2002).

    КАС Статья Google ученый

  • Аветтан-Феноэль, В. и др. Общая ДНК ВИЧ-1, маркер динамики вирусного резервуара с клиническими последствиями. клин. микробиол. Ред. 29 , 859–880 (2016).

    КАС Статья Google ученый

  • Чун Т.В. и др. Раннее создание пула латентно инфицированных, покоящихся CD4(+) Т-клеток во время первичной инфекции ВИЧ-1. Проц. Натл акад. науч. США 95 , 8869–8873 (1998).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Ngo-Giang-Huong, N. et al. ДНК провируса ВИЧ-1 у субъектов, наблюдаемых с момента первичной инфекции ВИЧ-1, у которых снижается вирусная нагрузка в плазме после одного года высокоактивной антиретровирусной терапии. СПИД 15 , 665–673 (2001).

    КАС Статья Google ученый

  • Karlsson, A.C. et al. Начало терапии во время первичной инфекции ВИЧ типа 1 приводит к непрерывному распаду провирусной ДНК и сильно ограниченной вирусной эволюции. СПИД Res. Гум. Ретровир. 17 , 409–416 (2001).

    КАС Статья Google ученый

  • Чун Т.-В. и другие. Распад резервуара ВИЧ у пациентов, получающих антиретровирусную терапию в течение продолжительных периодов времени: значение для эрадикации вируса. Дж. Заражение. Дис. 195 , 1762–1764 (2007 г.).

    КАС Статья Google ученый

  • Лаанани, М. и др. Влияние сроков начала антиретровирусной терапии при первичной инфекции ВИЧ-1 на распад ассоциированной с клетками ДНК ВИЧ. клин. Заразить. Дис. 60 , 1715–1721 (2015).

    КАС Статья Google ученый

  • Рамратнам, Б. и др. Распад латентного резервуара способного к репликации ВИЧ-1 обратно пропорционален степени остаточной репликации вируса во время длительной антиретровирусной терапии. Нац. Мед. 6 , 82–85 (2000).

    КАС Статья Google ученый

  • Siliciano, J.D. et al. Длительные последующие исследования подтверждают стабильность латентного резервуара ВИЧ-1 в покоящихся CD4+ Т-клетках. Нац. Мед. 9 , 727–728 (2003).

    КАС Статья Google ученый

  • Ганди, Р. Т. и др. Уровни персистенции ВИЧ-1 на антиретровирусной терапии не связаны с маркерами воспаления или активации. PLoS Патог. 13 , e1006285 (2017).

    Артикул Google ученый

  • Besson, G.J. et al. Динамика распада ДНК ВИЧ-1 в крови в течение более чем десятилетия супрессивной антиретровирусной терапии. клин. Заразить. Дис. 59 , 1312–1321 (2014).

    КАС Статья Google ученый

  • Чжан, З.-К. и другие. Половой путь передачи и размножение ВИО и ВИЧ в покоящихся и активированных CD4 + Т-клетках. Наука 286 , 1353–1357 (1999).

    КАС Статья Google ученый

  • Бейли, Дж. Р. и др. В остаточной виремии вируса иммунодефицита человека типа 1 у некоторых пациентов, получающих антиретровирусную терапию, преобладает небольшое количество инвариантных клонов, редко обнаруживаемых в циркулирующих CD4+ Т-клетках. Дж. Вирол. 80 , 6441–6457 (2006).

    КАС Статья Google ученый

  • Андерсон, Э.M. & Maldarelli, F. Роль интеграции и клональной экспансии в ВИЧ-инфекции: живите долго и процветайте. Ретровирусология 15 , 71 (2018).

    КАС Статья Google ученый

  • Киселинова М. и др. Интегрированная и общая ДНК ВИЧ-1 предсказывают рост вируса ex vivo. PLoS Патог. 12 , e1005472 (2016).

    Артикул Google ученый

  • Силло, А.Р. и др. Биомаркеры крови экспрессированного и индуцибельного ВИЧ-1. СПИД 32 , 699–708 (2018).

    КАС Статья Google ученый

  • Ерли С. и др. Proviral HIV-DNA позволяет предсказать восстановление вирусной активности и заданный уровень вирусной нагрузки после структурированных перерывов в лечении. СПИД 18 , 1951–1953 (2004).

    Артикул Google ученый

  • Уильямс, Дж.П. и др. ДНК ВИЧ-1 предсказывает прогрессирование заболевания и вирусологический контроль после лечения. eLife 3 , e03821 (2014).

    Артикул Google ученый

  • Koelsch, K.K. et al. Динамика общей, линейной неинтегрированной и интегрированной ДНК ВИЧ-1 in vivo и in vitro. Дж. Заражение. Дис. 197 , 411–419 (2008).

    Артикул Google ученый

  • Вуд, С. N. Быстрая стабильная оценка ограниченного максимального правдоподобия и предельного правдоподобия полупараметрических обобщенных линейных моделей. JR Stat. соц. 3 , 3–36 (2011).

    MathSciNet Статья Google ученый

  • Fiebig, E.W. et al. Динамика виремии ВИЧ и сероконверсии антител у доноров плазмы: значение для диагностики и стадирования первичной ВИЧ-инфекции. СПИД 17 , 1871–1879 (2003 г.).

    Артикул Google ученый

  • Ванделер, Г. и др. Вирусные инфекции гепатита С в швейцарском когортном исследовании ВИЧ: быстро развивающаяся эпидемия. клин. Заразить. Дис. 55 , 1408–1416 (2012).

    Артикул Google ученый

  • Azzoni, L. et al. Монотерапия пегилированным интерфероном альфа-2а приводит к подавлению репликации ВИЧ 1 типа и снижению интеграции ДНК ВИЧ, ассоциированной с клетками. Дж. Заражение. Дис. 207 , 213–222 (2013).

    КАС Статья Google ученый

  • Sun, H. et al. Терапия гепатита С интерфероном-альфа и рибавирином снижает количество ДНК ВИЧ-1, ассоциированной с Т-клетками CD4, у пациентов с коинфекцией ВИЧ-1/вирусом гепатита С. Дж. Заражение. Дис. 209 , 1315–1320 (2014).

    КАС Статья Google ученый

  • Морон-Лопес, С.и другие. Краткосрочное лечение альфа-интерфероном снижает экспрессию ВИЧ-1 и снижает активацию CD4+ Т-клеток у пациентов с коинфекцией ВИЧ и вирусом гепатита С, получающих антиретровирусную терапию. Дж. Заражение. Дис. 213 , 1008–1012 (2016).

    КАС Статья Google ученый

  • Strouvelle, V.P. et al. Отсутствие влияния пегилированного интерферона-альфа на общую нагрузку ДНК ВИЧ-1 у пациентов с коинфекцией ВИЧ-1/ВГС. Дж. Заражение. Дис. 217 , 1883–1888 (2018).

    КАС Статья Google ученый

  • Бланксон, Дж. Н. и др. Выделение и характеристика способного к репликации вируса иммунодефицита человека типа 1 из подмножества элитных супрессоров. Дж. Вирол. 81 , 2508–2518 (2007).

    КАС Статья Google ученый

  • Джонс, Л.Э. и Перельсон, А.С. Преходящая виремия, вирусная нагрузка в плазме и пополнение резервуара у ВИЧ-инфицированных пациентов, получающих антиретровирусную терапию. Дж. Эквайр. Иммунный дефицит. Синдр. 45 , 483–493 (2007).

    Артикул Google ученый

  • Fletcher, C.V. et al. Стойкая репликация ВИЧ-1 связана с более низкими концентрациями антиретровирусных препаратов в лимфатических тканях. Проц. Натл акад. науч. США 111 , 2307–2312 (2014).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Лоренцо-Редондо, Р. и др. Постоянная репликация ВИЧ-1 поддерживает тканевый резервуар во время терапии. Природа 530 , 51–56 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Podsadecki, T.J., Vrijens, B.C., Tousset, E.P., Rode, R.A. & Hanna, G.J. Снижение приверженности к антиретровирусной терапии, наблюдаемое до транзиторной виремии вируса иммунодефицита человека типа 1. Дж. Заражение. Дис. 196 , 1773–1778 (2007 г.).

    Артикул Google ученый

  • Young, J. et al. Транзиторная обнаруживаемая виремия и риск рецидива вируса у пациентов из Швейцарского когортного исследования ВИЧ. BMC Заражение. Дис. 15 , 382 (2015).

    Артикул Google ученый

  • Simonetti, F. R. et al. Клонально размноженные CD4+ Т-клетки могут продуцировать инфекционный ВИЧ-1 in vivo. Проц. Натл акад. науч. США 113 , 1883–1888 (2016).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ КАС Статья Google ученый

  • Wang, Z. et al. Разросшиеся клеточные клоны, несущие способный к репликации ВИЧ-1, сохраняются, возрастают и ослабевают. Проц. Натл акад. науч. США 115 , E2575–E2584. (2018).

    КАС Статья Google ученый

  • Ли, Г.К. и др. Клональная экспансия ВИЧ-1 с интактным геномом в функционально поляризованных Th2 CD4+ Т-клетках. Дж. Клин. Вкладывать деньги. 127 , 2689–2696 (2017).

