Как делают
Нахождение ВИЧ в пробах крови методом ПЦР выполняется двумя вариантами:
- исследуется провирус ВИЧ-инфекции, точнее его ДНК
- исследуется плазма или сыворотка крови на РНК ВИЧ-инфекции
Периферическая кровь, точнее ее мононуклеарные клетки, исследуются на содержание провируса.
По причине того, что ИФА дает вероятность выше 98% — 99,9%, ПЦР не является 100% подтверждающим анализом на наличие ВИЧ-инфекции.
Большой процент ложноположительных срабатываний зависит и от чистоты лаборатории, где проводят исследования, и от квалификации проводящего исследования.
ПЦР на ВИЧ-инфекцию – единственная диагностика до появления антител к ВИЧ.
То есть до минимум трёх месяцев с начала инфицирования.
Прогресс заболевания ВИЧ-инфекцией характеризуется нарастанием количества вируса в крови.
Проведение ПЦР говорит о стадии заболевания ВИЧ и эффективности антиретровирусной терапии.
Помимо вышеперечисленных условий, есть обязательные исследования крови на ВИЧ-инфекцию для:
- новорожденных от ВИЧ-инфицированной матери
- наблюдения за концентрацией ВИЧ-инфекции
Все остальные условия являются необязательными.
Процедура сдачи ПЦР для диагностики наличия ВИЧ-инфекции в организме проста.
Берется венозная кровь и проводится анализ.
Нужно воздержаться от употребления любых продуктов около десяти часов.
Не употреблять алкоголь, ограничить физическую активность, исключить эмоциональные нагрузки.
Для этого нужна очень чистая лаборатория.
При получении положительного результата его обязательно перепроверяют.
Для этого используют референц-лабораторию.
Там проводят более точный исследовательский способ диагностики.
К сожалению, универсальность не 100%, и зачастую результат анализа ложноположительный.
Его используют вспомогательным методом для установления наличия или отсутствия ВИЧ-инфекции в организме.
Если проводят скрининг на наличие ВИЧ-инфекции или ставят диагноз ВИЧ инфицирования, то используют метод ПЦР.
Методом проводят и количественную оценку нахождения ВИЧ в организме.
Так определяется степень и тяжесть патологических изменений в организме.
Уровень концентрации ВИЧ-инфекции, в организме диагностируемого определяют методом ПЦР.
До лечения исследуется кровь методом ПЦР и после, и можно оценить правильность проводимого курса лечения.
Те ли препараты назначают или нужно другие.
Проводят анализ, и в том случае, если антитела в крови есть, но их наличие не говорит о достоверности наличия ВИЧ-инфекции в организме.
Результаты анализов
Есть много поводов для исследования на наличие ВИЧ-инфекции в организме.
Предстоящая операция, планирование беременности, наличие в анамнезе случайных половых связей и другие похожие причины.
Есть категории работников (например, медицинские работники, учителя и другие) для которых эта процедура необходима, для допуска работы с людьми.
Есть определенная тревожная симптоматика, при которой анализ на ВИЧ-инфекцию проводят:
- при резкой потере веса
- при длительной диарее (около 3-х недель)
- при лихорадке невыясненной этиологии
- при росте лимфоузлов в разных местах
- при лимфо- и лейкопении
- при наличии необъяснимой пневмонии, системном кандидозе, туберкулезе, манифестном токсоплазмозе и других серьезных заболеваниях
Интерпретацией результатов проведенных анализов занимается только лечащий врач.
Какой бы ни был результат — это не повод заниматься лечением самостоятельно.
К тому же результат ввиду несовершенства метода может быть как ложноотрицательным, так и ложноположительным.
Иногда схожие результаты анализов у разных людей свидетельствуют о различной клинике.
Чаще делают количественный ПЦР-анализ на ВИЧ-инфекцию.
Этот анализ дает сведения о количестве вируса и отображается единицей копия/мл.
Расшифровка результатов:
- РНК вируса отсутствует или его очень мало (около 20 копий/мл)
- мизерное количество РНК (чуть больше 20 копий/мл)
- 20 – 106 копий/мл
- более чем 106 копий/мл
Самый опасный третий и четвертый результат.
Что делать, если результат анализа ПЦР на ВИЧ положительный
Анализы на ВИЧ-инфекцию делают в несколько этапов.
Это занимает период от двух до десяти дней.
Результаты анализов делятся на положительные, отрицательные и сомнительные.
Если результат сомнительный, то немного позже обязательно делают анализ еще раз.
Но даже положительный результат не окончательный.
Пересдача крови на анализ тоже делается.
На достоверность результата влияние оказывает некоторые заболевания и состояния организма.
Проведение анализа может быть конфиденциальным или анонимным.
При конфиденциальном обследовании имя обследуемого человека называется.
При анонимном обследовании анализ делают по идентификационному номеру.
Результат анализа может узнать только подвергшийся обследованию человек.
Даже положительный результат остается тайной.
Это врачебная тайна, и она не может быть нарушена.
Но даже подтвержденный положительный результат еще не приговор.
В современных условиях ВИЧ-инфицированные подвергаются пожизненной антиретровирусной терапии, что позволяет сохранить им жизнь.
Наоборот, чем раньше обнаружено наличие ВИЧ-инфекции в организме, тем плодотворнее будет лечение.
Перспективы метода в диагностике ВИЧ-инфекции
ПЦР относится к молекулярно-биологическим методам исследования.
Помимо диагностики ВИЧ-инфекции и ИППП, метод зарекомендовал себя в генетических разработках, в ветеринарной науке, сельском хозяйстве.
Продукты питания исследуют на содержание ГМО с помощью ПЦР.
Также сфера применения метода судебно-медицинская экспертиза.
Но все же нас интересуют, в первую очередь, перспективы ПЦР для постановки диагноза наличия ВИЧ-инфекции.
С помощью ПЦР выявляются даже единицы ВИЧ присутствия в крови.
Анализ характеризуется очень высокой чувствительностью – от одного до ста единиц ВИЧ.
Выраженная уникальность происходит за счет того, что идет поиск специфичной ДНК (или РНК) присущий конкретному возбудителю заболевания.
Реакция протекания операции копирования фрагментов РНК характеризуется высокой специфичностью метода ПЦР.
Поэтому амплификационная тест-система (ПЦР) выигрывает перед другими тест-системами иммунологического характера (например, ИФА).
Потому что нет «войны» между антигенами.
Еще важна и скорость ПЦР анализа.
Один рабочий день уходит на проведение ПЦР.
Но есть у метода и негативные качества.
Если ВИЧ-инфекция попадет в исследуемую кровь случайно, из воздуха, при ее отсутствии в организме, реакция копирования вируса все равно будет идти.
Поэтому и нужна такая стерильность в лаборатории, в которой проводиться ПЦР.
Благодаря большому непостоянству генетического материала ВИЧ уменьшаются диагностические показатели чувствительности.
Хотя сам метод очень чувствительный.
Чувствительность метода ПЦР характеризуют 98%. У ИФА этот показатель выше – 99%.
А за данными статистики или вовремя не продиагностируемые заболевшие или, наоборот, неправильно продиагностируемые о наличии в организме ВИЧ-инфекции.
Для лабораторий, в которых ПЦР проводиться, разрабатываются специальные системы внутреннего контроля, с целью повышения качества диагностики.
На основе стандартизированных межлабораторных панелей качества минимализируют ошибки тестирования.
Если все сделано правильно, без ошибок, то с помощью ПЦР можно определить только один фрагмент провируса на десять тысяч – сто тысяч лимфоцитов.
Методом определяют и резистентность к препаратам антиретрорвирусной терапии.
Конечно, метод несовершенный, но у него большие перспективы.
Особенно на ранних стадиях инфицирования, когда в крови еще нет антигенов.
Метод хоть и недешевый, но правильно проведенный, с соблюдением всех условий правильной постановки, очень информативный.
За ним — большое будущее.
В умелых руках ПЦР мощный диагностический инструмент.
Главное – уметь им пользоваться и избегать всевозможных ошибок.
Автор Владимир Черкесов На чтение 7 мин.
Существуют различные способы обнаружить вирус иммунодефицита, именно анализ на ВИЧ ПЦР методом заслуживает особого внимания. Он основывается на том, что находит генетический материал возбудителя. Это исключает ошибку практически гарантированно. Исторически методика планировалась как чисто научный способ, но нашла применение.
ПЦР через сколько можно сдать на ВИЧ при подозрении на заражение? Отличие как раз и заключается в оперативности, потому прописать такой анализ могут на самых ранних стадиях развития болезни. Если потенциальный больной пришел к врачу сразу же после возможного инфицирования и признаков жизнедеятельности вируса еще нет, то будет назначен именно ПЦР анализ. Он работает уже с четвертого дня присутствия вирионов в крови. Для точности рекомендуется анализ примерно на 14-й день после опасного взаимодействия.
Какова достоверность ПЦР на ВИЧ через 2 недели? Как установлено, достоверность определения наличия вируса методом полимеразно-цепной реакции очень не вызывает сомнений. С 80-х годов прошлого столетия именно этот тест массово применяется и считается одним из точнейших, его разработчик получил Нобелевскую премию. Лауреат предвидел перспективность полимеризации уже в ту эпоху.
Происхождение анализа методом ПЦР
Датой рождения можно назвать 1983 год. Метод основан на том, чтобы вычленить фрагмент нуклеотидной цепи чужака, это может быть как рибонуклеиновая кислота так и дезоксирибонулеиновая, искусственно размножить его и исследовать. Специалист по ПЦР ДНК ВИЧ берет и размножает по принципу комплементарности, выстраивая довольно длинную цепочку, которую удобно рассмотреть и подвергнуть тестированию. ПЦР РНК ВИЧ осуществляется так же, только берется плазма или сыворотка.
Возникновение этого подхода в широкой практике явилось настоящим прорывом и позволило совершить большой шаг в вопросе помощи больным. Таким образом стало реальным помогать людям на самых ранних этапах, обнаруживать недуг еще до появления специфичных антител. С этого дня истории медицины, ВИЧ уже не является приговором.
Диагностика ВИЧ ПЦР
Для исследования методом полимеразно-цепных реакций надо взять совсем немного инфекционного материала, потому поставить диагноз можно быстро и безотлагательно.
Диагностика ВИЧ ПЦР точна, требует виртуозного уровня квалификации от работников, которые занимаются исследованием. Современные лабораторные помещения много раз проверяют данные, которые получают, прежде чем сообщить итог обратившемуся.
Диагностика ВИЧ инфекции ПЦР методом занимает один день или несколько, все зависит от загруженности персонала.
Есть некоторые желательные условия к сдающему анализ, чтобы получить максимально правдивый ответ:
- Не есть 8-10 часов, если к этому нет противопоказаний;
- За пару дней отказаться от алкоголя;
- Сутки до не практиковать спортивных упражнений.
Это все, что должен сделать испытуемый. Остальное – дело медработников. Стерильность в помещении должна быть 100%, референц-лаборатории ведущих центров регулярно проверяются на предмет чистоты и исправности стерилизаторов. ПЦР применяют и для того чтобы удостовериться в диагнозе, и для подсчета вирусных частиц в крови, то есть вирусной нагрузки.
Через сколько можно сдать анализ ПЦР на ВИЧ?
Многие все же не доверяют результатам, которые получаются в первые дни после контакта с возбудителем. Анализ на ВИЧ ПЦР через какое время считается самым оптимальным? Чем больше времени проходит с момента попадания вируса в тело, тем проще его выявить. Но не следует забывать, что и лечить больного со временем все сложнее. Если достоверно известно, что был контакт с больным человеком, то не следует тянуть больше 14 дней. Если нет информации о контактах с положительными на ВИЧ людьми, то анализ нужно сдать сразу при появлении первых симптомов.
ПЦР ВИЧ на 9 неделе имеет высокую точность, но на этом сроке могут предложить и другое исследование, ИФА. Этот альтернативный анализ более дешевый, также точный, но основан на исследовании антител, которые, к сожалению, появляются не сразу после инфицирования. В идеале, для подтверждения диагноза, проводят оба анализа, сроки устанавливает врач.
Качественный ПЦР на ВИЧ дает понимание, действительно ли вирус иммунодефицита присутствует в организме. Этим же методом можно определить и другие инфекции.
Как проходит анализ на ВИЧ методом ПЦР?
Анализ на ВИЧ методом ПЦР процедура не сложная и начинается с забора венозной крови у пациента. Исследовать могут как ДНК, так и РНК, но сама процедура взятия материала будет одинаковой.
С помощью специальных реагентов, праймеров, в стерильной лаборатории проводится анализ. За единицу времени количество копий вырастает до определенных значений, эти значения оценивает сотрудник лаборатории. Проводится также определение возбудителя, чтобы установить, что речь идет о том самом вирусе. Таким образом, метод дает возможность качественного и количественного исследования биоматериала.
При каких условиях диагностика ВИЧ инфекции ПЦР методом обязательна?
Так как анализ не из дешевых, его проводят не всем и не всегда. Правда, есть ряд случаев, когда он обязателен. Донорам, к примеру, обязательно нужно сдать анализ на ВИЧ ПЦР. Также анализ проводят в случае непредвиденных аварий в медицинских учреждениях и лабораториях, и при этом есть риск контактов здоровых людей с кровью инфицированных.
В большинстве случаев исследование проводится на добровольных началах. Обязать могут только медицинских работников и, иногда, педагогов и других работников сферы образования, которые контактируют с маленькими детьми. Также основанием для принудительного обследования могут послужить признаки резкого снижения иммунитета.
Результаты анализа ПЦР на ВИЧ их точность и достоверность
Тест ПЦР на ВИЧ достоверность показывает очень высокую, до 99%. Следует напомнить, что точность зависит и от срока. На пятый день после проникновения вируса в тело, точность составляет примерно 80%. Уже к 14 дню этот показатель повышается до 98%. Далее доходит до 99%.
Практика показывает, что ложноотрицательных результатов практически не бывает, порой случаются ложноположительные. ПЦР на ВИЧ точность 99% дает вполне хорошее представление о состоянии здоровья человека, контактировавшего с ВИЧ-позитивными людьми.
Анализ ПЦР ВИЧ на раннем этапе дает шанс оперативно среагировать на проблему, и своевременно принять меры по продлению активной жизни. Провериться будет не лишним, если есть риск заражения.
ПЦР на ВИЧ отрицательный, что это значит?
ПЦР на ВИЧ отрицательный, как уже было сказано выше, практически не может быть ложным. В таких ситуациях врач ставит диагноз «здоров» и дальнейшее обследование не показано, если, конечно, ос временем не появится клинических симптомов заболевания.