    Артикул Google ученый

  • Новелли, С.и другие. Долгосрочное терапевтическое влияние сроков антиретровирусной терапии у пациентов с диагнозом первичной инфекции вируса иммунодефицита человека 1 типа. клин. Заразить. Дис. 66 , 1519–1527 (2018).

    КАС Статья Google ученый

  • Schmid, A. et al. Глубокое истощение транскрипции ВИЧ-1 у пациентов, начинающих антиретровирусную терапию во время острой инфекции. PLoS One 5 , e13310 (2010 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google ученый

  • Робб, М. Л. и Ананворанич, Дж. Уроки острой ВИЧ-инфекции. Курс. мнение ВИЧ СПИД 11 , 555–560 (2016).

    КАС Статья Google ученый

  • Ananworanich, J. et al. Контрольная точка ДНК ВИЧ быстро устанавливается при острой ВИЧ-инфекции и резко снижается при раннем начале АРТ()(). EBioMedicine 11 , 68–72 (2016).

    Артикул Google ученый

  • van Zyl, G., Bale, M.J. & Kearney, M.F. Эволюция и разнообразие ВИЧ у пациентов, получающих АРТ. Ретровирусология 15 , 14 (2018).

    Артикул Google ученый

  • Kearney, M. F. et al. Отсутствие обнаруживаемой молекулярной эволюции ВИЧ-1 во время супрессивной антиретровирусной терапии. PLoS Патог. 10 , e1004010 (2014).

    Артикул Google ученый

  • Госсез, М. и др. Вирусологическая ремиссия после прерывания антиретровирусной терапии у африканских женщин, сероконвертирующих ВИЧ. СПИД 33 , 185–197 (2019).

    Артикул Google ученый

  • Тейлор Б.С., Собещик М.Е., Маккатчан Ф.Е. и Хаммер С.М. Проблема разнообразия подтипов ВИЧ-1. Н. англ. Дж. Мед. 358 , 1590–1602 (2008 г.).

    КАС Статья Google ученый

  • Бхаргава М., Кахас Дж. М., Вайнберг М. А., Кляйн, М. Б. и Пант Пай, Н. Влияют ли не-В подтипы ВИЧ-1 по-разному на мутации резистентности и клиническое прогрессирование заболевания у получающих лечение популяций? Данные систематического обзора. Дж. Междунар. СПИД Соц. 17 , 18944 (2014).

    Артикул Google ученый

  • Rusert, P. et al. Детерминанты индукции ВИЧ-1 в целом нейтрализующих антител. Нац. Мед. 22 , 1260–1267 (2016).

    КАС Статья Google ученый

  • Chomont, N. et al. Размер резервуара ВИЧ и его персистенция определяются выживаемостью Т-клеток и гомеостатической пролиферацией. Нац. Мед. 15 , 893–900 (2009).

    КАС Статья Google ученый

  • Банга, Р. и др. PD-1(+) и фолликулярные хелперные Т-клетки ответственны за персистентную транскрипцию ВИЧ-1 у лиц, получавших лечение авиремией. Нац. Мед. 22 , 754–761 (2016).

    КАС Статья Google ученый

  • Джаллонардо, Ф. Ди и др. Полноразмерная реконструкция гаплотипов для определения структуры гетерогенных популяций вирусов. Рез. нуклеиновых кислот. 42 , е115 (2014).

    Артикул Google ученый

  • Галл А. и др. Универсальная амплификация, секвенирование следующего поколения и сборка геномов ВИЧ-1. Дж. Клин. микробиол. 50 , 3838–3844 (2012).

    КАС Статья Google ученый

  • ван Бюрен С., Гротуис-Оудсхорн К. Мыши: многомерное вменение с помощью цепных уравнений в R. Дж. Стат. ПО Том 1, https://www.jstatsoft.org/v045/i03 (2011 г. ).

  • Rieder, P. et al. Передача ВИЧ-1 после прекращения ранней антиретровирусной терапии среди мужчин, занимающихся сексом с мужчинами. СПИД 24 , 1177–1183 (2010).

    Артикул Google ученый

  • Kouyos, R.D. et al. Неоднозначные вызовы нуклеотидов из популяционного секвенирования ВИЧ-1 являются маркером вирусного разнообразия и возраста заражения. клин. Заразить. Дис. 52 , 532–539 (2011).

    КАС Статья Google ученый

  • Ragonnet-Cronin, M. et al. Генетическое разнообразие как маркер времени заражения у ВИЧ-инфицированных пациентов: оценка 6-месячного окна и сравнение с BED. Дж. Заражение. Дис. 206 , 756–764 (2012).

    Артикул Google ученый

  • Андерссон, Э. и другие. Оценка неоднозначности последовательности гена pol ВИЧ-1 как метод выявления недавней инфекции ВИЧ-1 в исследованиях устойчивости к лекарственным препаратам. Заразить. Жене. Эвол. 18 , 125–131 (2013).

    КАС Статья Google ученый

  • Taffe, P. & May, M. Совместная модель обратного расчета для условного определения даты ВИЧ-инфекции в преобладающей когорте. Стат. Мед. 27 , 4835–4853 (2008 г.).

    MathSciNet Статья Google ученый

  • Взаимосвязь между размером резервуара вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) в CD4+ Т-клетках периферической крови и соотношением CD4+:CD8+ Т-клеток у ВИЧ-1-инфицированных лиц с авиремией, получающих длительную высокоактивную антиретровирусную терапию | Журнал инфекционных болезней

    Аннотация

    Было продемонстрировано, что репликация вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1) сохраняется у большинства инфицированных лиц, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию (ВААРТ). Однако исследования, посвященные взаимосвязи между низкими уровнями продолжающейся репликации вируса и иммунологическими параметрами, такими как соотношение CD4 + :CD8 + Т-клеток, у таких людей отсутствуют. Здесь показана статистически значимая обратная корреляция между частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, и соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток у инфицированных лиц, получающих ВААРТ и у которых была плазменная виремия. были подавлены ниже предела обнаружения в течение длительных периодов времени.Корреляции между частотой ВИЧ-1-специфических цитотоксических CD8 + Т-лимфоцитов (ЦТЛ) и соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток у этих лиц обнаружено не было. Эти данные свидетельствуют о том, что постоянная репликация вируса на низком уровне, хотя и недостаточная для поддержания специфического ответа ЦТЛ на ВИЧ-1, может частично объяснить, почему нормализация соотношения CD4 + :CD8 + Т-клеток не достигается у некоторых инфицированных лиц, успешно получавших ВААРТ.

    Применение высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ) при лечении лиц, инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1), резко изменило клинический исход для многих инфицированных лиц и привело к существенному снижению заболеваемости СПИДом. и смертности [1]. Однако наличие репликативно-компетентного вируса [2–4], провирусной ДНК ВИЧ-1 [2] (включая 2 длинных терминальных круга повторов [5]), сплайсированной и несплайсированной РНК ВИЧ-1 [6, 7] в CD4 + Т-клетки и неидентифицированные резервуары вируса [8] были продемонстрированы у большинства инфицированных людей, у которых виремия в плазме упала ниже предела обнаружения, и эти источники продолжающейся репликации стали основным препятствием в предотвращении эрадикации ВИЧ-1.

    После начала ВААРТ виремия в плазме быстро снижается до уровня ниже предела обнаружения у значительной части инфицированных лиц, после чего следует постепенное увеличение числа CD4 + и снижение числа CD8 + Т-клеток. Однако нормализация соотношения CD4 90 204 + 90 205 :CD8 90 204 + 90 205 Т-клеток не достигается у некоторых инфицированных лиц, которые в остальном успешно ответили на ВААРТ [9, 10]. В связи с этим было высказано предположение, что хронически повышенные уровни CD8 + Т-клеток или аномальные соотношения CD4 + :CD8 + Т-клеток в периферической крови обусловлены активной репликацией вируса у инфицированных лиц, не получающих лечения. или получающих субоптимальную противовирусную терапию [11].Кроме того, было показано, что экспрессия маркера активации CD38 на CD8 + Т-клетках является прогностическим маркером прогрессирования заболевания [12]. Хотя было высказано предположение, что неспособность нормализовать соотношение CD4 90 204 + 90 205 :CD8 90 204 + 90 205 Т-клеток у некоторых пациентов, получающих ВААРТ, связана с неполным подавлением репликации вируса [10], данных, непосредственно касающихся этого вопроса, нет. особенно у пациентов, длительно получающих ВААРТ и у которых хорошо подавлена ​​виремия в плазме.

    Установлено, что резервуар инфицированных CD4 + Т-клеток в периферической крови, определяемый количеством клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, поддерживается за счет продолжающейся репликации вируса даже на очень низких уровнях [2]. ]. В настоящем исследовании мы оценили взаимосвязь между соотношением количества CD4 + :CD8 + Т-клеток и частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, в очищенных CD4 + Т-клетках, а также частоту ВИЧ-специфических цитотоксических CD8 + Т-лимфоцитов (ЦТЛ) у инфицированных лиц, получавших ВААРТ в течение длительного периода времени и у которых виремия в плазме была подавлена ​​ниже уровня обнаружения, как определено стандартные анализы.

    Пациенты и методы

    Исследуемые пациенты . Были обследованы 32 ВИЧ-инфицированных человека, получавших различные схемы ВААРТ, содержащие как минимум 1 ингибитор протеазы и 2 ингибитора обратной транскриптазы ВИЧ-1 в течение более 2,5 лет (в среднем 45,9 мес; диапазон 30,5–54,0 мес). Среднее количество CD4 + и CD8 + Т-клеток составляло 840 клеток/мм 3 (диапазон 170–1650 клеток/мм 3 ) и 1110 клеток/мм 3 (диапазон 380–1990 клеток). / мм 3 ), соответственно, и соотношение CD4 + :CD8 + Т-клеток было равно 0.90 (диапазон 0,18–2,79). Во время исследования у всех инфицированных людей постоянно поддерживались уровни виремии РНК ВИЧ-1 в плазме <50 копий/мл в течение >2,0 лет (в среднем 32,0 месяца; диапазон 24,0–46,0 месяцев), что определялось полимеразой обратной транскрипции. цепная реакция (ПЦР; Roche).

    Выделение CD4 + Т-клеток . Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) получали центрифугированием в градиенте плотности фиколл-гипак. CD4 + Т-клетки выделяли из РВМС ВИЧ-1-инфицированных с использованием метода разделения клеток на колонке (технологии стволовых клеток), как описано в другом месте [8].

    Количественная ПЦР ДНК ВИЧ-1 в режиме реального времени . Для определения частоты CD4 + Т-клеток, несущих провирус ВИЧ-1, у инфицированных индивидуумов проводили ПЦР в реальном времени, как описано ниже. Геномную ДНК выделяли из 1–2 × 106 очищенных CD4 + Т-клеток с использованием набора для выделения ДНК Puregene (Gentra) в соответствии с инструкциями производителя. Затем ДНК (1 мкг) использовали в качестве матрицы для ПЦР в реальном времени на iCycler (Bio-Rad). Реакцию амплификации проводили в трех повторностях с использованием 0.5 мк M праймеров, 0,2 мк M флуоресцентного зонда, 0,8 мк M dNTP, 5 мк M MgCl 2 и 2,5 ед Platinum Taq полимеразы (Life Technologies) в общем объеме 50 мл. Праймеры 5′-GGTCTCTCTGGTTAGACCAGAT-30 (5′-праймер) и 5′-CTGCTAGAGATTTTCCACACTG-3′ (3′-праймер) использовали вместе с флуоресцентным зондом 5′-6FAM-AGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTTAMRA-3′. Условия ПЦР состояли из стадии денатурации при 95°С в течение 3 мин, за которой следовали 45 циклов по 15 с при 95°С и 1 мин при 58°С. Серийно разведенную ДНК ACH-2 также подвергали описанной выше ПЦР для получения стандартных кривых.

    Проточный цитометрический анализ ВИЧ-1-специфических CD8 + Т-клеток . Частоту CD8 + Т-клеток, специфичных для ВИЧ-1, определяли путем анализа внутриклеточных интерферон-γ-положительных клеток после стимуляции ВИЧ-1-специфическими пептидами (20 мер, перекрывающихся 15 а.о.). Пулы перекрывающихся пептидов (1 мкг каждый; Программа реагентов Национального института здравоохранения по СПИДу), охватывающих все последовательности ВИЧ-1 gag , pol , env и nef , первоначально инкубировали с 3 × 106 PBMC в течение 10 мин в круглодонной пробирке 5 мл (Becton Dickinson) в 0.1 мл полной среды в инкубаторе CO 2 при 37°C. Затем в пробирку добавляли 0,4 мл полной среды и после 2-часовой инкубации в среду добавляли брефельдин А (Sigma) в конечной концентрации 10 мг/мл для ингибирования секреции IFN-γ. Через 6 ч инкубации клетки дважды промывали, фиксировали 1-кратным фиксирующим раствором (Becton Dickinson) в течение 10 мин при комнатной температуре и снова промывали. Клетки пермеабилизировали раствором 2 для пермеабилизации 1× (Becton Dickinson) и далее инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин.После повторной промывки клетки окрашивали следующими антителами: флуоресцеин-изотиоцианат-конъюгированные анти-CD8, фикоэритрин-конъюгированные анти-IFN-γ, перидинин-белок-хлорофилл-конъюгированные анти-CD69 и аллофикоцианин-конъюгированные анти-CD3 антитела ( Бектон Дикинсон). С гейтом на CD3+CD8 + лимфоцитов было собрано ~ 100 000 событий с использованием FACSCalibur (Becton Dickinson), и частота IFN-γ + CD69+ клеток была определена с использованием программного обеспечения Cellquest (Becton Dickinson).

    Статистический анализ . Ранговую корреляцию Спирмена использовали в качестве меры корреляции между (1) частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, и количеством CD4 + и CD8 + Т-клеток и CD4 + :CD8. Соотношение Т-клеток + и (2) частота ВИЧ-1-специфических ЦТЛ и CD4 + и CD8 + Т-клеток, соотношение CD4 + :CD8 + Т-клеток и количество CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1. Точный критерий Фишера использовали для определения связи соотношения CD4 + :CD8 + Т-клеток ⩾1,0 или <1,0 с провирусными нагрузками в CD4 + Т-клеточном компартменте. Метод Бонферрони для корректировки значений P для множественного тестирования был применен к корреляциям CD4 + и CD8 + Т-клеток и соотношению CD4 + :CD8 + Т-клеток с частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, и это было применено к корреляции количества CD4 + и CD8 + Т-клеток, соотношения CD4 + :CD8 + Т-клеток и уровней провирусного ВИЧ -1 ДНК в CD4 + Т-клеточном компартменте с частотой ВИЧ-1-специфических ЦТЛ.

    Результаты

    Корреляция между размером CD4 + Т-клеточного резервуара ВИЧ-1 и иммунологическими параметрами . Чтобы исследовать взаимосвязь между размером CD4 + T-клеток в периферической крови для ВИЧ-1 и аномальными периферическими иммунологическими параметрами у инфицированных лиц, получающих ВААРТ в течение длительного периода времени, мы стремились установить корреляции между частотой CD4 + Т-клетки, несущие провирусную ДНК ВИЧ-1, и количество Т-клеток CD4 + и CD8 + и соотношение CD4 + :CD8 + Т-клеток. Выявлена ​​статистически значимая обратная корреляция между частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, и количеством CD4 + Т-клеток в периферической крови исследованных нами инфицированных лиц ( P = 0,02; рис. 1 A ). Напротив, не было обнаружено никакой корреляции между нагрузкой провирусной ДНК ВИЧ-1 в CD4 + Т-клетках и количеством CD8 + Т-клеток ( P = 0,34; рисунок 1 B ). Когда эти два иммунологических параметра были объединены и выражены как соотношение CD4 + :CD8 + Т-клеток, наблюдалась сильная обратная корреляция между этими значениями и частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1 (). Р .01; рисунок 1 C ). Кроме того, 14 (74%) из 19 пациентов с соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток <1,0 имели провирусную нагрузку ДНК ВИЧ-1 <1000 копий/мкг геномной ДНК, полученной из CD4 + Т-клеток. . Напротив, 10 (77%) из 13 пациентов с соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток >1,0 имели провирусную нагрузку ДНК ВИЧ <1000 копий/мг геномной ДНК, полученной из CD4 + Т-клеток ( P = .01, цифра 1 C ).

    Рис. 1.

    Взаимосвязь между частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1), и различными иммунологическими параметрами. Геномную ДНК, выделенную из высокообогащенных CD4 + Т-клеток ВИЧ-1-инфицированных пациентов, получающих длительную высокоактивную антиретровирусную терапию, подвергали полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, специфичной для длинных терминальных повторов ВИЧ-1, как описано в разделе Пациенты и Методы. Оценивали корреляции между частотой клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, и количеством CD4 + ( A ) и CD8 + ( B ) Т-клеток и CD4 + :CD8 + T соотношения ячеек ( C ).

    Рисунок 1.

    Взаимосвязь между частотой CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1), и различными иммунологическими параметрами. Геномную ДНК, выделенную из высокообогащенных CD4 + Т-клеток ВИЧ-1-инфицированных пациентов, получающих длительную высокоактивную антиретровирусную терапию, подвергали полимеразной цепной реакции в режиме реального времени, специфичной для длинных терминальных повторов ВИЧ-1, как описано в разделе Пациенты и Методы. Оценивали корреляции между частотой клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, и количеством CD4 + ( A ) и CD8 + ( B ) Т-клеток и CD4 + :CD8 + T соотношения ячеек ( C ).

    Корреляция между частотой ВИЧ-1-специфических ЦТЛ и иммунологическими и вирусологическими параметрами . Было продемонстрировано, что частота ВИЧ-1-специфических ЦТЛ постепенно снижается после начала ВААРТ у ВИЧ-1-инфицированных лиц из-за снижения доступности антигенов ВИЧ-1 [13]. Мы исследовали взаимосвязь между частотой ВИЧ-1-специфических ЦТЛ и соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток у инфицированных лиц, которые успешно реагировали на ВААРТ в течение длительных периодов времени.Не было обнаружено статистически значимой корреляции между частотой ЦТЛ, которые реагировали на ВИЧ-специфические пептиды, полученные из генов gag, pol, env и nef, и соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток (рис. 2). Кроме того, не было обнаружено статистически значимой корреляции между числом ВИЧ-1-специфических ЦТЛ и CD4 + и CD8 + Т-клеток и числом CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1 (данные не показано). Следует отметить, что наблюдалась тенденция к более высокому количеству ЦТЛ у лиц с более низким соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток.