Что делать при положительном результате анализа ПЦР при ВИЧ?
Ситуация совсем иная, когда ПЦР тест на ВИЧ дал положительный результат. В этом случае можно рассчитывать на ошибку, но, чтобы подтвердить эту гипотезу, необходимо продолжить обследование. Повторный тест и дальнейшее исследование другими методами провести нужно обязательно, и врач обязательно назначит анализы. Игнорировать требования врача нельзя.
ПЦР при ВИЧ проводится на ранних стадиях, а также иногда назначается при прохождении пациентом антиретровирусной терапии.
Перспективы теста ПЦР
Метод ПЦР в диагностической медицине можно считать перспективным, действенным и точным. Пока что единственным его минусом можно считать высокую стоимость. Исследование генетического материала вирусной частицы дает возможность с высокой точностью подтвердить или опровергнуть наличие инфекции, а также предсказать скорость развития заболевания. ДНК тест на ВИЧ, или же РНК анализ, дает точность до 99%, причем на самых ранних этапах. Раннее диагностирование ВИЧ дает огромные шансы на успешную терапию.
Результат оценивают после 14 дней с предполагаемого момента проникновения вируса, предположительно это может незащищенный половой контакт или инъекции иглой сомнительной чистоты. Отрицательный результат при анализе ПЦР можно считать достоверным, в то время как положительный подлежит дополнительной проверке.
*Если вам не повезло и анализ ПЦР на ВИЧ показывает положительный результат, не стоит отчаиваться. В настоящее время существует целый список эффективных антиретровирусных препаратов, которые способны замедлить развитие болезни и продлить жизнь на 30-40 лет.
сколько делается, подготовка и цена ПЦР на ВИЧ
ВИЧ – вирус иммунодефицита человека является причиной развития у человека синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД). Одно из условий эффективного лечения заболевания является ранняя диагностика. ПЦР на ВИЧ – это метод, дающий наиболее точные результаты в обнаружении у человека опасного заболевания. Если человек планирует проходить тесты ПРЦ на ВИЧ, цена их в платных клиниках может быть высокой. Однако отказываться от исследований ни в коем случае нельзя.
Что такое ПЦР?
Полимеразная цепная реакция – это точный метод обнаружения инфекций. Он основан на выделении и исследовании генетического материала – ДНК и РНК. В качестве биологических материалов при использовании метода ПЦР на ВИЧ берут кровь, слюну, мокроту и выделения половых органов.
ПЦР тест на ВИЧ и другие болезни определяет возбудителя даже при минимальном количестве его клеток. Иногда ПЦР диагностика ВИЧ позволяет обнаружить проблему при наличии единичных клеток вируса.
В ходе ПЦР анализа на ВИЧ определяется патогенный организм, его природа, а также степень воздействия на организм. Полученная информация о вирусной нагрузке ВИЧ методом ПЦР важна при выборе метода лечения и лекарственного препарата. Сегодня указанный вид диагностики позволяет обнаружить практически все известные вирусные патологии, даже те, которые могут годами находиться в организме и ничем себя не проявлять.
Для чего необходим тест ПЦР?
Это исследование является ключом для диагностики большого количества заболеваний. ПЦР на ВИЧ и прочие патологии точно обнаруживает наличие патогенных организмов – вирусов и грибков. Следовательно, анализ назначается при любом подозрении на инфекционное бактериальное или вирусное заболевание.
Тест на полимеразную цепную реакцию необходим и для обнаружения мутировавших бактерий и вирусов и раковых клеток.
Тест с помощью ПЦР – это золотой стандарт ранней диагностики инфекционных болезней. Точность анализа ПЦР на ВИЧ достигает в лучших лабораториях 99,8%. Стоимость ПЦР на ВИЧ в клиниках, обеспечивающих такие высокие результаты, может быть достаточно высокой. Однако именно сверхточные результаты анализов – залог успешного лечения.
Существуют определенные категории лиц, которым делается анализ на ВИЧ методом ПЦР:
- Детям, рожденным инфицированными матерями в первые двое суток жизни. При этом не исследуется пуповинная кровь. Повторно ПЦР на ВИЧ младенцу делается в возрасте полтора – два месяца, при условии отсутствия грудного вскармливания – от 4 до 6 мес. При проведении повторных ПЦР на ВИЧ цена анализов может отличаться;
- Лицам, находящимся в инкубационном периоде. Сколько делается ПЦР на ВИЧ зависит от особенностей организма пациента и лаборатории. Следует помнить о том, что инкубационный период этого заболевания может длиться годами. Так как достоверность ПЦР ВИЧ высокая, анализ позволяет обнаружить даже минимальную активность вируса;
- Беременным женщинам, которые имели или имеют инфицированных партнеров и не обследовавшихся раньше;
- Потребителям наркотических веществ, в том числе и беременным женщинам, потреблявшим или потребляющим наркотики. Цена ПЦР анализа ВИЧ для таких людей не отличается;
- Лицам, имеющим сомнительные результаты иммуноферментного анализа ПЦР на ВИЧ обязателен. То же относится и к лицам, имеющим ложноположительный ПЦР на ВИЧ. В этом случае анализ сдают повторно через месяц или полтора. От того, через какое время делается ПЦР диагностика ВИЧ при повторном обследовании, зависит точность результата и адекватность назначенного лечения.
Как проходит диагностика?
Диагностика ПЦР на ВИЧ делается для:
- качественного определения провирусной ДНК вируса;
- качественного и количественного определения вирусной РНК.
Результаты стоит ожидать в зависимости от того, сколько делается ПЦР на ВИЧ.
Основной лабораторный маркер тяжести и прогрессирования вируса иммунодефицита человека – это количественное определение вирусной РНК (т.е. вирусной нагрузки). Она дает возможность следить за эффективностью антиретровирусных препаратов.
Кровь для анализа берут из вены. Если назначено обследование ПЦР на ВИЧ, подготовка к нему должна быть максимально тщательной, чтобы результаты были корректными.
Кровь для этого лабораторного исследования нужно сдавать натощак. Минимальный перерыв в приеме еды – 8 часов (рекомендуется еще больше увеличить этот промежуток до 12 часов). Бывает, что у пациента нет возможности посетить лабораторию утром. В этом случае биоматериал сдается после шестичасового перерыва в приеме пищи.
Перед сдачей венозной крови необходимо исключить факторы, отрицательно влияющие на результаты обследования. Прежде всего, это физического напряжение (занятия спортом, поднятие тяжестей, бег и даже подъем по лестнице). Если такие факторы имели место, то перед сдачей крови следует побыть в спокойной обстановке как минимум полчаса.
Кровь нельзя сдавать в состоянии сильного психоэмоционального возбуждения. Накануне желательно отказаться от просмотра остросюжетных фильмов и телепередач. В это время необходимо оградить себя от любых стрессовых факторов.
За 2 дня до обследования нужно исключить из меню жирную, жареную пищу и особенно спиртное. В противном случае ПЦР диагностика ВИЧ покажет неверные результаты. Бывает, что накануне состоялось застолье. В этом случае нужно сообщить врачу и перенести забор крови на день или два. За сутки перед анализом нужно воздержаться и от курения.
Кровь нужно сдавать до начала приема антибиотиков или химиотерапии. Если же лечение указанными препаратами имело место, то ПЦР диагностика ВИЧ переносится примерно на 2 недели. Время, за сколько делается ПЦР на ВИЧ может увеличиться.
Как и где делают анализ?
Многих интересует, сколько стоит анализ ПЦР на ВИЧ и где сделать ПЦР на ВИЧ. Его можно сдать в любой поликлинике или государственной больнице. В центрах лечения СПИД тест делают бесплатно и анонимно: вопрос, сколько стоит тест ПЦР на ВИЧ здесь не имеет смысла. Цена ПЦР на ВИЧ в частной клинике может отличаться в зависимости от региона и престижности диагностического центра. Получить результат анализа в центрах можно, назвав номер, который сообщался во время взятия крови.
Клиентов интересует, сколько делается ПЦР на ВИЧ. Обычно результат анализов ожидают от 2 до 10 суток, иногда несколько больше.
Отрицательный результат ПЦР на ВИЧ не требует дополнительной консультации: он свидетельствует о том, что все в порядке. При выполнении исследований на инфекционные болезни, в т.ч. ПЦР на ВИЧ, подготовка должна учитывать состояние иммунной системы. Если период инфицирования небольшой, то в результатах может проявиться отрицательный результат. Для уточнения диагноза стоит еще раз пройти анализ на ВИЧ методом ПЦР через месяц или два.
При получении положительного результата врач рекомендует пациенту обратиться в центр лечения СПИД. Лечение ВИЧ-положительных граждан России бесплатно. Цена ПЦР на ВИЧ может возрасти в частных клиниках.
Нужно учитывать, что в разных лабораториях, поликлиниках и медицинских центрах возможно применение разных методов обследований и единиц измерения результатов. Оценка их будет корректной, если все время сдавать анализы в одном и том же учреждении и, желательно, в одинаковое время. Тогда сравнение результатов будет корректным, и диагноз будет поставлен точным. От этого будет зависеть способ лечения и его результат.
Метод полимеразной цепной реакции незаменим для точной диагностики вирусных заболеваний. Если врач рекомендует пройти такую диагностику, не нужно отказываться от нее.
ПЦР — это один из основных методов диагностики инфекционных заболеваний. Применяется он и при определении ВИЧ инфекции.
Используется ПЦР для различных целей.
Это может быть:
- первичная диагностика инфекционного заболевания;
- оценка прогноза;
- определение вирусной нагрузки;
- подбор лечения;
- определение резистентности к антиретровирусным препаратам.
В ходе реакции ПЦР выявляют РНК вируса или ДНК провируса из клеток крови. Точность исследования достаточно высокая.
Наибольшая точность у метода, предполагающего обнаружение ДНК. Он позволяет выявить провирус при его концентрации от 1 до 5 копий ДНК на 1 миллион клеток. Исследование обладает высокой специфичностью. Она достигает 97%. Причем, если обнаруживается высокая вирусная нагрузка, то специфичность теста достигает 100%.
Ложноположительные результаты всегда дают низкий уровень вирусной нагрузки. Поэтому при обнаружении такого результата может потребоваться повторное определение ДНК провируса.
ПЦР имеет ограниченное применение. Этот анализ используется чаще всего не для первичной диагностики инфекции, а уже в процессе лечения. Тогда как первичная диагностика проводится с помощью серологических исследований. Это анализы, при которых в крови определяется уровень антител к ВИЧ. Они стоят гораздо дешевле.
ПЦР обходится пациенту в частных лабораториях в сумму 150-200 долларов США. Тем не менее, иногда этот способ бывает необходимым и при первичной диагностике инфекции. Он раньше всего становится информативным. С помощью анализа можно диагностировать ВИЧ уже в острый период. В это время человек страдает от повышенной температуры тела, боли в мышцах и суставах, тошноты высыпаний на коже и других симптомов. Хотя иногда они отсутствуют.
Острый период наступает сразу после инфекционного. В это время антитела методом ИФА еще могут не определяться. А ПЦР уже становится положительной. Однако оснований для назначения данного исследования при возникновении у больного ранних симптомов ВИЧ обычно не возникает. Потому что эти симптомы неспецифичны.
Человек просто идет к терапевту и лечится от острой респираторной вирусной инфекции.
Только если у него есть основания считать, что он заражен ВИЧ-инфекцией, может проводиться первичная диагностика методом ПЦР. Например, если человек имел половые контакты с ВИЧ-положительным партнером. А впоследствии у него проявились симптомы, вызывающие подозрение на инфицирование. Тогда ПЦР даст возможность раньше выявить заболевание и получить своевременную терапию. Ему будут назначены антиретровирусные препараты, которые блокируют размножение вируса и предотвращают нарушения иммунитета.
Антитела становятся положительными только в латентный период. Определение ДНК провируса может быть качественным или количественным. Качественный анализ означает, что результат выдается положительный или отрицательный. Вирусная нагрузка не определяется.
В диагностике ВИЧ вирусная нагрузка имеет большое прогностическое значение. Поэтому чаще используется количественный тест. ПЦР таким образом помогает выяснить, насколько много вирусов содержится в крови пациента. Исходя из этого, планируется необходимый объем терапевтических мероприятий.
Тест ПЦР ультрачувствительный. Он почти не дает ложноотрицательных анализов. Потому что благодаря ПЦР можно выявлять даже минимальные концентрации вируса в организме.
Этот метод часто используется для первичной диагностики ВИЧ инфекции у детей, которые рождены от больных матерей.
Анализ на антитела в детском возрасте не информативен. Потому что в их крови могут циркулировать антитела матери. Их наличие не говорит о том, что ребенок болен. Поэтому в первые 2 месяца жизни малыш должен сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР. Через несколько месяцев его проводят повторно. Если оба анализа отрицательные, нет оснований полагать, что у ребенка инфекция. Скорее всего, он здоров. Но кормить грудью его нельзя. Потому что вирус передается через грудное молоко.
В возрасте 1 год при отрицательных результатах анализов ребенка снимают с учета. Показанием для обследования детей может быть только их рождение от ВИЧ-позитивных матерей. Потому что симптомов инфекции у них нет до возраста 5 лет и более. Очень редко клинические признаки появляются раньше.
В среднем риск передачи ВИЧ от матери к ребенку, если она больна, составляет 30%. Антитела в детском организме к этому возбудителю могут обнаруживаться в течение первых полутора лет жизни. К этому времени ребенок серопозитивный всегда, независимо от наличия у него заболевания. После 2 лет жизни диагностика может проводиться с помощью анализа крови на антитела.
Анализ нет смысла сдавать в первые дни жизни ребенка. Потому что в это время возможны ложноотрицательные результаты. Только у одного ребенка из трех в этот период может быть выявлено ДНК провируса в случае, если малыш инфицирован. А вот спустя месяц чувствительность теста достигает 93%.
Это меньше, чем у взрослых. Именно по этой причине требуется двукратное проведение теста с разрывом в 1-2 месяца. Проведение химиопрофилактики ВИЧ не снижает диагностической ценности исследования, что является одним из его преимуществ.
Помимо ДНК провируса, определяется также РНК вируса иммунодефицита человека. Это исследование проводится в основном не для первичной диагностики. Оно назначается пациентам с уже диагностированным заболеванием. Основная цель — это мониторинг эффективности терапии и прогноз патологии. Для определения РНК — это ранний маркер результативности лечения.