    Обсуждения

    Широкое использование ВААРТ при лечении ВИЧ-1 привело к резкому улучшению клинических результатов [1]. Хотя виремия плазмы может поддерживаться ниже предела обнаружения у многих инфицированных лиц, получающих ВААРТ, сохранение низких уровней продолжающейся репликации вируса в CD4 + Т-клетках представляет собой серьезное препятствие на пути к эрадикации ВИЧ-1 [2–4]. ]. Действительно, стойкие низкие уровни репликации вируса считаются основным фактором, участвующим в поддержании резервуара ВИЧ-1, о чем свидетельствует частота CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, у пациентов с плазменной виремией. была подавлена ​​ВААРТ до уровня ниже уровня обнаружения стандартных анализов [2].Кроме того, устойчивые уровни повышенного количества CD8 + Т-клеток наблюдались у большой части инфицированных пациентов, получающих ВААРТ [9, 10]. В связи с этим было высказано предположение, что активная репликация вируса ответственна за повышенные уровни CD8 + Т-клеток [11] и что уровни экспрессии маркера активации CD38 на этих клетках являются прогностическим маркером. прогрессирования заболевания при отсутствии эффективной противовирусной терапии [12].

    Несмотря на отсутствие опубликованных данных, было высказано предположение, что инвертированное соотношение CD4 + :CD8 + Т-клеток в периферической крови инфицированных лиц, успешно получающих ВААРТ, связано с низкими уровнями продолжающейся репликации вируса. 10]. В настоящем исследовании мы изучили, были ли инвертированные соотношения CD4 + :CD8 + Т-клеток у некоторых инфицированных лиц, получающих ВААРТ в течение длительного периода времени, неполным подавлением репликации ВИЧ-1, о чем свидетельствует размер резервуар провирусной ДНК ВИЧ-1 в CD4 + Т-клетках.Постоянное присутствие провирусной ДНК ВИЧ-1 в компартменте CD4 + Т-клеток у инфицированных пациентов, получающих ВААРТ, было убедительно описано в другом месте [2] и, как считается, отражает неполное ингибирование остаточной продолжающейся репликации вируса, несмотря на супрессию. виремии плазмы до неопределяемого уровня [2]. Мы продемонстрировали сильную обратную корреляцию между частотой инфицированных CD4 + Т-клеток, содержащих провирусную ДНК ВИЧ-1, и соотношением CD4 + и CD8 + Т-клеток, предполагая, что низкие уровни остаточной вирусной репликации могли быть частично ответственны за для аномального соотношения CD4 + :CD8 + Т-клеток в периферической крови.

    Хотя частота CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, может быть напрямую связана с соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток, другие факторы могут влиять на эту взаимосвязь. Такие параметры, как наличие неизвестных резервуаров вируса, которые поддерживают активную репликацию вируса в присутствии ВААРТ, аномалии в иммунной системе хозяина, эффективность данных терапевтических режимов или другие смешанные факторы, могут влиять на CD4 + : CD8 Соотношения + Т-клеток и нагрузки провирусной ДНК в компартменте CD4 + Т-клеток. Следует отметить, что наши данные свидетельствуют о том, что продолжающаяся репликация вируса на уровнях, которые не обнаруживаются стандартными анализами виремии плазмы, но которые поддерживают CD4 + T-клеточный резервуар ВИЧ-1, хотя и достаточны, чтобы препятствовать нормализации CD4 + Соотношение : CD8 + Т-клеток у пациентов, обследованных в этом исследовании, недостаточно для поддержания ВИЧ-1-специфических ЦТЛ-ответов.

    Можно утверждать, что устойчивые аномальные соотношения CD4 + :CD8 + Т-клеток у инфицированных лиц, получающих ВААРТ в течение длительного времени, также могут быть связаны как с иммунологическими, так и с вирусологическими факторами.В связи с этим было продемонстрировано, что при отсутствии прогрессирования заболевания и достаточном восстановлении CD4 + Т-клеток общий гомеостаз Т-клеток поддерживается у инфицированных лиц за счет повышенных уровней CD8 + Т-клеток, которые могут свою очередь, препятствуют регенерации CD4 + Т-клеток [14]. Однако мы не обнаружили корреляции между уровнями CD4 + Т-клеток, несущих провирусную ДНК ВИЧ-1, и количеством CD8 + Т-клеток.

    Наконец, предыдущие исследования показали, что генерация CD4 + Т-клеток в тимусе сильно затруднена прямыми или косвенными последствиями активной репликации вируса [15].В связи с этим у инфицированных людей было продемонстрировано снижение уровня продукции тимуса, измеренное по частоте наивных CD4 + Т-клеток, несущих круги эксцизии Т-клеточных рецепторов [15]. Хотя неясно, инфицированы ли предшественники CD4 + Т-клеток ВИЧ-1 в тимусе, наши данные убедительно свидетельствуют о том, что неполное подавление репликации вируса у инфицированных лиц, получающих ВААРТ, продолжает распространять инфекцию в CD4 + Т-лимфоцитах. клеточного компартмента в периферической крови, что приводит к поддержанию CD4 + Т-клеточного резервуара для ВИЧ-1.

    Благодарности

    Мы благодарим Пола Паркса за планирование визитов пациентов, Сьюзен Мойр за чтение этой рукописи и полезные обсуждения, а также пациентов за их участие в этом исследовании.

    Каталожные номера

    1

    Центры по контролю и профилактике заболеваний

    ,

    Отчет о эпиднадзоре за ВИЧ/СПИДом

    ,

    2000

    , том.

    12

     (стр. 

    1

    44

    )2,  ,  , и др.

    Наличие индуцируемого латентного резервуара ВИЧ-1 во время высокоактивной антиретровирусной терапии

    94

     (стр. 

    13193

    7

    )3,  ,  , и др.

    Выявление резервуара ВИЧ-1 у пациентов, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию

    ,

    Наука

    ,

    1997

    , том.

    278

     (стр. 

    1295

    300

    )4,  ,  , и др.

    Восстановление способного к репликации ВИЧ, несмотря на продолжительное подавление виремии плазмы

    278

     (стр. 

    1291

    5

    )5,  ,  , и др.

    Персистенция эписомальных промежуточных звеньев инфекции ВИЧ-1 у пациентов, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию

    6

     (стр. 

    76

    81

    )6,  ,  , и др.

    Сохранение внутриклеточной мРНК ВИЧ-1 коррелирует со специфическими для ВИЧ-1 иммунными реакциями у инфицированных субъектов, получающих стабильную ВААРТ

    15

     (стр.  

    1635

    41

    )7,  ,  ,  ,  ,  .

    Репликация ВИЧ-1 у пациентов с неопределяемым вирусом в плазме, получающих ВААРТ

    ,

    Ланцет

    ,

    1999

    , том.

    353

     (стр. 

    119

    20

    )8,  ,  , и др.

    Взаимосвязь между ранее существовавшими резервуарами вируса и повторным появлением виремии в плазме после прекращения высокоактивной антиретровирусной терапии

    6

     (стр. 

    757

    61

    )9,  ,  , и др.

    Изменения статуса активации лимфоцитов CD8 + и уровня РНК ВИЧ в плазме крови на фоне антиретровирусной терапии

    12

     (стр. 

    1267

    73

    )10,  ,  ,  .

    Фенотипический анализ CD8 + Т-лимфоцитов в когорте ВИЧ-инфицированных пациентов 1-го типа, получавших саквинавир, ритонавир и два аналога нуклеозидов в течение 1 года, и ассоциация с РНК ВИЧ 1-го типа в плазме

    ,

    AIDS Res Hum Retroviruses

    ,

    1999

    , том.

    15

     (стр. 

    963

    72

    )11,  ,  , и др.

    Корреляция активации CD8-лимфоцитов с клеточной виремией и уровнями РНК ВИЧ в плазме у бессимптомных пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1

    12

     (стр. 

    17

    24

    )12,  ,  ,  ,  ,  .

    Повышенные уровни CD38 + CD8 + Т-клеток при ВИЧ-инфекции дополняют прогностическую ценность низких уровней CD4 + Т-клеток: результаты 6-летнего наблюдения.Центр Лос-Анджелеса, Многоцентровое когортное исследование СПИДа

    ,

    J Acquir Immune Defic Syndr

    ,

    1993

    , vol.

    6

     (стр. 

    904

    12

    )13,  ,  , и др.

    Количественное определение ВИЧ-1-специфических цитотоксических Т-лимфоцитов и плазменной нагрузки вирусной РНК

    279

     (стр. 

    2103

    6

    )14,  ,  , и др.

    Нарушение гомеостаза Т-клеток, предшествующее СПИДу при ВИЧ-1-инфекции. Многоцентровое когортное исследование СПИДа

    ,

    Nat Med

    ,

    1995

    , vol.

    1

     (стр. 

    674

    80

    )15,  ,  , и др.

    Изменения функции тимуса с возрастом и при лечении ВИЧ-инфекции

    ,

    Nature

    ,

    1998

    , vol.

    396

     (стр. 

    690

    5

    )

    Рисунки и таблицы

    Рисунок 2.

    Взаимосвязь между частотой встречаемости вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1)-специфических цитотоксических CD8 + Т-лимфоцитов и соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток.Частоту CD8 + Т-клеток, специфичных к ВИЧ-1, определяли путем анализа внутриклеточных интерферон-γ-позитивных клеток после стимуляции ВИЧ-1-специфичными пептидами, полученными из gag , pol , env. и генов nef . Метод ранговой корреляции Спирмена был использован для получения значений P .

    Рисунок 2.

    Взаимосвязь между частотой встречаемости вируса иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1)-специфических цитотоксических CD8 + Т-лимфоцитов и соотношением CD4 + :CD8 + Т-клеток. Частоту CD8 + Т-клеток, специфичных к ВИЧ-1, определяли путем анализа внутриклеточных интерферон-γ-позитивных клеток после стимуляции ВИЧ-1-специфичными пептидами, полученными из gag , pol , env. и генов nef . Метод ранговой корреляции Спирмена был использован для получения значений P .

    © 2002 г. Американского общества инфекционистов

    Генетический код ВИЧ, скрытый в старых тканях, дополняет признаки появления вируса Демократическая Республика Конго.Этот кусок ткани размером с ноготь на мизинце был запечатан в защитный блок из парафина.

    Освободив восковую оболочку, ученые из Аризонского университета смогли извлечь из ткани почти полную генетическую последовательность вируса ВИЧ — самый старый почти полный генетический код вируса ВИЧ-1, обнаруженный на сегодняшний день, и тот, который поддерживает теорию о том, что вирус, вызывающий СПИД, начал передаваться среди людей в течение первого или двух десятилетий 20-го века.

    «Это многолетняя работа», — сказал Майкл Вороби, ученый, чья группа выполнила работу, об исследовании, которое недавно было размещено на сайте препринтов bioRxiv. «Только над этой последовательностью мы работали более пяти лет».

    реклама

    Воробей, чья лаборатория неоднократно проводила вирусологическую археологию на старых образцах тканей и крови, сообщила, что статья еще не была представлена ​​в научный журнал для публикации. Таким образом, он не прошел через процесс рецензирования, когда независимые ученые, так сказать, пинают его шины.

    Связанный:

    Сводящая с ума сага о том, как «заговорщики» от болезни Альцгеймера десятилетиями мешали поиску лекарства

    Но Оливер Пайбус, профессор эволюции и инфекционных заболеваний Оксфордского университета, высоко оценил работу.

    реклама

    «Создание полного генома… из архивного образца ткани технически впечатляет», — сказал Пайбус STAT. «Хотя его открытие существенно не меняет нашу нынешнюю модель ранней генетической истории пандемии СПИДа, оно повышает нашу уверенность в выводах, сделанных ранее на основе современных и частичных последовательностей генов ВИЧ.

    Доктор Жак Пепин, профессор инфекционных болезней Шербрукского университета в Квебеке, написавший об истории эпидемии СПИДа, назвал последнюю работу Вороби «технологическим подвигом». Пепин работает над вторым изданием «Происхождение СПИДа», которое должно выйти в конце 2020 года, и сказал, что эта работа будет учитываться в обновлениях.

    Образец, который был исследован, датирован 1966 годом. Извлеченная из него последовательность старше на десять лет, чем предыдущая старейшая полноразмерная последовательность.Он дает представление о том, как выглядел вирус, когда он незамеченным циркулировал в Центральной Африке за 15 лет до того, как группа странных инфекций среди геев в Соединенных Штатах привела к признанию новой болезни, которая в конечном итоге была названа СПИДом.

    Генетические коды вирусов, заразивших людей в ранние дни эпидемии СПИДа, могут быть использованы учеными для определения даты, когда вирус ВИЧ перешел от приматов к людям. Изучая различия в вирусных последовательностях, ученые оценивают, сколько времени прошло с тех пор, как известные последовательности могли отличаться от общего источника. Он не сообщает им, когда произошло событие, но может предположить, что это должно было произойти до определенного времени, сказал Воробей, добавив, что новые данные предполагают, что скачок, вероятно, не произошел в 1920-х годах.

    Хотя существует ряд оценок того, когда ВИЧ начал передаваться среди людей, сейчас большинство из них сосредоточено на начале 1900-х годов. Пепин сказал, что это могло произойти даже в последние годы 1800-х годов.

    Воробей, разработавший метод извлечения вирусного генетического материала из образцов, который он называет «отбойным молотком», провел некоторое время в ДРК около 20 лет назад, работая над своей докторской диссертацией.Д. в Оксфордском университете.

    Он узнал о хранилище образцов старых тканей в Университете Киншасы и с помощью соавтора доктора Жан-Жака Муйембе — известного эксперта по Эболе и директора Национального института биомедицинских исследований ДРК — получил разрешение на изучение их, чтобы увидеть, содержит ли какой-либо РНК ВИЧ. Образцы тканей были взяты у пациентов в Киншасе — тогдашнем Леопольдвиле — для диагностических целей в период с 1959 по 1967 год.

    «Это было своего рода гниение в картонных коробках в большой куче в задней комнате», — сказал Воробей о коллекции.

    Это именно та находка, которую Воробей ищет, чтобы ответить на те загадки, которые его лаборатория пытается разгадать, например, привез ли франко-канадский бортпроводник вирус ВИЧ в Северную Америку (он этого не сделал) или вирус, ответственный за Пандемия испанского гриппа 1918 года уже циркулировала в Северной Франции в 1916 и 1917 годах. Его лаборатория все еще работает над последним.

    «Часть моего времени за последние 15 лет было потрачено на то, чтобы выяснить, где могут быть эти пыльные старые коробки с вещами, и попытаться добраться до них, прежде чем они окажутся в мусоре или исчезнут, потому что человек, который знает, что в них умирает, — сказал он.

    Более десяти лет назад в лаборатории удалось выделить РНК ВИЧ — хотя это всего лишь фрагмент, а не весь генетический код — из лимфатического узла, взятого у 60-летней женщины в 1960 году. С тех пор как эта работа была опубликована в 2008 году, Воробей и его команда усовершенствовали свой метод извлечения, что позволило им получить больше информации о последовательности при положительном попадании.

    Воробей сказал, что наличие генетических данных 1960-х годов показывает, что циркулирующие вирусы уже тогда были чрезвычайно генетически разнообразны, а это означает, что они какое-то время передавались среди людей.

    «Единственный способ, которым это может произойти, — это если до 1960-х годов было несколько десятилетий эволюции», — сказал он.

    Исследователи протестировали 1652 образца патологии и обнаружили последовательность ВИЧ в одном из них. Это, по словам Воробей, было немного утомительно, отдавая должное соавтору Томасу Уоттсу из его лаборатории.

    Хотя вы можете подумать, что положительное попадание было моментом для ликования, это не момент озарения в науке.

    «Это такой долгосрочный проект, и так много раз вы думаете, что, возможно, у вас есть что-то хорошее, но это просто оказывается какой-то неспецифической реакцией, которую мы осторожничаем, пока мы не очень , мы совершенно уверены, что то, с чем мы имеем дело, — настоящая вещь, — сказал Воробей. «Так что пробка от шампанского не вылетает. Больше теплого сияния удовлетворения после многих лет тяжелого труда».

    В более ранней версии этой истории неправильно описывался тип генетического материала, извлеченного из образца.

    Размер клетки и состояние клеточного цикла играют ключевую роль в принятии решений при ВИЧ — ScienceDaily

    Благодаря разработке антиретровирусных препаратов вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) сегодня считается управляемым хроническим заболеванием.Однако, если его не диагностировать или не лечить, ВИЧ может перерасти в СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита), болезнь, которая привела к смерти почти 1 миллиона человек во всем мире в 2017 году.

    Однако лекарства, спасающие жизнь, не лечат ВИЧ, потому что, когда вирус заражает организм, он коварно нацеливается на те самые клетки, которые необходимы для запуска иммунного ответа организма на любую инфекцию. В частности, ВИЧ вторгается в Т-клетки CD4 — тип лейкоцитов — делает копии самих себя и захватывает ДНК клетки-хозяина CD4.

    «При инфицировании Т-клетки CD4 ВИЧ подвергается одной из двух судеб», — сказал доцент Иллинойского университета Рой Дар. «Он либо интегрируется в состояние репликации, что приводит к производству сотен инфекционных вирионов, либо интегрируется в латентное состояние, когда провирус находится в транскрипционно-молчаливом состоянии».

    По словам Дара, исследователи сосредоточились на ликвидации латентного резервуара, потому что он может реактивироваться спонтанно, избежать лекарственной терапии или стать источником вирусного рикошета, который может произойти, если пациент не строго придерживается схемы лечения антиретровирусной терапией.

    «На сегодняшний день нет способа отличить неинфицированные клетки от латентно инфицированных клеток в организме, но такая возможность будет поддерживать существующие терапевтические подходы к лечению ВИЧ», — сказал Дар, который работает в отделе электротехники и вычислительной техники и Институт геномной биологии Карла Вёзе на территории кампуса.