С помощью этого метода:
- решается вопрос о назначении антиретровирусной терапии;
- оценивается, насколько эффективным является проводимое лечение;
- проводится мониторинг клинического течения инфекции;
- у беременных с помощью данного теста на месяц до родов определяется риск передачи ВИЧ ребенку, соответственно, оценивается целесообразность кесарева сечения.
Кроме того, с помощью ПЦР тестируют донорскую кровь. Данный метод диагностики указан в соответствующем приказе РФ от 2008 года.
Разные тест-системы выявляют вирус в разных концентрациях. Минимальный порог отличается. Он может быть от 20 копий в мл, тогда как другие системы определяют только от 150 копий в мл.
Вместе с исследованием на РНК вируса иммунодефицита может быть проведена оценка чувствительности к антиретровирусным препаратам. Это возможно только в случае, если вирус определяется в количестве более 1 тысячи копий в мл.
Оценивается чувствительность к таким препаратам:
- ингибиторам протеазы;
- ненуклеозидным или нуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы.
Показания к исследованию:
- снижение эффективности проводимой терапии, если нет других видимых причин уменьшения эффекта от препаратов;
- острый период инфекции, до начала антиретровирусной терапии, если точно известно, что человек инфицирован от партнера, у которого лечение стало неэффективным (имеет место резистентность к препаратам).
Резистентность к антиретровирусной терапии может быть первичной или вторичной.
- Первичная — это когда человек изначально заражен устойчивым вирусом.
- Вторичная развивается в случае, когда человек неправильно лечился.
Например, не вовремя получал препараты, делал перерывы в лечении, получал неадекватные дозы и т.д.
Признаки резистентности:
- РНК вируса иммунодефицита не снижается в течение 6 недель лечения;
- рецидив заболевания (обнаружение высокой концентрации РНК на фоне непрекращающейся терапии, если ранее была достигнута супрессия).
При этом важно исключить другие возможные причины прогрессирования болезни, за исключением резистентности. Нужно убедиться, что лечение действительно было непрерывным. То есть, что больной не игнорировал рекомендации врача и не прекращал лечение. А также что он не имеет заболеваний, при которых может нарушиться усвоение лекарственного препарата в желудочно-кишечном тракте.
Определение резистентности к антиретровирусным лекарствам дает возможность пересмотреть схему терапии. В неё включают те препараты, к которым вирус чувствительный.
Такое лечение не приводит к полному излечению ВИЧ, но:
- продлевает жизнь;
- сохраняет трудоспособность пациента;
- уменьшает риск передачи инфекции;
- нормализует состояние иммунитета.
Через сколько можно
Часто пациенты спрашивают, через сколько времени можно делать анализ методом ПЦР на ВИЧ. Это исследование проводится гораздо раньше, чем ИФА. Патологию можно выявить в остром периоде, а иногда и в инкубационном периоде. Сдавать анализ можно через 2-4 недели. В то время как кровь на антитела сдают не раньше, чем через 6 недель.
ПЦР на ВИЧ может быть положительным уже спустя 14-21 день после возможного инфицирования.
Но если анализ отрицательный, это не гарантирует отсутствие инфекции.
Лучше провести подтверждающий тест медом ИФА через несколько недель. А вот если ПЦР положительный, то очень мало шансов, что результаты анализа неправильные. Сдать анализ на ВИЧ методом ПЦР можно в нашей клинике.
Наши преимущества:
- нет очередей — сдача анализов по записи на определенное время;
- быстрые сроки выполнения анализов;
- возможность анонимного исследования;
- никому кроме вас мы не сообщим результаты анализов.
У нас используются самые современные методы диагностики, включая определение РНК вируса или ДНК провируса. При необходимости можно оценить результаты терапии и провести оценку резистентности ВИЧ к лечению антиретровирусными препаратами. Результаты вы получите через несколько дней.
Анализ ПЦР — точная диагностика инфекций
Полимеразную цепную реакцию (Polymerase chain reaction, ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году американский биохимик Кэри Б. Мюллис. В 1993 году за это открытие он был удостоен Нобелевской премии.
Сегодня области применения ПЦР как современного метода молекулярной биологии чрезвычайно широки. Особое место диагностика ПЦР занимает в медицинской практике. И причина этому достаточно проста: полимеразная цепная реакция делает невозможное возможным.
Часто диагностику ПЦР образно описывают как метод, с помощью которого можно находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл. «Иглой» является крошечный фрагмент генетического материала клеток (ДНК или РНК).
Таким образом, открытие этого метода — одно из наиболее выдающихся событий в области молекулярной биологии за последние десятилетия. Развитие метода ПЦР позволило медицинской диагностике в целом подняться на качественно новый уровень.
Основы ПЦР
Основа метода — многократное избирательное копирование (амплификация) определённого участка ДНК с целью получения такого количества генетического материала, которого будет достаточно для визуальной детекции. При этом многократно копируется (амплифицируется) только заданный участок ДНК при условии, что он присутствует в исследуемом биоматериале.
Кроме того, исследование помимо простого увеличения количества копий участков ДНК позволяет проводить другие манипуляции с генетическим материалом. Поэтому метод широко применяется в научных исследованиях, биологической и медицинской практике: в диагностике инфекционных и наследственных заболеваний, при выявлении мутаций, генотипировании, установлении отцовства, идентификация личности и др.
ПЦР в диагностике инфекционных болезней
Сегодня ПЦР-диагностика инфекций — один из самых точных, чувствительных и эффективных клинических лабораторных методов. Причём спектр выявляемых возбудителей практически неограничен – была бы разработана тест-система для ПЦР-анализа искомого возбудителя.
Благодаря своей высокой чувствительности, ПЦР позволяет выявить возбудителя даже при его минимальном содержании (то есть в исследуемом биоматериале присутствуют всего несколько молекул его ДНК).
ПЦР выявляет возбудителей инфекционных заболеваний тогда, когда это невозможно сделать другими методами (иммунологическими, культуральными, микроскопическими). Поэтому для целого ряда возбудителей инфекций метод полимеразной цепной реакции стал «золотым стандартом», он проверен временем и апробирован клинически. В современной лабораторной диагностике инфекционных болезней ПЦР — самый чувствительный и специфичный метод прямого обнаружения возбудителей. Это позволяет не только установить этиологию заболевания, но и контролировать течение инфекционного процесса и оценивать эффективность проводимого лечения.
Анализ на ИППП методом ПЦР особенно актуальны при бессимптомном течении инфекционного процесса, вызванного безусловно-патогенными микроорганизмами (Хламидия , качественное определение ДНК; Микоплазма, качественное определение ДНК; Возбудитель гонореи, качественное определение ДНК; Возбудитель трихомоноза, качественное определение ДНК). Например, при хронической гонорее у женщин даже с помощью бактериологического метода часто не удается выявить гонококк, несмотря на имеющиеся симптомы хронического воспалительного процесса в шейке матки или уретре.
Современная ПЦР-диагностика позволяет не только выявить генетический материал возбудителей инфекций, но и определить концентрации их ДНК/РНК (количественный формат исследования). Определение количества возбудителей имеет важное значение в решении вопроса о назначении лечения, особенно если выявлены условно-патогенные микроорганизмы (Микоплазма, количественное определение ДНК; Типирование уреаплазмы, количественное определение ДНК) .
Одним из основных направлений развития метода ПЦР является разработанный в CMD формат «Мультипрайм», позволяющий выявить в одной пробирке (и одной реакции) нескольких патогенов.
ПЦР-диагностика гепатитов
В настоящее время известно как минимум 5 вирусов, способность которых вызывать поражение печени доказана. Это возбудители гепатита А, В, С, D, Е. В редких случаях гепатит может быть вызван вирусами Эпштейна-Барр и простого герпеса. Способность поражать печень таких агентов как вирусы ТТ и гепатита G сегодня признается не всеми. Все эти вирусы относятся к различным семействам, имеют разные биологические свойства и соответственно, тактика лечения будет тоже значительно отличаться в зависимости от этиологии гепатита.
Учитывая вышеизложенное, весьма актуальной проблемой является адекватная этиологическая диагностика вирусных гепатитов с выявлением конкретного возбудителя. Без использования современных молекулярно-биологических методов это невозможно. Поэтому диагностика гепатитов методом полимеразной цепной реакции — один из самых важнейших шагов в установлении причины заболевания и определения дальнейшей тактики лечения.
ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции
В настоящее время для лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции используется наиболее доступный и одновременно чувствительный подход — обнаружение в крови антител к ВИЧ с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) – с последующим подтверждением положительных результатов анализа методом иммуноблоттинга (ИБ). Эффективность выявления лиц, инфицированных ВИЧ, с помощью данного подхода может достигать 99% и более.
Но серологическая диагностика ВИЧ-инфекции имеет ряд ограничений:
- Неэффективность в период т.н. «серологического окна» (в первые недели после заражения антитела не выявляются по причине их отсутствия или низкой концентрации).
- Антитела к ВИЧ длительное время выявляются у всех детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей.
- Ложноположительные результаты ИФА из-за присутствия в крови антител к антигенам, сходным с антигенами ВИЧ.
- Ложноотрицательные и сомнительные результаты ИФА и иммуноблоттинга (особенно у пациентов в терминальной стадии заболевания).
Поэтому анализы ПЦР при обследовании на ВИЧ-инфекцию сегодня находят всё более широкое применение. Согласно «Методическим рекомендациям о проведении обследования на ВИЧ-инфекцию» (утв. Минздравсоцразвития РФ 06.08.2007) «при наличии эпидемиологических критериев, свидетельствующих о недавнем риске заражения ВИЧ для пациентов и при этом предположительно ложноположительных или ложноотрицательных результатов в ИФА и ИБ, например, при обследовании детей, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей, или пациентов в периоде «серонегативного окна» используется метод ПЦР, при котором обнаруживается генный материал ВИЧ…..». А в случае уже установленного диагноза ВИЧ-инфекции анализ методом ПЦР используется для прогноза, динамического наблюдения и мониторинга проводимой терапии.
В Центре молекулярной диагностики (CMD) можно сдать ПЦР-анализ на ВИЧ анонимно.
Где сдать анализы ПЦР?
Для этого обращайтесь к разделу сайта «Где сдать анализы».
В последние годы большой популярностью стал пользоваться метод обнаружения генного материала ВИЧ методами репликации (амплификации, размножения) специфических генных последовательностей, часто объединяемых под названием одного из вариантов этого метода «полимеразная цепная реакция» (ПЦР).
В основе метода ПЦР (полимеразная цепная реакция) лежит уникальное свойство НК (как ДНК, так и РНК) — способность к саморепродукции, которая воспроизводится искусственно in vitro. При этом синтезируются только строго специфические фрагменты НК.
Этиологическим фактором ВИЧ-инфекции являются вирусы HIV-1 и HIV-2 (от англ. Human Immunodeficiency Viruses) из семейства Retroviridae. Патогенез ВИЧ-инфекции заключен в инфицировании вирусом клеток с фенотипом CD-4, присущий Т-лимфоцитам хелперам и некоторым другим клеткам организма человека. Прямое цитопатическое воздействие, оказываемое вирусом иммунодефицита на указанные клетки, в конечном итоге приводит к летальному исходу за счет активации оппортунистических инфекций или развития опухолей.
Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции проводится в трёх направлениях:
-
серологическая диагностика маркеров вируса методами иммуноферментного анализа и иммуноблотинга, заключающаяся в определении в сыворотки крови антигенов и антител против ВИЧ.
-
определение вирусной НК (провирусной-ДНК или РНК) методом ПЦР, как в крови, так и в клетках крови.
-
исследование иммунного статуса (количественная оценка CD-4 лимфоцитов), которая наиболее адекватно осуществляется методом проточной цитофлюориметрии.
Особо необходимо отметить значение ПЦР в диагностике ВИЧ-инфекции у детей первого года жизни. Ранняя диагностика ВИЧ-инфекции у детей этого возраста в принципе невозможна без применения ПЦР. Это обусловлено тем, что ребёнок, родившийся от ВИЧ-инфицированной матери обязательно имеет антитела к вирусу иммунодефицита. Различить материнские и собственные антитела к ВИЧ не представляется возможным. У неинфицированного ребёнка данные антитела элиминируются под влиянием собственной иммунной системой к возрасту 6-9 месяцев, хотя в отдельных случаях могут циркулировать до 18 месяцев жизни, но не более этого срока.
Необходимо отметить, что обследование методом ПЦР имеет смысл только при полном отказе от грудного вскармливания ребёнка ВИЧ-позитивной матерью с момента рождения, т.к. риск заражения довольно высок и составляет около 5%.
Таким образом, ПЦР позволяет проводить дифференциальную диагностику ВИЧ-статуса у детей раннего возраста. Так, если имеет место положительный результат ПЦР на НК вируса иммунодефицита в первые 48 часов жизни, то ВИЧ-инфицирование произошло in utero. Если имеет место отрицательный результат ПЦР в первые 48 часов, но становится положительным в возрасте 7 – 14 дней жизни, то инфицирование произошло intrapartum.
В настоящее время ПЦР позволяет осуществлять не только диагностику, но и мониторинг лечения ВИЧ-инфекции путем определения концентрации РНК в плазме, а также выявления резистентных к химиотерапии штаммов вируса иммунодефицита. Определение “вирусной нагрузки” в плазме крови является наилучшим прогностическим критерием течения ВИЧ-инфекции и оценки эффективности антиретровирусной терапии.
Известные модификации ПЦР для диагностики ВИЧ-инфекции достигают чувствительности лишь в 98%, то есть выявляют лишь 98% проб от ВИЧ инфицированных лиц, что существенно ниже, чем при использовании ИФА (до 99,9%). По этой причине они не могут использоваться и как подтверждающие тесты, так как будут давать заведомо больше ложноотрицательных результатов, чем иммуноблот. Методика ПЦР на практике ведет себя как чересчур «чувствительная» к внешним колебаниям, и в неумелых руках, и в недостаточно хорошо оборудованных лабораторных условиях дает немалое количество неспецифических (ложноположительных) реакций. Специфичность ПЦР также зависит от подбора используемых в ней ингредиентов, в особенности, так называемых «праймеров», которые должны имитировать «генные последовательности ВИЧ», но далеко не всегда могут быть точно подобраны. Неудачный подбор может приводить, в частности, к тому, что такие тесты могут с разным успехом выявлять разные субтипы ВИЧ-1, например, выявлять субтип B и не выявлять субтип A и G т.п. Впрочем, разработка этих методик идет быстрыми темпами и не исключено скорое появление более качественных наборов стандартных реактивов. На практике врачи должны учитывать операционные характеристики предлагаемых им диагностических тестов, изначально предполагая, что их полевая (практическая) ценность может быть существенно ниже заявляемой производителями.
Теоретическое преимущество ПЦР состоит в том, что она способна выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периоде, когда антител еще может не быть. Однако, она пока не всегда может выявлять инфицированных в более позднем периоде инфекции. Это в будущем, возможно, будет иметь значение и при попытке диагностики ВИЧ-инфекции у лиц, получающих противоретровирусную терапию, когда уровень ВИЧ в крови значительно снижается. Совместное использование двух методик, которое могло бы быть выходом из создавшейся ситуации — ИФА и ПЦР, к сожалению, сделает исследования значительно дороже, тем более, если они осуществляются в массовом масштабе.
Обнаружение ВИЧ методом ПЦР в крови возможно в двух вариантах:
-
Обнаружение ДНК провируса ВИЧ в мононуклеарных клетках периферической крови;
-
Обнаружение РНК ВИЧ в биологических жидкостях организма (например, в плазме или сыворотке крови).
Сейчас ПЦР на ДНК провируса ВИЧ используется как диагностическая методика для прямой диагностики ВИЧ-инфекции в следующих случаях:
-
В период серологического «окна». Хотя следует помнить! что чувствительность ПЦР на провирусную ДНК ВИЧ колеблется от 96 до 99%, в связи с чем, несмотря на высокие показатели чувствительности, ПЦР следует проводить или совместно с ИФА или с последующим подтверждением ИФА;
-
В случае сомнительного результата ИБ;
-
При обследовании детей, родившихся от ВИЧ-инфицированных матерей. Использование ПЦР в этом случае позволяет сократить сроки постановки диагноза ВИЧ-инфекции с 18 месяцев до 3-6 месяцев.
Ранняя диагностика заболеваний – залог успешного лечения. Ставшее крылатым выражение, особенно актуально для ВИЧ-инфекции. Ведь заболевание неизлечимо полностью, и только своевременная диагностика позволяет взять течение болезни под контроль и выбрать тактику лечения, чтобы жить полноценной жизнью.
Ранний срок диагностики ВИЧ – со 2 недели от предположительного заражения.Важность клинической диагностики ВИЧ
В понимании многих людей ВИЧ-инфицированный человек выглядит болезненно, изнеможенно. Он кашляет, чихает, чешется, стонет, у него все болит… На самом деле это не так! Проблема в том, что после инфицирования ВИЧ и в последующий инкубационный период симптомы полностью отсутствуют. Затем наступает острая фаза, на протяжении которой присутствуют симптомы, напоминающие ОРВИ или грипп. Но и они вскоре проходят, и наступает, так называемый, латентный период – продолжительный промежуток времени, когда ВИЧ-инфекция себя ничем не выдает. С момента инфицирования и до стадии пред-СПИДа может пройти порядка 10 лет, в течение которых, ни сам пациент, ни его окружение, даже и не подозревают о болезни. А когда она уже на полную мощность заявляет о себе, контролировать ее очень трудно. Сложно противостоять осложнениям ВИЧ, поддерживать практически разрушенную иммунную систему человека.
Очень важно понимать, что, хотя и есть группы риска – гомосексуалисты, наркозависимые и девушки легкого поведения – в основной массе, пациенты с ВИЧ-инфекцией – это обычные люди. Они учатся, ходят на работу, посещают общественные места, знакомятся в интернете – в общем, живут как все. К сожалению, но от ВИЧ никто не застрахован. Незащищенный половой контакт в порыве страсти, заветное тату без соблюдения стерильности, маникюр за полцены у начинающего мастера, уличная драка – все эти и множество других житейских ситуаций могут обернуться инфицированием ВИЧ.
Не ошибается лишь тот, кто не живет! Мы не можем знать все наперед, не можем исправить уже совершенных ошибок, но мы можем предпринять простые шаги для исправления их последствий – обратиться в ближайший кожно-венерологический диспансер, в местную клинику или специализированный СПИД-центр для сдачи анализов и ранней диагностики ВИЧ.
Благоприятные сроки для диагностики ВИЧ
Факт возможного инфицирования и плохое самочувствие без видимых причин – два веских основания для обращения к специалистам. Но отрицательный результат тестирования на антитела не всегда означает, что человек не инфицирован, так как существует период “серонегативного окна” (время между заражением и появлением антител), который составляет около трех месяцев. Поэтому лучше повторить их спустя 3 месяца с момента возможного инфицирования. Если же ответ опять будет отрицательным, но ваша тревога не проходит, и вы уверены в заражении ВИЧ, тогда лабораторную диагностику необходимо повторить спустя 6 месяцев после факта заражения.
Что касается плохого самочувствия, то поводом провериться на ВИЧ может быть сочетание следующих симптомов:
- увеличение лимфатических узлов на шее, в паху, в области подмышек;
- лихорадка;
- мышечные или головные боли;
- молочница и грибковые поражения, в том числе кандидоз полости рта;
- воспаление слизистой носа, рта или глотки;
- ночная потливость;
- ломота в суставах;
- длительная диарея;
- тошнота, рвота;
- резкое снижение массы тела;
- высыпания на коже.
Важно понимать, что с момента, когда проявляются первые признаки ВИЧ-инфекции и до момента, когда заболевание переходит в латентную стадию, проходит очень мало времени – около 3-6 недель с факта инфицирования. Нельзя упускать из вида этот промежуток времени! Поскольку последующие 8-10 лет вы будет жить, нормально себя чувствовать и даже не подозревать о том, что больны ВИЧ-инфекцией. Драгоценное время будет упущено.
Современные методы диагностики ВИЧ
В настоящее время в диагностике ВИЧ используется двухуровневый подход – косвенные и прямые тесты. Косвенные тесты позволяют обнаружить в крови пациента специфические антитела к ВИЧ, а прямые тесты помогают выявить собственно сам ВИЧ и определить степень вирусной нагрузки на организм. В России стандартная диагностика ВИЧ включает следующие методы лабораторных исследований:
- ИФА (иммуноферментный анализ).
- Иммуноблот (иммунный блоттинг).
Также могут быть применены следующие методики:
- Экспресс-тест ИХА (иммунохроматография).
- ПЦР (полимеразная цепная реакция).
Диагностические принципы лабораторных исследований и степень их достоверности приведены в нижеследующей таблице.
Метод исследования | Диагностический принцип | Достоверность | Время после заражения |
|---|---|---|---|
Экспресс-тест ИХА | Выявление антител к ВИЧ | 93-99% | с 3 недели |
Скрининговый тест ИФА | Выявление антител к ВИЧ и антигенов вируса | ||
Иммуноблот | Антитела к нескольким белкам ВИЧ | 99,9% | с 5 недели |
ПЦР | Исследуется генетический материал вируса | 80% | с 5 дня |
98% | со 2 недели |
При проведении исследований важно использовать сверхточное оборудование и верно интерпретировать результаты анализов. В противном случае точность диагностики снижается. При этом специалисты считают, что рациональнее всего проводить исследования в следующей последовательности.
- Сначала экспресс-диагностика, основанная на методе ИХА.
- В случае положительного результата – еще один анализ крови по методу ИФА.
- Положительный второй результат – проводится дообследование методом ИФА или иммуноблоттингом.
- В исключительных случаях для окончательной постановки диагноза можно применить более сложный и дорогостоящий метод ПЦР.
Экспресс-тесты методом ИХА или скрининг ИФА, предполагающий серологическое иммуноферментное исследование крови, выполняются в течение 15-30 минут. Высокая скорость диагностики актуальна в неотложных случаях, при планировании срочных операций. Но для постановки окончательного диагноза необходимо использовать основной метод диагностики – иммунный блоттинг. Если результаты ИФА и иммунного блоттинга противоречат друг другу, то возможно проведение референс диагностики – анализ сразу двумя методами. К проведению ПЦР прибегают в исключительных случаях, т.к. это наиболее дорогостоящий метод исследования. Далее разберем каждый из методов диагностики более подробно.
Экспресс-тест ИХА
Иммунохроматографические тесты неплохо зарекомендовали себя в экспресс-диагностике ВИЧ. Визуально они выглядят как полоски, на поверхность которых наносят исследуемый биологический материал (кровь, слюна). Для получения результата потребуется всего 10-15 минут, по истечении которых на тесте проявится, или цветная и контрольная полоска – положительный результат, подтверждающий наличие антител к ВИЧ, или только контрольная полоска – отрицательный результат.
С недавнего времени американская компания OraSure Technologies наладила массовое производство экспресс-тестов для домашнего применения. Они отпускаются без рецепта, и при желании их может использовать каждый желающий. Однако необходимо учесть, что по точности диагностики ИХА уступает методу ИФА, а для постановки окончательного диагноза необходимо проведение иммуноблота.
Скрининговый тест ИФА
Принцип метода основан на способности искусственно созданных белков ВИЧ, улавливать вырабатывающиеся в организме человека специфические антитела. В результате взаимодействия, тест-система ИФА изменяет окрас индикатора. Полученные изменения цвета обрабатываются с помощью аппаратуры, которая выдает результат анализа. При этом необходимо учесть, что скрининговый тест предназначен для выявления не ВИЧ как такового, а антител к нему. А поскольку для их появления в организме, необходимо время, то целесообразнее всего проводить скрининг спустя 3-6 недель после факта возможного инфицирования. Для этого достаточно всего 5 мл крови из вены пациента, забор которой проводят натощак, т.е. спустя 7-8 часов после последнего приема пищи.
Помимо положительного или отрицательного результата, тест ИФА может дать ложноположительный или ложноотрицательный результат.
- Ложноположительный – речь может идти об сходных по своей структуре антителах, которые вырабатываются в организме при аутоиммунных заболеваниях, множественных миеломах, алкогольном гепатите и других патологиях.
- Ложноотрицательный – скорее всего, тестирование было проведено преждевременно или иммунная система слишком слаба и не вырабатывает антитела к ВИЧ.
При сомнительном результате тест проводится повторно.
Иммунный блоттинг
Иммуноблот – это основной метод диагностики ВИЧ, сочетающий иммуноферментный анализ (ИФА) с предварительным электрофоретическим переносом на нитроцеллюлозную полоску антигенов вируса. Для их выявления анализ проводят в три этапа:
- подготовка нитроцеллюлозной полоски;
- исследование пробы биологического материала пациента;
- трактовка результата.
Таким образом, в ходе проводимого исследования, основные белки ВИЧ распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые проявляются при проведении иммуноферментной реакции и подтверждают наличие или отсутствие антител к антигенам ВИЧ. Полученные в ходе исследования иммунным блоттингом результаты считаются окончательными.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
Главное отличие ПЦР от других методов диагностики – тест-система определяет ДНК вируса. С ее помощью можно выявить даже единичные вирусные частицы. Применение метода возможно уже на 5ый день после факта возможного инфицирования с точностью до 80%, что позволяет провести раннюю диагностику ВИЧ. Однако ПРЦ проводят только в исключительных случаях.
- для постановки диагноза новорожденным, появившимся на свет от ВИЧ-инфицированных матерей;
- при сомнительных результатах иммуноблота;
- для оперативного исследования донорской крови;
- для оценки уровня ВИЧ в крови инфицированного пациента.
Несмотря на высокую чувствительность метода ПЦР, он обладает меньшей диагностической чувствительностью к ВИЧ, что объясняется вариабельностью генома вируса. Поэтому для постановки окончательного диагноза данный метод не используется.
Новые и альтернативные методы диагностики ВИЧ
Недавно, сотрудниками Питтсбургского университета был разработан новый высокочувствительный тест для обнаружения скрытых вирусов – тест TZA. Для его проведения требуется меньше времени и крови пациента. Принцип действия TZA сводится к поиску гена, который активируется только при репликации вируса. Несмотря на то, что разработчики уверены в эффективности теста, большинство специалистов склоняется к тому, что TZA не сможет заменить существующие методы диагностики полностью, поскольку он характеризуется иным механизмом действия и не подходит абсолютно каждому ВИЧ-инфицированному пациенту.
Где и как можно пройти диагностику ВИЧ
Сегодня тест на ВИЧ-инфекцию не является проблемой. При желании пациента, кровь на анализ можно сдать анонимно и абсолютно бесплатно. Сделать это можно в медицинских организациях по месту жительства, в Свердловском областном центре профилактике и борьбы со СПИД (г. Екатеринбург, ул. Ясная, 46. Регистратура: (343) 383-30-18 Телефон доверия по проблеме ВИЧ/СПИД: (343) 310-00-31 (будни, с 9 до 20 часов).
Диагностика ВИЧ – дело сугубо добровольное. Однако есть четыре ситуации, для которых прохождение теста является обязательным:
- Донорство.
- Трудоустройство на работу, предполагающую непосредственный контакт с биоматериалом, который может содержать ВИЧ.
- Иностранные граждане.
Лица при призыве на военную службу, поступающие в военные учебные заведения.
Но и в этих случаях тестирование не может проводиться насильно, поскольку для любого медицинского вмешательства необходимо добровольное и осознанное согласие пациента. Именно осознанное, поскольку каждый из нас должен понимать важность своевременной диагностики ВИЧ.
Что такое ПЦР-тест на ВИЧ? (с картинками)
ПЦР-тест на ВИЧ является одним из наиболее точных диагностических инструментов, используемых для обнаружения наличия вируса иммунодефицита человека в крови, более известного как ВИЧ. Помимо того, что ПЦР-тест на ВИЧ считается более надежным с точки зрения точности, чем большинство других тестов, он также является одной из немногих процедур скрининга, которые можно использовать для раннего выявления. Большинство людей могут получить точные результаты теста через три-четыре недели после подозрения на инфекцию.
В рамках теста на ПЦР на ВИЧ врачи используют ДНК-полимеразу для амплификации провирусных геномов.В отличие от других тестов, таких как тест на антиген P24, тест на ПЦР на ВИЧ не зависит от наличия антигенов или антител в крови для диагностики.Вместо этого он пытается идентифицировать определенный генетический материал, выделяя последовательности вируса в дезоксирибонуклеиновой кислоте субъекта или ДНК. Это достигается с помощью тестирования амплификации нуклеиновых кислот, чтобы наблюдать результирующую полимеразную цепную реакцию, отсюда и аббревиатуру «ПЦР». Кроме того, процесс ПЦР на ВИЧ далее делится на две подкатегории, которые определяют «вирусную нагрузку» в образце сыворотки: РНК-ПЦР и ДНК-ПЦР. Первый используется для скрининга донорской крови, а второй — для выявления ВИЧ у детей, рожденных от матерей, у которых, как известно, есть вирус.