    В недавнем исследовании Дар и его исследовательская группа исследовали реактивацию Т-клеток, которые были латентно инфицированы ВИЧ, в лаборатории с помощью вирусной конструкции, содержащей ген зеленого флуоресцентного белка (GFP), который экспрессируется, когда клетка реактивирует.

    «Метод покадровой визуализации одиночных клеток позволил отслеживать реактивацию отдельных латентных клеток от их молчаливого до активного состояния путем расчета средней флуоресценции GFP», — объяснила постдокторский исследователь биоинженерии Кэтрин Бон-Випперт, ведущий автор исследования. исследование.

    Как только они идентифицировали клетки, которые были реактивированы, они рассчитали размер клеток и определили средний диаметр клеток, необходимый для реактивации. Они обнаружили, что в латентной популяции реактивируются только более крупные клетки-хозяева, в то время как более мелкие клетки остаются безмолвными или латентными.

    Согласно Бон-Випперту, этот больший размер клетки-хозяина обеспечивает естественный клеточный механизм для увеличения размера вспышки вирусной экспрессии и необходим для дестабилизации латентного состояния, в то же время оказывая влияние на принятие вирусных решений.

    «Наши результаты представляют собой случай пассивного принятия решений о вирусе, в котором доминирует клетка-хозяин, когда вирус выключен, когда инфицированная клетка мала, и может спонтанно реактивироваться только в клетках большего размера», — сказал Дар. «Это представляет собой случай, когда клетка-хозяин изображает правильные условия для принятия вирусных решений.»

    Команда также определила, что переход клеток из латентного состояния в активное зависит от клеточного цикла — стадий, на которых реплицируется клеточная ДНК, — и может регулироваться медикаментозным лечением. «Мы показали, что вы можете использовать медикаментозное лечение для модуляции популяции клеток в определенном состоянии клеточного цикла и из него, чтобы сместить их реактивацию вируса», — сказал Дар.

    Эти результаты могут быть полезны для разработки стратегий стохастического проектирования лекарственной терапии, могут найти применение в синтетической биологии и сыграть роль в развитии диагностики и лечения ВИЧ.

    Дефектный ген оболочки ВИЧ-1 способствует эволюции инфекционного штамма посредством рекомбинации in vitro | BMC Infectious Diseases

  • Hemelaar J, Gouws E, Ghys PD, Osmanov S, C W-UNHI. Глобальные тенденции молекулярной эпидемиологии ВИЧ-1 в 2000-2007 гг. СПИД. 2011;25(5):679–89.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Абрам М.Е., Феррис А.Л., Дас К., Хинонес О., Шао В., Туске С., Алворд В.Г., Арнольд Э., Хьюз С.Х.Мутации в обратной транскриптазе ВИЧ-1 влияют на ошибки, совершаемые в одном цикле репликации вируса. Дж Вирол. 2014;88(13):7589–601.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Sanchez G, Xu XY, Chermann JC, Hirsch I. Накопление дефектных вирусных геномов в мононуклеарных клетках периферической крови людей, инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1. Дж Вирол. 1997;71(3):2233–40.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Шварц Д.Х., Висциди Р., Лайендекер О., Сонг Х.Ф., Рэй С.К., Майкл Н.Преобладание дефектных провирусных последовательностей в ВИЧ плюс долговременный непрогрессор. Иммунол Летт. 1996; 51 (1–2): 3–6.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Брунер К.М., Мюррей А.Дж., Поллак Р.А., Солиман М.Г., Ласки С.Б., Капоферри А.А., Лай Дж., Штамм М.С., Лада С.М., Хох Р. и др. Дефектные провирусы быстро накапливаются во время острой инфекции ВИЧ-1. Нат Мед. 2016;22(9):1043.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Куан Ю., Лян С., Бреннер Б.Г., Вайнберг М.А.Варианты ВИЧ типа 1 с множественной лекарственной устойчивостью (ВИЧ-1) могут существовать в клетках как дефектные квазивиды и могут быть восстановлены путем суперинфекции другими дефектными вариантами ВИЧ-1. J заразить Dis. 2009; 200(9):1479–83.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Ким Э.Ю., Буш М., Абель К., Фриттс Л., Бустаманте П., Стэнтон Дж., Лу Д., Ву С., Гловчвски Дж., Рурк Т. и другие. Ретровирусная рекомбинация in vivo: характер репликации вируса и генетическая структура популяций вируса иммунодефицита обезьян (SIV) у макак-резусов после одновременной или последовательной интравагинальной инокуляции SIVmac239 Delta vpx/Delta vpr и SIVmac239 Delta nef.Дж Вирол. 2005;79(8):4886–95.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Эдвардс AWF. Генетическая теория естественного отбора. Генетика. 2000;154(4):1419–26.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google ученый

  • Купер ТФ. Рекомбинация ускоряет адаптацию, уменьшая конкуренцию между полезными мутациями в популяциях кишечной палочки. PLoS биол. 2007; 5 (9): 1899–905.

    КАС Статья Google ученый

  • Иммонен Т.Т., Конвей Дж.М., Ромеро-Северсон Э.О., Перельсон А.С., Лейтнер Т. Рекомбинация увеличивает разнообразие оболочки ВИЧ-1, способствуя выживанию латентных геномных фрагментов в популяции вируса плазмы. PLoS Comput Biol. 2015;11(12):e1004625.

  • Аррильдт К.Т., Джозеф С.Б., Суонстром Р. Белок Env ВИЧ-1: разноцветная оболочка. Curr Hiv-Aids Rep.2012;9(1):52–63.

    Артикул Google ученый

  • Шанкараппа Р., Марголик Дж. Б., Ганге С. Дж., Родриго А. Г., Апчерч Д., Фарзадеган Х., Гупта П., Ринальдо К. Р., Лерн Г. Х., Хе Х и др. Последовательные вирусные эволюционные изменения, связанные с прогрессированием инфекции вирусом иммунодефицита человека 1 типа. Дж Вирол. 1999;73(12):10489–502.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Адачи А., Гендельман Х.Э., Кениг С., Фолкс Т., Уилли Р., Рэбсон А., Мартин М.А. Продукция ретровируса, ассоциированного с синдромом приобретенного иммунодефицита, в клетках человека и других животных, трансфицированных инфекционным молекулярным клоном. Дж Вирол. 1986;59(2):284–91.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Wei XP, Decker JM, Wang SY, Hui HX, Kappes JC, Wu XY, Salazar-Gonzalez JF, Salazar MG, Kilby JM, Saag MS, et al.Нейтрализация антител и ускользание ВИЧ-1. Природа. 2003;422(6929):307–12.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Guindon S, Dufayard JF, Lefort V, Anisimova M, Hordijk W, Gascuel O.Новые алгоритмы и методы для оценки филогений максимального правдоподобия: оценка производительности PhyML 3.0. Сист биол. 2010;59(3):307–21.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Лоле К.С., Боллинджер Р.С., Паранджапе Р.С., Гадкари Д., Кулкарни С.С., Новак Н.Г., Ингерсолл Р., Шеппард Х.В., Рэй С.К. Полноразмерные геномы вируса иммунодефицита человека типа 1 от сероконвертеров, инфицированных субтипом С, в Индии, с признаками межсубтиповой рекомбинации. Дж Вирол. 1999;73(1):152–60.

  • Сонг Х.С., Гиорги Э.Е., Ганусов В.В., Кай Ф.П., Атрея Г., Юн Х., Карха О., Хора Б., Храбер П., Ромеро-Северсон Э. и др. Отслеживание рекомбинации ВИЧ-1 для определения ее вклада в эволюцию ВИЧ-1 при естественной инфекции. Нац коммун. 2018;9(1):1928.

  • Дин XH, Чжан XJ, Чун HH, Чжу YM, Вэй HM, Ву XY, He JS, Ван XQ, He YX. Липопептид на основе энфувиртида (T20) является мощным ингибитором слияния клеток ВИЧ-1: влияние на проникновение и ингибирование вируса.Дж Вирол. 2017;91(18):e00831-17.

  • Goodenow M, Huet T, Saurin W, Kwok S, Sninsky J, Wainhobson S. Изоляты ВИЧ-1 быстро эволюционируют. Квазивиды — свидетельство наличия вирусных смесей и предпочтительных нуклеотидных замен. J Acq Immun Def Synd. 1989;2(4):344–52.

    КАС Google ученый

  • Smyth RP, Davenport MP, Mak J. Происхождение генетического разнообразия ВИЧ-1. Вирус рез. 2012;169(2):415–29.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Абрахамс М.Р., Андерсон Дж.А., Джорджи Э.Е., Сейх К., Млисана К., Пинг Л.Х., Атрея Г.С., Треурнихт Ф.К., Кил Б.Ф., Вуд Н. и др.Количественная оценка множественности заражения вирусом иммунодефицита человека типа 1 подтипа С показывает непуассоновское распределение передаваемых вариантов (том 83, стр. 3556, 2009). Дж Вирол. 2009;83(13):6974.

    КАС ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Li H, Bar KJ, Wang SY, Decker JM, Chen YL, Sun CX, Salazar-Gonzalez JF, Salazar MG, Learn GH, Morgan CJ et al. Высокомножественная инфекция ВИЧ-1 у мужчин, имеющих половые контакты с мужчинами.PLoS Патог. 2010;6(5):e1000890.