Образцы крови берут у пациента в начале теста на ПЦР на ВИЧ.Чтобы выполнить ПЦР-тест на ВИЧ, клиницист или техник использует фермент, известный как ДНК-полимераза, для проведения провирусной последовательности генома и «амплификации» ее или запуска репликации вируса in vitro несколько миллионов раз в течение нескольких часов.В дополнение к этому ферменту коктейль, индуцирующий ПЦР, также содержит олигонуклеотиды и предшественники дезоксинуклеотидов, а также кофактор, называемый MgCl2. В первые дни этой процедуры генетический материал подвергался циклическому воздействию при постепенно повышающихся температурах в течение определенного времени. Однако процесс амплификации ПЦР теперь саморегулируется путем добавления Taq-полимеразы, которая происходит из вида бактерий, которые естественным образом встречаются в горячих источниках.
Воздействие жидкостей организма во время дыхания из уст в уста и процесса СЛР может подвергать людей воздействию ВИЧ.Вообще говоря, тестирование на ВИЧ лучше всего проводить в клинических условиях, поскольку оно в большей степени способствует безопасности и точности. Тем не менее, существуют домашние наборы для тестирования, которые включают отправку образцов крови в лабораторию с соблюдением конфиденциальности назначенного кода вместо имени субъекта.В Соединенном Королевстве имеется только один такой надежный набор для тестирования, и только один в США одобрен Управлением по контролю за продуктами и лекарствами. В противном случае не рекомендуется покупать другие так называемые наборы для домашнего тестирования на ВИЧ в Интернете, поскольку они не были оценены на предмет точности.
Получение переливания крови может увеличить риск заражения ВИЧ.
Структура вируса иммунодефицита человека позволяет ему атаковать и убивать клетки, которые имеют решающее значение для иммунной системы. ,Грейс У а и Мухаммед Х Заман а
а. Кафедра биомедицинской инженерии, Бостонский университет, 44 Cummington Street, Бостон, MA 02215, Соединенные Штаты Америки.
Переписка с Мухаммедом Х. Заманом (электронная почта: [email protected]).
(Представлено: 22 января 2012 г. — Получена пересмотренная версия: 10 июля 2012 г. — Принята: 6 сентября 2012 г. — Опубликовано онлайн: 19 октября 2012 г.)
Бюллетень Всемирной организации здравоохранения 2012; 90: 914-920. doi: 10.2471 / BLT.12.102780
Введение
Новые технологии и лекарственные средства для ранней диагностики, постоянного мониторинга и лечения инфекции, вызванной вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), улучшили прогноз инфекции и качество жизни среди людей, живущих с ВИЧ. В 2009 году, через пять лет после того, как в странах Африки к югу от Сахары была расширена доступность антиретровирусной терапии (АРТ), одни лишь лекарственные препараты снизили смертность от ВИЧ-инфекции и синдром приобретенного иммунодефицита на 20%. 1 Однако в том же году только треть из 15 миллионов человек в странах с низким и средним уровнем дохода, которые нуждались в АРТ, получили ее. В этих областях нехватка ресурсов, будь то инфраструктурная, финансовая или кадровая, затрудняет доступ к уходу для постоянного населения. Это приводит к отсроченному лечению, плохому наблюдению пациентов и плохому соблюдению АРТ, и все это способствует высокому уровню передачи и смертности. 2 Таким образом, были предприняты значительные усилия для создания недорогих и надежных решений для диагностики и мониторинга ВИЧ в местах оказания медицинской помощи (POC), которые эффективно делают раннюю диагностику и лечение доступными даже для самых ограниченных по ресурсам сообществ.
Действующие золотые стандарты
Несколько технологий золотого стандарта с высокой чувствительностью и специфичностью используются во всем мире для эффективной диагностики и мониторинга ВИЧ-инфекции. Ферментно-связанные иммуносорбентные анализы (ELISA) и простые / быстрые тесты выполняются для диагностики ВИЧ-инфекции на основе обнаружения антител к ВИЧ. Проточная цитометрия используется для мониторинга количества CD4 + Т-клеток и, таким образом, определения момента начала АРТ. Более дорогие тесты на нуклеиновые кислоты, такие как анализы полимеразной цепной реакции (ПЦР), используются для выявления вирусологического сбоя путем мониторинга нагрузки на ВИЧ.ПЦР для сухих пятен крови также является наиболее эффективной технологией для ранней диагностики ВИЧ-инфекции у младенцев (также известной как «ранняя диагностика детей»), поскольку анализы, основанные на обнаружении антител, не подходят, поскольку материнские анти-ВИЧ-антитела могут сохраняться в крови младенца для до 18 месяцев после рождения. ПЦР с использованием сухих пятен крови также полезна для диагностики ВИЧ-инфекции, когда транспортировка жидкой плазмы через холодную цепь слишком дорога или сложна с логистической точки зрения. 3 , 4
Эти технологии полезны в широком спектре ограниченных ресурсов, но имеют свои недостатки.За исключением быстрых испытаний, технологии являются дорогостоящими, занимают часы и требуют высококвалифицированных техников и специальных лабораторных помещений. В результате многие развивающиеся страны не могут удовлетворить спрос на диагностику и мониторинг ВИЧ-инфекции. Например, в Замбии один из самых высоких в мире случаев ВИЧ-инфекции, но он выделяет только три аппарата ПЦР для диагностики инфекции у детей. Кроме того, хотя клинические симптомы и количество CD4 + Т-клеток использовались в условиях ограниченных ресурсов для определения того, когда начинать терапию и когда произошла вирусологическая недостаточность, существует растущая поддержка для рассмотрения результатов мониторинга вирусной нагрузки перед принятием терапевтических решений.Высокая стоимость анализов нуклеиновых кислот в сочетании с материально-техническими проблемами, связанными с транспортировкой по холодной цепи, вероятно, вынудит многие клиники направлять пациентов в более крупные клиники для дальнейшего тестирования, что может затруднить наблюдение за пациентом и отсрочить начало лечения.
Исходя из этих соображений, неудивительно, что в некоторых местах существует мало или нет частичного совпадения между набором технологий здравоохранения, связанных с ВИЧ, которые отвечают конкретной потребности, и набором технологий, которые являются практичными и доступными.Поэтому требуется более идеальный набор технологий для использования на местах, особенно в условиях ограниченных ресурсов.
Идеальный тест по уходу
Критерии ASSURED (доступные, чувствительные, специфичные, удобные для пользователя, быстрые и надежные, без оборудования и доставляемые конечным пользователям), изложенные Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ), обеспечивают хорошую основу для оценки устройств POC для ограниченных ресурсов. сред. Инструменты, которые удовлетворяют критериям ASSURED, в первую очередь нацелены на диагностику в тот же день и облегчают немедленное принятие решений. 5 Быстрое получение результатов увеличивает количество людей, которые знают свой ВИЧ-статус, помогает в своевременном предоставлении АРТ (особенно для рожениц) и сводит к минимуму количество пациентов, потерянных для долгосрочного наблюдения. 6 , 7 Кроме того, устройства, использование которых требует минимального обучения и которые обладают высокой пропускной способностью, могут расширить пул конечных пользователей и уменьшить перегруженность в центрах тестирования на ВИЧ. 8 Наконец, такое устройство должно быть работоспособным в условиях ограниченных ресурсов, в том числе с ненадежным электричеством, нестерильными условиями и нехваткой обученного персонала для выполнения обязанностей, обычно предназначенных для медсестер и работников здравоохранения.Дополнительные примеры целевых спецификаций, перечисленных в таблице 1, будут различаться в зависимости от потребностей и настроек, в которых будет использоваться устройство. Например, устройство, которое обнаруживает более низкую вирусную нагрузку, может быть менее полезным, чем устройство, которое обеспечивает полуколичественные, но клинически полезные диапазоны вирусной нагрузки (например, уровни, обозначающие низкий, средний и высокий риск вирусологического сбоя). Следовательно, консультации с клиницистами, работниками здравоохранения и другими конечными пользователями могут привести к четко определенным техническим характеристикам, которые дополняют критерии ASSURED и удовлетворяют специфическим потребностям медицинских работников и пациентов.
Здесь мы даем обзор недорогих и POC-устройств для диагностики и мониторинга ВИЧ-инфекции (Таблица 2). К ним относятся общепринятые стандартные устройства, которые находятся в стадии разработки и которые в настоящее время исследуются. Мы ориентируемся только на недорогие устройства, которые не имеют ограничений, связанных с использованием лабораторных испытаний золотого стандарта в областях с ограниченными ресурсами. Для более широкого обзора диагностических и мониторинговых тестов мы отсылаем читателя к последнему обзору используемых тестов на нуклеиновые кислоты и обзору имеющихся в продаже ИФА и тестов на нуклеиновые кислоты. 10 , 14
Недорогие тесты для настроек с низким ресурсом
скрининг на ВИЧ
Множество простых / быстрых коммерческих тестов используются в условиях ограниченных ресурсов для скрининга на ВИЧ. 10 Наиболее готовые виды быстрых испытаний — испытания на боковой поток, для которых не требуются реагенты. Как правило, экспресс-тесты дешевы (менее 1 доллара США на душу населения), портативны и просты в использовании, требуют мало или не требуют реагентов или оборудования и дают результаты в течение 30 минут.Каждый тест быстро обнаруживает антитела против ВИЧ типа 1 (ВИЧ-1) и / или ВИЧ типа 2 (ВИЧ-2) из небольшого объема плазмы, сыворотки, цельной крови, слюны или мочи с высокой специфичностью и чувствительностью. 10 Использование этих тестов значительно увеличило объем выполненных тестов на ВИЧ и число пациентов, которые узнали свои результаты, прежде чем были потеряны для последующего наблюдения. 15 Кроме того, поскольку быстрое тестирование имеет решающее значение при назначении внутри родовой профилактической терапии и антиретровирусных препаратов для предотвращения передачи инфекции от матери ребенку, быстрое тестирование на ВИЧ оказало положительное влияние на программы по профилактике ВИЧ-инфекции. 6 , 16
Страх стигматизации из-за положительного результата теста на ВИЧ может удержать людей, подвергающихся риску, от обращения за консультацией 17 и может заставить людей неохотно раскрывать свой ВИЧ-статус. Использование образцов слюны и мочи для быстрого тестирования предлагает отдельную альтернативу анализам крови в условиях, когда стигма, отсутствие образования, культурные обычаи и проблемы конфиденциальности подрывают профилактику ВИЧ. 18 Кроме того, неинвазивность сбора образцов устраняет беспокойство, связанное со сбором крови, и приводит к более высоким показателям добровольного тестирования на ВИЧ. 19 , 20 Экспресс-тест на антитела OraQuick Rapid HIV-1/2 (Orasure Technologies, Inc., Вифлеем, Соединенные Штаты Америки) — это экспресс-тест на боковой кровоток для образцов слюны, который работает так же, как и на основе крови. тесты даже при низких концентрациях антигенов ВИЧ в слюне. 10 , 21 Прибор Aware HIV-1/2 U (CALYPTE, Портленд, США) с чувствительностью 97,2% и специфичностью 100% является быстрой альтернативой анализам мочи, основанным на ИФА и Вестерн-блоттинге. 22
Использование экспресс-тестов на ВИЧ расширяется и включает комбинированные тесты, которые выявляют как анти-ВИЧ-антитело, так и антиген p24, а также тесты для ранней диагностики у детей (обсуждается ниже) и для дифференциации подтипа ВИЧ-1 и ВИЧ-2. 23 Обнаружение антител и антигена во время острой фазы инфекции особенно полезно для профилактических мероприятий, поскольку на этой стадии уровень передачи ВИЧ в 26 раз выше и может составлять до 50% новых случаев ВИЧ-инфекции. 23 Четвертое поколение «Определение ВИЧ-1/2 Ag / Ab Combo» (Alere, Waltham, USA) — это иммунохроматографический экспресс-тест, который выявляет антиген и антитело по отдельности. В двух независимых исследованиях определение ВИЧ-1/2 Ag / Ab Combo показало чувствительность 50% и 86% для обнаружения антигена. 24 , 25 Несмотря на то, что ИФА имеет более высокую чувствительность, комбинированный тест Ag-Ab для определения ВИЧ-1/2 все же способен обнаружить раннюю ВИЧ-инфекцию. Необходимы более масштабные исследования, чтобы подтвердить, является ли комбинированный тест Ag-Ab для определения ВИЧ-1/2 подходящей альтернативой ИФА в местах с ограниченными ресурсами.
Результаты быстрых тестов на выявление ВИЧ часто подтверждаются проведением вторичного и / или третичного теста. Эти алгоритмы тестирования улучшают положительную прогностическую ценность быстрых тестов в популяциях с низкой распространенностью ВИЧ-инфекции, в которых чаще встречаются ложноположительные результаты. Центры по контролю и профилактике заболеваний и ВОЗ рекомендуют использовать стратегии экспресс-тестирования POC в соответствии с целью теста (эпиднадзор, скрининг крови или диагностика), чувствительностью и специфичностью теста, локальной распространенностью ВИЧ-инфекции и ресурсы, доступные для тестирования. 26 , 27
Мониторинг нагрузки на ВИЧ
Обратная транскриптаза, фермент, присутствующий во время репликации вируса, линейно коррелирует с нагрузкой ВИЧ и количеством CD4 + Т-клеток. 28 Таким образом, коммерческие анализы для измерения этого белка являются дешевыми альтернативами для мониторинга вирусной нагрузки в условиях ограниченных ресурсов. Эти тесты не проводятся в момент оказания медицинской помощи, но они дают результаты в течение нескольких часов и стоят на 80% дешевле, чем тесты на нуклеиновые кислоты. 29
Несколько отчетов подтверждают использование теста нуклеиновых кислот EXAVir Load Version 3 для мониторинга нагрузки ВИЧ в развивающихся странах. 14 , 29 — 31 В этом тесте на стадии разделения геля выделяют вирионы из компонентов плазмы. Затем вирионы лизируют, а лизаты подвергают модифицированному ИФА для измерения активности обратной транскриптазы. Измерения вирусной нагрузки с помощью EXAViR версий 2 и 3 имели превосходное соответствие с анализами РНК ВИЧ золотого стандарта. 13 , 31 , 32 В одном исследовании, в котором пациенты, получающие АРТ, подвергались мониторингу в течение 48 недель с помощью анализов РНК и Байера EXAViR и ВИЧ (Рош и Байер), EXAViR продемонстрировал специфичность для ВИЧ на уровне 95% Обнаружение РНК в образцах с уровнями РНК> 400 копий / мл. 32 Оценки вирусной нагрузки, основанные на тестах с обратной транскриптазой, прямо не сопоставимы с оценками, полученными с помощью ПЦР, поскольку было обнаружено, что они недостаточно количественно определяют нагрузку ВИЧ. 31 , 32 Однако в местах, где ПЦР недоступна, результаты тестов обратной транскриптазы могут быть более дешевым методом контроля вирусной нагрузки. Дополнительные преимущества тестов обратной транскриптазы включают их способность обнаруживать множественные подтипы ВИЧ и их возможное использование для мониторинга нагрузки ВИЧ у педиатрических пациентов. 29
Уровни основного белка ВИЧ p24 также коррелируют с нагрузкой ВИЧ и количеством CD4 + Т-клеток, 28 , и, следовательно, иммуноанализы p24 раннего поколения предлагают недорогие варианты для измерения нагрузки ВИЧ.Иммуноанализы р24 более не рассматриваются для этой активности, однако из-за их низкой чувствительности, высокой вариабельности результатов между анализами и сложности стандартизации корреляции между р24 и вирусной нагрузкой у лиц, получающих АРТ. 14 , 33 , 34
Ранняя детская диагностика
Поскольку раннее вмешательство значительно снижает младенческую смертность из-за ВИЧ-инфекции (на 75% в одном исследовании), тесты на ВИЧ с высокой чувствительностью были бы чрезвычайно полезны для тысяч детей, подвергающихся риску, в странах, где распространение машин для ПЦР ограничено. 35 Текущие иммуноанализы p24 имеют лучшую чувствительность по сравнению с тестами p24 прошлого поколения из-за включения стадии тепловой денатурации для разделения комплексов p24-антитело, которые обычно влияют на чувствительность анализа. Многие исследования подтверждают использование иммуноанализа Perkin Ultra p24 для ранней диагностики у детей в возрасте от 10 дней до 12 месяцев. 30 , 36 , 37 р24 иммуноанализ сухих образцов крови имел чувствительность 94,4% и 100% специфичность в другом исследовании.Эти результаты являются многообещающими, потому что анализ засохшей крови является распространенным для диагностики младенцев в сельской местности. 37 По сравнению со стандартной или обратной транскрипцией ПЦР иммуноанализы p24 дешевле (до 10 долларов США в Африке) и требуют меньше ресурсов, что делает их подходящим вариантом в клиниках с ограниченным доступом к более дорогим тестам. 11 Однако иммуноанализы р24 не получили широкого распространения из-за отсутствия данных для валидации. Кроме того, поскольку иммуноанализы р24 требуют специального оборудования и квалифицированного персонала, быстрые тесты р24 предпочтительны для ранней диагностики младенцев в местах с ограниченными ресурсами.
Разработка экспресс-тестов p24 была сосредоточена главным образом на улучшении чувствительности. 38 , 39 В 2010 году Parpia et al. проверил микрофлюидный тест p24 на 25 мкл образцов плазмы от 389 южноафриканских детей. 40 В их конструкцию входит компонент теплового шока, который разрушает комплексы антиген-антитело. Они достигли 95% чувствительности, 99% специфичности и предела обнаружения 42 500 копий РНК / мл. Текущий прототип теперь возвращает результаты через 20 минут.В этой работе, входящей в состав Северо-западного фонда глобального здравоохранения, запланированы клинические испытания на 2012 год. 12
Портативные тесты
Портативные тесты для мониторинга ВИЧ включают в себя анализы на количество CD4 + Т-клеток и количественные анализы на ВИЧ. В настоящее время в продаже имеется всего несколько действительно портативных счетчиков Т-клеток CD4 +: PointCare NOW, CyFlow miniPOC (Partec), Pima Test (Alere) и Daktari CD4 + (Daktari Diagnostics). Все они полностью автоматизированы, могут питаться от батарей или электричества, использовать ≤ 25 мкл крови и обеспечивать результаты в тот же день.Дополнительные тесты POC на CD4 + Т-клетки, находящиеся в стадии разработки, включают в себя мультиплексный тест на инфекционные заболевания (MBio Diagnostics) и полуколичественный, не содержащий электричества анализ CD4 + T-клеток (Zyomyx). 12
И PointCare NOW, и CyFlow miniPOC измеряют абсолютное количество CD4 + Т-клеток и процент Т-клеток, экспрессирующих CD4 +, и не требуют холодной цепи для хранения реагентов. CyFlow miniPOC обладает существенно высокой пропускной способностью и способностью обрабатывать 250 тестов в день.На момент написания отчета независимые диагностические данные для обоих тестов отсутствовали.
Pima Test и Daktari CD4 + — это тесты на основе картриджей, в которых образец крови помещается в одноразовый картридж, содержащий необходимые реагенты для каждого теста. Daktari CD4 + все еще проходит оценку производительности, но тест Pima, представленный в конце 2010 года, дал результаты, сопоставимые с результатами других устройств мониторинга ART. 8 , 41 — 43 В то время как большинство измерений теста Pima недооценивают количество CD4 + Т-клеток, одно исследование показало 96.Чувствительность 3% для концентраций ниже предела 250 клеток / мкл. 42 Недавнее исследование также показало, что образцы капиллярной крови Pima Test дали менее точные результаты, чем образцы венозной крови. 43 Это подчеркивает необходимость устранения источников ошибок, которые могут снизить точность теста POC.
В настоящее время на рынке нет портативных ПЦР-тестов для количественного определения ВИЧ, но некоторые из них находятся в стадии разработки. Согласно PATH, в условиях ограниченных ресурсов разрабатывается недорогая версия полностью автоматизированного устройства для быстрой ПЦР. 12 В этом тесте, известном как количественный анализ ВИЧ-инфекции Liat (IQuum Inc., Марлборо, США), цельная кровь используется в одном контейнере для амплификации и анализа ПЦР за 88 минут. 44 Тест SAMBA HIV-1 — это анализ нуклеиновой кислоты на основе щупа для выявления и амплификации ВИЧ. После сбора вирусной РНК изотермическая амплификация РНК автоматизируется на машине. Текущий прототип тестирует один образец за 2 часа ( (6 копий / мл)). 45 Дополнительные преимущества этого теста включают: (i) его более низкую стоимость, потому что, в отличие от ПЦР, он не требует термоциклеров; (ii) его способность к мультиплексированию, которая позволяет обнаруживать подтипы ВИЧ; и (iii) диагноз в тот же день.Дополнительный тест SAMBA для качественной ранней детской диагностики также находится в разработке. Другие компании, разрабатывающие тесты на вирусную нагрузку POC, включают Alere и Micronics. Несколько других платформ POC для ПЦР, находящихся в стадии разработки, также могут быть легко адаптированы для здравоохранения, связанного с ВИЧ. 12
Дополнительные соображения
С ростом появления тестов POC на рынке, валидационные исследования полезны, чтобы пролить свет на те ЗАВЕРШЕННЫЕ критерии, которые не удовлетворяются тестами.Во-первых, эти исследования обычно показывают, что интерпретация результатов данного теста требует дальнейшего анализа. Например, чтобы определить, когда начинать АРТ у детей в возрасте до 5 лет, фракция CD4 + Т-клеток (%) является лучшим критерием для принятия клинических решений, чем количество CD4 + Т-клеток, которое в этом возрасте сильно варьирует. группа. 46 Таким образом, такой анализ, как тест Pima, будет недостаточным в условиях, когда под наблюдением находятся ВИЧ-инфицированные дети в возрасте 5 лет или моложе, из-за необходимости использования проточной цитометрии или таблиц возраста / клинической стадии для оценки CD4 +. Фракция Т-клеток у этих индивидуумов. 8 В других случаях для привязки сбора / анализа данных к тестированию POC может потребоваться оборудование (например, источники питания, принтеры, оптическое оборудование и процессоры данных) и техническое обслуживание сверх того, которое требуется только для теста POC. Зачастую существуют компромиссы между устройствами с высокой пропускной способностью (например, CyFlow miniPOC), переносимостью (например, тест Pima) и временем получения результата, и такие компромиссы могут помочь определить, какая платформа наиболее подходит для конкретной местности.
Во-вторых, тесты POC могут иметь более низкую пропускную способность, даже если они дают более быстрые результаты.Непереносимый Partec CyFlow способен тестировать до 400 образцов в день, тогда как тест Pima ограничен 20-25 образцами в течение 8-часового рабочего дня. В-третьих, некоторые тесты могут потребовать дополнительных навыков и расходных материалов для обеспечения точного, безопасного и стерильного отбора проб. Хотя ланцеты подходят для сбора образцов крови, оцененных с помощью POC-тестов, оценочное исследование Pima Test показало, что объем крови, собранной одним уколом пальца, в некоторых случаях был недостаточен для анализа. 8 , 41 Дискомфорт от последующих уколов пальцев и риск травмы, вызванной острыми предметами, можно минимизировать, используя микротейнеры для сбора больших объемов (приблизительно 500 мкл) крови. В-четвертых, в целом тест POC может стоить столько же, сколько и текущие стандартные лабораторные тесты, если учесть затраты на техническое обслуживание, одноразовые товары, подготовку образца, доставку образца и анализ результатов. Каждый тест Pima стоит примерно 10 долларов США без учета дополнительных затрат, тогда как один тест на нуклеиновую кислоту имеет общую стоимость приблизительно 7–8 долларов США. 43 Наборы ранних диагностических тестов для младенцев могут стоить до 55% от общей стоимости материалов, связанных с тестированием. 35
Текущие исследования по испытаниям POC
По-прежнему проводится значительный объем исследований по разработке тестов на ВИЧ для POC в сочетании с разработкой тестов на основе золотого стандарта и новых технологий тестирования. В исследованиях микрофлюидики последние достижения в области мультиплексной диагностики, обнаружения без меток и визуализации без линз продемонстрировали высокую чувствительность и специфичность выявления ВИЧ. 47 — 49 Работа с изображениями без линз, в частности, включала ручные прототипы, не больше и не тяжелее мобильного телефона. Такие устройства также имеют возможность беспроводной передачи результатов испытаний в министерства здравоохранения, медицинские клиники и других конечных пользователей для мониторинга тенденций в отношении ВИЧ-инфекции и вирусологического статуса. Desai et al. обзор нескольких других интересных исследований, связанных с тестами на ВИЧ, которые будут интересны для практиков и инженеров для мониторинга в ближайшие годы. 50
Заключение
Несколько недорогих и портативных инструментов для диагностики и мониторинга ВИЧ в условиях ограниченных ресурсов в настоящее время находятся на стадии разработки или недавно были представлены на рынке. Текущие полевые исследования показали, что, в отличие от текущих тестов золотого стандарта, они обеспечивают диагностику в тот же день надежным, быстрым, доступным, простым и надежным способом. Диагностические тесты POC все еще нуждаются в валидации, поэтому инженеры, врачи и работники здравоохранения должны знать о них, чтобы они могли участвовать в их оценке и улучшении и гарантировать, что тесты готовы для коммерческого использования.
Конкурирующие интересы:
Никто не объявлен.
Рекомендации
- Объединенная программа ООН по ВИЧ / СПИДу. Глобальный доклад: доклад ЮНЭЙДС о глобальной эпидемии СПИДа за 2010 год . Женева: ЮНЭЙДС; 2010. Доступно по адресу: http://www.unaids.org/documents/20101123_GlobalReport_em.pdf [по состоянию на 19 октября 2012 года].
- Curioso WH, Kurth AE, Cabello R, Segura P, Berry DL. Оценка юзабилити персональных цифровых помощников (PDA) для поддержки приверженности лечению ВИЧ и безопасного сексуального поведения в Перу. AMIA Annu Symp Proc 2008918 — pmid: 18999317.
- Лофгрен С.М., Моррисси А.Б., Шевалье С.С., Малабеджа А.И., Эдмондс С., Амос Б. и др., И др. Оценка программы РНК ВИЧ-1 на засохшей крови для ранней диагностики младенцев и мониторинга вирусной нагрузки в сельских и отдаленных медицинских учреждениях. СПИД 2009; 23: 2459-66 doi: 10.1097 / QAD.0b013e328331f702 pmid: 19741481.
- Pathfinder International [Интернет]. Ранняя диагностика ВИЧ у младенцев с помощью точечного тестирования крови: Pathfinder International / Кения Проект по профилактике передачи инфекции от матери к ребенку .Уотертаун: Pathfinder International; 2007. Доступно по адресу: http://www.pathfinder.org/publications-tools/Early-Infant-Diagnosis-of-HIV-through-Dried-Blood-Spot-Tesing-Pathfinder-InternationalKenyas-Prevention-of-Mother-to -Child-Transmission-Project.html [по состоянию на 19 октября 2012 года].
- Mabey D, Peeling RW, Ustianowski A, Perkins MD. Тропические инфекционные заболевания: диагностика для развивающихся стран. Nat Rev Microbiol 2004; 2: 231-40 doi: 10.1038 / nrmicro841 pmid: 15083158.
- Брэнсон Б.М. Экспресс-тесты на наличие антител к ВИЧ. J Lab Med 2003; 27: 288-95 дои: 10.1046 / j.1439-0477.2003.03049.х.
- мягкий рм. Лечение ВИЧ-инфицированных детей в Африке: прогресс и проблемы. Arch Dis Child 2011; 96: 911-5 doi: 10.1136 / adc.2010.193789 pmid: 21562058.
- Mtapuri-Zinyowera S, Chideme M, Mangwanya D, Mugurungi O, Gudukeya S, Hatzold K, et al., Et al. Оценка CD4-анализатора PIMA в клиниках ДКТ в Зимбабве. J Acquir Immune Defic Syndr 2010; 55: 1-7 doi: 10.1097 / QAI.0b013e3181e93071 pmid: 20622679.
- Всемирная организация здравоохранения [Интернет]. Анализы на ВИЧ; эксплуатационные характеристики (фаза 1). Отчет 15. Антиген / антитело ELISAS. Женева: Всемирная организация здравоохранения и Объединенная программа ООН по ВИЧ / СПИДу; 2004. Доступно по адресу: http://www.who.int/diagnostics_laboratory/publications/evaluations/en/index.html [по состоянию на 19 октября 2012 г.].
- Всемирная организация здравоохранения [Интернет].Оценка комплектов тестов на ВИЧ. Анализы на ВИЧ: эксплуатационные характеристики (фаза 1). Отчет 14. Простые / экспресс-тесты . Женева: Всемирная организация здравоохранения и Объединенная программа Организации Объединенных Наций по ВИЧ / СПИДу; 2004 г. Доступно по адресу: http://www.who.int/diagnostics_laboratory/evaluations/hiv/en/ [по состоянию на 16 октября 2012 г.].
- Finnegan J, Noble K-A, Lodha R. Доказательства, лежащие в основе руководящих принципов ВОЗ: стационарная помощь детям: какова роль тестирования на антиген ВИЧ у детей в возрасте 12 месяцев> J Trop Pediatr 2009; 55: 216-8 дои: 10.1093 / tropej / fmp056 pmid: 19602485.
- Муртау М. Технический отчет ЮНИТЭЙД: Диагностика ВИЧ / СПИДа . Женева: ЮНИТЭЙД; 2011 г. Доступно по адресу: http://www.unitaid.eu/about/market-approach/9-uncategorised/345-technical-reports [по состоянию на 16 октября 2012 г.].
- Greengrass VL, Plate MM, Steele PM, Denholm JT, Cherry CL, Morris LM, et al., Et al. Оценка анализа нагрузки Cavidi ExaVir (версия 3) для мониторинга нагрузки вируса иммунодефицита человека плазмы типа 1. J Clin Microbiol 2009; 47: 3011-3 doi: 10.1128 / JCM.00805-09; pm: 19605583.
- Стивенс В.С., Скотт Л.Е., Кроу С.М. Количественная оценка ВИЧ для мониторинга антиретровирусной терапии в условиях ограниченных ресурсов. J Infect Dis 2010; 201: S16-26, дои: 10.1086 / 650392, вечера: 20225942.
- Kassler WJ, Alwano-Edyegu MG, Marum E, Biryahwaho B, Kataaha P, Dillon B. Быстрое тестирование на ВИЧ с результатами того же дня: полевое испытание в Уганде. Int J STD AIDS 1998; 9: 134-8 дои: 10.1258/0956462981921882 pmid: 9530897.
- Bulterys M, Jamieson DJ, O’Sullivan MJ, Cohen MH, Maupin R, Nesheim S и др., Исследовательская группа по быстрому вмешательству матери и ребенка (MIRIAD), et al. Быстрое тестирование на ВИЧ-1 во время родов: многоцентровое исследование. JAMA 2004; 292: 219-23 дои: 10.1001 / jama.292.2.219 pmid: 15249571.
- Браун Л., Макинтайр К., Трухильо Л. Мероприятия по снижению стигмы ВИЧ / СПИДа: что мы узнали? AIDS Educ Prev 2003; 15: 49-69 дои: 10.1521 / aeap.15.1.49.23844 pmid: 12627743.
- Бонд V, Чейз Э, Агглтон П. Стигма, ВИЧ / СПИД и профилактика передачи от матери ребенку в Замбии. Eval Program Plann 2002; 25: 347-56 doi: 10.1016 / S0149-7189 (02) 00046-0.
- Ходинка Р.Л., Нагашунмугам Т, Маламуд Д. Обнаружение антител к вирусу иммунодефицита человека в пероральных жидкостях. Clin Diagn Lab Immunol 1998; 5: 419-26. Понедельник: 9665942. .
- Спилберг Ф., Брэнсон Б.М., Гольдбаум Г.М., Локхарт Д., Курт А., Селум С.Л. и др., и другие. Преодоление барьеров для тестирования на ВИЧ: предпочтения для новых стратегий среди клиентов обмена игл, клиники по венерическим заболеваниям и сексуальных центров для мужчин, имеющих половые контакты с мужчинами. J Acquir Immune Defic Syndr 2003; 32: 318-27 doi: 10.1097 / 00126334-200303010-00012 pmid: 12626893.
- Parisi MR, Soldini L, Di Perri G, Tiberi S, Lazzarin A, Lillo FB. Предложение экспресс-тестирования и альтернативных биологических образцов в качестве практических инструментов для реализации программ скрининга на ВИЧ. New Microbiol 2009; 32: 391-6 вечера: 20128446.
- Всемирная организация здравоохранения [Интернет]. Анализы на ВИЧ: эксплуатационные характеристики (фаза 1). Отчет 13. Анализы мочи и слюны. Женева: Всемирная организация здравоохранения; 2004 г. Доступно по адресу: http://www.who.int/diagnostics_laboratory/evaluations/hiv/en/ [по состоянию на 16 октября 2012 г.].
- Брэнсон Б.М. Будущее тестирования на ВИЧ. J Acquir Immune Defic Syndr 2010; 55: S102-5 doi: 10.1097 / QAI.0b013e3181fbca44 pmid: 21406978.
- Fox J, Dunn H, O’Shea S. Низкие показатели обнаружения антигена p24 с использованием теста на ВИЧ в четвертом поколении. Sex Transm Infect 2011; 87: 178-9 дои: 10.1136 / sti.2010.042564 pmid: 21084439.
- Beelaert G, Fransen K. Оценка быстрого и простого скринингового анализа четвертого поколения для качественного выявления антигена p24 ВИЧ и / или антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2. J Virol Methods 2010; 168: 218-22 doi: 10.1016 / j.jviromet.2010.06.002 pmid: 20561542.
- Руководство по использованию технологий тестирования на ВИЧ в эпиднадзоре: отбор, оценка и внедрение . Женева: Всемирная организация здравоохранения и Объединенная программа ООН по ВИЧ / СПИДу; 2001. Доступно: http://www.unaids.org/en/dataanalysis/knowyourepidemic/epidemiologypublications/ [по состоянию на 19 октября 2012 г.].
- Беннетт Б., Брэнсон Б., Делани К., Оуэн М., Пентелла М., Вернер Б. Алгоритмы тестирования на ВИЧ: отчет о состоянии, резюме. Silver Spring: Ассоциация лабораторий общественного здравоохранения; 2009.Доступно по адресу: http://www.aphl.org/aphlprograms/infecious/hiv/Pages/HIVStatusReport.aspx [по состоянию на 16 октября 2012 г.].
- Sivapalasingam S, Essajee S, Nyambi PN, Itri V, Hanna B, Holzman R, et al., Et al. Активность обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) коррелирует с нагрузкой РНК ВИЧ: последствия для ограниченных ресурсов. J Clin Microbiol 2005; 43: 3793-6 doi: 10.1128 / JCM.43.8.3793-3796.2005 pmid: 16081912.
- Steegen K, Luchters S, De Cabooter N, Reynaerts J, Mandaliya K, Plum J, et al., и другие. Оценка двух коммерчески доступных альтернатив для тестирования на вирусную нагрузку ВИЧ-1 в условиях ограниченных ресурсов. J Virol Methods 2007; 146: 178-87 doi: 10.1016 / j.jviromet.2007.06.019 pmid: 17686534.
- Fiscus SA, Wiener J, Abrams EJ, Bulterys M, Cachafeiro A, Respess RA. Сверхчувствительный анализ на антиген p24 для диагностики перинатальной инфекции вируса иммунодефицита человека типа 1. J Clin Microbiol 2007; 45: 2274-7 doi: 10.1128 / JCM.00813-07 pmid: 17475763.
- Лаббетт У., Гарсиа-Диаз А., Фокс З., Клеули Г.С., Фернандес Т., Джонсон М. и др. И др. Сравнительная оценка анализа обратной транскриптазы ExaVir Load версии 3 для измерения плазменной нагрузки вируса иммунодефицита человека типа 1. J Clin Microbiol 2009; 47: 3266-70 дои: 10.1128 / JCM.00715-09; PM: 19656978.
- Sivapalasingam S, Wangechi B, Marshed F, Lavery M, Essajee S, Holzman RS, et al., Et al. Мониторинг вирусологических реакций на антиретровирусную терапию у ВИЧ-инфицированных взрослых в Кении: оценка недорогого анализа вирусной нагрузки. PLOS ONE 2009; 4: e6828-doi: 10.1371 / journal.pone.0006828, pmid: 19714253.
- Стивенс Г., Рехвиашвили Н., Скотт Л. Е., Гонин Р., Стивенс В. Оценка двух коммерчески доступных, недорогих альтернативных анализов, используемых для оценки вирусной нагрузки в когорте пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита 1 типа С, из Южной Африки J Clin Microbiol 2005; 43: 857-61 дои: 10.1128 / JCM.43.2.857-861.2005 pmid: 15695692.
- Bonard D, Rouet F, Toni TA, Minga A, Huet C, Ekouévi DK, et al., ANRS 1220 PRIMO-CI Study Group, et al. Полевая оценка улучшенного анализа с использованием диссоциированного теплом антигена p24 для взрослых, в основном инфицированных штаммами ВИЧ-1 CRF02_AG, в Кот-д’Ивуаре, Западная Африка. J Acquir Immune Defic Syndr 2003; 34: 267-73 doi: 10.1097 / 00126334-200311010-00002 pmid: 14600570.
- Чиаранелло А.Л., Парк J-E, Рамирес-Авила Л., Фридберг К.А., Валенский Р.П., Леруа В. Программы ранней диагностики ВИЧ-1 у детей в условиях ограниченных ресурсов: возможности для улучшения результатов и более рентабельных вмешательств. BMC Med 2011; 9: 59- doi: 10.1186 / 1741-7015-9-59; pm: 21599888.
- George E, Beauharnais CA, Brignoli E, Noel F, Bois G, De Matteis Rouzier P, et al., Et al. Возможности упрощенного анализа p24 для ранней диагностики инфекции вируса иммунодефицита человека типа 1 на Гаити. J Clin Microbiol 2007; 45: 3416-8 doi: 10.1128 / JCM.01314-07 pmid: 17670933.
- Cachafeiro A, Sherman GG, Sohn AH, Beck-Sague C, Fiscus SA. Диагностика инфекции типа 1 вируса иммунодефицита человека у детей с использованием сухих пятен крови и сверхчувствительного анализа на антиген p24. J Clin Microbiol 2009; 47: 459-62 дои: 10.1128 / JCM.01181-08, pmid: 19073872.
- Набатиян А., Бауманн М.А., Парпиа З., Келсо Д. Сверхчувствительный анализ p24 на основе латерального потока с использованием флуоресцентных микрочастиц. J Acquir Immune Defic Syndr 2010; 53: 55-61 doi: 10.1097 / QAI.0b013e3181c4b9d5 pmid: 19927003.
- Workman S, Wells SK, Pau C-P, Owen SM, Dong XF, LaBorde R, et al., Et al. Быстрое обнаружение антигена p24 ВИЧ-1 с помощью магнитной иммунохроматографии (MICT). J Virol Methods 2009; 160: 14-21 дои: 10.1016 / j.jviromet.2009.04.003 pmid: 19482361.
- Parpia ZA, Elghanian R, Nabatiyan A, Hardie DR, Kelso DM. Экспресс-тест на антиген p24 для диагностики острой ВИЧ-инфекции у детей. J Acquir Immune Defic Syndr 2010; 55: 413-9 doi: 10.1097 / QAI.0b013e3181f1afbc pmid: 20811289.
- Sitoe N, Luecke E, Tembe N, Matavele R, Cumbane V, Macassa E, et al., Et al. Абсолютный и процентный подсчет CD4 + Т-клеток методом проточной цитометрии с использованием капиллярной крови. J Immunol Methods 2011; 372: 1-6 дои: 10.1016 / j.jim.2011.07.008 и 21787779.
- Manabe YC, Wang Y, Elbireer A, Auerbach B, Castelnuovo B. Оценка портативного счетчика CD4 в месте оказания медицинской помощи с высокой чувствительностью для выявления пациентов, имеющих право на антиретровирусную терапию. PLoS One 2012; 7: e34319-doi: 10.1371 / journal.pone.0034319, pmid: 22536323.
- Glencross DK, Coetzee LM, Faal M, Masango M, Stevens WS, Venter WF, et al., Et al. Оценка эффективности CD4-анализатора Pima ™ для медицинских учреждений с использованием отбора проб капиллярной крови в полевых испытаниях в Южной Африке. J Int AIDS Soc 2012; 15: 3- doi: 10.1186 / 1758-2652-15-3 pmid: 22284546.
- Танриверди С., Чен Л., Чен С. Быстрый и автоматический тест нагрузки на ВИЧ для выборки к результату для применения рядом с пациентом. J Infect Dis 2010; 201: S52-8 doi: 10.1086 / 650387 pmid: 20225947.
- Ли Х.Х., Динева М.А., Чуа Ю.Л., Ричи А.В., Уширо-Лумб I, Вишневский К.А. Простой анализ на основе амплификации: платформа для ухода за ВИЧ-1 на основе нуклеиновой кислоты. J Infect Dis 2010; 201: S65-72 дои: 10.1086/650385 pmid: 20225949.
- Всемирная организация здравоохранения [Интернет]. Антиретровирусная терапия при инфекциях у младенцев и детей: к всеобщему доступу. Рекомендации по подходу общественного здравоохранения — редакция 2012 г. . Женева: ВОЗ; 2010. Доступно по адресу: http://apps.who.int/medicinedocs/en/m/abstract/Js18809en/ [по состоянию на 16 октября 2012 г.].
- Chin CD, Laksanasopin T, Cheung YK, Steinmiller D, Linder V, Parsa H, et al., Et al. Микрофлюидическая диагностика инфекционных заболеваний в развивающихся странах. Nat Med 2011; 17: 1015-9, дои: 10.1038 / нм.2408, вечера: 21804541.
- Даабуль Г.Г., Юрт А., Чжан Х, Хванг Г.М., Гольдберг Б.Б., Юнлу М.С. Высокопроизводительное обнаружение и определение размеров индивидуальных низкоиндексных наночастиц и вирусов для идентификации патогенных микроорганизмов. Nano Lett 2010; 10: 4727-31 doi: 10.1021 / nl103210p pmid: 20964282.
- Tseng D, Mudanyali O, Oztoprak C, Isikman SO, Sencan I, Yaglidere O, et al., Et al. Микроскоп без линз на мобильном телефоне. Lab Chip 2010; 10: 1787-92 дои: 10.1039 / c003477k pmid: 20445943.
- Desai D, Wu G, Zaman MH. Борьба с ВИЧ с помощью надежной диагностики в развивающихся странах: текущее состояние и будущие возможности. Lab Chip 2011; 11: 194-211 doi: 10.1039 / c0lc00340a pmid: 21125097.
Тест на текущую инфекцию | CDC
Вирусные тесты проверяют образцы из вашей дыхательной системы, такие как мазок изнутри вашего носа, чтобы сказать вам, есть ли у вас инфекция SARS-CoV-2, вируса, который вызывает COVID-19. Некоторые тесты являются тестами на месте оказания помощи, то есть результаты могут быть получены на месте тестирования менее чем за час. Другие анализы должны быть отправлены в лабораторию для анализа, процесс, который занимает 1-2 дня после получения в лаборатории.