  • Манский Л.М., Темин Х.М. Более низкая частота мутаций вируса иммунодефицита человека типа 1 in vivo, чем прогнозируется на основании точности очищенной обратной транскриптазы. Дж Вирол. 1995;69(8):5087–94.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Юнг А., Майер Р., Вартанян Дж. П., Бочаров Г., Юнг В., Фишер Ю., Миз Э., Уэйн-Хобсон С., Мейерханс А. Рекомбинация: множественно инфицированные клетки селезенки у пациентов с ВИЧ.Природа. 2002; 418 (6894): 144.

    КАС пабмед Статья Google ученый

  • Иноуэ М., Хокси Дж. А., Редди М. В., Шринивасан А., Редди Е. П. Механизмы, связанные с генерацией биологически активных частиц вируса иммунодефицита человека 1 типа из дефектных провирусов. Proc Natl Acad Sci U S A. 1991;88(6):2278–82.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Пиантадоси А., Чохан Б., Чохан В., Макклелланд Р.С., Овербо Дж.Хроническая инфекция ВИЧ-1 часто не защищает от суперинфекции. PLoS Патог. 2007;3(11):1745–60.

    КАС Статья Google ученый

  • Streeck H, Li B, Poon AFY, Schneidewind A, Gladden AD, Power KA, Daskalakis D, Bazner S, Zuniga R, Brander C, et al. Иммунная рекомбинация и потеря контроля после суперинфекции ВИЧ. J Эксперт Мед. 2008; 205(8):1789–96.

    КАС пабмед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Уотерс Л., Смит Э.Суперинфекция ВИЧ-1. Curr Opin Infect Dis. 2012;25(1):42–50.

    ПабМед Статья Google ученый

  • Simon-Loriere E, Galetto R, Hamoudi M, Archer J, Lefeuvre P, Martin DP, Robertson DL, Negroni M. Молекулярные механизмы рестрикции рекомбинации в оболочке гена вируса иммунодефицита человека. PLoS Патог. 2009;5(5):e1000418.

    ПабМед ПабМед Центральный Статья Google ученый

  • Нджай Х.Ф., Гали Ю., Ванам Г., Клайберг К., Дженнес В., Видаль Н., Бутель К., Мпуди-Нголле Э., Питерс М., Ариен К.К. Преобладание вируса иммунодефицита человека типа I (ВИЧ-I), циркулирующего в рекомбинантной форме 02 (CRF02_AG) в западной части Центральной Африки, может быть связано с его репликативной приспособленностью.Ретровирусология. 2006; 3:40.

  • Tebit DM, Nankya I, Arts EJ, Gao Y. Разнообразие ВИЧ, рекомбинация и прогрессирование заболевания: как фитнес «вписывается» в головоломку? AIDS Rev. 2007;9(2):75–87.

    ПабМед Google ученый

  • Фурати С., Ламбер-Никлот С., Сули С., Малет И., Валантен М.А., Дескур Б., Айт-Аркуб З., Мори Б., Карселейн Г., Катлама С. и др. Геном ВИЧ-1 часто дефектен в РВМС и ректальных тканях после длительной ВААРТ в результате редактирования APOBEC3 и коррелирует с размером резервуаров. J Антимикроб Chemoth. 2012;67(10):2323–6.

    КАС Статья Google ученый

  • Arenaccio C, Anticoli S, Manfredi F, Chiozzini C, Olivetta E, Federico M. Латентный ВИЧ-1 активируется экзосомами из клеток, инфицированных репликативно-компетентным или дефектным ВИЧ-1. Ретровирусология. 2015;12:87.

  • Ляо Х.К., Гу Ю., Диас А., Марлетт Дж., Такахаши Ю., Ли М., Судзуки К., Сюй Р., Хишида Т., Чанг С.Дж. и др. Использование системы CRISPR/Cas9 в качестве внутриклеточной защиты от инфекции ВИЧ-1 в клетках человека.Нац коммун. 2015;6.

  • Zhu WJ, Lei RY, Le Duff Y, Li J, Guo F, Wainberg MA, Liang C. Система CRISPR/Cas9 инактивирует латентную провирусную ДНК ВИЧ-1. Ретровирусология. 2015;12.

  • Пегу А., Асокан М., Ву Л., Ван К.И., Хатайе Дж., Казацца Дж.П., Го XT, Ши В., Георгиев И., Чжоу Т.К. и др. Активация и лизис клеток CD4 человека, латентно инфицированных ВИЧ-1. Нац коммун. 2015;6.

  • Обнажение ВИЧ-1 путем высвобождения кДНК вируса из капсидоподобных структур в ядрах инфицированных клеток

    Основные версии:

    1.Демаскирование эпитопа в ядре.

    Авторы утверждают, что CA-эпитопы на ядерных капсидах обычно маскируются CPSF6, тем самым ухудшая визуализацию в первичных CD4 + Т-клетках, и что обработка PF74 может выявить скрытые эпитопы (рис. 6). Однако, согласно некоторым публикациям, 15 мкМ PF74 дестабилизирует сердцевинные структуры в клетках. Таким образом, авторы должны продемонстрировать, что при этой дозе PF74 в ядре все еще могут существовать структуры, подобные сердцевине. В качестве альтернативы, распознавание антител может вместо этого отражать ремоделирование ядерной структуры вируса, чтобы обнажить эпитопы, распознаваемые антителом.Точно так же авторы отмечают, что в макрофагах сигнал ядерной СА легче обнаруживается с помощью IF, чем в Т-клетках. Не должен ли CPSF6 одинаково экранировать эпитопы CA в обеих клетках? Почему можно обнаружить внутриядерные КА в макрофагах без обязательного использования PF74? Наконец, также известно, что PF74 ингибирует связывание Nup153 с CA. Какой контроль был проведен, чтобы ингибирование связывания Nup153 не влияло на фенотипы?

    Как указано в обзоре, мы считаем, что маскировка эпитопа СА в ядре является потенциальной причиной отсутствия (или слабого) обнаружения СА на ядерных комплексах ВИЧ-1 с помощью иммуноокрашивания. Этого можно избежать с помощью различных методов экстракции и/или обработки PF74, которая препятствует связыванию CPSF6 с CA-решеткой. Однако мы не утверждали, что после обработки PF74 сохраняются стабильные сердцевинные структуры, как подразумевается в обзоре. Наши данные свидетельствуют о том, что интенсивность сигнала CA на ядерных субвирусных комплексах аналогична таковой на цитозольных комплексах, что указывает на то, что большинство молекул CA сохраняется в субвирусном комплексе ВИЧ-1 после проникновения в ядро. Наш анализ CLEM показал конусообразные и трубчатые структуры, похожие на ядро, а также очевидные остатки ядра в ядре без обработки PF74.Остаются ли эти структуры интактными после обработки PF74, однако, не анализировалось, и это не является частью нашего аргумента.

    Это оставляет важный вопрос, обусловлен ли наблюдаемый сигнал CA в первую очередь либо демаскированием CA путем удаления CPSF6, либо экспозицией эпитопа CA из-за ремоделирования структуры капсида с помощью PF74. Для решения этой проблемы мы проанализировали CPSF6 и CA-сигналы в зависимости от концентрации PF74 и времени обработки и сравнили сигналы ядерных и цитозольных комплексов.Мы также использовали моноклональное антитело, эпитоп которого близок к сайту связывания CPSF6.

    Дополнительные эксперименты по изучению эффекта экстракции и обработки PF74 проводили с клетками TZM-bl, клетками SupT1 и первичными Т-клетками CD4 + . Мы показываем, что:

    я. Либо обработка PF74, либо экстракция метанолом приводили к обнаружению ранее скрытых сигналов CA на ядерных субвирусных комплексах ВИЧ-1 в клетках TZM-bl. (новые рис. 4а, б, е и рис. 4 — дополнение к рис. 1б).

    ii. Распознавание и интенсивность сигнала ядерного CA-сигнала на субвирусных комплексах ВИЧ-1 зависели от концентрации PF74 и времени лечения (рис. 4g, h).

    III. Интенсивность сигнала CA оставалась неизменной на внеклеточных вирионах и цитозольных субвирусных комплексах ВИЧ-1 при обработке той же концентрацией PF74 в тех же клетках и эксперименте; это показывает, что обработка PF74 не вызывает усиления окрашивания из-за воздействия новых эпитопов (рис. 4 — дополнение к рисунку 1a, b, см. также v).

    ив. Интенсивность иммуноокрашивания CPSF6 и иммуноокрашивания CA была обратно пропорциональна (новый рисунок 4g)

    v. Аналогичные результаты, что и для поликлональной антисыворотки, были получены для моноклонального антитела с известным эпитопом вблизи области связывания CPSF6 (рис. 4 — дополнение к рисунку 1в, г). Это антитело эффективно связывалось с цитоплазматическими комплексами и частицами, связанными со стеклом, что указывает на то, что соответствующий эпитоп экспонируется в контексте собранного капсида; однако никакого сигнала не наблюдалось на ядерных субвирусных комплексах ВИЧ-1 в отсутствие экстракции PF74.После обработки PF74 сигналы CA также наблюдались на ядерных субвирусных комплексах и соответствовали интенсивности на цитозольных комплексах (новый рисунок 4j, k). С другой стороны, не наблюдалось различий в интенсивности сигнала на цитозольных комплексах, что указывает на то, что эта обработка не изменяет экспозицию эпитопа.