Если вы дали положительный или отрицательный результат на COVID-19 на вирус или тест на антитела, вы все равно должны принять профилактические меры, чтобы защитить себя и других.
Как пройти вирусный тест
Вот некоторая информация, которая может помочь вам принять решение о получении вирусного теста:
- Большинство людей имеют легкую болезнь и могут выздороветь дома без медицинской помощи. Обратитесь к врачу, если ваши симптомы ухудшаются или у вас есть вопросы о вашем здоровье.
- Решения о тестировании принимаются государственными и местными службами здравоохранения или провайдерами медицинских услуг.
- Если у вас есть симптомы COVID-19 и вы не прошли тестирование, важно оставаться дома.Что делать, если ты болен.
- В настоящее время нет лечения, специально одобренного для людей, у которых есть COVID-19.
COVID-19 отличается в зависимости от местоположения. Если у вас есть симптомы COVID-19 и вы хотите пройти тестирование, сначала позвоните своему врачу. Вы также можете посетить веб-сайт департамента здравоохранения своего штата или местного значка, чтобы найти самую свежую местную информацию о тестировании. Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) санкционировало проведение вирусных анализов, которые позволяют вам собирать либо наружную иконку слизистой оболочки носа, либо внешнюю иконку слюны.Тем не менее, вам все равно нужно будет отправить образец в лабораторию для анализа.
Что делать после вирусного теста
Чтобы получить результат теста, пожалуйста, свяжитесь с группой, которая выполнила ваш тест, например, с вашим лечащим врачом или отделом здравоохранения. Проверьте сайт CDC, чтобы найти информацию о вашем отделе здравоохранения. Сколько времени потребуется, чтобы вернуть результаты теста, зависит от используемого теста.
- Если у вас положительный тест на COVID-19, знает, какие защитные меры следует предпринять, если вы больны или ухаживаете за кем-либо.
- Если вы дали отрицательный результат на COVID-19, вы, вероятно, не были заражены во время сбора пробы. Однако это не значит, что вы не заболеете. Результат теста означает только то, что у вас не было COVID-19 на момент тестирования. Вы можете получить отрицательный результат, если образец был взят на ранней стадии вашей инфекции, и положительный результат на более позднем этапе вашей болезни Вы также можете подвергнуться воздействию COVID-19 после теста и заразиться потом. Это означает, что вы все еще можете распространять вирус.Если у вас появятся симптомы позже, вам может потребоваться еще один тест, чтобы определить, заражены ли вы вирусом, который вызывает COVID-19.
будущее для диагностики ПЦР
Методика полимеразной цепной реакции (ПЦР), удостоенная Нобелевской премии 1 произвела революцию в молекулярной биологии в своем изобретении в 1986 году и сделала то же самое для медицинской диагностики за последние 15 лет. Возможность копировать и размножать специфические целевые молекулы ДНК открыла путь к диагностике заболеваний во многих областях быстро, точно и со временем с меньшими затратами.
ПЦР создает неограниченное количество копий ДНК только с одной исходной цепи с использованием полимеразных ферментов, праймеров (небольших последовательностей ДНК, которые определяют ДНК, подлежащую амплификации) и нескольких тепловых циклов.Достижения произошли в 1980-х годах с использованием бактериальных ферментов, способных противостоять высоким температурам, а в 1991 году технология была приобретена фармацевтическим гигантом Roche, который начал совершенствовать науку для использования в медицинской диагностике.
Преимущества ПЦР
‘Современные методы [культивирования] могут быть весьма трудоемкими и иногда могут занимать от нескольких дней до нескольких недель, тогда как количественные методы ПЦР могут дать вам ответы в течение нескольких часов. Это может быть намного быстрее и надежнее », — говорит Ребекка Сандерс, специалист по метрологии нуклеиновых кислот из LGC, Теддингтон, Великобритания.ПЦР-диагностика быстрее и менее подвержена перекрестному загрязнению, потому что методика обычно проводится в автоматических термоциклерах. Он также более чувствителен и более специфичен, чем иммуноанализ на пластинках.
В некоторых случаях ПЦР становится предпочтительным методом диагностики. Например, Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) одобрила этот метод для быстрой диагностики туберкулеза легких (ТБ) 2 вместо стандартного метода микроскопии мазка мокроты, разработанного более века назад.ПЦР или тесты на амплификацию нуклеиновых кислот (NAAT) дают быстрые результаты, и это позволяет использовать их в полевых условиях для ранней диагностики туберкулеза, что важно для предотвращения распространения заболевания.
Потенциал для диагностики ПЦР огромен. «Было бы проще определить, где не будет использоваться ПЦР — все на этой планете имеет геном ДНК или РНК, поэтому, если вы хотите что-то обнаружить, вы переходите на ПЦР», — объясняет Джонатан О’Халлоран, главный научный сотрудник QuantumDx, запуск диагностики ПЦР в Ньюкасле, Великобритания.Он добавляет, что наряду с клиническим применением диагностика ПЦР также может стать важной в таких отраслях, как производство продуктов питания и сельское хозяйство. Еще одним преимуществом диагностики ПЦР является их использование в мультиплексных анализах — амплификация нескольких мишеней в одном эксперименте ПЦР путем простого использования нескольких пар праймеров. Это может быть полезно при диагностике инфекционных агентов, когда симптомы не так легко охарактеризовать. В одном тесте может быть охвачено до 20 патогенов. 3
Арон Коэн, главный исполнительный директор лондонской диагностики.ai, говорит, что в настоящее время в экосистеме диагностики ПЦР в настоящее время преобладают лабораторные тесты, «на данный момент очень мало тестов, которые одобрены FDA, возможно, 10 различных анализов имеют одобрение FDA (например, на ВИЧ) и имеют полную автоматизацию, но в подавляющем большинстве люди полагаются на лабораторно разработанные тесты. ‘
КПЦР прокладывает путь
Большинство диагностических методов будет основываться на ПЦР в реальном времени или количественной ПЦР (КПЦР). 4 Работает с использованием флуоресцентно-меченных олигонуклеотидных зондов и контроля флуоресценции после каждого цикла — интенсивность сигнала отражает количество амплифицированной ДНК, а количество циклов, при которых флуоресценция впервые обнаружена, используется для расчета исходного числа молекул ДНК в образце, как только система была откалибрована.
Признавая важность молекулярной диагностики для ранней диагностики опасных для жизни инфекций, Bruker недавно запустил ПЦР в режиме реального времени для лечения инвазивных грибковых заболеваний. Fungiplex® Aspergillus и Fungiplex® Candida обнаруживают ДНК Aspergillus и Candida соответственно, непосредственно из образцов пациентов, позволяя раннюю диагностику инвазивного заболевания, не дожидаясь появления грибкового патогена в культуре. Целевая противогрибковая медикаментозная терапия может быть назначена ранее для улучшения результатов лечения пациентов.
КПЦР также был адаптирован для обнаружения РНК-вирусов, таких как ВИЧ и гепатит С, и анализа транскриптов РНК, связанных с некоторыми видами рака. В двухэтапной обратной транскрипционной полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) молекулы РНК превращаются в свои последовательности комплементарной ДНК (кДНК) ферментами обратной транскриптазы с последующей амплификацией кДНК с помощью стандартной ПЦР. Новый сверхбыстрый метод в разработке может обещать более эффективный процесс, особенно при анализе большого количества образцов.Метод использует генно-инженерную термостабильную обратную транскриптазу, поэтому процесс ПЦР может происходить непосредственно из РНК. 5
Преодоление ограничений
Но есть и ограничения, связанные с диагностикой ПЦР, «все дело в пробоподготовке с помощью ПЦР, в отличие от иммунодиагностики, где вы можете по существу использовать необработанный образец сыворотки крови, диагностика ПЦР требует от вас сделать сложную пробоподготовку, — говорит О’Халлоран. Многие органические и неорганические вещества будут ингибировать ПЦР, поэтому их необходимо удалить, и эти дополнительные стадии усложняют процедуру.
Ряд компаний и академических групп ищут технологии для улучшения диагностики ПЦР. Альтернативный метод температурного цикла разрабатывает Люк Ли, профессор биоинженерии в Калифорнийском университете в Беркли. Он разработал способ ускорения циклического изменения температуры — с помощью плазмоники — взаимодействия света с металлическими поверхностными электронами, которые генерируют тепло. Светодиоды нагревают 120-нм золотую пленку в контакте с раствором ДНК в микрофлюидальной лунке. Механизм позволял ездить на велосипеде от 55 до 95 ° С 30 раз за 5 минут.
O’Halloran QuantumDx выпустил портативное настольное устройство, которое может сократить время теста до 7 минут и улучшило чувствительность до 1 ячейки на мл — огромное улучшение стандартных методов, которые составляют около 150 клеток на мл. Это было достигнуто с использованием умной микрофлюидики и технологии полевого транзистора с нанопроволоками. 7 «Мы решаем некоторые проблемы чувствительности, используя действительно новую физику, называемую диэлектрофорезом», — объясняет О’Халлоран.Это явление вызывает воздействие силы на частицу в неоднородном электрическом поле и позволяет захватывать точные представляющие интерес ячейки из необработанного образца: «Мы устанавливаем электрические поля с частотой и величиной, которые вызывают дипольные моменты именно в представляющую интерес клетку, и мы используем микрожидкости для высвобождения этих концентрированных клеток в нашу ПЦР. ‘
В больших диагностических лабораториях большая часть ПЦР проводится автоматизированными роботизированными высокопроизводительными системами. Но стандартизация и контроль качества для ПЦР все еще требуют кропотливого участия человека.Инновационный стартап-диагностика .ai предлагает решение с использованием искусственного интеллекта. «Мы эффективно наполняем учебную машину контролируемым набором данных, набором входных данных с кучей известных результатов, и обучающая машина автоматически проверяет себя и гарантирует, что она может давать те же результаты на регулярной основе — чего нельзя сделать без ручного ввода в Современные системы из-за изменчивости ПЦР в реальном времени на разных платформах и в разных анализах », — говорит Коэн. Как только их система была настроена, о результатах можно сообщить почти сразу, и это будет только отмечать неожиданные результаты, которые требуют дальнейшего анализа.Испытание системы проводится крупнейшим в Великобритании поставщиком патологических услуг Viapath в одной из их ведущих лабораторий.
Цифровая точность
Изобретенная в начале 1990-х годов, но замененная КПЦР в 1996 году, цифровая ПЦР вернулась для специализированных применений. Метод не требует стандартной калибровки, но работает путем разделения исходного образца на большое количество отдельных лунок перед амплификацией, так что в каждой лунке будет 1 или 0 молекул ДНК (отсюда и цифровая).После амплификации простой расчет положительных или отрицательных лунок может определить абсолютную количественную оценку. 8
«Цифровая технология обеспечивает такой уровень точности, которого вы просто не можете достичь с помощью КПЦР, — говорит Сандерс, но, как отмечает О’Халлоран, — это откровенно излишне для большинства клинических применений». Это полезно, когда вам нужно точно знать, сколько цели находится в вашем образце. «Например, существуют некоторые виды рака, вызванные несколькими копиями одного и того же гена, поэтому изменение количества копий и знание количества копий может изменить режим лечения», — объясняет Сандерс.Она говорит, что в настоящее время большинство больниц не имеют доступа к такого рода приборам; «стоимость должна снизиться, и это произойдет, если на рынке появится больше платформ».
Взгляд в будущее
ПЦР-диагностика также окажет большое влияние на будущий рост точной медицины — индивидуализация медицинской помощи для конкретного пациента. О’Халлоран говорит, что QuantumDx уже разработал тест варфарина. Антикоагулянтный препарат, который выбирался десятилетиями, недавно был заменен дорогостоящими альтернативами из-за риска тромбоза и других осложнений в подгруппе пациентов.«Увеличение расходов [антикоагулянтов] ежегодно составляет сотни тысяч фунтов, — говорит О’Халлоран, — но мы разработали тест, который позволяет нам провести быстрый тест на пациентах, а затем сказать врачу, который может принимайте варфарин (который составляет 75% нашего населения) ».
В конечном счете, О’Халлоран рассматривает диагностику ПЦР как нечто, что расширится до первичной медицинской помощи:« вы увидите ее в кабинете врача и в аптеке, она собирается действительно захватывающее время для ПЦР ». QuantumDx работает над ручным устройством ПЦР, и он предлагает однажды, что оно может сидеть в нашей домашней аптечке рядом с термометром:« Я не вижу причин, почему это не может произойдет в течение следующих 10 лет.’
Список литературы
1 Mullis KB и Faloona FA« Специфический синтез ДНК in vitro с помощью полимеразно-катализируемой цепной реакции ». Методы в энзимологии том. 155 (F) pp. 335–50 (1987)
2 Boehme et al. 2010. Быстрое молекулярное выявление туберкулеза и устойчивости к рифампину. N Engl J Med. 363: 1005-1015, DOI: 10.1056 / NEJMoa0907847
3 Paul C. Schreckenbergera и Alexander J. McAdamb. Точка-контрапункт: большие мультиплексные ПЦР-панели должны быть тестами первой линии для выявления респираторных и кишечных патогенов.J. Clin. Microbiol. Октябрь 2015 г. 53 нет. 10 3110-3115. doi: 10.1128 / JCM.00382-15
4 Петр Кралик и Маттео Риччи. Основное руководство по ПЦР в реальном времени в микробной диагностике: определения, параметры и все. Фронт Микробиол. 2017; 8: 108. doi: 10.3389 / fmicb.2017.00108
5 Петра Чованкова, Верена Мерк, Андреас Маркс, Марсель Лейст, Рамон Кранастер; Количественная ПЦР с обратной транскрипцией непосредственно из клеток без выделения РНК и без изотермической обратной транскрипции: протокол RT-qPCR «с нулевой стадией», «Биологические методы и протоколы», том 2, выпуск 1, 1 января 2017 года, bpx008, https: // DOI.org / 10.1093 / biomethods / bpx008
6 Джун Хо Сон, Бьюнгра Чо, Сун Гвон Хонг, Сан Хун Ли, Ори Ходжа, Аманда Дж. Хаак и Люк П. Ли. Сверхбыстрая фотонная ПЦР. Light: Science & Applications том 4, страница e280 (2015) doi: 10.1038 / lsa.2015.53
7 http://quantumdx.com/systems/q-poc
8 Джим Ф. Хуггетт, Александра Кит , Цифровая ПЦР как новая технология и ее потенциальные последствия для молекулярной диагностики. Клиническая химия.2013, 59 (12) 1691-1693; DOI: 10.1373 / clinchem.2013.214742
,