    в.и. Сигналы СА на ядерных субвирусных комплексах ВИЧ-1 также анализировали в линии Т-клеток и первичных Т-клетках CD4 + : обнаружение сигналов ядерных СА требовало обработки PF74 и экстракции метанолом (новый рисунок 7 — дополнение к рисунку 2) в этом тип клеток, в то время как на цитозольных субвирусных комплексах ВИЧ-1 в тех же условиях не наблюдалось изменения интенсивности сигнала КА.

    Таким образом, наши данные показывают, что сигнал CA на ядерных субвирусных комплексах ВИЧ-1 в значительной степени скрыт из-за плотного покрытия субвирусного комплекса CPSF6. В различных отчетах сообщалось о слабом и вариабельном окрашивании КА ядерных субвирусных комплексов (Chen et al., 2016; Chin et al., 2015; Francis et al., 2020; Hulme et al., 2015; Peng et al., 2015; Zhou et al., 2011), и эти различия могут быть связаны с различиями в методах фиксации и извлечения. Эксперименты по МДМ (Bejarano et al., 2018; Stultz et al., 2017) и клетки THP-1 (Rensen et al., 2021), обнаруживающие сильные ядерные сигналы CA, обычно выполняли после экстракции клеток для медь-опосредованной клик-реакции. Таким образом, надежное обнаружение сигналов CA на ядерных субвирусных комплексах ВИЧ-1 с помощью иммунофлуоресценции, по-видимому, зависит от удаления CPSF6 с помощью PF74 и/или от экстракции клеток (например, метанолом). В настоящее время мы не знаем, почему для разных типов клеток требуется разная интенсивность лечения; эти наблюдения могут указывать на специфические для клеточного типа различия в архитектуре кластера CPSF6 и/или на присутствие дополнительных белков, специфических для клеточного типа.Эти аспекты теперь упоминаются в Обсуждении исправленной рукописи. Наши результаты также согласуются с Chin et al., 2015, которые сообщили, что иммунодетекция CA на ядерных субвирусных комплексах ВИЧ-1 зависит от предварительного частичного расщепления образца протеазой.

    Мы пришли к выводу, что большая часть CA поступающего капсида ВИЧ-1 сохраняется на ядерных субвирусных комплексах во всех проанализированных типах клеток; эти наблюдения согласуются с очень недавними выводами, сделанными нами и другими (Burdick, 2020; Zila, Margiotta et al. , 2021). Предыдущая неудача в обнаружении CA на ядерных субвирусных комплексах с помощью иммунофлуоресценции, по-видимому, была в значительной степени связана с замаскированными эпитопами.

    Что касается опосредованного PF74 ингибирования связывания Nup153, мы хотим подчеркнуть, что лечение PF74 в нашем исследовании проводилось в течение коротких периодов времени в более поздние моменты времени после заражения. Таким образом, мы проанализировали субвирусные комплексы ВИЧ-1, которые уже вошли в ядро ​​и отделились от NPC до добавления PF74. Соответственно, взаимодействие CA-Nup153 или его ингибирование в этом исследовании не анализировались.

    2. Ключевой вывод этого исследования состоит в том, что интактные ядра могут проникать в ядро ​​через ядерные поры. Однако обработка афидиколином не обязательно полностью блокирует деление всех клеток, и авторы должны показать, что анализируемые клетки не могут делиться, например, с помощью EdU (который, по мнению авторов, не окрашивает ДНК клеток, обработанных Aph), хотя это может быть технически сложным. Несмотря на это, необходимо продемонстрировать полный блок клеточного деления в анализируемой клетке, чтобы исключить проникновение ядра во время митотического распада ядра.

    Мы согласны с рецензентом, что это важный момент, который необходимо решить. Мы провели дополнительные эксперименты для решения этой проблемы. Обработанные афидиколином (APC) клетки TZM-bl, экспрессирующие eBFP2.LMNB1 для маркировки ядерной оболочки, инфицировали, после чего проводили визуализацию синего канала живыми клетками в течение 12 часов p.i. В этот момент клетки ненадолго обрабатывали PF74, фиксировали, окрашивали с помощью иммуноокрашивания и визуализировали. Впоследствии фиксированные клетки повторно идентифицировали в видеоизображении живых клеток и анализе изображений, а количественный анализ проводили исключительно для клеток, которые не подвергались распаду ядра в течение всего 12-часового периода.Мы четко идентифицировали CA-положительные ядерные субвирусные комплексы ВИЧ-1 в этих клетках, которые, должно быть, проникли в ядро ​​через интактные ядерные поры. Интенсивность сигнала CA снова была аналогична таковой для цитозольных или внеклеточных частиц ВИЧ-1, подтверждая наш вывод о том, что в основном интактные капсиды проникают в ядро ​​​​через интактные ядерные поры. Новые данные представлены в виде нового рисунка 4 — дополнения к рисунку 1e, f и нового рисунка 4l-o в исправленной рукописи.

    https://doi.org/10.7554/eLife.64776.sa2

    Оценка общего размера резервуара ВИЧ

    В статье, опубликованной ранее в этом месяце в журнале Nature Medicine Джейком Эстесом и его коллегами, рассматривается сложная задача, связанная с попыткой определить распределение и общий размер резервуара персистирующего ВИЧ. Исследователи использовали различные тесты для измерения вирусной РНК и ДНК, в том числе новые методы визуализации, которые они разработали, названные RNAscope и DNAscope, в нескольких тканях необработанных или получавших АРТ макак (зараженных SIVmac251, SIVmac239 или SHIV), а также образцы лимфатических узлов и ректальной ткани из когорты из 20 человек, получающих АРВТ в Кампале, Уганда.

    Основные выводы заключались в том, что подавляющее большинство (~99,6%) клеток, экспрессирующих вирусную РНК, что указывает на некоторую степень продукции вируса, было обнаружено в лимфоидных тканях (лимфатических узлах, кишечнике, селезенке и легких). АРТ значительно снизила уровни вирусной РНК, но исследователи оценили общую нагрузку на организм в семь миллионов клеток, экспрессирующих РНК ВИЧ в любой момент времени в тканях, несмотря на подавление вирусной нагрузки до неопределяемого уровня в крови.

    Одним из предложенных объяснений продолжающейся экспрессии вирусной РНК является продолжающаяся репликация из-за более слабого проникновения АРВ-препаратов в ткани (в исследовании сообщается о субоптимальных уровнях АРТ в тканях макак).Но авторы отмечают, что тесты на вирусную РНК не смогли различить текущую активную репликацию вируса и продукцию вирусов реактивированными латентно инфицированными клетками. Нельзя ожидать, что АРТ заблокирует последний процесс; скорее, это помешало бы любым вирусам, которые продуцируются реактивированными латентно инфицированными клетками, продолжать свое существование и заражать другие клетки.

    Общий размер способного к репликации резервуара ВИЧ, который сохраняется во время АРВТ, оценивается примерно в 400 миллионов латентно инфицированных клеток на основе анализа уровней вирусной ДНК в тканях.Исследователи предполагают, что это в целом согласуется с другой недавней оценкой, которая при экстраполяции на все тело дает результат в 240 миллионов клеток. В реферате статьи указано более консервативно ~100 миллионов (мне не ясно, почему есть разница с оценкой, приведенной в статье). Эти цифры больше, чем предполагалось первоначально, и они подчеркивают сложность ликвидации латентной ВИЧ-инфекции.

    Вопрос о том, сохраняется ли обычно репликация ВИЧ в тканях, несмотря на АРТ, остается спорным, и многие авторы этого исследования ранее сообщали об этом, основываясь на анализе трех человек, получавших АРТ в течение шести месяцев (эта предыдущая работа цитируется в текущей статье).

    Но недавно эти результаты были оспорены исследовательской группой Мэри Кирни, которая не обнаружила доказательств репликации ВИЧ у детей, получавших АРТ с подавленной вирусной нагрузкой в ​​течение семи-девяти лет (работа Кирни первоначально была представлена ​​на КРОИ 2017 и с тех пор был опубликован в Journal of Clinical Investigation ). Кирни утверждал, что с первоначальными утверждениями была потенциальная проблема, потому что байесовская методология оценки эволюции ВИЧ не подходила для этой задачи.

    Недавняя статья Дэвида Асмута и его коллег также представляет противоположную точку зрения, обнаруживая, что концентрации АРТ в лимфоидной ткани, ассоциированной с кишечником (GALT), были адекватными почти во всех изученных случаях без признаков остаточной репликации ВИЧ.

    Решение вопроса о том, происходит ли РНК ВИЧ, которая обнаруживается, несмотря на АРТ, из продолжающейся активной репликации вируса или из реактивированных латентно инфицированных клеток (или из обоих), будет важным, поскольку это имеет значение для терапевтических подходов к уменьшению резервуара.

    Ричард Джефферис — директор проекта группы действий по лечению (TAG).

    [Примечание от TheBodyPRO.com: эта статья была первоначально опубликована Treatment Action Group 30 октября 2017 года. Мы разместили ее с их разрешения.

    Размер вич вируса: Высокая степень защиты от ВИЧ: ПРЕЗЕРВАТИВ

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован.